白杨素衍生物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种白杨素衍生物及其制备方法和应用。白杨素衍生物的结构如式(Ⅰ)所示，式(Ⅰ)中，X为NR、O或CH2，其中R选自被苯或卤代苯取代的C1?C6烷基，未被取代的或被选自下组的取代基取代的苯基：卤素、硝基、C1?C6烷氧基、卤素取代的C1?C6烷基、C1?C6烷基，或吡啶基。本发明公开的这类白杨素衍生物具有一定的生物活性、低的毒性。本发明还提供了白杨素衍生物的制备方法及白杨素在抗菌药物中的应用。
【专利说明】
白杨素衍生物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一类白杨素衍生物及其制备方法及在抗 菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 世界卫生组织(WHO) -项最新调查结果显示，有61 %的中国受访者认为抗生素可 治疗流感。人们滥用抗生素类药物等原因导致细菌，真菌，病毒和寄生虫的耐药性出现，从 而过去开发的许多强效抗菌药逐渐失去功效，所以新型的抗菌药物研究迫在眉睫。
[0003] 白杨素是一类具有广泛药理活性的黄酮类天然产物。近年来，研究发现白杨素类 药物具有抗肿瘤，抗炎，抗氧化和防治心脑血管疾病等药理活性，然而白杨素的水溶性较 差，肠道难吸收，这极大得影响了白杨素的生物利用度。临床试用的剂型只有乳剂，稳定性 差，静脉注射给药有明显的血管刺激性，难以达到作用部位，限制了它的临床应用。
[0004] 因此，有必要对其结构进行修饰改进，以期望在水溶性、生物活性、毒性等方面得 到改进。
【发明内容】
[0005] 发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种水溶性好、活性高、低 毒的白杨素衍生物。
[0006] 技术方案:一种白杨素衍生物，它的结构如式(I)所示：
[0007]
[0008] 式（I)中，X为NR、0或CH2，其中R选自被苯或卤代苯取代的&-C6烷基，未被取代的或 被选自下组的取代基取代的苯基：卤素、硝基、&-C6烷氧基、卤素取代的G-C6烷基、&-C6烷 基，或吡啶基。
[0009] 进一步的，R选自被苯或卤代苯取代的&-C3烷基，未被取代的或被选自下组的取代 基取代的苯基:卤素、硝基、&-C3烷氧基、卤素取代的&-C3烷基、&-C3烷基，或吡啶基。
[0010] 进一步的，R选自苯甲基，二苯甲基，卤代苯甲基々代二苯甲基，苯基，被选自下组 的取代基取代的苯基滷素、硝基、甲氧基、??素取代的甲基、甲基，或吡啶基。
[0011] 所述的卤素为F、ci或Br，卤代苯为被F、C1或Br取代的苯。
[0012]更进一步的，R选自
[0013]
[0014] 本发明还提供了所述的白杨素衍生物的制备方法，包括：
[0015] (1)式(II)化合物与式(III)化合物反应，获得式(IV)化合物;其中，式(II)化合物 ~式(IV)化合物的结构依次分别为：
[0016]
[0017]式（II)~式（IV)中为，办为卤素，X如权利要求1~5任一项所定义；
[0018] (2)式(IV)化合物与白杨素反应，得所述的白杨素衍生物。
[0019]本领域技术人员可以理解，关于"X如权利要求1~5任一项所定义"：由于X基团进 入到最终产物中，所以根据目标化合物(IV)的结构，化合物(m)中X为相应的结构基团。
[0020] 步骤（1)反应在有机溶剂如二氯甲烷、四氟氢喃等中进行，反应温度为0~50°C，反 应时间为2~24h。实验证明，在该温度及时间条件下均可得到目标产物。
[0021] 步骤(2)反应在有机溶剂如二氯甲烷、甲醇、乙醇、DMF，THF及丙酮等中进行，反应 温度为〇~80°C，反应时间为2~24h。实验证明，在该温度及时间条件下均可得到目标产物。
[0022] 本发明还提供了所述的白杨素衍生物在制备抗菌药物中的应用。
[0023] 与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
[0024] 本发明制备方法实验可重复性强，稳定性好，实验反应所需条件较简单，且实验环 境温和，产率较好，可在较小投入情况下进行大量生产。
[0025] 本发明整合了哌嗪杂环，白杨素和吗啡啉等基团，设计了一系列的白杨素衍生物， 本发明白杨素衍生物对大肠杆菌(E.coli)有明显的抑制作用，其作用效果与阳性对照药 Penici 11 in G大致相当，部分该含哌嗪杂环的二白杨素衍生物表现优于阳性对照药。因此， 本发明公开的这类白杨素衍生物具有更好的生物活性、更高的选择性和更低的毒性。
[0026]本发明的这类衍生物水溶性好、低毒、生物活性好。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例，进一步阐明本发明。
[0028] 本发明【具体实施方式】中，白杨素衍生物合成反应式为：
[0029]
[0030] (a)CH2CI2，HOBt，EDC，50Γ，10_12h; (b)丙酮，K2CO3，白杨素，60Γ，10h
