用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯及其应用，方法包括：a.多糖溶液的制备；b.沙蒿多糖硅醚衍生物的制备；c.酯化试剂的制备；d.硫酸化反应;e.保护基的除去。利用空间位阻较大的叔丁基二苯基氯硅烷保护沙蒿多糖伯羟基，区域选择性合成了沙蒿多糖硫酸酯，拓展了沙蒿多糖作为天然活性物质的应用范围。本发明中硅醚衍生物对酸的稳定程度高，在硫酸酯化反应中能更好地保护多糖伯羟基，产物的取代度和分子量可以通过硫酸化试剂的比例调节优化，以提高多糖衍生物质量要求。合成的沙蒿多糖硫酸酯作为Hela宫颈癌细胞的抑制剂应用于制备抗癌药物中。
【专利说明】
用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯及其应用
技术领域
[0001] 本发明属化学合成领域，涉及一种利用有机硅烷区域选择性合成沙蒿多糖硫酸酯 的方法;本发明还涉及该沙蒿多糖硫酸酯的医药用途一一作为Hela宫颈癌细胞的抑制剂应 用于制备抗癌药物中。
[0002]
【背景技术】
[0003]多糖具有多种多样的生物学功能，如抗肿瘤、抗感染、免疫促进、抗辐射、抗类风湿 症和抗艾滋病等。具有生物学功能的多糖又被称为"生物应答效应物"（biological response modifier，BRM)或活性多糖。多糖是多功能基化合物，分子中有伯羟基、仲羟基及 羰基，有的还带有氨基，结构中的官能团的种类对其生物活性有极大的影响，目前国内外对 多糖进行结构修饰的方法主要有:硫酸化、乙酰化、磺酰化、硒化、烷基化、磷酸化和羧甲基 化等，这些方法表明对当今多糖构效关系研究的重要途径。
[0004]多糖经过化学修饰后，取代度、分子量和取代位置是决定其生物应答调节作用的 重要因素。对于仅含有羟基的多糖，伯羟基优先反应，在引入体积较大的酯基时尤其如此。 由于存在电子效应，与糖苷键毗邻的羟基反应活性更高，（1-3)和（1-4)连接的多糖，如凝 胶多糖、淀粉和纤维素，酯化反应速度通常为6-OH>2-OH>3(4)-OH，不含伯羟基的多糖2位 反应速度最快（T. Heinze et al. Esterification of polysaccharides, Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 2006)。因此，普通的化学合成技术往往得到的是C-6位取代 的产物，C2/C3也有部分取代。而非C-6取代或具有设计取代方式的产物需要进行选择性修 饰，必须采用基团保护技术，难度主要集中在保护基的选择、酯化过程对保护基影响、脱保 护条件以及溶剂的限制性等。目前，对壳聚糖和纤维素的选择性合成的文献报道均采用三 苯甲基化保护技术（Nishimura et al. Macromolecules 24，4745-4748)。专利 ZL201310235367.7授权了非伯羟基取代的硫酸化多糖的合成方法，采用三苯甲基保护圆头 蒿多糖伯羟基，合成了非C-6取代的圆头蒿多糖硫酸酯，显示出一定的体外抑制HepG2肝癌 细胞的活性。以上专利和文献报道的区域选择性合成多糖衍生物的方法，主要问题是三苯 甲基保护基对酸不稳定，在形成酯的过程中受酸的影响较大，尤其是在硫酸酯化反应过程 中，氯磺酸酸性极强，保护基容易掉落，造成取代位置的不可控，需要寻找其他反应体系。因 此，为了拓展活性多糖的应用范围，选择高效的区域选择性合成方法及相关工艺开发具有 十分重要的意义。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种利用有机硅烷作为保护 基，区域选择性合成沙蒿多糖硫酸酯的方法。
[0006] 本发明的另一目的在于提供用有机硅烷合成的沙蒿多糖硫酸酯，作为Hela宫颈癌 细胞的抑制剂应用于制备抗癌药物中 本发明的目的是通过以下技术方案来实现： 一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，包括以下工艺步骤： a.多糖溶液的制备:将沙蒿多糖加入到无水甲酰胺中，在70~80°C下，转速为800~1500 rpm/小时，搅拌8~12小时，得到沙蒿多糖的甲酰胺溶液，待用。
