辅助鉴定大豆抗花叶病毒sc7的引物及其检测方法

文档序号:10506051阅读:569来源:国知局
辅助鉴定大豆抗花叶病毒sc7的引物及其检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物及其检测方法,通过利用BARCSOYSSR_02_0631分子标记的专用引物对大豆品系抗花叶病毒SC7的相关位点进行早期子代选择鉴定,不仅避免了传统方法接种鉴定花叶病毒的传播,而且减少了随后的育种工作量和育种周期,因而可快速筛选出抗病高产的大豆育种材料。本发明经济效益高,可以应用于大豆子代的抗病性选育,可提高育种效率和大豆花叶病毒抗性水平,且提高了育种目的的针对性。
【专利说明】
辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物及其检测方法
技术领域
[0001] 本发明设及生物检测领域,具体设及一种辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物及 其检测方法。
【背景技术】
[0002] 大豆常规育种中因表型选择易受季节W及生产安全环境等因素限制而导致育种 效率低等问题,现代农业急需注入生物技术手段,辅之于分子标记高效率的基因型定向选 择,才能高效快速地选育出理想地大豆新品种。随着生物信息学和分子遗传学W及基因组 学的迅速发展,分子标记辅助选择育种的应用将更加广泛。基于PCR的分子标记(如SSR)具 有共显性、多态性高、重复性好、简便操作等优势而受遗传育种家广泛接受使用。
[0003] 国内外许多专家学者对大豆花叶病毒进行了 WL定位研究。滕卫丽等利用与抗 SMV3相关的SSR标记Sattll4和Satt362进行检测,抗病毒资源筛选的与抗性鉴定符合率分 别达到82.4%和68.8% ;王大刚利用基因组SSR和SNP标记将大豆抗性基因 Rscs精细定位在2 号染色体上,Rscs两侧最近的标记BARCS0YSSR-02-0610和BARCS0YSSR-02-0616)之间的遗传 距离为〇.32cM,物理距离不足200kb。马奎研究指出单独使用标记Satt334或Sct_033对Rscmo 在齐黄1号X南农1138的两个世代MAS W及对Rsci2在齐黄22 X南农138-2的S个世代准确率 均在85% W上,同时使用两个标记准确率达95%;化n Hong Iang等人把Rsct定位到染色体2 号和13号上;国外已经把S个抗花叶病毒基因(Rsvl、Rsv3和Rsv4)分别定位到大豆染色体 13号、14号和2号上。