[0031] 一个详细实施方式如下：
[0032]步骤a:在室温搅拌作用下，将结构如式n(2mmol)所示的化合物溶于CH2Cl2(30ml) 中，并加入HOBt (1.2mmo 1)，EDC(3mmo 1)，活化后加入化合物ΙΠ (2mmo 1)转移至油浴锅中回流 搅拌11 ± lh，反应结束后将混合液倒入250ml冰水中，然后用100ml CH2C12萃取，分别用 NaHC03、盐水洗有机层，然后用无水硫酸钠干燥，真空下蒸干得到的固体通过硅胶柱提纯制 得结构如式IV所示的化合物；
[0033] 步骤b :将结构如式IV所示的化合物（1 mmο 1)、无水碳酸钾（2mmο 1)和白杨素 (lmmol)溶于30ml丙酮中，然后将反应置于60°C搅拌作用下9±lh，反应结束后将反应混合 液冷却至室温，得到固体沉淀，用蒸馏水洗三次后真空干燥的得到粗产物，在乙醇：乙酸乙 酯（1:1)的溶液中重结晶并用蒸馏水(25ml)洗三次制得结构如式V所示的化合物。
[0034]实施例1化合物1的制备
[0035] 化合物1:7-(2-(4-(2-氟苯基）哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为 C27H23FN2O5，结构为：
[0036]
[0037]在室温搅拌作用下，将溴乙酸（2mmol)所示的化合物溶于CH2Cl2(30ml)中，并加入 H0Bt(l-羟基苯并三唑，1.2_〇1)400(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，3_〇1)，活 化后加入4-(2-氟苯基)哌嗪(CAS号为1011-15-0,2mmol)转移至油浴锅中回流搅拌反应11 ±lh，反应结束后将混合液倒入250ml冰水中，然后用100ml CH2C12萃取，分别用饱和 NaHC03、饱和盐水洗有机层，然后用无水硫酸钠干燥，真空下蒸干得到的固体通过硅胶柱提 纯(柱子长45cm，柱子直径2.5cm，洗脱剂用V Ac:VPE = 4:l-l:4，其中，PE为石油醚，AC为乙酸 乙酯收集的产物是1: 2比例）制得中间产物;将中间产物（lmmo 1)、无水碳酸钾(2mmol)和白 杨素（lmmol)溶于30ml丙酮中，60°C搅拌作用下反应9±lh，反应结束后将反应混合液冷却 至室温，得到固体沉淀，用蒸馏水洗三次后真空干燥的得到粗产物，在乙醇：乙酸乙酯（1:1) 的溶液中重结晶并用蒸馏水(25ml)洗三次制得化合物1。
[0038]检测参数为:黄色固体，产率:47 · 3%，m·p · 182-186Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.67(m,3H,ArH),7.01-7.17(m,5H, ArH) ,6.84(d ,J = 2Hz,lH,ArH) ,6.46(d ,J= 1.6Hz , ΙΗ,ΑγΗ) , 5.08(s, 2H,CH2), 3.64(s ,4H, CH2NCH2), 3.09 (s, 2H, CH2), 3.01 (s, 2H, CH2). C27H23FN2O5
[0039] 实施例2化合物2的制备
[0040] 化合物2:7-(2-(4-(4-氟苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为 C27H23FN2O5，结构为：
[0041]
[0042]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0043]
[0044] 检测参数为:黄色固体，产率:52 · 8%，m· p · 220-222°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.83(s,lH,0H),8.10(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.62(m,3H,ArH),7.00-7.09(m,5H, ArH) ,6.85(d,J = 4.0Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,6.45(d, J = 2.4Hz ΙΗ,ΑγΗ) , 5.09(s , 2H,CH2), 3.62(s , 4H, CH2NCH2), 3.17 (s, 2H, CH2), 3.08 (s, 2H, CH2). C27H23FN2O5
[0045] 实施例3化合物3的制备
[0046] 化合物3:7-(2-(4-(3-三氟甲苯基）哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子 式为C28H23F3N2O，结构为：
[0047]
[0048]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0049]
