一种Eph激酶多肽抑制剂及其应用
【专利摘要】本发明属于生物技术领域，具体的说是Eph激酶多肽抑制剂及其应用。本发明所述多肽如式Ι所示。本发明所述多肽对Eph激酶具有高效的抑制作用，而且稳定性较高，可用于制备治疗或预防Eph激酶异常表达相关疾病药物。本发明所述多肽通过抑制Eph激酶的异常表达，抑制肿瘤血管的生成，从而达到抗肿瘤生长的作用，可用于制备治疗癌症的药物。
【专利说明】
一种Eph激酶多肽抑制剂及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体的说是Eph激酶多肽抑制剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 血管生成是一个涉及新生成的成血管细胞聚集成原始血管丛，再经历增殖、迀移、 发芽等重建形成新的血管和血管网的过程。生理或病理条件下，血管生成与胚胎发育生长、 炎症反应、伤口愈合、肿瘤糖尿病性视网膜的发生等过程有关。血管生成是肿瘤生长和转移 的必要条件之一，不仅为肿瘤生长提供必要的氧气和营养物质，而且可以排泄代谢产物。因 此抗肿瘤血管生成成为肿瘤治疗的新策略。
[0003] 受体酪氨酸激酶Eph及其配体ephrins在组织修复、肿瘤发生和神经发育等多种生 物进程的调控中扮演重要的角色。目前在哺乳动物体内存在14种已知的Eph受体和8种 ephrin配体。与其他大多数酪氨酸激酶受体相似，Eph受体家族属于附膜细胞表面分子，由 三部分组成，即胞外配体结合区、跨膜区和胞内区。Eph受体家族根据其配体的不同、结构的 相似性膜结合方式分为两大类:9种EphA受体可与5种A类ephrin配体结合，5种EphB受体可 与3种B类ephrin结合。Eph受体的ephrin结合区在蛋白的氨基端，连接着半胱氨酸富集区和 两个纤连蛋白III类区，而细胞膜内则包含了受体的酪氨酸激酶区。EphA类受体可通过糖基 磷脂酰肌醇(GPI)锚定的方式连接在细胞膜上，而EphB类受体则通过穿膜结构固定在细胞 膜上。
[0004] 近期的研究发现受体酪氨酸激酶Eph及其配体ephrins在原始血管丛的生成以及 后续血管网的构建中发挥着重要的作用。研究发现Eph激酶在多种肿瘤细胞如乳腺癌、结肠 癌、膀胱癌等中过度表达，抑制Eph激酶的活性可以抑制肿瘤血管的生成，从而达到抗肿瘤 生长的作用。
[0005] 目前尚无抑制ephrin配体与Eph受体的结合而起到抑制Eph激酶活性的小分子抗 肿瘤药物。因此，开发高活性以及高稳定性的抑制Eph激酶的多肽类分子成为了抗肿瘤血管 生成药物开发的热点。本发明提供了一种活性好稳定性高的Eph激酶多肽抑制剂，以更好地 满足市场需求。
【发明内容】
[0006] 本发明目的是提供稳定的抑制Eph激酶的多肽及其应用。
[0007] 为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] -种式I所示多肽，
[0009]
[0010] 或其异构体、非对映体、对映体、药学上可接受的盐以及它的前药，其中：
[0011] A 独立选自 Tyr、Ser 或 Thr;
[0012] B 独立选自 Asn、Asp、Glu 或 Gin;
[0013] C独立选自 Ile、Leu、Phe或Val;
[0014] D独立选自His或Arg;
[0015] E 独立选自 Ala、Ile、Leu、PheSVal;
[0016] XiSF-G片段或酰胺键，F和G分别独立选自为Ala、I le、Leu、Phe或Val。
[0017] 本发明所述多肽是指氨基酸之间通过肽键共价结合形成的化合物，式I从左到右 表示为从多肽N端到C端。所述氨基酸包括天然和非天然氨基酸。天然氨基酸是指常见的主 要的用于组成多肽和蛋白质的氨基酸。非天然氨基酸是指其他通过合成途径获得或者来源 于天然资源的氨基酸。
[0018] 本发明还提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列中取代、缺失或添加一 个或多个氨基酸残基所得到的氨基酸序列且具有Eph激酶抑制活性的多肽。所述的氨基酸 取代、缺失或添加，可以在氨基酸序列的任意位点进行，只要具有改造后的氨基酸序列的多 肽具有Eph激酶抑制活性即可。类似的，所取代、缺失或添加的氨基酸的数目也是任意的，只 要具有改造后的氨基酸序列的多肽具有Eph激酶抑制活性即可。
[0019] 本发明还提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列末端修饰所得到的氨 基酸序列且具有Eph激酶抑制活性的多肽。多肽没有连接化学基团，则N末端为氨基基团，C 末端为羧基或酰胺基团。所述多肽可以在其N末端或C末端连接化学基团进行末端修饰。所 述修饰可以是磷酸化、酰胺化、羰基化、烷基化、酯化或泛素化等等。
