一种硫酸卡那霉素的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种硫酸卡那霉素的药物组合物及其医药用途，本发明提供的硫酸卡那霉素的药物组合物中含有硫酸卡那霉素和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，硫酸卡那霉素、化合物(Ⅰ)单独作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤具有治疗作用；硫酸卡那霉素和化合物(Ⅰ)联合作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种硫酸卡那霉素的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及硫酸卡那霉素的新用途，具体涉及一种硫酸卡那 霉素的药物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 硫酸卡那霉素为氨基糖甙类广谱抗生素，抗菌谱和新霉素相似。主要对革兰阴性 菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肺炎杆菌、产气肠杆菌及志贺菌属等引起的严 重感染，对耐药性金葡菌也有良好的抗菌作用。临床上主要用于敏感菌所致的肺部感染、尿 路感染、胆道感染败血症及腹腔感染等，后两者常与其它抗菌药联合应用。也可用于对其它 抗生素耐药而对本品敏感的金葡菌感染。对结核病的治疗，本品可作为第二线药物。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种硫酸卡那霉素的药物组合物，该药物组合物中含有硫 酸卡那霉素和一种结构新颖的天然产物，硫酸卡那霉素和该天然产物可以协同治疗脑动脉 硬化症慢性脑缺血损伤。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] -种硫酸卡那霉素的药物组合物，包括硫酸卡那霉素、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将关黄柏粉碎，用70~90%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱12个柱体积，再用80 %乙醇洗脱15个柱体积，收集80 %洗 脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」4个组分；（(1)步 骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和15:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到化合物(I)。
[0011]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用80%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的药物中的应用。
[0015] 上述硫酸卡那霉素药物组合物在制备治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤药物中 的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的硫酸卡那霉素的药物组合物中含有硫酸卡那霉素和一种结构新颖 的天然产物，硫酸卡那霉素、化合物（I)单独作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤具有 治疗作用;硫酸卡那霉素和化合物（I)联合作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的治疗 效果进一步提高，可以开发成治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020]分离方法：（a)将关黄柏(2kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱12个柱体积，再用80 %乙醇洗 脱15个柱体积，收集80%洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (10个柱体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积)和10:1(9个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(7个柱体积）、20:1(8个柱体积)和15:1(7 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 421.1421，结合核磁特征可得分子式为 C21H24〇9，不饱和度为 10。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，CDC13，500MHz): H-1 (2 · 68，s)，H-3 (4.11，s)，H-5(2.54，t，J = 6.8Hz)，H-6(4.69，dd，J = 6.8,9.6Hz)，H-7(3.13，ddt，J = 9.6， 3·5,3·3Ηζ)，H-8(5.02，ddd，J = 9.6,4.7,4.7Hz)，H-9a(2.64，dd，J=14.0,4.7Hz)，H-9b (2.31，dd，J=14.0,4.7Hz)，H-13a(6.12，d，J = 3.5Hz)，H-13b(5.64，d，J = 3.5Hz)，H-14a (5.27，br，s)，H-14b(5.10，br，s)，H-15a(4.76，d，J=12.5Hz)，H-15b(4.28，d，J=12.5Hz)， H-3'a(6.11，br，s)，H-3'b(5.63，br，s)，H-4'（1.94，s)，15-0Ac(2.11，s);核磁共振碳谱数 据 Sc(ppm，CDCl3，125MHz):57.2(CHd-C)，219.8(C，2-C)，82.5(CH，3-C)，83.2(C，4-C)，55.3 (CH，5-C)，76.9(CH，6-C)，48.9(CH，7-C)，74.2(CH，8-C)，38.4(CH2,9-C)，137.2(C，10-C)， 135.3(C，11-C)，167.8(C，12-C)，122.5(CH 2，13-C)，117.1(CH2，14-C)，65.2(CH2，15-C)， 165.4(C，1'-C)，136.2(C，2'-C)，124.1(CH2,3'-C)，18.4(CH3,4'-C)，173.l(C，15-0Ac)， 21.5 (CH3，15-OAc)。