一种作用于EGFR敏感突变激酶EGFR<sup>L858R</sup>，EGFR<sup>(d746-750)</sup>的6-取代氨基嘌呤类化合物及 ...的制作方法
【专利摘要】本发明公开了具有下列化学结构的6?取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，，其中：R是或；R1是氢、氟、氯、溴、甲氧基或羟基。本发明提供新的6?取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，对EGFR激酶的抑制具有选择性，能有效地抑制EGFR敏感突变激酶EGFRL858R，EGFR(d746?750)的活性，但对EGFRWT激酶不具有抑制效果，这样既可以抑制EGFR突变体过度表达或异常激活的细胞增殖，从而高效地治疗肿瘤，又可以避免因为抑制对人体内正常组织EGFRWT激酶的磷酸化和相关信号通路的激活，从而带来较大的毒副作用，发生皮疹、呕吐等药物反应，提高治疗效果，减少副反应。
【专利说明】
_种作用于EGFR敏感突变激酶EGFRL858R，EGFR(d746_75Q)的 6-取代氨基嘌昤类化合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药化学技术领域，尤其涉及一种作用于选择性抑制EGFR敏感突变 激酶EGFI^5' EGFR(d746 的活性6-取代氨基嘌呤类化合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着人们的生活压力越来越大，生活环境越来越差，癌症的发病率较之过去也越 来越高，因此，癌症治疗的方法以及治疗的效果越来越受到医药工作者的关心与关注。近几 年随着科学技术的发展，抗肿瘤药物也有了新的进展，目前为止研究比较热门新型抗肿瘤 药物有：新型细胞毒药物，内分泌治疗药物，基因药物，免疫治疗药物和分子靶向抗肿瘤药 物。其中，分子靶向抗肿瘤药物中的受体酪氨酸激酶抑制剂和血管新生通路抑制剂有着良 好的前景。
[0003] 表皮生长因子受体（EGFR)是一类磷酸化蛋白质，是通过特定的酪氨酸残基序列 排列的蛋白质。表皮生长因子受体（EGFR)属于ErbB家族成员之一，其与HER2、HER3及HER4 共同组成ErbB大家族。研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR 与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。其可能机制有：EGFR 的高表达引起下游信号传导的增强；突变型EGFR受体或配体表达的增加导致EGFR的持续 活化；自分泌环的作用增强；受体下调机制的破坏；异常信号传导通路的激活等。EGFR的过 表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等 组织中都有EGFR的过表达。对胶质细胞瘤的研究发现EGFR的高表达主要与其基因扩增有 关。但有时EGFR表达水平的调节异常也存在于翻译及翻译后。EGFR在肿瘤中的高表达还 可能与活化后降解减少有关，一些研究指出c-Src可通过抑制受体泛素化和内吞作用而上 调EGFR水平。许多肿瘤中有突变型EGFR存在，现已发现许多种EGFR突变型。突变型EGFR 的作用可能包括：具有配体非依赖型受体的细胞持续活化；由于EGFR的某些结构域缺失而 导致受体下调机制的破坏、异常信号传导通路的激活、细胞凋亡的抑制等。突变体的产生是 由于EGFR基因的缺失、突变和重排。
[0004] 目前，EGFR抑制剂的构效关系并不明朗，有的结构差别很小的化合物，其针对 EGFR抑制的效果却相差很大。本发明人经过艰苦努力，令人意外地合成出对EGFR突变体具 有选择性抑制作用的化合物，从而用于肿瘤的治疗，减少抑制剂的副反应。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的之一是为解决EGFR抑制剂作用效果低，副反应大的问题，提供一种 作用于EGFR敏感突变激酶EGFR185' EGFR(d746 的6-取代氨基嘌呤类化合物及其应用。
[0006] 本发明提供了具有下列化学结构的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，
[0007]
[0010] R1是氢、氟、氯、溴、甲氧基或羟基。
[0011] 进一步的，所述化合物选自6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤或6-(6-氯-嘧 啶-4-甲胺基）嘌呤。
[0012] 本发明还提供一种上述6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐在制备抗肿瘤药物 中的应用。
[0013] 本发明再提供一种上述6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐在制备抑制EGFR突 变体过度表达或异常激活的细胞增殖药物中的应用。
[0014] 本发明再提供一种药物、药物组合或试剂，包括上述的6-取代氨基嘌呤化合物及 其可药用盐。
[0015] 进一步的，所述药物、药物组合或试剂用于抑制EGFR突变体过度表达或异常激活 的细胞增殖。
[0016] 进一步的，所述EGFR突变体是在L858R或（d746-750)位点产生突变的EGFR激酶。
[0017] 进一步的，所述药物、药物组合或试剂用于治疗或预防肿瘤。