[0020] 在一些实施方案中，提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列N末端被磷 酸化、酰胺化、羰基化、泛素化、聚乙二醇化修饰所得到的氨基酸序列且具有Eph激酶抑制活 性的多肽。即不同的化合物与多肽的氨基酸序列N末端的氨基形成共价结合的基团，如酰基 化基团包括甲酰化、乙酰化、苯甲酰化、三氟乙酰胺化以及琥珀酰化等，只要具有改造后的 氨基酸序列的多肽具有Eph激酶抑制活性即可。
[0021] 在一些实施方案中，提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列C末端被烷 基化、酯化修饰所得到的氨基酸序列且具有Eph激酶抑制活性的多肽。即不同的化合物与多 肽的氨基酸序列C末端的羧基形成共价结合的基团，如具有叔丁基、苯基等基团的化合物与 C末端的羧基形成共价结合的基团。
[0022]在具体实施实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO: 1~6之一所示的氨基酸序 列。
[0023] 本发明还提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列中多个氨基酸残基环 化所得到的氨基酸序列且具有Eph激酶抑制活性的多肽。所述的氨基酸环化可以在氨基酸 序列的任意位点进行，只要具有环化后的氨基酸序列的多肽具有Eph激酶抑制活性即可。
[0024] 其中，优选的，所述环化通过二硫键或酰胺键形成。
[0025] 本发明还提供了具有通过在本发明所述多肽的氨基酸序列中连接荧光标记或放 射性标记且具有Eph激酶抑制活性的多肽。
[0026] 所述的荧光标记可以连接于多肽的N末端或多肽侧链中的任意的游离氨基上，如 式II-V所示，只要具有荧光标记后的氨基酸序列的多肽具有Eph激酶抑制活性即可。
[0027]
[0028] 优选的，所述荧光标记为FITC或FAM。
[0029] 本发明也提供了编码本发明所述多肽的DNA分子。由于密码子的简并性，可以存在 很多种能够编码本发明所述的特定多肽的核苷酸序列。对于编码本发明所述多肽的DNA分 子，本领域技术人员可以很容易的利用现有公知的方法制造合成。诸如，通过选择对应于构 成所设计的氨基酸序列的氨基酸残基的密码子，可很容易地确定和提供相应于多肽的氨基 酸序列的DNA分子。
[0030] 本发明还提供了一种药物组合物，含本发明所述的多肽。
[0031] 在一些实施方案中，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料。如崩解剂、润滑 剂、乳化剂、粘合剂等。
[0032]实验表明，本发明所述多肽对Eph激酶具有高效的抑制作用，而且稳定性较高，可 用于Eph激酶异常表达相关疾病的治疗。因此本发明提供了所述多肽在制备治疗或预防Eph 激酶异常表达相关疾病药物中的应用。
[0033] 其中，所述Eph激酶异常表达相关疾病为细胞增殖疾病、血管新生的破坏所导致、 关联或伴随的疾病、神经系统疾病。
[0034] 本发明所述细胞增殖疾病具体为癌症。
[0035] 本发明所述癌症可以为胃肠癌类如胃癌、食道癌、小肠癌、肝癌、肝外胆管癌、胃肠 类癌性肿瘤、胆囊癌。泌尿生殖器癌类，例如睾丸癌、阴茎癌、前列癌类;妇科癌类如卵巢癌、 子宫颈癌、阴道癌、阴部癌、子宫/子宫内膜癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤;头 和颈部肿瘤类包括口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌;血 癌类如儿童白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓 性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病、骨髓癌，血液病 症例如骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、再生障碍性贫血、范科尼贫血、特发性巨球 蛋白血症;肺癌类例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌;淋巴癌类例如霍奇金病、非霍奇金氏淋 巴瘤、皮肤型T-细胞淋巴瘤、周围T-细胞淋巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤;眼癌类例如视网膜母 细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤;皮肤癌类例如黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌、软组 织肉瘤类包括儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波希肉瘤;泌尿系统癌症例如肾癌、维 尔姆斯肿瘤、膀胱癌、尿道癌和转移性细胞癌，骨癌类例如尤因肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、和 同类者，脑和CNS肿瘤例如听神经瘤、神经母细胞瘤、神经胶瘤和其他脑肿瘤，脊髓肿瘤、乳 癌、结肠直肠癌、进展期结肠直肠腺癌；内分泌癌类例如肾上腺皮质癌、胰癌、脑垂体癌、甲 状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、多发性内分泌肿瘤。