[0050] 检测参数为:黄色固体，产率:45 · 2%，πκp · 192-194°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.83(s,lH,0H) ,8.09(d,J = 7.0Hz,2H,ArH) ,7.58-7.64(m,3H,ArH),7.45(t,J = 8.0Hz, lH,ArH),7.25(t ,J = 8.4Hz,2H,ArH),7.13(t ,J = 7.7Hz,2H,ArH),6.85(d ,J = 2.1Hz,lH, ArH) ,6.46(d,J = 2. ΙΗζ,ΙΗ,ΑγΗ) ,5.10(s,2H,CH2) ,3.63(s,4H,CH2N CH2), 3.35 (s , 2H, CH2)，3 · 28 (s，2H，CH2) · C28H23F3N2O
[00511实施例4化合物4的制备
[0052] 化合物4:7-(2-(4-二(4-氟苯基）甲基-哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分 子式为C34H28F2N20，结构为：
[0053]
[0054] 制备万法参考买施例1，原料式（Π )化合物具体为溟乙酸，式（ΙΠ)化合物为：
[0055]
[0056] 检测参数为:黄色固体，产率:73 · 4%，m· p · 228-230°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=7.4Hz,2H,ArH),7.58-7.62(m,3H,ArH),7.44-7.46(m,4H, ArH),7.05-7.15(m,5H,ArH),6.79(d,J = 4.0Hz,lH,ArH),6.40(d,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,4.99 (s,2H,CH2) ,4.46(s,1H,CH),3.49(s,4H,CH2NCH2),2.34(s,2H,CH2),2.28(s,2H,CH 2) .C34H28F2N2〇
[0057] 实施例5化合物5的制备
[0058] 化合物5:7-( 2-(4-二(3，4-二氯苯基）哌嗪)-2-羰基-1 -乙氧基)-5-羟基黄酮，分 子式为C27H22CI2N2O5，结构为：
[0059]
[0060]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式（ΙΠ)化合物为：
[0061]
[0062] 检测参数为：貢色固体，产率：75 · 6%，m·p · 187-190Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H) ,8.09(d,J = 8.4Hz,2H,ArH) ,7.57-7.65(m,3H,ArH),7.43(d,J = 9.0Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7.19(d ,J = 2.8Hz,lH,ArH) ,7.06(s,lH,ArH) ,6.97(d ,J = 2.8Hz , 1H, ArH) ,6.83 (d,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,6.45(d,J = 3.2Hz,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.61(t,J = 4.5Hz, 4H, CH2NCH2), 3.31 (s, 2H, CH2), 3.22 (s, 2H, CH2). C27H22CI2N2O5
[0063] 实施例6化合物6的制备
[0064] 化合物6:7-(2-(4-(2,3-二氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子 式为C27H22CI2N2O5，结构为：
[0065]
[0066]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0067]
[0068] 检测参数为:淡黄色固体，产率:68 · 7%，m·p · 198-200Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ: 12.84(s，1H，0H)，8.11(d，J = 6.9Hz，2H，ArH) ,7.59-7.63(m，3H，ArH)，7.35(t，J = 4.0Hz， 2H,ArH),7.17-7.18(m,lH,ArH),7.07(s,lH,ArH),6.85(d ,J = 2.0Hz,lH,ArH),6.46(d ,J = 2.0Hz,lH,ArH),5.09(s,2H,CH2) ,3.64(s,4H,CH2NCH2),3.07(s,2H,CH2) ,2.99(s,2H,CH2) .C27H22CI2N2O5
[0069] 实施例7化合物7的制备
[0070] 化合物7:7-(2-(4-(2-氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为 C27H23CIN2O5，结构为：