[0007] 所述步骤a中，沙蒿多糖为白色无定形粉末，总糖含量为90.6%，糖醛酸含量为 15.8%，重均分子量为7.348 X 104，在水中溶解度为0.71 lmg/mL( 25 °C )，沙蒿多糖与无水甲 酰胺的重量体积比为2~4 mg/mL。
[0008] 沙蒿多糖硅醚衍生物的制备:称取一定量的咪唑，加入到步骤a中的沙蒿多糖的甲 酰胺溶液中，在500~1000转/小时转速搅拌下，70~80°C活化12~24小时，之后量取一定量 的叔丁基二苯基氯硅烷，用恒压滴液漏斗以〇. 1~〇. 5 mL/min的速度滴入咪唑与沙蒿多糖的 甲酰胺混合溶液中，在70~90°C下搅拌反应36~48小时，完毕后室温下加入无水乙醇洗涤5~ 8遍，直至滤液遇水不产生乳浊液沉淀为止，用0.45 μπι纤维素滤膜在0.06~0.08 MPa下减 压抽滤，滤饼在0.06~0.08 MPa、50~60°C下减压干燥8~12小时，得沙蒿多糖硅醚衍生物。
[0009] 所述步骤b中，咪唑与沙蒿多糖的重量比2:1~3:1。
[0010]所述步骤b中，沙蒿多糖与叔丁基二苯基氯硅烷的重量体积比为0.08~0.125 g/ mL〇
[0011] 所述步骤b中，无水乙醇与沙蒿多糖的甲酰胺混合溶液的体积比为1~2。
[0012] c.酯化试剂的制备:在-5~5°C下，将氯磺酸用恒压滴液漏斗以0.2~0.6 mL/分钟 的速度滴加到吡啶中，滴加完毕后，在800~1500 rpm下搅拌反应20~30分钟，得到酯化试 剂。
[0013]所述步骤c中氯磺酸与吡啶的体积比为2:1十1。
[0014] d.硫酸化反应:将步骤b得到的沙蒿多糖硅醚衍生物加入无水甲酰胺中分散，得 沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液，加入步骤c得到的酯化试剂，于50~60 °C反应60~90分钟，反应 完毕后装入截流分子量为8000~12000道尔顿的透析袋中，依次于流水中透析24~48小时、去 尚子水透析12~24小时，每2~5小时换水一次，透析袋内液体在50~60°C、0.06~0.08 MPa下 减压浓缩至原体积的1/30~1/40呈浓缩液，再在浓缩液中加入无水乙醇进行沉淀，乙醇的含 量占无水乙醇和浓缩液的混合溶液总体积的70~85%，在0.06~0.08 MPa下减压抽滤，滤饼在 0.06~0.08 MPa、50~60°C下减压干燥8~12小时，得硫酸化衍生物。
[0015]所述步骤d中，沙蒿多糖硅醚衍生物与无水甲酰胺的重量体积比为3~5 mg/mL。
[0016] 所述步骤d中，沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液与酯化试剂的重量体积比为15~20 mg/ mL〇
[0017] e.保护基的除去:取步骤d-定量的硫酸化衍生物，加入四氢呋喃搅拌15~30分钟 后加入四丁基氟化铵，室温下500~1000 rpm搅拌反应48~60小时，完毕后在0.06~0.08 MPa 下减压抽滤，滤饼用20~50 mL无水乙醇洗涤4~5次，之后滤饼在-60~-50°C、1~10 Pa的条件 下冷冻干燥24~48小时，得区域选择性合成的沙蒿多糖硫酸酯。
[0018] 所述步骤e中，硫酸化衍生物与四氢呋喃的重量体积比为1~2 mg/mL。
[0019] 所述步骤e中，四丁基氟化铵与硫酸化衍生物的质量比为7:1~11:1。
[0020] 本发明与现有技术相比具有如下优点： 1、本发明利用有机硅烷保护技术，区域选择性合成了沙蒿多糖硫酸酯，相比现有技术， 硅醚衍生物对酸的稳定程度高，能更好地保护多糖伯羟基。有显著的体外抑制Hela细胞的 作用，拓展了沙蒿多糖作为天然活性物质的应用范围。
[0021] 2、本发明制备的沙蒿多糖的取代度和分子量可以通过酯化试剂的比例调节优化， 以提高多糖衍生物质量要求； 3、本发明不需要特殊设备，工艺简单，反应可控，适合推广应用。
【附图说明】
[0022] 图1为本发明制备的沙蒿多糖硅醚衍生物及反应之前的红外光谱图； 图2为沙蒿多糖及沙蒿多糖衍生物的红外光谱图； 图3为沙蒿多糖(A)和沙蒿多糖衍生物(B)的13C NMR谱图。
