作为选择性弹性蛋白酶抑制剂的β-发夹肽模拟物的制作方法
【专利摘要】通式环(?Xaa1?Xaa2?Thr3?Xaa4?Ser5?Xaa6?Xaa7?Xaa8?Xaa9?Xaa10?Xaa11?Xaa12?Xaa13?)的β?发夹肽模拟物及其药学上可接受的盐，其中Xaa1,Xaa2,Xaa4,Xaa6,Xaa7,Xaa8,Xaa9,Xaa10,Xaa11,Xaa12和Xaa13是在本说明书和权利要求书中定义的氨基酸残基，其具有弹性蛋白酶抑制性质，特别是针对人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制性质，并且可用于预防健康个体中的感染或与这样的感染相关的疾病，或用于减缓受感染的患者中的感染。当癌症或免疫性疾病或肺部疾病或心血管疾病或神经变性疾病或炎症或炎症相关疾病由弹性蛋白酶活性介导或引起时，可以进一步使用本发明的化合物。这些肽模拟物可以通过基于混合固相和溶液相合成策略的方法制造。
【专利说明】作为选择性弹性蛋白酶抑制剂的e-发夹化模拟物
[0001] 本发明提供了可用作蛋白酶的抑制剂的e-发夹肤模拟物，其包括在W02006/ 087001A1的一般公开内容中但并没有被W02006/087001A1具体公开。
[0002] 本发明的0-发夹肤模拟物是通式环（-Xaai-Xaa2-Ilir3-Xaa4-SerS-Xaa 6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-XaaiD-Xaaii-Xaai 2-Xaai3-)的化合物及其药学上可接受的盐，其中Xaai, Xaa2, Xaa4, Xaa6，Xaa7，Xaa8，Xaa 9，Xaa"，Xaaii，Xaai哺Xaa"是在本说明书和权利要求书中定义的某些 类型的氨基酸残基。
[0003] 运些0-发夹肤模拟物可用作蛋白酶的抑制剂并且尤其有价值的是用作某些丝氨 酸蛋白酶例如弹性蛋白酶的抑制剂。
[0004] 此外，本发明提供一种高效方法，其中如果需要，可W通过所述方法W文库形式产 生运些化合物。
[0005] 本发明的0-发夹肤模拟物显示针对人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的高抑制活性，而 具有针对蛋白酶3的低抑制活性和针对猪膜弹性蛋白酶(PPE)的出人意料的低抑制活性。运 些有利的活性/选择性特征谱取决于某些类型的Q-氨基酸残基的适当选择和它们在单环肤 模拟物中的位置。
[0006] 蛋白酶的抑制剂正在显现出在治疗疾病中的有前景的治疗用途，所述疾病为例如 癌症（R.P.Beckett,A.Davidson,A.H.Drummond,M.Whitaker,Drug Disc.Today 1996,1, 16-26;L丄.Johnson,R.Dyer,D.J.Hupe, Qirr.Opin.Qiem.Biol.1998,2,466-71;D.Leung, G.Abbenante,and D.P.Fairlie,J.Med.Chem.2000,43,305-341,T.Rockway ,Expert Op in. Ther. Patent S 2003,13,773-786)，寄生物、真菌和病毒感染（例如血吸虫病 (M.M.Becker,S.A.Harrop,J.P.DaIton,B.H.KaIinna,D.P.McManus,D.P.Brindley, J. Biol .Chem. 1995,270,24496-501);白色念珠菌（C.albicans)(C. Abad-Zapetero , R. Goldman ,S.W.Muchmore,C. Hutchins ,K. Stewart,J.Navaza,C.D. Payne ,T.L. Ray , Protein Sci.1996,5,640-52),HIV(A.Wlodawer,J.W.Erickson,Annu.Rev.Biochem.1993, 62,543-85 ; P丄.Darke，J.R. Huff，Adv.曲 armacol. 1994,5,399-454)，肝炎（J.L.Kim, K. A.Morgenstern,,C.Lin,T.Fox,M.D. Dwyer,J. A.Landro,S.P. Chambers ,W.Markland, C.A.Lepre,E.T.0'Malley,S.L.Harbeson,C.M.Rice,M.A.Murcko,P.R. Caron , J.A.Thomson,Cell,1996,87,343-55;R.A.Love'H.E.Parge,J.A.Wickersham, Z. Hostomsky,N.化b址a,E. W.Moomaw, T. Adachi ,Z. Hostomska,Cel 1,1996,87,331-:342)，瘤 疹(W.G 化son，M.R.化11，0^旨.063.013。〇￥.1997，15,39-47))，^及炎性、免疫性、呼吸性 (P.R.Bernstein,P.D.Edwards ,J.C.Wi IIiams, Prog.Med.Chem.1994,31,59-120； T. E. Hugli，Trends Biotechnol. 1996,14,409-12，）、屯、血管（M.T. St 加 bs，W. A. Bode, Thromb.Res.1993,69,1-58;H.Fukami et al,Current Pharmaceutical Design 1998,4, 439-453)和神经变性缺陷，包括阿尔茨海默病（R. Vassar，B. D. Bennett，S. Babu-Kahn， S . Kahn , E . A .Mendiaz ,Science,1999,286,735-41)、血管发生（M. Kaatinen et al, Atherosklerosis 1996,123 1-2,123-131 )和多发性硬化（M.Z.Ibrahim et al, J.化uroimmunol 1996,70,131-138)。
[0007] 在蛋白酶中，丝氨酸蛋白酶构成重要的治疗祀。丝氨酸蛋白酶通过其底物特异性， 特别是通过在Pl上发现的残基类型，分类为膜蛋白酶样（在Pl上优选为带正电荷的残基 Lys/Arg)、弹性蛋白酶样(在Pl上优选为小的疏水性残基Ala/Val)或糜蛋白酶样(在Pl上优 选为大的疏水性残基Phe/Tyr/Leu)。其蛋白酶抑制剂X-射线晶体数据可获得于PDB数据库 (PDB:WWW. rcsb. org/pdb)的丝氨酸蛋白酶包括膜蛋白酶，a-糜蛋白酶，丫-糜蛋白酶，人嗜 中性粒细胞弹性蛋白酶，猪膜弹性蛋白酶，凝血酶，枯草杆菌蛋白酶，人巨细胞病毒蛋白酶， 无色杆菌蛋白酶1，人组织蛋白酶G，谷氨酸特异性酸蛋白酶，carhop邱tidase D，血液凝固 因子Vila,猪因子lXA，mesente;ricop邱tidase，HCV蛋白酶，和嗜热蛋白酶。具有治疗利益的 其它丝氨酸蛋白酶包括类膜蛋白酶，补体转化酶，丙型肝炎-NS3蛋白酶。凝血酶（例如， J.L.Metha,L.Y.Chen,W.W.Nichols ,C.Mattsson,D.Gustaffson,T.G.P.Saldeen, J.Cardiovasc. Pharmacol.1998,31,345-51；C. Li la,P.Gloanec,L. Cadet,Y.Herve, J.Fournier,F丄eborgne,T.J.Verbeuren,G.DeNanteui I,Synth.Comm.1998,28,4419-29) 和因子Xa(例如，1口.￥日。。日，411皿.1?6口.]\16(1.〇16111.1998,33,81-90)的抑制剂在临床评价中 作为抗血栓形成剂，弹性蛋白酶的抑制剂（J.R. Wi I Iiams，R.C. Fal cone, C. Knee, R.L.Stein,A.M.Strimpler,B.Reaves,R.E.Giles,R.D.Krell,Am.Rev.Respir.Dis.1991, 144,875-83)在临床试验中用于肺气肿和其它肺部疾病，而类膜蛋白酶抑制剂目前处于用 于哮喘的II期临床试验(C. Seife，Science 1997，277，1602-3)，尿激酶抑制剂用于乳腺癌， W及糜蛋白酶抑制剂用于屯、脏相关疾病。最后，组织蛋白酶G、弹性蛋白酶和蛋白酶3密切参 与细胞因子及其受体的活性的调节。特别地，在炎症位点上，高浓度的运=种嗜中性粒细胞 丝氨酸蛋白酶(NSP) W与炎性细胞因子的水平升高紧密时间相关地从浸润多形核细胞中释 放，强烈表明运些蛋白酶参与细胞因子生物活性和可用性的控制（U. Bank，S. Ansorge， J丄e址OC.Biol. 2001,69,177-90)。因此弹性蛋白酶的高选择性抑制剂构成用于针对感染 性炎性疾病和非感染性过程中的新药候选物的有价值的祀，所述感染性炎性疾病包括肺疾 病，如慢性阻塞性肺疾病，急性呼吸窘迫综合征，囊性纤维化和缺血-再灌注损伤，W及所述 非感染性过程为例如肾小球肾炎，关节炎和大瘤性类天瘤疮（H. Ohbayashi ,Eped Opin.Investig.Drugs 2002,11,965-980;B.Korkmaz,T.Moreau,F.Gauthier,Biochimie 2008,90,227)〇