[0071]
[0072]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0073]
[0074] 检测参数为:淡黄色固体，产率:75 · 6%，m·p · 179-181°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ :12.84(s，lH，0H)，8.11(d，J = 6.8Hz，2H，ArH),7.34-7.64(m，5H，ArH),7.10-7.18(m，3H， ArH) ,6.86(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,6.47(d, J = 2.2Hz ΙΗ,ΑγΗ) , 5.10(s , 2H,CH2), 3.65(s , 4H, CH2NCH2), 3.06 (s, 2H, CH2), 2.98 (s, 2H, CH2). C27H23CIN2O5
[0075] 实施例8化合物8的制备
[0076] 化合物8:7-(2-(4-(3-氯苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为 C27H23CIN2O5，结构为：
[0077]
[0078] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0079]
[0080] 检测参数为:淡黄色固体，产率:71 · 4%，m·p · 187-190Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.10(d ,J = 7.3Hz,2H,ArH) ,7.58-7.64(m,3H,ArH) ,7.23(t ,J = 8.1Hz, lH,ArH),6.82-7.06(m,5H,ArH) ,6.46(d ,J = 2.2Hz ΙΗ,ΑγΗ) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.60(t ,J = 4.4Hz, 4H, CH2NCH2), 3.30 (s, 2H, CH2), 3.20 (s, 2H, CH2). C27H23CIN2O5
[0081] 实施例9化合物9的制备
[0082] 化合物9:7-(2-(4-(4-氯苯基)苯甲基-哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分 子式为C34H29CIN2O5，结构为：
[0083]
[0084]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0085]
[0086] 检测参数为：淡黄色固体，产率:67 · 8%，m·p · 202-204Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) δ:12·82(s，1H，0H)，8.09(d，J=6.9Hz，2H，ArH),7.58-7.65(m，3H，ArH),7.31-7.47(m，8H， ArH),7.22(t ,J= 12.5Hz, ΙΗ,ΑγΗ), 7.06(s, ΙΗ,ΑγΗ), 6.79(d,J = 2.1Hz, ΙΗ,ΑγΗ), 6.40(d,J = 2.12Hz,lH,ArH) ,4.99(s,2H,CH2) ,4.42(s,lH,CH) ,3.49(s,4H,CH2NCH2),2.34(s,2H, CH2)，2 · 29 (s，2H，CH2) · C34H29CIN2O5
[0087] 实施例10化合物10的制备
[0088] 化合物10:7-(2-(4-(4-硝基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式 为C27H23N3O7，结构为：
[0089]
[0090] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(m)化合物为：
[0091]
[0092] 检测参数为：晶体，产率72.9% ,1114.211-2131:.? NMR(DMS0-d6,400MHz)S: 12.83 (s,lH,0H),8.08-8.10(m,4H,ArH),7.57-7.65(m,3H,ArH),7.04(d,J=9.16Hz 3H,ArH), 6.85(d,J = 2.24Hz,lH,ArH) ,6.46(d,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.10(s,2H,CH2) ,3.65(s,6H, CH2CH2NH2),3.54(d,J = 4.0Hz,2H,CH2).C27H23N3O7
[0093] 实施例11化合物11的制备
[0094] 化合物11:7-(2-(4-(2-吡啶）哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羟基黄酮，分子式为 C26H23N3O5，结构为：