[0018] 进一步的，所述肿瘤是EGFR依赖性肿瘤。
[0019] 进一步的，所述肿瘤包括肺癌、肠癌、卵巢癌、肾癌、膀胱癌、空腔癌、胃癌或乳腺 癌。
[0020] 本发明的有益效果在于：本发明提供新的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐， 对EGFR激酶的抑制具有选择性，能有效地抑制EGFR敏感突变激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 750)的 活性，但对EGFRWT激酶不具有抑制效果，这样既可以抑制EGFR突变体过度表达或异常激活 的细胞增殖，从而高效地治疗肿瘤，又可以避免因为抑制对人体内正常组织EGFR WT激酶的 磷酸化和相关信号通路的激活，从而带来较大的毒副作用，发生皮疹、呕吐等药物反应。
【附图说明】
[0021] 图1所示为本发明6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤的合成路线。
[0022] 图2所示为本发明6-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤的合成路线。
【具体实施方式】
[0023] 下文将结合具体附图详细描述本发明具体实施例。应当注意的是，下述实施例中 描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达 到更好的技术效果。
[0024] 实施例1化合物6- (5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的合成
[0025] 1化合物的合成路线
[0026] 具体合成路线如图1所示。
[0027] 2合成步骤
[0028] 2. 16-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的制备
[0029] 量取5ml的正丁醇，称取80mg的6-氯嘌呤以及100mg的（5-氯-1H-吡咯-2-基） 甲胺，放入25ml的圆底烧瓶中，并加入50 μ 1的三乙胺作为催化剂，加入搅拌子。在 110°C油浴加热回流5h，冷却，待白色固体析出，减压抽滤，用正丁醇洗涤两次，干燥，得到 6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)。
[0030] 2. 26- (5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的物理特征
[0031] t-NMR (DMS0-d6) δ (ppm) : 12. 987 (s，1H，7' or 9 ' -P ur i n e-Η)， 8. 220 (s，1H，-NH)，8. 140-8. 15 (m，2H，2'，8' -Purine-H)，7. 858 (s，1H，Γ -Pyrrole-H)， 6. 432-6. 446 (m，1H，4' -Pyrrol e-H)，6. 252-6. 283 (m，1H，3' -Pyrrol e-H)， 4.760(s，2H，-CH2)。ESI-MS:249. 1[M+H] +。
[0032] 实施例2化合物6- (6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的合成
[0033] 1化合物的合成路线
[0034] 具体合成路线如图2所示。
[0035] 2合成步骤
[0036] 2. 16-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的制备
[0037] 量取5ml的正丁醇，称取80mg的6-氯嘌呤以及120mg的（6-氯嘧啶-4-基）甲 胺，放入25ml的圆底烧瓶中，并加入50 μ 1的三乙胺作为催化剂，加入搅拌子。在110°C油浴 加热回流5h，冷却，待白色固体析出，减压抽滤，用正丁醇洗涤两次，干燥，得到6-(6-氯-嘧 啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)。
[0038] 2. 26- (6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的物理特征
[0039] ^-NMR (DMS0-d6) δ (ppm) ：13.276(s,lH, 7'or 9' -Purine-H), 9. 432 (s, 1H, 2' -Pyrimidine-H)，8. 720 (s, 1H, -NH-)，8. 125-8. 243 (m, 2H, 2'，8' -Purine -Η)，7. 673(s，1H，5' -Pyrimidine-H)，4. 980(s，2H，-CH2)。ESI-MS:262. 6[M+H] +。
[0040] 实施例3化合物体外EGFR抑制活性测试
[0041] EGFR激酶体外活性筛选：实验采用的方法是Caliper Mobility Shift Assay，该 实验是以微流体芯片技术的迀移率检测技术为核心的检测平台。具体的实验步骤是：配 置 1. 25x 激酶反应缓冲液（62. 5mmol/L HEPES，ρΗ7· 5 ;0· 001875% Brij-35 ;12· 5mmol/L MgCl2;2. 5mmol/L DTT)和激酶反应终止液（100mmol/L HEPES，ρΗ7· 5 ;0· 015% Brij-35 ; 0· 2% Coating Reagent#3);在5 μ 1的5x浓度化合物溶液中（DMS0溶解，用水稀释10倍） 加入10 μ 1的2. 5x的EGFR激酶溶液（在1. 25x激酶反应缓冲液中加激酶），室温反应10min 后再加入10 μ 1的2. 5x底物肽溶液（在1. 25x激酶反应缓冲液中加 FAM标记肽和ATP)，在 28°C下反应特定的时间后加入25 μ 1激酶反应终止液。在Caliper上搜集数据，对激酶活 性的抑制率=(max-conversion)/(max_min) XIOOo