[0008] 在许多已出现的蛋白质性丝氨酸蛋白酶抑制剂中，一种是来自向日葵子的14个氨 基酸的环肤，被称为向日葵膜蛋白酶抑制剂（SFTI-I) (S丄UCkett，R. Santiago Garcia, J.J.Barker,A.V.Konarev,P.R.Shewry,A.R.Clarke,R丄.Brady,J.MoI.Biol.1999,290, 525-533;Y.-Q. Long ,S.-L.Lee,C.-Y.Lin, I.J.Enyedy,S.Wang,P. Li ,R.B. Dickson , P.P.Roller，Biorg.&Med.化 em 丄 ett. 2001,11，2515-2519)，其与丝氨酸蛋白酶抑制剂的 Bowman-Birk家族的膜蛋白酶反应性环具有序列和构象相似性。该抑制剂在结合至牛0-膜 蛋白酶的活性位点时采用e-发夹构象。SFTI-I抑制0-膜蛋白酶化i<0.1 nM)、组织蛋白酶G 化i心，15nM)、弹性蛋白酶化i~105山〇、糜蛋白酶化i~7.仙〇和凝血酶化i~136mM)。
[0009] 化合物环（-Xaai-XaaS-llirS-XaaLserS-XaaS-XaaLXaaS-XaaS-XaaW-Xaaii-XaaU-XaaU-)的(6-发夹构象基于来自与位置12上的D-氨基酸残基组合并且由分别地位置3和5上 的保守氨基酸残基化r和Ser养育(foster)的天然存在的肤的0-发夹环。
[0010] 模板结合的发夹模拟肤已描述于文献中（D. Obrecht, M. Altorfer, J.A. Robinson, Adv .Med. Chem. 1999，4，1-68; J. A. Robinson，Syn 丄ett. 2000，4，429-441)，并且丝氨酸蛋白 酶抑制性的模板固定的肤模拟物及其合成方法已描述于国际专利申请W02003/054000A1、 W02006/08700IAl和A.Descours,K.Moehle,A.Renard,J.A.Robinson,QiemBioQiem 2002, 3,318-323中，但先前公开的分子不显示运样的有利活性/选择性特征谱。
[001。 使用组合和平行合成法产生e-发夹肤模拟物的能力已被建立化.Jiang, K.Moehle,B.Dhanapal,D.Obrecht,J.A.Robinson,Helv. Qiim.Acta.2000,83,3097-3112)。 本文描述的方法允许合成和筛选大的发夹模拟文库，其进而显著地促进结构-活性研究，并 因此促进发现具有适合用于新药的化合物性质的新分子，其具有高度强力和选择性的丝氨 酸蛋白酶抑制活性，特别是具有如本文中描述的运样的有利的活性/选择性特征谱。
[0012] 本发明的0-发夹肤模拟物是通式(I)的化合物：
[0013] 环
[0014] (-Xaai-XaaS-T 虹 3-Xaa4-Ser5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-XaaiD-Xaaii-Xaai2-Xaai3-)
[0015] (I)，
[0016] 及其药学上可接受的盐，
[0017] 其中
[001 引 Xaai是OctGly;Arg;hArg;Qia;Glu(苯乙基）；或Dab(下酷基）；
[0019] Xaa2是Glu;化1; Leu; Nle;陆e; h陆e; DiHPhe; Tyr; hTyr;或化 P;
[0020] Xaa* 是 Ala; Al Iy IGly; Abu;或化 1;
[0021] XaaS 是 lie;或 OctGly;
[0022] Xaa^Pro;
[002；3] Xaa 墙化)；
[0024] Xaa? 是 Gln;或 Tyr;
[0025] XaaiD是Lys;或Asn;
[0026] Xaa"是IiLeu; Ser;hSer;hSer (Me); T虹；alIoT虹；Asn;Gln;hGln;Dap; Tyr;或HiS;
[0027] Xaa"是 Dpro^
[00 巧]Xaa"是 P;ro;Tic;Glu;Asp;Ala;化1;或Lys;
[00例条件是
[0030]如果 Xaai 是 OctGly,贝 Ij
[0031] Xaa 堪 Glu;或 Nle;
[0032] 乂日日4是41日；或41311;
[0033] XaaS 是 lie;或 OctGly;
[00；34] Xaa"是 Lys;
[00；35] Xaa"是 Ser; 1"虹；Asn;或 Gln;
[0036] Xaa"是 P;ro;Tic;Ala;化1;或Lys;
[0037] 和 / 或如果 XaaS 是 OctGly,贝 Ij
[0038] Xaai 是 OctGly; Arg;或 Qia;
[0039] Xaa2 是 Glu;或 Nle;
[0040] Xaa*是 Al a;或 Abu;
[0041] Xaa"是 Lys;
[0042] Xaa"是 Ser :1"虹；Asn; Gin;
[0043] Xaa"是P;ro;Tic;Ala;化I;或Lys;
[0044] 并且进一步的条件是
[0045] 如果 Xaaii 是 Tyr;或 His,则
[0046] Xaai是Arg;hArg;或Glu(苯乙基）。
[0047] 根据本发明，运些0-发夹肤模拟物可W通过W下方法制备，所述方法包括
[0048] (a)将适当官能化的固体支持物与在所需的终产物中对应于Xaan的适当N-保护的 氨基酸衍生物偶联，其中n是13、8、7、6、5或4，可W在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的 任何官能团同样适当地受到保护；
[0049] (b)从如此获得的产物移除N-保护基；
[0050] (C)将如此获得的产物用处在所需终产物中对应于XaaD-I的适当N保护的所述氨基 酸衍生物偶联，可W在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的任何官能团同样适当地受到保 护；
[0051] (d)从步骤(C)中获得的产物移除N-保护基；
[0052] (e)使用在所需终产物中处于位置n-2至1位置内的适当N-保护的氨基酸衍生物实 施基本上与步骤(C)和(d)相对应的步骤，可W在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的任何 官能团同样适当地受到保护；
[0053] (f)如果n不是13,则使用在所需终产物中处于位置13至n+1位置内的适当N-保护 的氨基酸衍生物进一步实施基本上与步骤山)和((1)相对应的步骤，可W在所述N-保护的氨 基酸衍生物中存在的任何官能团同样适当地受到保护；
[0054] (g)如果需要，在从步骤(e)或(f)中获得的产物移除N-保护基之前，选择性去保护 分子中存在的一个或几个受到保护的官能团，并将如此释放的反应基通过附接来源于酸、 氨基酸或胺的一个或多个部分和从如此获得的产物移除N-保护基来适当取代；
[0055] 化)从固体支持物脱离如此获得的产物；
[0056] (i)环化从固体支持物切下的产物；
[0057] (j)移除在氨基酸残基链的任何组件的官能团上存在的任何保护基;并且
[0058] (k)如果需要，将如此获得的产物转化成药学上可接受的盐或将如此获得的药学 上可接受的或药学上不可接受的盐转化成相应的游离化合物或转化成不同的药学上可接 受的盐。
[0059] 此后提供了氨基酸的列表，所述氨基酸或其残基适合用于本发明的目的，其中缩 写对应于通常采用的惯例：
[0060] =字母代码 单字母代码
[0061 ] Ala k丙氨酸 A
[0062] 化1 k鄉氨酸 V
[0063] Leu k亮氨酸 L
[0064] Phe 心苯丙氨酸 F
[00化]His k组氨酸 H
[0066] Tyr k酪氨酸 Y
[0067] T;rp k色氨酸 W
[006引 Lys k赖氨酸 K
[00例 Arg k精氨酸 R
[0070] Ser k丝氨酸 S
[0071] T虹 k苏氨酸 T
[0072] Asp 心天冬氨酸 D
[0073] Asn 心天冬酷胺 N
[0074] Glu k谷氨酸 E
[0075] Gln 心谷氨酷胺 Q
[0076] Pro L-脯氨酸 P
[0077] AllylGly k締丙基甘氨酸
[007引 Abu L-日-氨基下酸
[00巧]OctGly k辛基甘氨酸
[0080] 化a k环己基丙氨酸
[0081 ] Nle 心正亮氨酸
[0082] hLeu 心高-亮氨酸
[0083] Whe k高-苯丙氨酸
[0084] DiHPhe k二高-苯丙氨酸，
[00化] (2S)-2-氨基-5-苯基戊酸
[0086] hTyr 心高-酪氨酸
[0087] Dap 心2,3-二氨基丙酸
[008引 Mrg 心高-精氨酸
[0089] hSer 心高-丝氨酸
[0090] hSer(Me) 心高-〇-甲基丝氨酸
[0091] allollir (2S，3S)-2-氨基-3-径基-下酸
[0092] hGln k高-谷氨酷胺
[0093] Glu(苯乙基）（2S)-2-氨基-5-苯乙基氨基-5-氧代戊酸
[0094] 化b (下酷基）（2S) -2-氨基-4-下基氨基-下酸
[0095] Tic (3S)-1，2,3,4-四氨异哇嘟-3-簇酸
[0096] 在本发明的具体实施方案中，0-发夹肤模拟物是通式I的化合物及其药学上可接 受的盐，其中
[0097] Xaai是OctGly;Arg;hArg;或Glu(苯乙基）；
[009引 Xaa2 是 6111;饥6;叫>。或化1;
[0099] Xaa* 是 Ala;或 Al IylGly;
[0100] Xaa 墙 lie;
[0101] Xaa?是Pro;
[010。 Xa 媚化)；
[0103] Xaa? 是 Gln;或 Tyr;
[0104] Xaa"是 Lys;
[01 化]Xaa"是 IiLeu; Ser; T虹；Asn; Tyr; hGln;或 His;
[0106] Xaa"是 Dpro;和
[0107] Xaa。是 Pro;
[010引条件是
[0109] 如果 Xaai 是 OctGly,贝 Ij
[0110] Xaa2 是 Glu;或 Nle;
[0111] Xaa* 是 Ala;