[0095]
[0096]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0097]
〇
[0098] 检测参数为：淡黄色固体，产率：57 · 3%，m·p · 166-168Γ · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.08-8.14(m,3H,ArH),7.55-7.64(m,4H,ArH),7.04(s,lH,ArH),6.83-6.88(dd ,Ji = 8.6 j2 = 2.2Hz,2H,ArH),6.68(q ,J = 5.2Hz,lH,ArH),6.45(d ,J = 2.2Hz,lH, ArH)，5 · 09 (s，2H，CH2)，3 · 56 (d，J = 2 · 3Hz，8H，NCH2CH2NCH2CH2) · C26H23N3O5
[0099] 实施例12化合物12的制备
[0100] 化合物12 :7-(2-(4-苯基哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羟基黄酮，分子式为 C27H24N2O5，结构为：
[0101]
[0102]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0103]
[0104] 检测参数为:淡黄色固体，产率:71 · 9%，m·p · 206-209°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.09(d ,J = 7.0Hz,2H,ArH) ,7.56-7.64(m,3H,ArH) ,7.25(t ,J = 8.4Hz, 2H,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.99(d ,J = 8.0Hz,2H,ArH) ,6.83-6.85(m,2H,ArH) ,6.45(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.62(s,4H,CH2NCH2),3.23(s,2H,CH2) ,3.14(s,2H,CH2) .C27H24N2〇5
[0105] 实施例13化合物13的制备
[0106] 化合物13:7-(2-(4-二苯甲基哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为 C34H3QN2O5，结构为：
[0107]
[0108] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0109]
a
[0110] 检测参数为:淡黄色固体，产率:74· 1 %，m·p · 235-238°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.10(d ,J = 6.7Hz,2H,ArH) ,7.61 (d ,J = 7.0Hz , 3H,ArH), 7.21-7.44(m, 10H,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.80(s,lH,ArH),6.40(s,lH,ArH),4.99(s,2H,CH2) ,4.36(s, 1H，CH), 3 · 49(s, 4H, CH2NCH2)，2 · 33(d, J = 2 · 0Hz, 4H, CH2NCH2) · C34H30N2O5
[0111] 实施例14
[0112] 化合物14: 7-(2-(4-苯甲基哌嗪）-2-羰基-1-乙氧基）-5-羟基黄酮，分子式为 C28H26N2O5，结构为：
[0113]
[0114]制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0115]
ο
[0116] 检测参数为:淡黄色固体，产率:66 · 8%，m·ρ · 131-132°c · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.10(d ,J = 7.4Hz,2H,ArH) ,7.59-7.61(m,3H,ArH) ,7.33(d ,J = 6.4Hz, 4H,ArH) ,7.06(s,lH,ArH) ,6.81(d ,J=1.9Hz,lH,ArH) ,6.41 (d ,J = 2.0Hz , 1H, ArH), 5.01 (s, 2H, CH2), 3.52(s, 2H,CH2), 3.47(s,4H,CH2CH2),2.34-2.43(m,4H,CH2CH2). C28H26N2O5
[0117] 实施例15化合物15的制备
[0118] 化合物15:7-(2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子 式为C28H26N2O6，结构为：
[0119]
[0120] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0121]