[0036] 优选的，所述癌症为乳腺癌、结肠癌肿、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤、间皮 瘤等。
[0037] 本发明所述多肽可以是天然多肽、重组多肽或合成多肽。所述多肽的制备方法本 发明没有限定，只要能获得本发明所述的多肽即可。在一些实施方案中，可以通过化学方法 合成，如通过固相合成法、液相合成法或固相液相相结合的方法合成。
[0038] 由上述技术方案可知，本发明提供了抑制Eph激酶的多肽。本发明所述多肽对Eph 激酶具有高效的抑制作用，而且稳定性较高，可用于制备治疗或预防Eph激酶异常表达相关 疾病药物。本发明所述多肽通过抑制Eph激酶的异常表达，抑制肿瘤血管的生成，从而达到 抗肿瘤生长的作用，可用于制备治疗癌症的药物。
【附图说明】
[0039] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0040] 图1本发明提供了多肽化合物对ephrin-ΒΙΑΡ结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制 曲线以及计算得到的IC5Q值;其中图a为化合物NI-E-00009对ephr in-ΒΙΑΡ结合于EphB4的Fc 段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的IC5Q值（2.94nM)，图b为化合物NI-E-00005对 ephrin-ΒΙΑΡ结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的IC5Q值（1.4nM)，图c 为化合物NI-E-00011对ephrin-ΒΙΑΡ结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制曲线以及计算得 到的 IC5Q 值（2.85nM);
[00411图2本发明提供了多肽化合物对ephrin-B2AP结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制 曲线以及计算得到的IC5Q值;其中图a为化合物NI-E-00009对ephr in-B2AP结合于EphB4的Fc 段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的IC50值(9.4nM)，图b为化合物ΝΙ-Ε-00010对ephrin-B2AP结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的IC 5Q值(40μΜ)，图c为化合物 NI-E-00005对ephrin-B2AP结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的1(：50值 (30nM)；
[0042] 图3本发明提供了多肽化合物在人肺腺癌细胞(LU1250)条件培养基中不同时间段 未降解的多肽的含量；其中图a化合物NI-E-00005与化合物NI-E-00009在人肺腺癌细胞 (LU1250)条件培养基中4小时内不同时间段的含量，图b为为化合物NI-E-00013与对照组 (NI-E-00013+抑肽酶)在人肺腺癌细胞(LU1250)条件培养基中6小时内不同时间段的含量， 图c为化合物NI-E-00009与对照组(NI-E-00009+抑肽酶）以及化合物NI-E-00012与对照组 (NI-E-00012+抑肽酶)在人肺腺癌细胞(LU1250)条件培养基中210min内不同时间段的含 量。
【具体实施方式】
[0043] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例，对本发明进行详细 阐述。如无特殊说明，本发明实施例所涉及的实验试剂均为市售产品。其中部分试剂名称与 缩写的对应如下：DMF:N，N-二甲基甲酰胺；DCM:二氯甲烷;DIC:N，N-二异丙基碳二亚胺； HOBt: 1-羟基苯并三氮唑;PIP:哌啶;Boc:叔丁氧羰基;Trt:三苯甲基;tBu:叔丁基。
[0044] 实施例1本发明所述多肽化合物及其合成