[0112] XaaS 是 lie;
[011引 Xaa"是 Lys;
[0114] Xaa"是 Ser; 1"虹；或 Asn
[01 巧]Xaa。是 Pro;
[0116]并且进一步的条件是 [0117]如果 Xaaii 是 Tyr;或 His,则
[0118] Xaai是Arg;hArg或Glu(苯乙基）。
[0119] 在本发明的另一个具体实施方案中，e-发夹肤模拟物是通式I的化合物及其药学 上可接受的盐，其中
[0120] Xaai是OctGly;Arg;或Glu(苯乙基）；
[01別]乂日日2是6111;饥6;11171';或化1;
[0122] Xaa^^Ala；
[0123] XaaS 是 lie;
[0124] Xaa?是Pro;
[0125] Xaa?是Pro;
[0126] Xaa? 是 Gin;或 Tyr;
[0127] Xaai 日是 Lys;
[01 巧]Xaa"是 Ser; 1"虹；Asn; Tyr;或 Hi S;
[0129] Xaa"是 Dpro^
[0130] Xaa"是 Pro;
[0131] 条件是
[0132] 如果 Xaai 是 OctGly,贝 Ij
[0133] Xaa2 是 Glu;或 Nle;
[0134] 并且进一步的条件是
[0135] 如果 Xaaii 是 Tyr;或 His,则
[0136] Xaai 是 Argo
[0137] 在本发明的另一个具体实施方案中，0-发夹肤模拟物是通式I的化合物及其药学 上可接受的盐，其中
[013 引 Xaai 是 Arg;或 hArg;
[0139] Xaa2 是Glu;化1;或hTyr;
[0140] Xaa* 是 Ala;或 Al IylGly;
[0141] XaaS 是 lie;
[0142] Xaa^Pro ；
[01创 Xaa 墙 Pro;
[0144] Xaa 目是 Gln;或 Tyr;
[014日]XaaiQ 是 Lys;
[0146] Xaa"是 IiLeu; Ser; Thr;或 hGln;
[0147] Xaai2 是。Pro;和
[014 引 Xaais 是化 O。
[0149] 在本发明的另一个具体实施方案中，(6-发夹版模拟物是通式I的化合物及其药学 上可接受的盐，所述化合物选自
[0150] 环
[0151 ] (-0ctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Asn-DF*r〇-F*r〇-);
[0152] 环
[0153] (-OctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Tyr-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0154] 环
[0155] (-OctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Ser-Dp*r〇-F*r〇-);
[0156] 环
[0157] (-OctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0158] 环（-六巧-扣71'-化1'-六13-561'-116-?1'〇-?1'〇-61]1-173-171'-。化〇-化〇-);
[0159] 环（-Arg-Nle-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr-Dp*r〇-F*r〇-);
[0160] 环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-His-Dp*r〇-F*r〇-);
[0161 ]环（-Glu(苯乙基）-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr-DF*r〇-F*r〇-);
[0162] 环（-Arg-Val-Thr-Ala-Ser-I le-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr-Dp*r〇-F*r〇-) O
[0163] 在本发明的另一个具体实施方案中，(6-发夹版模拟物是通式I的化合物及其药学 上可接受的盐，所述化合物选自
[0164] 环
[0165] (-Arg-Glu-Thr-AlIyIGl厂Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0166] 环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-Ser-Dp*r〇-F*r〇-);
[0167] 环（-]1六巧-6111-扣1'-六13-561'-116-?1'〇-?1'〇-6111-173-化1'-。化〇-化〇-);
[0168] 环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-hLeu-Dp*r〇-F*r〇-);
[0169] 环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0170] 环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-hGln-Dp*r〇-F*r〇-);
[0171 ]环（-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Tyr-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0172] 环（-Arg-Val-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-);
[0173] 环（-Arg-hTyr-l'hr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-l'hr-Dft'o-ft'o-) O
[0174] 本发明的方法可有利地^平行阵列合成进行W产生上述通式I的(6-发夹版模拟物 的文库。这样的平行合成允许^高产率和确定的纯度获得许多（通常24-192,典型地96)通 式I的化合物的阵列，从而使二聚和多聚副产物的形成最小化。官能化固体支持物（即固体 支持物加接头分子）、模板和环化位点的恰当选择发挥关键作用。
[0175] 官能化固体支持物便利地衍生自优选地与1-5%二乙締基苯交联的聚苯乙締；用 聚乙締间隔团包覆的聚苯乙締 CTent贫ge臟);和聚丙締醜胺树脂（D .ObrechtJ.- M.Villalgordo,"Solid-Supported Combinatorial and Parallel Synthesis of Small-MoIecuIsr-Weight Compound Libr曰ries",Tetrahedron Orgsnic Chemistry Series,第 17卷,Pergamon,Elsevier Science,1998)。
[0176] 固体支持物通过接头来官能化，即，双官能间隔分子，所述双官能间隔分子在一个 末端上含有用于接合至固体支持物的错定基团并且在另一个末端上含有用于后续化学转 化和切割过程的可选择性切割官能团。出于本发明目的，使用两种类型的接头：
[0177] 1型接头设计成在酸性条件下释放酷胺基化.Rink,Te化ahe化on Lett. 1987,28, 3783-3790)。运种类型的接头形成氨基酸簇基的酷胺；由运类接头结构官能化的树脂的例 子包括4-[(( (2,4-二甲氧苯基）Fmoc-氨基甲基）苯氧乙酷氨基）氨基甲基]PS树脂、4-[(((2,4-二甲氧苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧乙酷氨基)氨基甲基]-4-甲基-二苯甲基胺PS树 脂(Rink酷胺MBHAPS树脂)和4-[(((2,4-二甲氧基-苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧乙酷氨基)氨 基甲基]二苯甲基胺PS-树脂(Rink酷胺BHA PS树脂）。优选地，支持物衍生自最优选地与1-5%二乙締基苯交联并借助4-(((2,4-二甲氧苯基)Fmoc-氨基甲基)苯氧乙酷氨基)接头官 能化的聚苯乙締。
[0178] 2型接头设计成最终在酸性条件下释放簇基。运种类型的接头与氨基酸的簇基形 成酸不稳定醋，通常是酸不稳定节醋、二苯甲基醋和=苯甲基醋;运类接头结构的例子包括 2-甲氧基-4-径甲基苯氧基(Sasrin霞接头）、4-(2,4-二甲氧基-径甲基））-苯氧基(Rink接 头）、4-(4-巧圣甲基)-3-甲氧苯氧基)下酸(HMPB接头）、S苯甲基和2-氯S苯甲基。优选地， 支持物衍生自最优选地用1-5 %二乙締基苯交联并借助2-氯S苯甲基接头官能化的聚苯乙 締。
[0179] 当作为平行阵列合成实施时，本发明的方法可W有利地如下文所述那样实施，但 是本领域技术人员将立即明了，在需要合成本发明的一种单一化合物的情况下，将必需如 何调整运些方法。
[0180] 将数目与通过平行方法待合成的化合物的总数相等的反应容器充W25至lOOOmg， 优选地60mg适宜的官能化固体支持物，优选地1至5 %交联聚苯乙締或Tentagel树脂。
[0181] 待使用的溶剂必须能够溶胀该树脂并且包括但不限于二氯甲烧(DCM)、二甲基甲 酷胺(DMF)、N-甲基化咯烧酬(醒P)、二嗯烧、甲苯、四氨巧喃（THF)、乙醇化t0H)、S氣乙醇 (TFE )、异丙醇等。含有极性溶剂作为至少一种组分的溶剂混合物(例如20 % TFE/DCM、35 % THF/NMP)有益于确保结合树脂的肤链的高度反应性和溶剂化(G.B.Fields，C.G.Fields, J.Am.Chem.Soc.1991,113,4202-4207)。