[0122] 检测参数为:淡黄色固体，产率:72 · 6%，m·p · 185-188°c · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.09(d,J=7.0Hz,2H,ArH),7.58-7.65(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.84-6.98(m,5H,ArH) ,6.45(d ,J = 2.2Hz , 1H, ArH), 5.08(s , 2H, CH2), 3.80(s , 3H,0CH3), 3.61(s,4H，CH2NCH2)，3.03(s，2H，CH2)，2.95(s，2H，CH2).C28H26N2〇6
[0123] 实施例16化合物16的制备
[0124] 化合物16:7-(2-(4-(3-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子 式为C28H26N2O6，结构为：
[0125]
[0126] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0127]
[0128] 检测参数为：淡黄色固体，产率：55 · 2%，m·p · 175-177°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.08(d ,J = 6.9Hz,2H,ArH) ,7.58-7.63(m,3H,ArH) ,7.14(t ,J = 8.2Hz, lH,ArH),7.06(s,lH,ArH),6.84(d,J=2.2Hz,lH,ArH),6.40-6.56(m,4H,ArH),5.09(s,2H, CH2)，3.73(s，3H，OCH3)，3.61(s，4H，CH2NCH2)，3.23(s，2H，CH2)，3.14(s，2H，CH2).C28H26N2〇6
[0129] 实施例17化合物17的制备
[0130] 化合物17:7-(2-(4-(4-甲氧基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子 式为C28H26N2O6，结构为：
[0131]
[0132] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0133]
[0134] 检测参数为：淡黄色固体，产率:73 · 6%，m·ρ · 175-177°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.83(s,lH,0H),8.08(d,J=6.9Hz,2H,ArH),7.58-7.64(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.94(d,J = 9.1Hz,2H,ArH) ,6.83-6.85(m,3H,ArH),6.45(d,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,5.08(s, 2H,CH2) ,3.69(s,3H,0CH3),3.61(s,4H,CH2NCH2) ,3.09(s,2H,CH2),2.99(s,2H,CH2) .C28H26N2〇6
[0135] 实施例18化合物18的制备
[0136] 化合物18:7-(2-(4-(2,4-二甲基苯基)哌嗪)-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分 子式为C29H28N2O5，结构为：
[0137]
[0138] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0139]
[0140] 检测参数为：淡黄色固体，产率:70.3% ,1114.195-1971:.? NMR(DMS0-d6,400MHz) 5：12.84(s,lH,0H),8.11(d ,J = 6.1Hz,2H,ArH) ,7.61 (d ,J = 6.9Hz , 3H,ArH) ,6.89-6.99(m, 5H,ArH) ,6.46(s,lH,ArH) ,5.09(s,2H,CH2) ,3.61(s,4H,CH2NCH2) ,2.82(d,J = 3.2Hz 4H, CH2NCH2)，2 · 23 (d, J = 12 · 4Hz , 6H, CH3ArCH3) · C29H28N2O5
[0141] 实施例19化合物19的制备
[0142] 化合物19:7-(2-吗啡啉-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为C21H 21N06,结构 为：
[0143]
[0144] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0145]