[0042] 通过上述方法在5 μ mol/L浓度下测定化合物A1和化合物A2对FGFR1，KDR，野生 型EGFR激酶，EGFR敏感突变激酶EGFRLS5SR，EGFR(d746 75°}及EGFR突变耐药激酶EGFR ?°M等 激酶的抑制活性，以表征抑制剂仅对EGFR突变株的抑制效果，抑制率见下表。
[0043] 化合物 A1 和化合物 A2 在 5 μ mol/L 浓度下对 EGFRWT、EGFRLS5SR、EGFR(d746 75°)以及各 种激酶的抑制率
[0044]
[0045] 通过上述方法分别在 10000, 3333,1111，370,123,41，14, 5, 2,1(单位：nmol/L)等 10个浓度下测定化合物A1和化合物A2对野生型EGFR激酶，EGFR敏感突变激酶EGFI^ 5' EGFR(d746 75°)的抑制活性，IC50结果见下表。
[0046] 化合物 A1 和化合物 A2 对 EGFRWT、EGFRLS5lP EGFR (d746 75°)的 1C 5。值
[0047]
[0048] 激酶实验表明：化合物A1和化合物A2对突变的EGFR激酶具有很高的选择性，尤 其是对EGFR敏感突变激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 75Q)具有很好的抑制作用，达到了 nmol/L的水 平，但对FGFR1，KDR和野生型的EGFR均不具有抑制作用。
[0049] 本发明的新的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，对EGFR激酶的抑制具有选 择性，能有效地抑制EGFR敏感突变激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 75°}的活性，但对EGFR "激酶不具 有抑制效果，这样既可以抑制EGFR突变体过度表达或异常激活的细胞增殖，从而高效地治 疗肿瘤，又可以避免因为抑制对人体内正常组织EGFR WT激酶的磷酸化和相关信号通路的激 活，从而带来较大的毒副作用，发生皮疹、呕吐等药物反应，提高治疗效果，减少副反应。
[0050] 本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在 不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不 应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
【主权项】
1. 具有下列化学结构的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，Rl是氢、氟、氯、溴、甲氧基或羟基。2. 如权利要求1所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐，其特征在于，所述化合 物选自6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤或6-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤。3. 如权利要求1或2任一项所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐在制备抗肿 瘤药物中的应用。4. 如权利要求1或2任一项所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可药用盐在制备抑制 EGFR突变体过度表达或异常激活的细胞增殖药物中的应用。5. -种药物、药物组合或试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的6-取代氨基嘌呤化 合物及其可药用盐。6. 如权利要求5所述的药物、药物组合或试剂，其特征在于，所述药物、药物组合或试 剂用于抑制EGFR突变体过度表达或异常激活的细胞增殖。7. 如权利要求6所述的药物、药物组合或试剂，其特征在于，所述EGFR突变体是在 L858R或（d746-750)位点产生突变的EGFR激酶。8. 如权利要求5所述的药物、药物组合或试剂，其特征在于，所述药物、药物组合或试 剂用于治疗或预防肿瘤。9. 如权利要求8所述的药物、药物组合或试剂，其特征在于，所述肿瘤是EGFR依赖性肿 瘤。10. 如权利要求9所述的药物、药物组合或试剂，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、肠 癌、卵巢癌、肾癌、膀胱癌、空腔癌、胃癌或乳腺癌。
【文档编号】C07D473/34GK105884777SQ201510315178
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年6月9日
【发明人】叶发青, 王宇, 王跃武, 俞淑芳, 陈弟, 陈梁芳, 宋晓琴, 谢自新, 梁广, 李校堃, 刘志国, 林丹
【申请人】温州医科大学