[0182] 随着开发出在溫和酸性条件下释放C端簇酸基，不影响保护侧链中官能团的酸不 稳定基团的多种接头，在合成受保护的肤片段方面已经取得巨大进展。2-甲氧基-4-径基节 醇衍生的接头（S:as.rin?接头，Mergler等人，Tetrahe化on Lett. 1988,29 4005-4008)用 稀释的S氣乙酸(DCM中的0.5-l%TFA)可切割并且对肤合成期间的Fmoc去保护条件稳定， 基于Boc/tBu的额外保护基与运种保护方案相容。适用于本发明方法的其他接头包括过酸 不稳定性4-( 2,4-二甲氧基-?甲基）-苯氧基接头（Rink接头，H. Rink , Tetrahedron Lett. 1987，28，3787-3790)，其中肤的移除需要DCM中的10 %乙酸或DCM中的0.2 氣乙 酸;4-(4-?甲基-3-甲氧苯氧基)下酸衍生的接头(HMPB-接头，F16rsheimer和Riniker, 化Ptides 1991,1990 131)，该接头也用1%TFA/DCM切割W产生含有全部酸不稳定侧链保 护基的肤片段；另外，2-氯S苯甲基氯接头（Bar I OS等人，Tetrahedron Lett. 1989,30 , 3943-3946)，该接头允许使用冰醋酸/S氣乙醇/DCM( 1:2:7)混合物30分钟使肤脱离。
[0183] 氨基酸的适合保护基及其残基的适合保护基例如分别是
[0184] -对于氨基(如存在，例如也存在于赖氨酸的侧链中）
[01化]Cbz 苯甲氧基幾基
[01化]Boc 叔下氧幾基
[0187] Fmoc 9-巧基甲氧幾基
[0188] Alloc締丙氧幾基
[0189] 化OC S甲基甲娃烷基乙氧幾基
[0190] Tcc S氯乙氧幾基
[0191] 化S 邻硝基苯基横酷；
[0192] ht S苯甲基或S苯甲基(trityl)
[0193] -对于用醇组分转化成醋的簇基（如存在，例如也存在于精氨酸和谷氨酸的侧链 中）
[0194] tBu 叔下基
[019引 Bn 苄基
[0196] Me 甲基
[0197] Ph 苯基
[019引 Pac 苯甲酯甲基
[0199] 締丙基
[0200] Tse S甲基甲娃烷基乙基
[0201] Tce S 氯乙基；
[0202] -对于脈基(如存在，例如存在于精氨酸的侧链中）
[0203] Rnc 2,2,5,7,8-五甲基苯并二氨化喃-6-横酷基
[0204] Ts 甲苯横酷基(即，对甲苯横酷基）
[02化]Cbz 苯甲氧基幾基
[0206] Pbf 五甲基二氨苯并巧喃-5-横酷基
[0207] -对于径基(如存在，例如存在于苏氨酸和丝氨酸的侧链中）
[020引巧U 叔下基
[0209] Bn 苄基
[0210] ht S 苯甲基。
[0211]优选地使用9-巧基甲氧幾基巧moc)保护的氨基酸衍生物作为构建本发明0-发夹 环模拟物的结构单元。对于去保护，即，切去化OC基团，可W使用DMF中的20 %赃晚或DMF中 的2 % D脚/2 %赃晚W及C出Cl 2中的六氣异丙醇。
[0212]基于最初称入反应管中的官能化固体支持物的毫当量/克(meq/g)载量，反应物 (即氨基酸衍生物）的量通常1至20当量(通常，对于聚苯乙締树脂是0.1至2.85meq/g)。如果 需要，可W使用额外当量的反应物，W驱动反应W合理时间完成。优选的工作站(然而，不限 于 1?)是Labsource'S Combi-chem工作站、Protein Technolo邑ies'Symphony和MultiSyn Tech's-Syro合成仪，后者在从固体支持物脱下充分保护的线性肤的过程期间额外地配备 转移装置和储盒。全部合成仪均能够提供受控环境，例如，反应可W在与室溫不同的溫度W 及如果需要在惰性气氛下完成。
[0213] 酷胺键形成需要活化a-簇基用于酷化步骤。当运种活化借助常使用的碳二亚胺如 二环己基碳二亚胺（DCC，Sheehan 和 Hess J. Am. Chem. Soc. 1955,77，1067-1068)或二异丙基 碳二亚胺（DIC，Sarantaki S 等人 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976,73,336-:342)实施时， 所产生的二环己基脈和二异丙基脈是不可溶的，并且分别可溶解于通常使用的溶剂中。在 碳二亚胺方法的变例中，包含1-径基苯并S挫化OBt, K扣nig和Geiger,化em.Ber. 1970， 103,788-798)作为偶联混合物的添加剂。HO化阻止脱水、抑制活化氨基酸的外消旋化并充 当改善缓慢偶联反应的催化剂。已经使用某些憐鐵试剂作为直接偶联试剂，如苯并=挫-1-基-氧-S(二甲基氨基）憐鐵六氣憐酸盐（B0P，Casho等人，Tetrahedron Lett. 1975,14, 1219-1222; Synthesis 1976，751-752)，或苯并S挫-I-基-氧-S-化咯烷基-憐鐵六氣憐酸 盐（P 厂 B0P，Coste 等人，Tetrahe 化 on 16?.1990,31，205-208)，或2-(1护苯并^挫-1-基） 1,1,3,3-四甲基脈鐵四氣棚酸盐（TBTU)或六氣憐酸盐化BTU,Knorr等人，Tetrahedron Lett. 1989，30，1927-1930);运些憐鐵试剂也适用于与保护的氨基酸衍生物原位形成册化 醋。最近，还已经使用叠氮化憐酸二苯醋化PPA)或0-(7-氮杂-苯并S挫-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脈鐵六氣棚酸盐(TATU)或0-(7-氮杂-苯并S挫-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脈鐵六氣 憐酸盐(HATU)/7-氮杂-1-?基苯并S挫化OAt，Ca巧ino等人,Tetrahe化on Lett. 1994,35, 2279-2281)或0-(6-氯-lH-苯并S挫-1-基)-N，N，N'，N'-l，l，3,3-四甲基脈鐵六氣棚酸盐 (1'(：1'1])或六氣憐酸盐化(：1'1]，]\1曰'(16'，5111￥0和4化6'1。1〇:肥1'1]311(11'(：1'1]:化￥(：0叫1111邑 民eagents:Development and Industrial Applications,Poster Presentation,Gordon Conference February 2002)作为偶联试剂，W及尤其用于偶联N-甲基化氨基酸的1, 1,3, 3-双（四亚甲基）氯脈鐵六氣憐酸盐（PyCIU)(J.Coste,E.F;r6;rot,P.Jouin,B.Cast;ro, Teh址e化on Lett. 1991,32,1967)或五氣苯基联苯-次麟酸盐（S.Qien,J.Xu,Tetrahehon Lett.1991,32,6711)。
[0214] 归因于必需近乎定量性偶联反应的事实，需要具有反应完成的实验证据。可W在 每个偶联步骤后容易地和迅速进行巧S酬试验化aiser等人,Anal .BiochemiSt巧1970, 34,595)，其中针对树脂结合肤的等分试样的阳性比色反应定性表示伯胺存在。当用碱释放 Fmoc发色团时，Fmoc化学允许Fmoc发色团的分光光度检测（Meienhofer等人， Int.J.P巧tide Protein Res.1979,13,35-42)。
[0215] 通过采用W下两种方法之一反复暴露于纯溶剂，将每个反应管内部树脂结合的中 间体洗涂至不含过量的遗留试剂、溶剂和副产物：
[0216] 1)将反应容器填充W溶剂(优选地5mU，揽拌5至300分钟，优选地15分钟，并排干 W驱出溶剂；
[0217] 2)将反应容器填充W溶剂(优选地5mL)并排入接收器皿如试管或小瓶中。
[0218] 上述两种洗涂过程均重复至多到约50次(优选地约10次），通过多种方法如化C、GC 或视检洗出液，监测移除试剂、溶剂和副产物的效率。
[0219] 随移除过量试剂、副产物和溶剂后，重复树脂结合的化合物与试剂在反应孔内部 反应的上述过程，伴W连续转化，直至已经获得树脂结合的充分保护的最终线性肤。
[0220] 从固体支持物脱离运种充分保护的线性肤之前，如果需要，可能的是选择性去保 护分子中存在的一个或几个受到保护的官能团和适当取代如此释放的反应基。为了此效 应，所考虑的官能团必须最初通过保护基保护，所述保护基可W被选择性移除而不影响存 在的其余保护基。Alloc(締丙基氧幾基)是氨基保护基的实例，而Allyl(締丙基)是簇基保 护基的实例。两种基团均可例如通过C出Cb中的苯基硅烷和PcT选择性移除而不影响分子中 存在的其余保护基，例如Fmoc。如此释放的反应基随后可使用适合用于引入所需取代基的 试剂处理。因此，例如，氨基可W通过对应于待引入的酷基取代基的酷化剂来酷化，而簇基 可W通过引入氨基取代基来衍生化。优选地，Alloc或Allyl将通过应用干燥C此C12中的0.2 当量四苯基-麟)钮(O)(IOmM)和10当量苯基硅烷在室溫下进行15分钟来移除。在过滤和 洗涂树脂后，通过使用新鲜试剂溶液重复该程序来完成去保护。在释放的簇基的情况下，例 如胺的随后偶联可W例如通过应用如上所述的用于酷胺键形成的试剂/反应条件来实现。
[0221] 通过使加载的树脂暴露用于切割的试剂溶液(优选地3至5mL)实现从固体支持物 脱离充分保护的线性肤。如上文所述实施溫度控制、揽拌和反应监测。借助转移装置，反应 容器与含有储管W高效收集已切割产物溶液的储盒连接。将留在反应容器中的树脂随后如 上所述用3至5mL适宜溶剂洗涂2至5次W提取(洗脱)尽可能多的脱离产物。将如此获得的产 物溶液合并，小屯、避免交叉混合。随后根据需要操作各份溶液/提取物W分离最终化合物。 常见的操作包括但不限于蒸发、浓缩、液体/液体提取、酸化、碱化、中和或溶液中的其它反 应。