【具体实施方式】
[0023] 为了对本发明合成的沙蒿多糖硫酸酯结构、性能等进行分析说明，下面通过红外 光谱图、13C NMR谱图、元素分析和凝胶色谱-动静态光散射联用对硫酸化衍生物进行元素分 析测定和分子量分布的测定及对Hela宫颈癌细胞的抑制作用。
[0024] 1、红外光谱图分析 图1为本发明制备的沙蒿多糖硅醚衍生物及反应之前样品的红外光谱图。图1中，沙蒿 多糖中糖环母体吸收峰并未发生变化。3059 cnf1处为芳环中=C-H的伸缩振动；1477 cnf1和 1439 cnf1为芳香环C=C的伸缩振动;741 cnf1处源于芳香环=C-H的面外弯曲振动，这是单取 代芳香环的特征吸收峰，703 cnf1处为芳香环骨架面外弯曲振动。在1108 cnf1处出现了极 宽强Si-Ο的伸缩振动峰。由此说明，糖环上部分羟基已被苯基硅醚所取代。
[0025] 图2为沙蒿多糖和保护基的去除后的沙蒿多糖衍生物的红外光谱图。经过硫酸酯 化和保护基的去除后，沙蒿多糖衍生物没有任何苯基和硅醚有关的的特征吸收，说明保护 基已完全从多糖分子中除去。新的吸收峰出现在1251 cnf1和812 cnf1处，分别对应S=0和C-0-S的特征吸收，说明硫酸化沙蒿多糖的部分-OH已被硫酸基取代，发生了硫酸酯化反应。
[0026] 2、13C NMR谱图分析 图3为沙蒿多糖(A)和沙蒿多糖衍生物(B)的13C匪R谱图。在硫酸酯化和保护基的去除 后，C2-C-6的化学环境发生了较大程度的改变。65.9 ppm处C-6连接的化学位移也没有发 生变化，C-6信号没有向低场移动，说明取代不发生在C-6位。新的碳信号出现在73.5 ppm、 74.6 ppm和76.5 ppm低场处，分别归属为#D-galactose、#D_mannose和#D-glucose取代 的02信号峰，76.2口口111处为#〇-11^1111〇86的03取代碳信号。以上信息表明，取代位置发生 在C-2和C-3处。
[0027] 3、元素分析 采用元素分析仪(EA3000，Leeman)测定，本发明合成的硫酸化多糖的取代度为0.23~ 0.42，说明硫酸化多糖已成功合成。
[0028] 4、分子量分析 采用凝胶色谱-动静态光散射联用测定，本发明合成的多糖衍生物重均分子量为2.05 X104 Da~3.11X104Da。说明本发明中产物的分子量可根据反应条件进行调节。
[0029]下面通过具体实施例对本发明的合成方法作进一步的说明： 实施例1 一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，包括以下工艺步骤： (1) 多糖溶液的制备：将5 0 0 m g沙蒿多糖加入到2 5 0 m L无水甲酰胺中，8 0 °C下，15 0 0 rpm/小时搅拌10小时，得到沙蒿多糖的甲酰胺溶液； (2) 沙蒿多糖硅醚衍生物的制备:称取1.5 g咪唑，加入到上述沙蒿多糖的甲酰胺溶液 中，放置在活化床上，按800 rpm/小时搅拌，75°C活化12小时，之后量取6.25 mL叔丁基二 苯基氯硅烷，用恒压滴液漏斗以0.2 mL/min的速度缓慢滴入上述混合溶液中，在90°C下搅 拌反应36小时，完毕后室温下加入375 mL无水乙醇洗涤5遍，直至滤液遇水不产生乳浊液 沉淀为止，用0.45 μπι纤维素滤膜在0.08 MPa下减压抽滤，滤饼在0.07 MPa、55°C下减压干 燥12小时，得沙蒿多糖硅醚衍生物。
[0030] (3)酯化试剂的制备:在5°C下将氯磺酸用恒压滴液漏斗以0.2 mL/分钟的速度滴 加到吡啶中，至氯磺酸和吡啶的体积比为2:1，滴加完毕后在800 rpm下搅拌反应30分钟，得 到酯化试剂。
[0031] (4)硫酸化反应:将300 mg沙蒿多糖硅醚衍生物加入60 mL无水甲酰胺中分散，得 沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液，加入上述酯化试剂15 mL，于60°C反应60分钟，反应完毕后装 入截流分子量为8000~12000道尔顿的透析袋中，依次于流水中透析48小时、去离子水透析 12小时，每5小时换水一次，透析袋内液体在55°C、0.06 MPa下减压浓缩至原体积的1/40,再 在浓缩液中加入无水乙醇进行沉淀（乙醇含量占总体积的70%)，在0.08 MPa下减压抽滤，滤 饼在0.07 MPa、60°C下减压干燥10小时，得硫酸化衍生物。