红外光谱表明该化合物含有五元内酯环（1765(^1)和羟基(3600(^ 1)。 该化合物的碳谱结合HSQC谱，显示出21个碳信号，包括两个甲基(一个乙酰甲基），五个亚甲 基(一个连氧亚甲基，三个烯属亚甲基），六个次甲基(三个连氧碳）以及八个季碳(三个酯羰 基，一个酮羰基，三个烯烃季碳以及一个连氧季碳）</H-NMR显示两个特征性的单质子双峰 信号[6 116.12(1!1，(1，了 = 3.5抱，!1-133)和5.64(1!1，(1，了 = 3.5!^，!1-1313)]，且都与!1-7[3[13.13 (1!1，(1(1^ = 9.6,3.5,3.3抱）]相连，证实了€[-亚甲基-丫-内酯结构的存在。此外，!1-6和!1-7 的耦合常数(J 6,7 = 9.6Hz)以及H-7和H-13的烯丙基耦合常数(J7,13 = 3.5Hz)表明内酯为反 式连接。七元环环外双键信号[6115.27(1!1，1^，8，!1-143)和5.10(1!1，1^，8，!1-1413)]。两个单 峰质子信号5h6.11和5.63(H_3'a和H_3'b)，以及三个质子形成的一个尖锐单峰信号5h1.94 (CH 3-4 '）表明该化合物含有一个2-甲基丙烯酰氧基侧链。HMBC谱中H-8 (δΗ5.02)与羰基碳C-1'（δ[165.4)的相关性表明侧链位于C-8位。同时，Η2-15与C-迎CH 3的相关性说明C-15位连有 一个乙酰氧基。根据上述核磁数据可以猜测该化合物为一个倍半萜类化合物。通过查阅文 献可以发现该化合物和已知化合物20304(1-1：1'；[117(11'017-40-(3061:01711161:1171)-8€[(4-methacrylate)-laH, 5αΗ，6βΗ, 7aH-guai_10( 14),11 (13)-dien_6，12-0lide 具有相似的结 构。比较两者的核磁数据可以发现，该新化合物和已知化合物的区别在于，新化合物多出了 一个酮羰基信号。进一步的HMBC谱解析，H-1与C-2，H-3与C-2以及H-5与C-2的相关性说明多 出来的酮羰基信号是位于C-2位的。至此，该化合物的平面结构解析了出来。NOESY谱中，H-3 与与H-5以及H-5与H-7的相关信号说明该化合物中的3-OH以及C-7位上的基团是位 于β位的。此外，H-15与H-6，H-6与H-13以及H-8与H-6的相关性说明4-OH，C-6位上的基团以 及C-8位上的基团是位于α位的。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型 核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实 验值基本一致。
[0022]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024] 实施例2:药理作用
[0025] 本实施例使用双肾双夹法复制肾性高血压进而建立脑动脉硬化症模型大鼠模型， 观察药物对各组大鼠血脂、血清学相关指标、脑组织血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响。 [0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028] 9~12周龄清洁级Wistar大鼠，体质量（250±20)g，由甘肃中医学院动物中心提 供。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030] 硫酸卡那霉素购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。生理盐水(甘肃扶正药业科技股份有限公司；无水乙醇(成都市金山化工试剂厂）；10%水 合氯醛(兰大二院药剂科）；硫酸庆大霉素注射液(甘肃兰药药业集团有限责任公司生产）； S0D试剂盒、MDA试剂盒、GSH-PX试剂盒（均购自南京建成生物技术有限公司）；VEGF试剂盒、 PDGF试剂盒(均购自武汉博士得生物技术有限公司）；高脂乳剂:配成含7%胆固醇、15%猪 油、2%胆酸钠和1%丙基硫氧嘧啶的脂肪乳剂，4°C冰箱保存备用。
[0031] 1.3仪器
[0032] FT-630G微机多探头r计数器(北京核仪器厂）；低速冷冻离心机(科大创新股份有 限公司中佳分公司，KDC-2044);全自动生化分析仪（日本日立公司，7010);紫外分光光度计 (日本岛津有限公司，SHMADZU UV-2401PC);石蜡切片机(德国Leica公司）；自动组织脱水 机、全自动细胞包埋机（日本SAKURA公司）
[0033] 1.4大鼠分组及模型制备
[0034]大鼠，禁食12小时(不禁水），以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，行双侧肾主动脉狭 窄手术，使其狭窄3/4,造成大鼠实验性高血压模型。手术1周后，大鼠灌胃给予高脂乳剂 10mL/kg，l次/d，共14周，制成高血压合并高血脂的脑动脉硬化模型，挑选造模成功的60只， 按照随机数字表分组分为正常对照组、模型对照组、硫酸卡那霉素组(80mg · kg^1)、化合物 (I)组（80mg · kg<)、硫酸卡那霉素与化合物（I)组合物组【40mg · kg<硫酸卡那霉素+ 40mg · kg^1化合物（I)】。自造模成功后，模型组灌胃生理盐水3mL/d，其余各组按相应剂量给 药，连续14周。