[0222] 将含有充分保护的线性肤衍生物的溶液蒸发，其中所述线性肤衍生物已经从固体 支持物切下并用碱中和。随后使用溶剂如DCM、DMF、二嗯烧、THF等，在溶液中实现环化。前文 提到的多种偶联试剂可W用于环化。环化的持续时间是约6-48小时，优选地约16小时。跟踪 反应进程，例如通过RP-HPLC(反相高效液相色谱）。随后通过蒸发法移除溶剂，将充分保护 的环状肤衍生物溶解于不可溶混于水的溶剂（如DCM)中，并且该溶液用水或水可溶混性溶 剂的混合物提取，W除去任何过量的偶联试剂。
[0223] 最后，将充分保护的肤衍生物用95%TFA、2.5%此0、2.5%TIS或用于实现切除保 护基的另一种清除剂组合处理。切割反应时间通常是30分钟至12小时，优选地约2.5小时。
[0224] 可选地，可W在玻璃容器中手工地实现充分保护的肤从固体支持物的脱离和完全 去保护。
[0225] 在完全去保护后，例如，W下方法可W用于其他工序：
[0226] 1)将挥发性物质蒸发至干燥，并且将粗制肤溶解于水中的20%Ac0H内并用异丙酸 或适用的其他溶剂提取。将水层收集并蒸发至干燥，并且作为终产物，获得充分去保护的 肤，环（-Xaai-XaaS-T 虹 3-Xaa4-Ser 日-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaai 日-Xaaii-XaaU-Xaa"-);
[0227] 2)在真空下浓缩去保护混合物。在二乙酸中、优选地在(TC沉淀充分去保护的肤 后，将固体洗涂至多约10次，优选地3次，干燥，并且作为终产物，获得充分去保护的肤，环(- Xaai-XaaS-T 虹 3-Xaa4-Ser5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-XaaW-Xaaii-Xaai2-Xaai3-)。
[0228] 取决于其纯度，如上获得的终产物可W直接用于生物测定，或需要被进一步纯化， 例如通过制备型HPLC来纯化。
[0229] 如之前提到，如果需要，此后可W将如此获得的充分去保护的环状产物转化成药 学上可接受的盐或将如此获得的可药用或不药学上可接受的盐转化成相应的游离化合物 或转化成不同的药学上可接受的盐。运些操作的任一者可W通过本领域熟知的方法实施。
[0230] 本发明的(6-发夹肤模拟物可W在广泛类型的应用(其中炎性疾病或肺部疾病或感 染或免疫性疾病或屯、血管疾病或神经变性疾病由丝氨酸蛋白酶活性介导或引起，或其中癌 症由丝氨酸蛋白酶活性介导或引起）中使用。为了控制或预防适于用蛋白酶抑制剂治疗的 给定疾病或病症，可施用本发明的e-发夹肤模拟物本身或可W将本发明的e-发夹肤模拟物 施加为与本领域中已知的载体、稀释剂或赋形剂一起的适当制剂。
[0231] 当用于治疗、预防、调节或重塑疾病例如al抗膜蛋白酶缺乏症(AATD)、肺气肿、类 风湿关节炎、骨性关节炎、动脉粥样硬化、银屑病、囊性纤维化（CF)、慢性阻塞性肺疾病 (COPD)、特发性肺纤维化(IPF)、支气管扩张症、支气管扩张、慢性支气管炎、多发性硬化、急 性呼吸窘迫综合征(ARDS)、急性肺损伤(ALI)、肺性高血压(PH)、肺动脉高压(PAH)、膜腺炎、 哮喘、过敏性鼻炎、炎性皮肤病、血管成形术后再狭窄、全身炎性呼吸系统综合征(SIRS)、缺 血再灌注损伤、屯、脏肥大、屯、肌炎、急性屯、肌梗塞（AMI)、屯、脏衰竭、屯、脏移植、炎性肠病 (IBD)、结肠炎、克罗恩病、适应性结肠炎或癌症，例如但不限于肺癌、乳腺癌或与血管发生 相关的癌症或转移癌时，本发明的e-发夹肤模拟物可W单独施用，作为几种e-发夹肤模拟 物的混合物与其他抗炎性剂或抗微生物剂或抗癌药和/或与其他药物活性物质组合时施 用。本发明的e-发夹肤模拟物可W原样或作为药物组合物施用。
[0232] 包含本发明0-发夹肤模拟物的药物组合物可W通过常规混合、分散、造粒、衣片剂 制造、粉碎、乳化、封胶、包埋或冻干方法制造。药物组合物可W使用一种或多种促进本发明 的活性e-发夹肤模拟物加工成制品的生理可接受载体、稀释剂、赋形剂或赋形剂W常规方 式配制，其中可W药学地使用所述制品。正确的制剂取决于所选的施用方法。
[0233] 对于局部施用，本发明的0-发夹肤模拟物可W配制为溶液，凝胶剂、油膏剂、乳膏 剂、混悬剂等，如本领域熟知。
[0234] 全身性制剂包括设计成通过注射例如皮下、静脉内、肌内、銷内或腹膜内注射施用 的那些，W及设计成透皮、透粘膜、口服或肺施用的那些。
[0235] 对于注射剂，本发明的0-发夹肤模拟物可W在水溶液中、优选地在生理相容性缓 冲液如化nk溶液、Ringer溶液或生理盐水中配制。所述溶液可W含有配制剂如助悬剂、增溶 剂、稳定剂和/或分粉剂。可选地，本发明的e-发夹肤模拟物可W处于粉末形式，W在使用前 与合适的溶媒(例如无菌无热原的水)组合。
[0236] 对于透黏膜施用，在制剂中使用适合待渗透的屏障的渗透剂，如本领域已知。
[0237] 对于口服施用，该化合物可W通过将本发明的活性0-发夹肤模拟物与本领域熟知 的可药用载体组合来容易地配制。运类载体使得本发明的e-发夹肤模拟物可配制为片剂、 丸剂、锭剂、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、混悬剂、粉剂等，W由待治疗的患者口服 摄入。对于口服制剂，例如粉剂、胶囊剂和片剂，合适的赋形剂包括填料如糖，如乳糖、薦糖、 甘露糖和山梨糖;纤维素制品如玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃馨淀粉、明胶、黄著胶，甲 基纤维素、径丙基甲基纤维素、簇甲基纤维素钢和/或聚乙締化咯烧酬(PVP);造粒剂和粘合 剂。如果需要，可W添加崩解剂，如交联聚乙締化咯烧酬、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钢。 如果需要，可W使用标准技术将固体剂型进行糖包衣或肠溶包衣。
[0238] 对于口服液体制品例如混悬剂、馳剂和溶液剂，合适的载体、赋形剂或稀释剂包括 水、乙二醇、油、醇等。另外，可W添加矫味剂、防腐剂、着色剂等。
[0239] 对于口腔施用，组合物可W采取如本领域已知地配制的片剂、锭剂等形式。
[0240] 对于通过吸入施用，本发明的(6-发夹肤模拟物W气雾喷雾剂形式从加压的包装或 喷雾器，借助于适合的抛射剂，例如二氯二氣甲烧、=氯氣甲烧、二氧化碳或另一种适合的 气体方便地递送。在加压气雾剂的情况中，剂量单位可W通过提供阀而递送计量的量来确 定。用于在吸入器或吹入器中使用的例如明胶的胶囊和药筒可配制为含有本发明的e-发夹 肤模拟物和适合的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
[0241] 化合物也可W与适宜的栓剂基料如可可脂或其他甘油醋一起配制于直肠或阴道 组合物如栓剂中。
[0242] 除前文描述的制剂之外，本发明的0-发夹肤模拟物也可W配制为胆库制剂。运种 长效制剂可W通过(例如皮下或肌内）埋植或通过肌内注射施用。为制造运类储库制剂，本 发明的e-发夹肤模拟物可W用合适的聚合材料或疏水材料(例如，作为可接受油中的乳液） 或离子交换树脂配制，或配制为微溶性盐。
[0243] 此外，可W使用其他药物递送系统，如本领域熟知的脂质体和乳液。也可W使用某 些有机溶剂如二甲基亚讽。额外地，本发明的e-发夹肤模拟物可W使用持续释放系统(如含 有治疗剂的固体聚合物的半透性基质)递送。各种持续释放材料已经是确立的并且是本领 域技术人员熟知的。取决于它们的化学性质，持续释放胶囊剂可W释放所述化合物持续几 周直至超过100日。根据治疗剂的化学性质和生物学稳定性，可W使用额外的蛋白质稳定化 策略。
[0244] 由于本发明的0-发夹肤模拟物含有带电荷残基，因此它们可W原样或作为药学上 可接受的盐包括于前述任一种制剂中。药学上可接受的盐倾向于比相应的游离形式更多可 溶于含水溶剂和其他质子溶剂中。特别合适的药学上可接受的盐包括与W下酸的盐:簇酸、 麟酸、横基酸和氨基横酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烧酸、乙醇酸、乳酸、延胡索酸、 班巧酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、巧樣酸、氨基酸、如谷氨酸或天冬 氨酸、马来酸、径基马来酸、甲基马来酸、环己烧簇酸、金刚烧簇酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基 水杨酸、献酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲横酸或乙横酸、2-径基乙横酸、乙烧-1,2-二横酸、 苯横酸、2-苯横酸、1，5-糞二横酸、2-、3-或4-甲基苯横酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫 酸、N-环己基氨基横酸、N-甲基-、N-乙基或N-丙基氨基横酸和其他有机质子酸，如抗坏血 酸。合适的无机酸是例如氨面酸(如氨氯酸）、硫酸和憐酸。
[0245] 本发明的0-发夹肤模拟物或其组合物通常将W有效实现预期目的量使用。应当理 解所用的量将取决于具体的应用。
[0246] 对于局部施用W治疗或预防适于用0-发夹模拟物治疗的疾病，治疗性有效剂量可 W使用例如实施例中提供的体外测定法确定。治疗可W在疾病明显时施加，或甚至当它不 明显时也可W施加。普通技术人员将能够在无需过多实验的情况下确定治疗局部疾病的治 疗有效量。