[0032] (5)保护基的除去：取100 mg硫酸化衍生物，加入50 mL四氢呋喃中搅拌30分钟后 加入四丁基氟化铵700 mg，室温下搅拌（1000 rpm)反应60小时，完毕后在0.06 MPa下减压 抽滤，滤饼用50 mL无水乙醇洗涤4次，之后滤饼在-60°C、5 Pa的条件下冷冻干燥24小时，得 区域选择性合成的沙蒿多糖硫酸酯。
[0033]合成的沙蒿多糖硫酸酯为淡黄色无定形粉末，总糖含量为83.3%，糖醛酸含量为 7.6%，在水中溶解度为3.3 mg/mL( 25°C )，取代度为0.42，重均分子量为2.33 X 104Da。
[0034] 实施例2 一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，包括以下工艺步骤： (1)多糖溶液的制备:将500 mg沙蒿多糖加入到125 mL无水甲酰胺中，70°C下搅拌(800 rpm)8小时，得到沙蒿多糖的甲酰胺溶液。
[0035] (2)沙蒿多糖硅醚衍生物的制备：称取1.0 g咪唑，加入到上述沙蒿多糖的甲酰胺 溶液中，放置在活化床上，按500 rpm/小时搅拌，80°C活化24小时，之后量取4 mL叔丁基二 苯基氯硅烷，用恒压滴液漏斗以0.5 mL/min的速度缓慢滴入上述溶液中，在80°C下搅拌反 应48小时，完毕后室温下加入250 mL无水乙醇洗涤7遍，直至滤液遇水不产生乳浊液沉淀 为止，用0.45 μπι纤维素滤膜在0.06 MPa下减压抽滤，滤饼在0.08 MPa、60°C下减压干燥12 小时，得沙蒿多糖硅醚衍生物。
[0036] (3)酯化试剂的制备:在_5°C下将氯磺酸用恒压滴液漏斗以0.4 mL/分钟的速度滴 加到吡啶中，至氯磺酸和吡啶的体积比为1:1，滴加完毕后，在1500 rpm/小时转速搅拌下， 反应20分钟，得到酯化试剂。
[0037] (4)硫酸化反应:将300 mg沙蒿多糖硅醚衍生物加入100 mL无水甲酰胺中分散，得 沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液，加入上述酯化试剂20 mL，于50°C反应90分钟，反应完毕后装 入截流分子量为8000~12000道尔顿的透析袋中，依次于流水中透析24小时、去离子水透析 24小时，每2小时换水一次，透析袋内液体在60°C、0.08 MPa下减压浓缩至原体积的1/30，再 在浓缩液中加入无水乙醇进行沉淀（乙醇含量占总体积的85%)，在0.07 MPa下减压抽滤，滤 饼在0.06 MPa、55°C下减压干燥12小时，得硫酸化衍生物。
[0038] (5)保护基的除去:取100 mg硫酸化衍生物，加入100 mL四氢呋喃中搅拌15分钟后 加入四丁基氟化铵1100 mg，室温下搅拌(800 rpm)反应50小时，完毕后在0.08 MPa下减压 抽滤，滤饼用30 mL无水乙醇洗涤5次，之后滤饼在-55°C、1 Pa的条件下冷冻干燥48小时，得 区域选择性合成的沙蒿多糖硫酸酯。
[0039] 合成的沙蒿多糖硫酸酯为淡黄色无定形粉末，总糖含量为86.7%，糖醛酸含量为 10.2%，在水中溶解度为2.02 mg/mL(25°C )，取代度为0.23，重均分子量为2.05 X 104Da。
[0040] 实施例3 一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，包括以下工艺步骤： (1)多糖溶液的制备：将500 mg沙蒿多糖加入到200 mL无水甲酰胺中，75°C下搅拌 (1000 rpm)12小时，得到沙蒿多糖的甲酰胺溶液。
[00411 (2)沙蒿多糖硅醚衍生物的制备:称取1.25 g咪唑，加入到上述沙蒿多糖的甲酰胺 溶液中，放置在活化床上，按1000 rpm/小时搅拌，70°C活化18小时，之后量取5 mL叔丁基二 苯基氯硅烷，用恒压滴液漏斗以0.1 mL/min的速度缓慢滴入上述溶液中，在70°C下搅拌反 应40小时，完毕后室温下加入200 mL无水乙醇洗涤8遍，直至滤液遇水不产生乳浊液沉淀为 止，用0.45 μπι纤维素滤膜在0.07 MPa下减压抽滤，滤饼在0.06 MPa、50°C下减压干燥10小 时，得沙蒿多糖硅醚衍生物。