[0035] 1.5取材方法及观察指标
[0036] 1.5.1取材方法
[0037] 灌胃14周后，当天禁食，股动脉采血3~4mL于lOmL试管中，3000r/min低温离心，取 血清，低温（<20°C)保存，进行血脂、血清相关指标检测。股动脉采血后，以10%水合氯醛腹 腔注射麻醉，开胸暴露大鼠心脏和主动脉弓，分别使用生理盐水、4%多聚甲醛行灌注，直至 动物呈僵硬状态，然后断头取脑，将脑海马组织取出后放入4%多聚甲醛溶液中固定，置于4 °C冰箱内保存待测。
[0038] 1.5.2观察指标
[0039] 1.5.2.1血脂相关指标的测定
[0040] 采用OLYMPUS AU2700型全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高 密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。单位 :mmol/L。
[0041 ] 1.5.2.2血清相关指标的测定
[0042] 根据试剂盒操作步骤采用比色法行血清超氧化物歧化酶（S0D)、血清丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平含量的检测。
[0043] 1.5.2.3脑组织血管内皮生长因子(VEGF)含量的测定
[0044] 采用免疫组织化学法检测脑海马组织的VEGF免疫反应细胞的表达，免疫组化过程 均按说明书操作。
[0045] 1.6统计学方法
[0046]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS 18.0版统计软件进行单因素方 差分析和t检验，以P<〇. 05为差异有统计学意义。
[0047] 2、实验结果
[0048] 2.1各组大鼠血脂含量变化
[0049] 治疗第14周末，与模型组比较，硫酸卡那霉素组、化合物（I)组的TC、TG均有降低(P < 0.0 5)，HD L - C升高(P < 0.0 5);与模型组组比较，硫酸卡那霉素与化合物（I)组合物组的 TC、TG两项血脂指标显著降低(P<0.01)，HDL-C显著升高(P<0.01)。
[0050] 试验结果见表1。
[00511 2.2各组大鼠血清学相关指标
[0052] 第14周末，与模型组比，硫酸卡那霉素组、化合物（I)组血清S0D含量、GSH-PX活性 升高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.05);与模型组比，硫酸卡那霉素与化合物（I)组合物组 S0D含量、GSH-PX活性明显升高(P<0.01)，MDA含量明显降低(P<0.01)。
[0053] 试验结果见表2。
[0054] 表1治疗后各组大鼠血脂水平比较
[0056]表2治疗后各组大鼠血清学相关指标比较
[0058] 动脉粥样硬化斑块形成的途径之一是各种原因引起的内皮细胞损伤，血流动力学 异常必将启动血管重构机制，导致血管重构和功能异常，出现血流速度滞缓、外周阻力增大 和顺应性变差等，从而促进动脉粥样硬化的进程。亦有研究资料表明，大量的脂质过氧化物 及分解产物如MDA可损伤动脉壁而导致动脉粥样硬化。机体内的S0D可清除氧自由基，对细 胞生物膜起保护作用，从而抑制动脉粥样硬化的形成。GSH-PX作为主要的自由基清除剂之 一，可通过清除细胞内的过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化物连锁反应，对减轻脑损伤、 阻断兴奋性毒性、防止损伤级联反应。
[0059] 上述结果表明，硫酸卡那霉素、化合物（I)单独作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺 血损伤具有治疗作用;硫酸卡那霉素和化合物(I)联合作用时，对脑动脉硬化症慢性脑缺血 损伤的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的药物。
[0060] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种硫酸卡那霉素的药物组合物，其特征在于:包括硫酸卡那霉素、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的硫酸卡那霉素的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的硫酸卡那霉素的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、□服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将关 黄柏粉碎，用70~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱12个柱体积，再用80%乙醇洗脱 15个柱体积，收集80%洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中80%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1 和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~17个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用80%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗脑动脉硬化症慢性脑缺血损伤的药物中的 应用。10. 权利要求2~4任一所述的硫酸卡那霉素的药物组合物在制备治疗脑动脉硬化症慢 性脑缺血损伤的药物中的应用。
【文档编号】C07D307/93GK105884727SQ201610335394
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月15日
【发明人】刘雨
【申请人】刘雨