[0045] Eph 激酶多肽抑制剂 NI-E-00005 的氨基酸序列为：Tyr-Asn-Tyr-Leu-Phe-Ser-Pr〇-Asn-Gly-Pr〇-Ile-Ala-His-Ala-Trp-NH2(SEQ ID N0:5)，用下述路线合成。
[0046]
[0047] 1、采用Fmoc固相合成法合成。
[0048] 称取714mg替代度为0.28mmol/g的Rink Amide-MBHA树脂于固相反应器中，加入 DCM溶胀30min，随后加入20 % PIP/DMF溶液脱保护2次，第一次5min，第二次20min。分别用 DCM与DMF洗涤多次，抽干。向固相反应器中加入Fmoc-Trp (Boc)-OH(426mg，lmmo 1)，HOBt (135mg，lmmol)，DIC( 126mg，lmmol)，DMF(6mL)，室温反应2h。将树脂洗涤抽干，即得Fmoc-Trp(Boc)-Rink Amide-MBHA树脂。加入20%PIP/DMF溶液脱保护2次，第一次5min，第二次 20min，脱除Fmoc保护基。分别用DCM与DMF洗涤3次，得NH 2-Trp(Boc)-Rink Amide-MBHA树 脂。
[0049] 向固相反应器中加入Fmoc_Ala-〇H(31 lmg，lmmol )，HOBt (135mg，lmmol)，DIC (126mg，lmmol)，DMF(6mL)，室温反应2h。偶联完成后使用Kaiser测试检测，检测通过后进行 下一步反应。将树脂洗涤抽干，即得Fmoc-Ala_Trp(Boc)-Rink Amide-MBHA树脂。以此方法 依次偶联剩余的氨基酸，得到侧链全保护多肽树脂。
[0050] 向固相反应器中加入冷冻的8mL裂解液（体积比为三氟乙酸：二苯硫醚：水=95 : 2.5 :2.5 )，室温反应2h。裂解反应结束，过滤树脂，二氯甲烷洗涤树脂，合并滤液和洗液，旋 蒸浓缩。加入1 OmL冷冻的乙醚溶液，析出白色沉淀，离心后收集白色固体，真空干燥得粗肽 95mg。粗肽使用制备型HPLC纯化，将制备得到的液体冷冻干燥得到目标化合物MS(m/z): 1749.79[M+H] +〇
[0051 ]实施例2本发明所述多肽化合物及合成
[0052] Eph激酶多肽抑制剂NI-E-00013的氨基酸序列 Tyr-Asn-Tyr-Leu-Phe-Ser-Pro-Asn-Gly-Pr〇-Ile-Ala-His-Ala-Trp-Ahx-Lys(Biotin)-NH2(SEQ ID NO: 6)，用下述路线合 成。
[0053]
[0054] 1、采用Fmoc固相合成法合成。
[0055] 称取357mg替代度为0.28mmol/g的Rink Amide-MBHA树脂于固相反应器中，加入 DCM溶胀30min，随后加入20 %PIP/DMF溶液脱保护2次，分别反应5min和20min。分别用DCM与 0]\〇7洗涤多次，抽干。向固相反应器中加入?111〇(3-1^8(13;[01:;[11)-0!1(297.411^，0.5mmo 1)，H0Bt (67 · 5mg，0 · 5mmol)，DIC(63mg，0 · 5mmol)，DMF(4mL)，室温避光反应2h。将树脂洗涤抽干，即 得Fmoc-Lys(Biotin)-Rink Amide-MBHA树脂。随后加入20%PIP/DMF溶液脱保护2次，分别 反应5min和20min。分别用DCM与DMF洗涤3次，得NH 2-Lys(Biotin)-Rink Amide-MBHA树脂。 [0056]向固相反应器中加入Fmoc-6_Ahx-〇H( 176 · 7mg，0 · 5mmo 1)，H0Bt(67.5mg， 0· 5mmol)，DIC(63mg，0 · 5mmol)，DMF(4mL)，室温避光反应2h。偶联完成后使用Kaiser试剂检 测，检测通过后进行下一步反应。将树脂洗涤抽干，即得Fmoc-Ahx-Lys(Biotin)-Rink Amide-MBHA树脂。以此方法依次偶联剩余的氨基酸，得到侧链全保护多肽树脂。
[0057]向固相反应器中加入冷冻的6mL裂解液（体积比为三氟乙酸：二苯硫醚：水=95 : 2.5:2.5)，室温避光反应2h。裂解反应结束，过滤树脂，二氯甲烷洗涤树脂，合并滤液和洗 液，旋蒸浓缩。加入10mL冷冻的乙醚溶液，析出白色沉淀，离心后收集白色固体，冷冻干燥得 粗肽lOlmg。粗肽使用制备型HPLC纯化，将制备得到的液体冷冻干燥得到目标化合物MS(m/ ζ):2217·41[Μ+Η]+。
[0058] 实施例3本发明所述多肽化合物
[0059] Eph激酶多肽抑制剂的氨基酸序列如表1所示，按照实施例1或实施例2所述方法合 成。
[0060] 表1 Eph激酶多肽抑制剂
[0061]
[0062] 实施例4生物学活性 [0063] 1、对EphB4酶活性的测定