[0042] (3)酯化试剂的制备:在0°C下将氯磺酸用恒压滴液漏斗以0.5 mL/分钟的速度滴 加到吡啶中，至氯磺酸和吡啶的体积比为1.5 :1，滴加完毕后，在1000 rpm/小时转速搅拌 下，反应25分钟，得到酯化试剂。
[0043] (4)硫酸化反应:将300 mg沙蒿多糖硅醚衍生物加入75 mL无水甲酰胺中分散，得 沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液，加入上述酯化试剂15 mL，于55°C反应75分钟，反应完毕后装 入截流分子量为8000~12000道尔顿的透析袋中，依次于流水中透析36小时、去离子水透析 18小时，每3小时换水一次，透析袋内液体在50°C、0.07 MPa下减压浓缩至原体积的1/40，再 在浓缩液中加入无水乙醇进行沉淀（乙醇含量占总体积的80%)，在0.06 MPa下减压抽滤，滤 饼在0.08 MPa、50°C下减压干燥8小时，得硫酸化衍生物。
[0044] (5)保护基的除去：取100 mg硫酸化衍生物，加入62.5 mL四氢呋喃中搅拌20分钟 后加入四丁基氟化铵800 mg，室温下，在1000 rpm/小时转速搅拌下，反应48小时，完毕后在 0.07 MPa下减压抽滤，滤饼用20 mL无水乙醇洗涤5次，之后滤饼在-50°C、10 Pa的条件下冷 冻干燥46小时，得区域选择性合成的沙蒿多糖硫酸酯。
[0045] 合成的沙蒿多糖硫酸酯为淡黄色无定形粉末，总糖含量为80.8%，糖醛酸含量为 5.2%，在水中溶解度为4.3 mg/mL(25°C )，取代度为0.33，重均分子量为3.11 X 104 Da。
[0046] 实施例4 沙蒿多糖硫酸酯体外（即在培养箱中培养肿瘤细胞的环境)作为Hela宫颈癌细胞的抑 制剂应用于制备抗癌药物中 分别取对数生长期Hela细胞，用以下方法处理：用0.25%胰蛋白酶(含EDTA)消化，用含 10%胎牛血清的1640培养基制成浓度5 X104个/mL的单细胞悬液，不断摇动细胞悬液使细胞 数均匀，以〇. 1 mL/孔接种于96孔培养板。其中，空白组加3孔不含细胞的培养基，置C02培养 箱内在37 °C、饱和湿度、5%C02条件下培养。
[0047]培养24小时后细胞贴壁，换含10%胎牛血清的完全培养基，每孔加180 yL牛血清 的培养基和20 yL沙蒿多糖硫酸酯药液（空白组和对照组加20 yL PBS液），药物终浓度为 31.25,62.5,125,250,500,1000 yg/mL，每浓度重复6孔，并设不加药物的对照组和空白调 零组。置C02培养箱内在37 °C、饱和湿度、5%C02条件下培养。
[0048] 药物处理48小时后，每孔加入CCK-8溶液10 yL，37°C下继续培养1小时。用酶标 仪在450 nm处测吸光值，对照组以空白组调零，并按下列公式计算抑制率： 抑制率(％)=(1-给药组平均0D值/对照组平均0D值）X 100%。
[0049] 表1实施例1-3的取代度、分子量及对Hela细胞的1(：50值
表1是本发明实施例1-3得到的沙蒿多糖硫酸酯体外对He la细胞的IC5Q值。由体外抗 肿瘤实验结果可以看出，经过本发明路线合成的沙蒿多糖衍生物显示出了较强的体外抑制 Hela细胞的活性，其IC5Q值为184.2~312.6 yg/mL，且与产物的取代度呈正相关，取代度越 尚，IC5Q值越低，体外抗肿瘤活性越强，说明硫酸基团的区域选择性引入能有效地提尚广物 的抗肿瘤活性。此外，取代度的高低和酯化试剂的比例有密切关系，本发明工艺可以通过对 其进行调整以合成具有不同结构特征及活性的沙蒿多糖衍生物。
【主权项】