[0146] 检测参数为:淡黄色固体，产率:71 · 7%，m·p · 194-197°C · 4 NMR(DMS〇-d6，400MHz) 5：12.82(s,lH,0H),8.09(d,J=8.5Hz,2H,ArH),7.58-7.63(m,3H,ArH),7.05(s,lH,ArH), 6.81(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH),6.43(d ,J = 4.0Hz,lH,ArH) ,5.04(s , 2H,CH2) ,6.58-6.4(m,4H, CH2CH2), 3.47 (d ,J = 4.2Hz , 4H, CH2NCH2). C21H21NO6
[0147] 实施例20化合物20的制备
[0148] 化合物20 :7-(2-哌啶-2-羰基-1-乙氧基)-5-羟基黄酮，分子式为C22H23N〇4,结构 为：
[0149]
[0150] 制备方法参考实施例1，原料式（Π )化合物具体为溴乙酸，式(ΙΠ)化合物为：
[0151]
[0152] 检测参数为:淡黄色固体，产率:69%，m.p.171-173°C.4 NMR(DMS〇-d6，400MHz)δ: 12.82(s,lH,0H),8.10(d,J=6.8Hz,2H,ArH),7.59-7.63(m,3H,ArH),7.06(s,lH,ArH), 6.81(d ,J = 2.2Hz,lH,ArH) ,6.41 (d ,J = 4.0Hz , 1H, ArH), 5.00(s , 2H,CH2), 3.40-3.46(m, 4H，CH2CH2)，1 · 60 (d，J = 9 · 4Hz，4H，CH2CH2)，1 · 45 (s，2H，CH2) · C22H23NO4
[0153] 实施例21
[0154] 1.抗菌活性实验步骤
[0155] (1)培养液的配制
[0156] RPMI1640培养液：RPMI1640 10g，NaHC03 2.0g，M0PS 34.5g(0.165M)，加三蒸水 900mL溶解，IN NaOH调pH至7.0(25°C)，定容至1000mL，滤过消毒，4°C保存。
[0157] YEH)培养液:酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900mL溶解，加入2mg/ mL氯霉素水溶液50mL，定容至1000mL，高压灭菌后4°C保存。
[0158] (2)菌液制备
[0159] 实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上挑取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠 杆菌和荧光假单胞菌少量，接种至lmL YEH)培养液，于35°C，250rpm振荡培养，活化16h。取 该菌液至lmL YEPD培养液中，用上述方法再次活化，16h后，用血细胞计数板计数，以 RPMI1640培养液调整菌液浓度至1 X 103-5 X 103cfu/mL。
[0160] (3)药液配制
[0161] 受试药物分别用DMS0配成lmg/mL溶液，-20°C保存，实验前，将药液取出置35°C温 箱融化备用。测试时按二倍稀释法配成浓度梯度。配成最终测试浓度为2〇 yg/mL，10yg/mL，5 yg/mL，2·5yg/mL，1·25yg/mL，0·625yg/mL，0·312yg/mL 〇
[0162] (4)药敏板的制备
[0163] 细菌悬浮在RPMI1640培养基中，分散浓度大约为1 X 103-5 X 103cfu/mL，将培养基 加入到96孔板的第一排，每孔100yL，作为空白对照（阴性对照）。第二排加菌液，每孔100yL， 不加被测试样品，作为试剂空白。将被测样品配好的梯度溶液，以每孔IlyL的量加入到96孔 板的第3-12排，使最终浓度为 20yg/mL，10yg/mL，5yg/mL，2yg/mL，5yg/mL，1 · 25yg/mL，0 · 625 以8/11^，0.312以8/11^。每个浓度梯度做三个平行实验。将96孔板放入37°(：的培养箱中培养 24h，然后加入每孔25yL含4mg MTT/mL的D-hanks溶液中，再在同样条件下培养4h，加入每孔 100yL SDS裂解液(90mL三蒸水+10g SDS+5mL异丙醇+2mL浓盐酸）后培养12h。
[0164] (5)MIC 值判定
[0165] 用酶标仪于570nm下测定0D值，按如下公式计算抑制率：
[0166] 抑制率=[1 -(测试样品0D值-空白0D值)/(阴性对照0D值-空白0D值)]X 100
[0167] 以抑制率不低于50%的最低浓度作为被测样品的MIC5Q(最低抑制浓度）。当药物的 MIC值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计:MIC值高于最高浓度50yg/mL时，计为"〉 50yg/mL" ；MIC值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为.56yg/mL"。上述 实验均平行操作3次，取平均值作为该化合物的最终MIC。
[0168] 表1目标化合物的抗菌活性