[0247] 对于全身性施用，可W从体外测定法初步估计治疗有效剂量。例如，可W在动物模 型中配制某个剂量W实现包括ICso的循环型0-发夹肤模拟物浓度范围，如细胞培养物中所 测定。运类信息可W用来更精确地确定用于人类中的剂量。
[0248] 也可W使用本领域熟知的技术，从体内数据(如动物模型）估计初始剂量。本领域 普通技术人员可W基于动物数据容易地优化向人类的施用。
[0249] 可W调节单独作为丝氨酸蛋白酶抑制剂应用的剂量数量W提供足W维持治疗效 果的本发明e-发夹肤模拟物的血浆水平。治疗有效的血清水平可W通过每日施用多个剂量 实现。
[0250] 在局部施用或选择性摄入的情况下，本发明0-发夹肤模拟物的有效局部浓度可W 与血浆浓度不相关。本领域普通技术人员将能够在无需过多实验的情况下优化治疗有效的 局部剂量。
[0251] 当然，施用的本发明的0-发夹肤模拟物的量将取决于正在治疗的受试者、该受试 者的体重、疾患的严重性、施用方式和处方医师的判断。
[0252] 正常情况下，本文所述的本发明的0-发夹肤模拟物的治疗有效剂量将在不造成明 显毒性的情况下提供治疗益处。
[0253] 可W通过细胞培养或实验动物中的标准药学方法确定本发明0-发夹肤模拟物的 毒性，例如，通过确定LD50(对50%群体致死的剂量)或LDioo(对100%群体致死的剂量）。毒性 作用和治疗作用之间的剂量比是治疗指数。优选显示高治疗指数的化合物。从运些细胞培 养测定法和动物研究中获得的数据可W用于形成在人类中使用时无毒的剂量范围。本发明 的e-发夹肤模拟物的剂量优选地处于在毒性低或无毒情况下包括有效剂量的一系列循环 浓度内。该剂量可W根据所用的剂型和所用的施用途径在运个范围内变动。确切的制剂、施 用途径和剂量可W由各位医师根据患者的状况选择（见，例如Fingl等人，1975,引自：The Pharmacological Basis of Therapeutics,第I章，第顶）。
[0254] 本发明也可W包括化合物，其与通式环(-Xaai-Xaa2-Thr3-Xaa4-Ser5-Xaa6-Xaa7-Xaa 8-Xaa9-XaaiD-Xaaii-Xaai2-Xaai3-)的化合物相同，差异在于一个或多个原子由具有与自 然界中通常存在的原子质量或质量数不同的原子质量数或质量的原子替换，例如富含 2H (0)、化、11(：、14(：、1291等的化合物。将运些同位素类似物和它们的药用盐和制剂视为在治疗 和/或诊断中可用的药剂，例如，但不限于，其中精细调节体内半寿时间可能导致优化剂量 方案的情况。
[0255] W下实施例说明本发明，但是无论如何将不得解释为限制其范围。 实施例
[0256] 1.肤合成
[0257] 保护的第一氨基酸残基与树脂的偶联
[0巧引将1邑（1.4111101)2-氯立苯甲基氯树脂（1.4mMol/g;100-200目，共聚（苯乙締-1% DVB)聚合物母体;BarIos等人，Tetr址e化on Lett. 1989,30,3943-3946)填充至干燥的烧瓶 中。将树脂悬浮于C此Cl2(5mL)中并且使其在室溫恒定振摇下溶胀30分钟。添加与960山（4当 量)二异丙基乙胺(DIEA)混合的适当保护的第一氨基酸残基在C此Cb(SmL)中的0.98mMol (0.7当量）溶液(见下文）。将反应混合物在25°C振摇4小时后，将树脂滤出并且用C此CbQ X )、DMF(1 X )和C出Cl2(l X )连续洗涂。将C此Cl2/Me0H/DIEA(17/2/l，10血）的溶液添加至 树脂并且将悬液振摇30分钟。在过滤后，将树脂按W下顺序用如下洗涂:C出Cb(1 X )、DMF( 1 X )、CH2Cl2( 1 X )、MeOH( 1 X )、CH2Cl2( 1 X )、MeOH( 1 X )、CH2Cl2(2 X )、化20(2 X )并在真空下 干燥6小时。
[0巧9] 载量通常地是0.6-0.7mMol/g。
[0260]制备W下预加载的树脂：
[o%1]尸111〇。-56八1811)-0-2-氯^苯甲基树脂和尸111〇。斗'〇-0-2-氯^苯甲基树脂。
[0262]使用Syro-肤合成仪(MultiSynTech)使用24-96个反应容器实施合成。在每个容器 中，放置0.04mMol上述树脂并且使树脂在C出Cl2和DMF中分别溶胀15分钟。将W下反应循环 编程并实施：
[0%3]
[0265] 除非另外指出，否则最终偶联氨基酸后，通过采用上述反应循环的步骤1-3进行 Fmoc去保护。
[0266] 适当保护的氨基酸结构单元是商购可得的或可W按本领域已知的进行合成。
[0267] 苯乙胺与具有簇基的侧链的附接 [0%引程序A
[0269] 苯乙胺与树脂上的选择性去保护的线性肤的附接
[0270] 为了从树脂结合肤的簇基官能团移除締丙基保护基，将树脂结合肤(0.(MmMol)在 新鲜蒸馈的C也Cb中溶胀至少15分钟，随后加入干燥C也Cb中的0.2当量的四苯基-麟） 钮(0)(1 OmM)和10当量苯基硅烷。在室溫下摇动反应混合物15分钟后，将树脂滤出，并加入 试剂的新鲜溶液W重复该程序。在随后用C出Cb、DMF和Et2〇洗涂树脂后，将树脂再次在 C也Cb中溶胀并且通过随后加入3.6当量苯乙胺与3.6当量溶于DMF的HOAt和3.6当量溶于 DMF的DIC的混合物从而使反应混合物静置1小时，仅通过偶尔揽拌打断，来实现苯乙胺的附 接。在过滤和用DMF洗涂树脂S次后，通过用3.6当量的同一胺和3.6当量溶于DMF的HOAt的 混合物W及DMF中的3.6当量HATU和7.2当量DIPEA的混合物的新鲜溶液重复该程序来完成 偶联。
[0271 ] 和3.6当量HOAT混合物的新鲜溶液与3.6当量的HATU和7.2的混合物重复该过程完 成在DMF EQ DIPEA
[0272] 主链环化肤的环化和制备
[0273] 切割充分保护的肤片段
[0的4] 在完成合成后，将树脂（0. (MmMol)悬浮于ImUO. 13mMol，3.4当量）在C也Ch中的 l%TFA(v/v)中3分钟，过滤，并且将滤液用1血(〇.58mMol，14.6当量)在C也Ch中的10%DIEA (v/v)中和。将运个过程重复3次W确保切割的完成。将滤液蒸发至干燥，并且通过使用含有 95%S氣乙酸(TFA)、2.5%水和2.5%S异丙基硅烷(TIS)的切割混合物，将产物的样品充 分去保护，通过反相-HPLC(Ci泡)和ESI-MS分析W检测线性肤合成的效率。
[0275] 线形肤的环化
[0276] 将充分保护的线性肤（0.04mMo 1)溶解于DMF(4iiMo 1 /mL)中。随后添加30.4mg (0.08111]\1〇1，2当量）的齡1'1]、10.9111邑（0.08111]\1〇1，2当量）的册41和2祉1(0.16111]\1〇1，4当量）的 DIEA，并将混合物在25°C满旋混合16小时并且随后在高真空下浓缩。将残余物在C出Cb和 出0/CH3CN(90/10:v/v)之间分配。将C出Cl細蒸发W产生充分保护的环状肤。
[0277] 环状肤的完全去保护
[0278] 将获得的环状肤溶解于3mL含有82.5 % S氣乙酸(TFA)、5 %水、5 %茵香硫酸、5 % 苯酪和2.5%乙二硫醇化DT)的切割混合物中。使混合物在25°C静置2.5小时并且随后在真 空下浓缩。在(TC于二乙酸化t2〇)中沉淀充分去保护的环状肤后，将固体用化2〇洗涂两次并 干燥。
[0279] 通过制备型HPLC肤纯化粗产物后，将肤冻干（白色粉末），并通过下述分析方法进 行分析：
[0280] 用于实施例5-10、16-18的分析方法A:
[0巧1 ]分析性HPLC保留时间（RT，W分钟计）使用具有W下溶剂A(出0+0.1 % TFA)和B (畑 3CN+0.01%TFA)和梯度的 Ascentis Express C18 柱，50x 3.Omm, (cod.53811-U-S啡elco)进行测定：0-0.05min:97%A，3%B;4.95min:3%A97%B;5.35min:3%A，97%B; 5.40min:97%A，3%B。流速 = 1.3mL/min;UV_Vis = 220nm。
[0282] 用于实施例1-4的分析方法B:
[0283] 分析性HPLC保留时间（RT，W分钟计）使用具有W下溶剂A(出0+0.1 % TFA)和B (畑 3CN+0.01%TFA)和梯度的 Ascentis Express C18 柱，50x 3.Omm, (cod.53811-U-Supelco)进行测定：0-0.05min:97%A，3%B;3.40min:33%A，67%B;3.45min:3%A，97%B; 3.65min:3%A，97%B;3.70min:97%A，3%B。流速 = 1.3mL/min;UV_Vis = 220nm。
[0284] 用于实施例11-15的分析方法C:
[0285] 分析性HPLC保留时间（RT，W分钟计）使用具有W下溶剂A(出0+0.1 % TFA)和B (畑3CN+0.01%TFA)和梯度的Xselect C細 C18XP柱，IOOx 3.0mm, (cod.186006107， Waters)进行测定：0-0.05min:95%A, 5%B; 10.05min:3%A, 97%B; 12.05min:3%A，97%B; 12.10min:95%A，5%B。流速 = 0.6mL/min;UV_Vis = 220nm。
[O%6] 实施例1-13示于表1中。肤如下合成:起始树脂是Fmoc-Ser (tBu)-0-2-氯S苯甲基 树脂，其如上所述制备。向该树脂最终在第4位接枝Xaa4。W如下序列按照上述程序在固体 支持物上合成线性肤：树脂-Sers-Xaa 4-Thr3-Xaa2-Xaai-Xaai3-Xaai 2-Xaaii-XaaiD-Xaa9-Xaa8-Xa a7-Xaa6。在如上所述的最终Fmoc去保护后，如上所示将肤从树脂切掉、环化、去保 护和纯化。
[0287] 使用如上所述的分析方法测定的HPLC保留时间和UV纯度显示于表1中。