1. 一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，包括以下工艺步骤： a. 多糖溶液的制备：将沙蒿多糖加入到无水甲酰胺中，70~80°C下，转速为800~1500 rpm/小时搅拌8~12小时，得到沙蒿多糖的甲酰胺溶液，待用； b. 沙蒿多糖硅醚衍生物的制备:称取一定量的咪唑，加入到步骤a中的沙蒿多糖的甲 酰胺溶液中，在500~1000转/小时转速搅拌下，70~80°C活化12~24小时，之后量取一定量 的叔丁基二苯基氯硅烷，用恒压滴液漏斗以〇. 1~〇. 5 mL/min的速度滴入咪唑与沙蒿多糖的 甲酰胺混合溶液中，在70~90°C下搅拌反应36~48小时，完毕后室温下加入1-2倍反应液体 积的无水乙醇洗涤5~8遍，直至滤液遇水不产生乳浊液沉淀为止，用0.45 μπι纤维素滤膜在 0.06~0.08 MPa下减压抽滤，滤饼在0.06~0.08 MPa、50~60°C下减压干燥8~12小时，得沙蒿 多糖硅醚衍生物； c. 酯化试剂的制备:在_5~5 °C下，将氯磺酸用恒压滴液漏斗以0.2~0.6 mL/分钟的速 度滴加到吡啶中，滴加完毕后，在800~1500 rpm下搅拌反应20~30分钟，得到酯化试剂； d. 硫酸化反应:将步骤b得到的沙蒿多糖硅醚衍生物加入无水甲酰胺中分散，得沙蒿 多糖硅醚衍生物悬浊液，加入步骤c得到的酯化试剂，于50~60°C反应60~90分钟，反应完毕 后装入截流分子量为8000~12000道尔顿的透析袋中，依次于流水中透析24~48小时、去离子 水透析12~24小时，每2~5小时换水一次，透析袋内液体在50~60°C、0.06~0.08 MPa下减压 浓缩至原体积的1/30~1/40呈浓缩液，再在浓缩液中加入无水乙醇进行沉淀（乙醇的含量占 总体积的70~85%)，在0.06~0.08 MPa下减压抽滤，滤饼在0.06~0.08 MPa、50~60°C下减压干 燥8~12小时，得硫酸化衍生物； e. 保护基的除去:取步骤d-定量的硫酸化衍生物，加入四氢呋喃搅拌15~30分钟后加 入四丁基氟化铵，室温下500~1000 rpm搅拌反应48~60小时，完毕后在0.06~0.08 MPa下减 压抽滤，滤饼用20~50 mL无水乙醇洗涤4~5次，之后滤饼在-60~-50°C、1~10 Pa的条件下冷 冻干燥24~48小时，得区域选择性合成的沙蒿多糖硫酸酯。2. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤a 中，沙蒿多糖与无水甲酰胺的重量体积比为2~4 mg/mL。3. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤b 中，咪唑与沙蒿多糖的重量比2:1~3:1。4. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤b 中，沙蒿多糖与叔丁基二苯基氯硅烷的重量体积比为〇.08~0.125 g/mL。5. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤c 中氯磺酸与吡啶的体积比为2:1~1:1。6. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤d 中，沙蒿多糖硅醚衍生物与无水甲酰胺的重量体积比为3~5 mg/mL。7. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤d 中，沙蒿多糖硅醚衍生物悬浊液与酯化试剂的重量体积比为15~20 mg/mL。8. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤e 中，硫酸化衍生物与四氢呋喃的重量体积比为1~2 mg/mL。9. 如权利要求1所述一种用有机硅烷合成沙蒿多糖硫酸酯的方法，其特征在于：步骤e 中，四丁基氟化铵与硫酸化衍生物的质量比为7:1~11:1。10.如权利要求1所述一种用有机硅烷合成的沙蒿多糖硫酸酯，作为Hela宫颈癌细胞的 抑制剂应用于制备抗癌药物中。
【文档编号】A61P35/00GK105906732SQ201610271412
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】王俊龙, 包爱娟, 牛盛蕃, 李清瑶, 刘秀蓉, 孔维宝, 梁俊玉, 姚健, 张继
【申请人】西北师范大学