一种阴道加德纳菌培养基制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种阴道加德纳菌培养基制备方法，包括：步骤1：准确称量哥伦比亚血琼脂基础4.1g，并加入95ml蒸馏水加热溶解。步骤2：对步骤1中的溶解液高压灭菌。步骤3：将溶解液冷却至50℃左右无菌操作加入5ml脱纤维兔血和组合抑菌剂。步骤4：倾倒于已灭菌玻璃平皿，作为兔血哥比琼脂单层培养基，冷确备用。步骤5：将阴道加德纳菌接种于已制备好的兔血哥比琼脂单层培养基，分区划线接种。步骤6：置于35℃，5%CO2孵育48小时。本发明仅使用兔血和哥伦比亚血琼脂两种成分作为营养物质，配制成单层培养基，能达到阴道加德纳菌分离效果，实现培养基制备成本低廉、操作方便、原料易得等特点，利于不同等级医院广泛开展。
【专利说明】
_种阴道加德纳菌培养基制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种阴道加德纳菌培养基制备方法。
[0002]
【背景技术】
[0003]阴道加德纳菌(gardnerella vaginalis GV)在细菌性阴道病的微生物菌群中含量明显高于其它正常菌群，历来被国内外学者认为细菌性阴道病的重要致病菌之一。GV感染还可引起输卵管异位妊娠、胎膜早破、绒毛膜羊膜炎、产褥期感染、子宫内膜炎及新生儿早产等不良妊娠结局。
[0004]GV的分离培养法仍然是GV检测的国际公认金标准。GV生长条件较为苛刻，生长过程中需多种营养物质参与。普通羊血平板，经过35?37°C，5%C02，48?72h培养会形成针尖大小的菌落，且不易辨认，缺乏特异性菌落形态特征，极易造成日常工作中的漏检。国内学者选择在的培养中加入多种营养成份(哥比琼脂、人全血及血浆、心脑浸液、酵母浸膏、营养肉汤等来促进GV的生长，提高检出的阳性率。GV在含人血培养基上产生β溶血，β溶血的出现不仅可以作为GV特异性的一个菌落生长特征，同时也有利于阳性检出率的提高。
[0005]目前国内外大多文献采有含人血双层培养基加多种营养成份分离阴道加德纳菌，在全国中心血站血液供应严重不足情况下，人血价格昂贵且不易获得。双层培养基制备复杂、增加污染机会。心脑浸液、酵母浸膏等营养成份的添加导致成本增加。因此，研究即可成本低廉、配制程序简单，同时保证稳定细菌分离效果培养基，是广泛应用的前提条件。
【发明内容】
[0006]本发明的目的:提供一种阴道加德纳菌培养基制备方法，材料易得、制备简便、成本低廉，使其在各级医院均能广泛开展，提高阴道加德纳菌分离率。
[0007]为了实现上述目的，本发明的技术方案是:
一种阴道加德纳菌培养基制备方法，该方法至少包括如下步骤:
步骤1:准确称量哥伦比亚血琼脂基础4.1g，并加入95ml蒸馏水加热溶解。
[0008]步骤2:对步骤I中的溶解液高压灭菌。
[0009]步骤3:将溶解液冷却至50°C左右无菌操作加入5ml脱纤维兔血和组合抑菌剂。
[0010]步骤4:无菌操作倾倒于已灭菌玻璃平皿，制备成兔血哥比琼脂单层培养基，冷确备用。
[0011]步骤5:将阴道加德纳菌接种于已制备好的兔血哥比琼脂单层培养基，分区划线接种。
[0012]步骤6:置于35Γ，5%C02孵育48小时。
[0013]上述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其中，在所述的步骤I中，所述的哥伦比亚血琼脂基础4.1g溶解后的pH值为7.2-7.4。
[0014]上述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其中，在所述的步骤2中，所述的高压灭菌的温度为121°C，高压灭菌的时间为15分钟。
[0015]上述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其中，在所述的步骤3中，所述的溶解液加入脱纤维兔血和组合抑菌剂后的终浓度为:两性霉素B 2^^/1111;庆大霉素Syg/ml;萘啶酮酸30pg/mlo
[0016]上述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其中，在所述的步骤6中，孵育48小时后，菌落呈圆形、光滑、湿润、露滴样形态，最大菌体直径达0.985mm，β溶血环最大直径达2.273mm。