【发明内容】

[0004] 本发明目的在于提供一种辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物及其检测方法,通 过利用BARCS0YSSR_02_0631分子标记的专用引物对大豆品系抗花叶病毒SC7的相关位点进 行早期子代进行选择鉴定,减少了育种工作量和育种周期,因而可快速筛选出抗病高产的 大豆育种材料。
[0005] 为实现上述目的,本发明技术方案如下:
[0006] 本发明提供了一种辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物,所述引物如下:
[0007] 前引物:5 ' -TGGTTTAAAAATTGTGGAGACAAA-3 ' ;
[000引 后引物:5 ' -TTGTGATTGAATGATGGAGTAAGA-3 '。
[0009] 上述辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物的检测方法,包括如下步骤:
[0010] Sl、采用SDS法提取每份大豆的DNA,利用所述引物对其进行PCR扩增,PCR扩增反应 体系为20化,包括IOXPCR Buffer(含15mM Mg2+)2.0yL,dNTP 0.化L,浓度为2.抓AU的化邑 酶0 .化L,所述前引物0.0祉1,所述后引物0.0如1,d地2〇 12.44化,浓度为20ng/iiL的模板 0魁扣1^; PCR反应程序为94°C预变性5min; 94°C变性30sec,55 °C退火30sec,72 °C延伸Imin, 运行35个循环,然后72°C延伸8min后于4°C保存;
[0011] S2、在步骤Sl所得的扩增产物中加入2.化L Loading Buffer,用聚丙締酷胺胶进 行分离,银染检测。
[0012]其中,扩增后的感病条带较小,另外一个较大的为抗病带型。
[OOU] 其中,所述dNTP的终浓度为lOmM。
[0014] 本发明具有W下有益效果:
[0015] 本发明随机检测区试试验中大豆品种(系)抗病(包括中感)检出符合率为64.3 %, 感病符合率为100%,即检测正确率为79.2%,为今后的分子标记辅助选择育种提供了快捷 高效的方法,为设计育种提供了一种参考手段,提高了早期选择的效率,节约了大量的人力 物力。本发明经济效益高,可W应用于大豆子代的抗病性选育,可提高育种效率和大豆花叶 病毒抗性水平,且提高了育种目的的针对性。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明实施例中含有标记M的用聚丙締酷胺跑的电泳图。
[0017] 图中,Marker带型和24个品种(系)带型。
【具体实施方式】
[0018] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白,W下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明,并不用于限定本发 明。
[0019] 实施例中所使用的试验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂 等,如无特殊说明,均可通过商业途径从生物试剂公司买到。
[0020] 所使用的引物为:
[0021] 前引物:5 ' -TGGTTTAAAAATTGTGGAGACAAA-3 ' ;
[0022] 后引物:5' -TTGTGATTGAATGATGGAGTAAGA-3'。
[0023] 实施例
[0024] 上述引物用于检测大豆抗花叶病毒SC7性。
[0025] S1、从现代农业产业技术体系阜阳大豆综合试验站区试试验中随机收集到24份大 豆资源材料(纯合品种或品系),采用SDS法提取每份大豆的DNA,利用所述引物对其进行PCR 扩增,PCR扩增反应体系为20化,包括10 XPCR Buffer(含15mM Mg2+)2.0化,终浓度为IOmM 的dNTP 0.化L,浓度为2.5UAU的Tag酶0.化L,所述前引物0.0如1,所述后引物0.0如1, d地2〇 12.44化,浓度为2〇11旨/化的模板0魁化1^;?〔1?反应程序为94°(:预变性5111111;94°(:变性 30sec,55°C退火30sec,72°C延伸Imin,运行35个循环,然后72°C延伸Smin后于4°C保存;其 中,扩增产物中含有一个235-27化P之间的DNA片段,为候选的具有抗花叶病毒SC7性状的待 检大豆品种(系);
[00%] S2、在步骤Sl所得的扩增产物中加入2.化L Loading Buffer,用聚丙締酷胺胶进 行分离,银染检测,花叶病毒抗性鉴定采用区试结果如表1和图1所示,其中,抗花叶病毒8C7 性状为国家/省区试抗病水平检测为中感、抗病和高抗等级的性状。
[0027]表1花叶病毒抗性鉴定采用区试结果表。
[002引
[0029] W上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人 员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可W作出若干改进和润饰,运些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物,其特征在于,所述引物如下: 前引物:5 ' -TGGITTAAAAATTGTGGAGACAAA-3 ' ; 后引物:5 ' -TTGTGATTGAATGATGGAGTAAGA-3 '。2. 辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物的检测方法,其特征在于,包括如下步骤: 51、 采用SDS法提取每份大豆的DNA,利用所述引物对其进行PCR扩增,PCR扩增反应体系 为20yL,包括 10 X PCR Buf f er (含 15mM Mg2+) 2 · OyL,dNTPO · 2yL,浓度为2 · 5UAU 的Tag酶0 · 2μ L,所述前引物0.08μ1,所述后引物0.08μ1,ddH20 12.44yL,浓度为20ng/yL的模板DNA5yL; PCR反应程序为94°C预变性5min; 94°C变性30sec,55°C退火30sec,72°C延伸lmin,运行35个 循环,然后72°C延伸8min后于4°C保存; 52、 在步骤S1所得的扩增产物中加入2.5yL Loading Buffer,用聚丙稀酰胺胶进行分 离,银染检测。3. 如权利要求2所述辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物的检测方法,其特征在于,扩 增后的感病条带较小,另外一个较大的为抗病带型。4. 如权利要求2所述辅助鉴定大豆抗花叶病毒SC7的引物的检测方法,其特征在于,所 述dNTP的终浓度为1 OmM。
【文档编号】C12N15/11GK105861648SQ201610200675
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月25日
【发明人】王传之, 孙云飞, 刘武艺, 李扬眉, 王敏, 王梓钰, 李智民, 李素梅, 冯邦杰, 刘新亮, 马慧慧, 白鹏, 陈乃珍, 闫振, 张婧霖, 李铭
【申请人】阜阳市农业科学院
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1