[0288] 实施例14、16示于表1中。肤如下合成：起始树脂是Fmoc-Pro-O-S-氯S苯甲基树 月旨，其如上所述制备。向该树脂最终在第12位接枝XaaU。W如下序列按照上述程序在固体支 持物上合成线性肤：树脂-Pr〇U-Xaai 2-Xaaii-Xaai 日-Xaa9-Xaa8-Xaa7-Xaa6-Ser 日-Xaa4-Thr3- Xa a2-Xaai。在如上所述的最终Fmoc去保护后，如上所示将肤从树脂切掉、环化、去保护和纯 化。
[0289] 使用如上所述的分析方法测定的HPLC保留时间和UV纯度显示于表1中。
[0290] 实施例15示于表1中。肤如下合成:起始树脂是Fmoc-Pro-O-S-氯S苯甲基树脂，其 如上所述制备。向该树脂最终在第12位接枝XaaU。W如下序列按照上述程序在固体支持物 上合成线性肤：树脂-Proi 3-Xaai2-Xaaii-XaaW-Xaa9-Xaa8-Xaa 7-Xaa6-SerS-Xaa4-Ser3-Xaa 2-Glui。在最后的Fmoc-去保护之前，应用程序AW将苯乙胺附接至Glui的侧链。在如上所述的 最终Fmoc去保护后，如上所示将肤从树脂切掉、环化、去保护和纯化。
[0291] 使用如上所述的分析方法测定的HPLC保留时间和UV纯度显示于表1中。
[0292] 实施例17-18示于表1中。肤如下合成：起始树脂是Fmoc-Pro-O-S-氯S苯甲基树 月旨，其如上所述制备。向该树脂最终在第7位接枝Xaa 7。W如下序列按照上述程序在固体支 持物上合成线性肤：树脂-Pro8-Xaa7-Xaa 6-Sers-Xaa4-Ilir3-Xaa2-Xaai-Xaai 3-Xaai2-Xaaii-XaaW-Xaa9。在如上所述的最终Fmoc去保护后，如上所示将肤从树脂切掉、环化、去保护和纯 化。
[0293] 使用如上所述的分析方法测定的HPLC保留时间和UV纯度显示于表1中。
[0巧4] 表1:实例
[0297]
[029引a)氨基酸的缩写参见上文的列表。
[0299] 6)]?5:[]\1+1扣^或[]\1+2扣2+。
[0300] C)分析方法B
[0301] d)分析方法C
[0302] e)Glu(Phen)=Glu(苯乙基）
[0303] 2.生物学方法
[0304] 2.1.肤样品的制备
[03化]将冻干的肤在微天平(Mettler MT5)上称重并溶解于DMSO中至终浓度lOmM。母液 避光保存在+4°C。除非另外说明，否则在具有小于1%DMS0的分析条件下实施生物学测定 法。
[0306] 2.2.人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制
[0307] 本发明的肤抑制人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(Serva Electrophoresis ,Germany) 的水解活性的能力使用合成的四肤底物MeOSuc-AAPV-pNA(Bachem, Switzer land)如下测 定：
[030引将上述底物（0.3mM)和人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶（IOnM)与测定缓冲液（50mM 化is，pH 8,300mM化Cl，0.01%Tween20)中的肤a%DMS0终浓度）的连续稀释液在37°C溫 育。在pNA的释放之后监测405nm处的吸光度的变化30分钟。具有上述的相同测定设置但不 具有肤的对照测定线性运行。将剂量-响应数据拟合至4-参数Hill方程，从而提供使用 Gra地pad (Prism 5)的 IC加值。
[0309] 2.3.猪膜弹性蛋白酶的抑制
[0310] 本发明的肤抑制猪膜弹性蛋白酶(Sigma, USA)的水解活性的能力使用合成的立肤 底物MeOSuc-AAA-pNA(Bachem, Switzerland)如下测定： 惦川将上述底物（ImM)和人猪膜弹性蛋白酶（15nM)与测定缓冲液（50mM Tris,pH 8， IOOmM化Cl，0.01 %Tween20)中的肤(0.5 %DMS0终浓度）的连续稀释液在37 °C溫育。在pNA 的释放之后监测405nm处的吸光度的变化30分钟。具有上述的相同测定设置但不具有肤的 对照测定线性运行。将剂量-响应数据拟合至4-参数化11方程，从而提供使用Graphpad (Prism 5)的IC加值。
[0312] 2.4.人蛋白酶3的抑制
[0313] 本发明的肤对人蛋白酶3(Elastin Products Company,USA)的灭活使用合成的S 肤底物Boc-Ala-Ala-Nva-SBzKElastin Products Company,USA)如下测定：
[0314]将上述底物（11111)、4,4'-二硫代二化晚(250測)和人蛋白酶3(10碰)与测定缓冲液 (50mM lYistpH 7.4，150mM 胞(：1，0.01%1'讯661120)中的肤(0.5%0150终浓度）的连续稀释 液在37°C溫育。在该反应过程之后监测340皿处的吸光度的变化30分钟。具有上述的相同测 定设置但不具有肤的对照测定线性运行。将剂量-响应数据拟合至4-参数化11方程，从而提 供使用Gra地pad(PriSm 5)的IC日日值。
[0：31引3.0结果
[0316]在上文2.2-2.4中描述的实验的结果示于下表2中。
[0：317]表 2
[031引 n.d.=未确定
【主权项】
1. 通式(I)的主链环化肽化合物： 环 (-Xaa1-Xaa2-Thr3-Xaa 4-Ser5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa 9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-) ⑴， 及其药学上可接受的盐，所述化合物由13个氨基酸残基构成， 其中 }^&1是0(^617;六作;1^作;〇1&;6111(苯乙基）；或0&13(丁酰基）； Xaa2 是Glu;Val;Leu;Nle;Phe;hPhe;DiHPhe;Tyr;hTyr;或Trp; Xaa4是Ala; A1 lylGly; Abu;或Val; Xaa6是I le;或OctGly; Xaa7 是 Pro; Xaa8 是 Pro; Xaa9 是 Gin;或 Tyr; Xaa10 是 Lys;或 Asn; Xaa11是hLeu;Ser;hSer;hSer(Me);Thr;alloThr;Asn;Gln;hGln;Dap;Tyr;或 His; )^&12是％『〇;和 Xaa13^Pro；Tic；Glu；Asp；Ala；Val ；^cLys ； 条件是 如果Xaa1是OctGly，贝丨J Xaa2 是 Glu;或 Nle; Xaa4 是 Ala;或 Abu; Xaa6是I le;或OctGly; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 Ser; Thr; Asn;或 Gin; Xaa13是Pro; Tic; Ala; Val;或Lys; 和/或如果Xaa6是OctGly，则 Xaa1 是 OctGly; Arg;或 Cha; Xaa2 是 Glu;或 Nle; Xaa4 是 Ala;或 Abu; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 Ser; Thr; Asn; Gin; Xaa13是Pro; Tic; Ala; Val;或Lys; 并且进一步的条件是 如果Xaa11是Tyr;或His，则 Xaa1 是Arg; hArg;或Glu(苯乙基）。2. 根据权利要求1的式I的化合物，其中 Xaa1 是OctGly ;Arg;hArg;或Glu(苯乙基）； Xaa2是Glu;Nle;hTyr;或Val; Xaa4 是 Ala;或 A1 lylGly; Xaa6是I le; Xaa7 是 Pro; Xaa8 是 Pro; Xaa9 是 Gin;或 Tyr; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 hLeu; Ser; Thr; Asn; Tyr; hGln;或 Hi s; Xaa12 是 DPro;和 Xaa13 是 Pro; 条件是 如果Xaa1是OctGly，贝丨J Xaa2 是 Glu;或 Nle; Xaa4 是 Ala; Xaa6是I le; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 Ser; Thr;或 Asn Xaa13 是 Pro; 并且进一步的条件是 如果Xaa11是Tyr;或His，则 Xaa1 是Arg; hArg或Glu(苯乙基）。3. 根据权利要求1的式I的化合物，其中 Xaa1 是OctGly ;Arg;或Glu(苯乙基）； Xaa2是Glu;Nle;hTyr;或Val; Xaa4 是 Ala; Xaa6是I le; Xaa7 是 Pro; Xaa8 是 Pro; Xaa9 是 Gin;或 Tyr; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 Ser; Thr; Asn; Tyr;或 His; )^&12是％『〇;和 Xaa13 是 Pro; 条件是 如果Xaa1是OctGly，贝丨J Xaa2 是 Glu;或 Nle; 并且进一步的条件是 如果Xaa11是Tyr;或His，则 Xaa1 是 Arg〇4. 根据权利要求1的式I的化合物，其中 Xaa1 是 Arg;或 hArg; Xaa2是Glu;Val;或hTyr; Xaa4 是 Ala;或 A1 lylGly; Xaa6是I le; Xaa7 是 Pro; Xaa8 是 Pro; Xaa9 是 Gin;或 Tyr; Xaa1Q 是 Lys; Xaa11 是 hLeu; Ser; Thr;或 hGln; )^&12是％『〇;和 }^&13是卩1'〇〇5. 