[0064]向ELISA 96孔板反应孔中加入稀释于TBST的lmg/mL EphB4的Fc段蛋白，室温避光 条件下孵育1小时。用TBST缓冲液冲洗EphB4Fc包被的96孔板后，向各反应孔中加入不同浓 度的多肽和不同体积的包含有ephrin-B2AP的细胞培养基，使总体积为50uL，室温避光条件 下孵育1小时。
[0065]用TBST缓冲液冲洗反应孔，去除未结合的多肽以及印hrin，以ImM PNPP(4-硝基苯 基磷酸钠盐）为底物，激发波长为485nm，发射波长为520nm在酶标仪上检测其荧光值， GraphPad Prism4绘图软件计算得出各多肽对EphB4酶活性即IC5Q<JC5〇定义为能够抑制Eph 酶活性的50 %所需要的化合物浓度。结果见图1、图2以及表2。
[0066] 2、体外稳定性试验
[0067] 取人肺腺癌细胞(LU1250)采用含10%胎牛血清、盘尼西林和链霉素的RPMI 1640 培养基进行常规培养。将浓度为25nM的受试化合物加入到人肺腺癌细胞的条件培养基中， 37 °C培养1 -4天。收集不同时间段的细胞培养基并以1:10的比例稀释于ELI SA孔中。使用酶 联免疫吸附试验法测定未降解的多肽的含量。结果如图3和表2。
[0068]表2本发明化合物的体外酶活性IC5Q及其稳定性测试结果
[0069]
[0070] 注:n/d为未检测到;n/a为不适用
[0071] 图1结果显示SEQ ID N0:l、3、5对ephrin-ΒΙΑΡ结合于EphB4的Fc段蛋白的活性抑 制曲线以及计算得到的IC5Q值。图2结果显示SEQ ID N0 1、2、5对ephrin-B2AP结合于EphB4 的Fc段蛋白的活性抑制曲线以及计算得到的IC5Q值。图3结果显示SEQ ID NO 1、5、6在人肺 腺癌细胞(LU1250)条件培养基中不同时间段未降解的多肽的含量以及加入抑肽酶后1、5、6 在人肺腺癌细胞(LU1250)条件培养基中不同时间段未降解的多肽的含量(阳性对照）。
[0072] 上述结果表明本发明化合物对Eph激酶具有一定的抑制作用，特别是SEQ ID N0 4、5、6所示多肽不仅可以在低浓度抑制Eph受体与其配体ephrins的结合，而且具有较高的 稳定性，因而有可能更好的发挥生物效果。
【主权项】
1. 一种式I所示多肤，或I， 或其异构体、非对映体、对映体、药学上可接受的盐W及它的前药，其中： A独立选自TyiNSer或!'虹； B 独立选自 Asn、Asp、Glu 或 Gln; C独立选自11 e、Leu、陆e或Val; D独立选自化S或Arg; E独立选自Ala、lie、Leu、陆e或Val; Xi为F-G片段或酷胺键，F和G分别独立选自为Ala、11 e、Leu、化e或化1。2. 具有通过在权利要求1所述多肤的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基 酸残基所得到的氨基酸序列且具有化h激酶抑制活性的多肤。3. 具有通过在权利要求1所述多肤的氨基酸序列N末端被憐酸化、酷胺化、幾基化、泛素 化、聚乙二醇化修饰所得到的氨基酸序列，或C末端被烷基化、醋化、酷胺化修饰所得到的氨 基酸序列，或连接氨基酸的肤键中N原子被甲基化修饰所得到的氨基酸序列，且具有化h激 酶抑制活性的多肤。4. 根据权利要求1-4所述多肤，其特征在于，具有SEQ ID NO: 1~6之一所示的氨基酸序 列。5. 具有通过在权利要求1所述多肤的氨基酸序列中多个氨基酸残基环化所得到的氨基 酸序列且具有化h激酶抑制活性的多肤，优选所述环化通过二硫键或酷胺键形成。6. 具有通过在权利要求1所述多肤的氨基酸序列中连接巧光标记或放射性标记且具有 E地激酶抑制活性的多肤，优选所述巧光标记为FITC或FAM。7. -种药物组合物，含权利要求1-6任意一项所述的多肤。8. 根据权利要求7所述药物组合物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。9. 权利要求1-6任意一项所述多肤或权利要求7-8任意一项所述的药物组合物在制备 治疗或预防化h激酶异常表达相关疾病药物中的应用。10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述化h激酶异常表达相关疾病为细胞增 殖疾病、血管新生所导致、关联或伴随的疾病、神经系统疾病。11. 根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述细胞增殖疾病为癌症，优选所述癌 症为胃肠癌、泌尿生殖器癌、妇科癌、头和颈部肿瘤、血癌、血液病症、肺癌、淋己癌、眼癌、皮 肤癌、泌尿系统癌、骨癌、脑和CNS肿瘤、脊髓肿瘤、乳癌、结肠直肠癌、进展期结肠直肠腺癌、 内分泌癌类。
【文档编号】A61K38/10GK105906691SQ201610523440
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】黄子为
【申请人】珠海诺贝尔国际生物医药研究院有限公司