[0017]本发明仅使用兔血和哥伦比亚血琼脂两种成分作为营养物质，只配制成单层培养基，就能达到阴道加德纳菌分离效果，实现了培养基制备成本低廉、操作方便、原料易得等特点，有利于在不同等级的医院广泛开展。
[0018]
【附图说明】
[0019]图1是本发明一种阴道加德纳菌培养基制备方法的流程图。
[0020]
【具体实施方式】
[0021]以下结合附图进一步说明本发明的实施例。
[0022]请参见附图1所示，一种阴道加德纳菌培养基制备方法，该方法至少包括如下步骤:
步骤1:准确称量哥伦比亚血琼脂基础4.1g，并加入95ml蒸馏水加热溶解。
[0023]步骤2:对步骤I中的溶解液高压灭菌。
[0024]步骤3:将溶解液冷却至50°C左右无菌操作加入5ml脱纤维兔血和组合抑菌剂。
[0025]步骤4:无菌操作倾倒于已灭菌玻璃平皿，制备成兔血哥比琼脂单层培养基，冷确备用。
[0026]步骤5:将阴道加德纳菌接种于已制备好的兔血哥比琼脂单层培养基，分区划线接种。
[0027]步骤6:置于35°C，5%C02孵育48小时。
[0028]在所述的步骤I中，所述的哥伦比亚血琼脂基础4.1g溶解后的pH值为7.2-7.4。
[0029]在所述的步骤2中，所述的高压灭菌的温度为121°C，高压灭菌的时间为15分钟。
[0030]在所述的步骤3中，所述的溶解液加入脱纤维兔血和组合抑菌剂后的终浓度为:两性霉素B 2yg/ml;庆大霉素5yg/ml;萘啶酮酸30yg/ml。
[0031]在所述的步骤6中，孵育48小时后，菌落呈圆形、光滑、湿润、露滴样形态，用游标卡尺测得最大菌体直径可达0.985mm，因加入兔血产生的β溶血环大小明显，β溶血环最大直径可达2.273mm。
[0032]在本发明中，菌落人肉眼清晰可辨，能够达到阴道加德纳菌分离效果。兔血哥比琼脂单层培养基是一种节约成本、配制方便，具有重要的临床应用价值的阴道加德纳菌分离培养基。
[0033]综上所述，本发明仅使用兔血和哥伦比亚血琼脂两种成分作为营养物质，只配制成单层培养基，就能达到阴道加德纳菌分离效果，实现了培养基制备成本低廉、操作方便、原料易得等特点，有利于在不同等级的医院广泛开展。
[0034]以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构变换，或直接或间接运用附属在其他相关产品的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种阴道加德纳菌培养基制备方法，其特征在于:该方法至少包括如下步骤: 步骤1:准确称量哥伦比亚血琼脂基础4.1g，并加入95ml蒸馏水加热溶解； 步骤2:对步骤I中的溶解液高压灭菌； 步骤3:将溶解液冷却至50 °C左右无菌操作加入5ml脱纤维兔血和组合抑菌剂； 步骤4:无菌操作倾倒于已灭菌玻璃平皿，制备成兔血哥比琼脂单层培养基，冷确备用； 步骤5:将阴道加德纳菌接种于已制备好的兔血哥比琼脂单层培养基，分区划线接种； 步骤6:置于350C，5%C02孵育48小时。2.根据权利要求1所述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其特征在于:在所述的步骤I中，所述的哥伦比亚血琼脂基础4.1g溶解后的pH值为7.2-7.4。3.根据权利要求1所述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其特征在于:在所述的步骤2中，所述的高压灭菌的温度为121°C，高压灭菌的时间为15分钟。4.根据权利要求1所述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其特征在于:在所述的步骤3中，所述的溶解液加入脱纤维兔血和组合抑菌剂后的终浓度为:两性霉素B 2^^/1111;庆大霉素5yg/ml ；萘啶酮酸30yg/ml。5.根据权利要求1所述的阴道加德纳菌培养基制备方法，其特征在于:在所述的步骤6中，孵育48小时后，菌落呈圆形、光滑、湿润、露滴样形态，最大菌体直径达0.985mm，β溶血环最大直径达2.273mm。
【文档编号】C12R1/01GK105861372SQ201610271076
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】陈远翔
【申请人】陈远翔