根据权利要求1的化合物，其选自： 5F(-0ctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Asn-DPr〇-Pr〇-)； 5F(-0ctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-Thr-DPr〇-Pr〇-)； 5F(-0ctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Ser- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-0ctGly-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-hTyr-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Nle-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-AllylGly-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-Ser- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-hArg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-hLeu- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-hGln- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Tyr-Lys-His- DPr〇-Pr〇-)； 环（-0111(苯乙基）-6111-1'111'-六1&-361'-116-?1'〇-?1'〇-6111-1^8-丁71'- 1)?1'〇-?1'〇-); 5F(-Arg-Val-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-hTyr-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Thr- DPr〇-Pr〇-)； 5F(-Arg-Val-Thr-Ala-Ser-Ile-Pr〇-Pr〇-Gln-Lys-Tyr- DPr〇-Pr〇-) 〇6. 根据权利要求1至5的任一项的式I的化合物，其为游离形式或药学上可接受的盐形 式，其用作药剂。7. 根据权利要求1至5的任一项的式I的化合物，其为游离形式或药学上可接受的盐形 式，其具有用于治疗或预防下列疾病的针对弹性蛋白酶的抑制活性:肺癌;乳腺癌;银肩病； α?抗胰蛋白酶缺乏症;肺气肿;囊性纤维化;慢性阻塞性肺疾病;特发性肺纤维化;支气管扩 张；肺性高血压；肺动脉高压；心脏肥大；心肌炎；急性心肌梗塞;类风湿关节炎;骨性关节 炎;动脉粥样硬化;多发性硬化症;胰腺炎;过敏性鼻炎;全身炎症呼吸综合征;炎性皮肤病； 炎性肠病;或克罗恩病。8. -种药物组合物，其包含游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求1至5的 任一项的式I的化合物或化合物的混合物，以及药学上惰性的载体，所述药物组合物特别地 是适合用于吸入的形式，用于口服、局部、透皮、注射、口腔、透黏膜、直肠、肺或吸入施用，特 别地是片剂、锭剂、胶囊剂、溶液、液体剂、凝胶剂、硬膏剂、乳膏剂、油膏剂、糖浆剂、膏剂、混 悬剂、粉剂或栓剂的形式。9. 游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求1至5的任一项的式I的化合物用 作药物活性物质的用途，所述药物活性物质具有选择性蛋白酶抑制活性，特别是针对人嗜 中性粒细胞弹性蛋白酶，和/或抗癌活性和/或抗炎活性和/或抗感染活性和/或抗心血管活 性和/或抗免疫活性和/或抗神经变性活性。10. 游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求1至5的任一项的化合物或根据 权利要求8的组合物用作具有针对弹性蛋白酶的抑制活性的药剂的用途，所述药剂用于治 疗或预防感染或与这样的感染相关的疾病;或者，例如由弹性蛋白酶活性介导或引起的肺 癌或乳腺癌;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的免疫性疾病，例如银肩病;或由弹性蛋白酶 活性介导或引起的肺部疾病，例如α?抗胰蛋白酶缺乏症、肺气肿、囊性纤维化、慢性阻塞性 肺疾病、特发性肺纤维化、支气管扩张、肺性高血压或肺动脉高压;或由弹性蛋白酶活性介 导或引起的心血管疾病，例如心脏肥大、心肌炎或急性心肌梗塞;或由弹性蛋白酶活性介导 或引起的神经变性疾病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的炎症或与炎症相关的疾病，例 如类风湿关节炎、骨性关节炎、动脉粥样硬化、多发性硬化症、胰腺炎、过敏性鼻炎、全身炎 症呼吸综合征、炎性皮肤病、炎性肠病或克罗恩病;或当免疫反应由弹性蛋白酶活性介导或 引起时。11. 游离形式或药学上可接受的盐形式的根据权利要求1至5的任一项的化合物用于制 备具有针对弹性蛋白酶的抑制活性的药剂的用途，所述药剂用于治疗或预防感染或与这样 的感染相关的疾病;或者由弹性蛋白酶活性介导或引起的癌症，例如肺癌，或乳腺癌;或由 弹性蛋白酶活性介导或引起的免疫性疾病，例如银肩病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起 的肺部疾病，例如α?抗胰蛋白酶缺乏症、肺气肿、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病、特发性肺 纤维化、支气管扩张、肺性高血压或肺动脉高压;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的心血管 疾病，例如心脏肥大、心肌炎或急性心肌梗塞;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的神经变性 疾病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的炎症或与炎症相关的疾病，例如类风湿关节炎、骨 性关节炎、动脉粥样硬化、多发性硬化症、胰腺炎、过敏性鼻炎、全身炎症呼吸综合征、炎性 皮肤病、炎性肠病或克罗恩病;或当免疫反应由弹性蛋白酶活性介导或引起时。12. -种方法，其治疗感染或与这样的感染相关的疾病或病症，其由弹性蛋白酶活性引 起;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的癌症;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的免疫性疾 病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的肺部疾病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的心血 管疾病;或由弹性蛋白酶活性介导或引起的神经变性疾病;或由弹性蛋白酶活性介导或引 起的炎症;或当免疫反应由弹性蛋白酶活性介导或引起时，所述方法包括给有此需要的受 试者施用药学上可接受的量的根据权利要求1至5或8的任一项的化合物或药物组合物。13. 用于制备由权利要求1至5的任一项定义的式（I)的化合物的方法，其包括下列步 骤： (a) 将适当官能化的固体支持物与在所需的终产物中对应于Xaan的适当Ν-保护的氨基 酸衍生物偶联，其中η是13、8、7、6、5或4,可以在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的任何 官能团同样适当地受到保护； (b) 从如此获得的产物移除Ν-保护基； (C)将如此获得的产物用处在所需终产物中对应于Xaa1-1的适当N保护的所述氨基酸衍 生物偶联，可以在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的任何官能团同样适当地受到保护； (d) 从步骤(c)中获得的产物移除N-保护基； (e) 使用在所需终产物中处于位置n-2至1位置内的适当N-保护的氨基酸衍生物实施基 本上与步骤(c)和(d)相对应的步骤，可以在所述N-保护的氨基酸衍生物中存在的任何官能 团同样适当地受到保护； (f) 如果η不是13,则使用在所需终产物中处于位置13至n+1位置内的适当N-保护的氨 基酸衍生物进一步实施基本上与步骤(c)和(d)相对应的步骤，可以在所述N-保护的氨基酸 衍生物中存在的任何官能团同样适当地受到保护； (g) 从固体支持物脱离如此获得的产物； (h) 环化从固体支持物切下的产物； (i) 移除在氨基酸残基链的任何组件的官能团上存在的任何保护基;和 (j) 如果需要，将如此获得的产物转化成药学上可接受的盐或将如此获得的药学上可 接受的或药学上不可接受的盐转化成相应的游离化合物或转化成不同的药学上可接受的 盐。
【文档编号】C07K7/64GK105873939SQ201380081887
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2013年12月27日
【发明人】F·O·贡贝尔, D·奥伯莱希特, O·塞利耶-凯斯勒
【申请人】波利弗尔股份公司