[0169]
[0171] 实施例22
[0172] 本发明测试了新合成化合物对人肾上皮细胞(293T)的细胞毒性，每个化合物的毒 性用抑制293T细胞存活率到50 %时的浓度(CC5Q)来表示。
[0173] 实验方法：
[0174] (1)药物存储液配制：取m= 2mg的已合成化合物溶于200yL的2%DMS0中，放在-20 °C保存备用。
[0175] (2)培养基准备:DMEM基础培养基（89%)+小牛血清（10%)+抗生素（1%)混合均 匀，备用。
[0176] (3)用上述培养基培养人肾上皮细胞(293T)直至达到其对数生长期末细胞趋于融 合，用细胞消化液消化分散细胞，用细胞培养液配制成1 X 1〇4个/mL的细胞悬液。取96孔培 养板，每孔中加入l〇〇yL的细胞悬液。轻轻水平转动培养板使细胞均匀地分散在皿孔的表 面。置于含5 % C〇2细胞培养箱中，在37 ± 0.5 °C温度下培养12h。
[0177] (4)药物浓度配制:通过公式(V=^；)计算，吸取相对应体积的存储液到500yL的 培养基中，配制药物浓度为200yg/mL。然后用培养基稀释浓度到100yg/mL、50yg/mL、25yg/ mL、10yg/mL、5yg/mL、lyg/mL、0. lyg/mL等浓度梯度，各吸取100yL( X3)到各自的孔中。培养 板放置在37 ±0.5°C，5%C02的培养箱下进行培养48h。
[0178] (5)每个培养间期后，每孔加入MTT溶液20yL，置于含5 % C02培养箱中，在37 ± 0.5 °C温度下培养4h。
[0179] (6)弃去孔内液体，每孔分别加入200yL DMS0，将培养板放置lOmin，水平摇晃使孔 内溶液颜色均匀。
[0180] (7)用酶标仪测定吸光度，波长采用570nm〇
[0181] 测得的LC50和CC50见表1所示。
[0182] 表1选择化合物的细胞毒性
[0183]
[0184] 3溶解浓度30 %
[0185] 4丨起显微镜下检测到正常细胞形态变化需要的最小细胞毒性浓度
[0186] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种等同变换，这 些等同变换均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述【具体实施方式】中所描述 的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不 必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施 方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公 开的内容。
【主权项】
1. 一种白杨素衍生物，其特征在于，它的结构如式(I)所示：式（I)中，X为NR、0或C出，其中R选自被苯或面代苯取代的Ci-Cs烷基，未被取代的或被选 自下组的取代基取代的苯基：面素、硝基、Ci-Cs烷氧基、面素取代的Ci-Cs烷基、Ci-Cs烷基，或 化晚基。2. 根据权利要求1所述的白杨素衍生物，其特征在于，R选自被苯或面代苯取代的C1-C3 烷基，未被取代的或被选自下组的取代基取代的苯基:面素、硝基、C1-C3烷氧基、面素取代的 C1-C3烷基、C1-C3烷基，或化晚基。3. 根据权利要求1所述的白杨素衍生物，其特征在于，R选自苯甲基，二苯甲基，面代苯 甲基，面代二苯甲基，苯基，被选自下组的取代基取代的苯基：面素、硝基、甲氧基、面素取代 的甲基、甲基，或化晚基。4. 根据权利要求1所述的白杨素衍生物，其特征在于，所述的面素为F、C1或化，面代苯 为被F、C1或化取代的苯。5. 根据权利要求1所述的白杨素衍生物，其特征在于，R选自6. 根据权利要求1~5任一项所述的白杨素衍生物的制备方法，其特征在于，包括： (1)式（II)化合物与式(III)化合物反应，获得式（IV)化合物;其中，式（II)化合物~式 (IV)化合物的结构依次分别为：式(II)~式(IV)中为，Ri为面素，X如权利要求1~5任一项所定义； (2)式(IV)化合物与白杨素反应，得所述的白杨素衍生物。7. 根据权利要求6所述的白杨素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤（1)反应在有机 溶剂中进行，反应溫度为O~50°C，反应时间为2~24。8. 根据权利要求6所述的白杨素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(2)反应在有机 溶剂中进行，反应溫度为O~80°C，反应时间为2~24。9. 根据权利要求1~5任一项所述的白杨素衍生物在制备抗菌药物中的应用。
【文档编号】A61P31/04GK105906598SQ201610335347
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】王忠长, 朱海亮, 沈发千, 杨永安, 李红侠, 钟慧
【申请人】江苏耐雀生物工程技术有限公司