从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法
【专利摘要】本发明提供了一种从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法。方法：对油茶叶进行浸提；以D101为色谱柱填料，用75?85％乙醇溶液对粗提液进行洗脱；将最后的洗脱液进行硅胶层析分离，合并含有槲皮素?3?鼠李糖苷、槲皮素葡萄糖苷(或半乳糖苷)的流份段，采用DAC色谱柱分离，收集槲皮素?3?鼠李糖苷流份；同时合并含有槲皮素葡萄糖苷(或半乳糖苷)的流份段，命名为第二顺序组分；对第二顺序组分进行硅胶层析，合并含有槲皮素葡萄糖苷(或半乳糖苷)的流份段，再进行半制备液相色谱分离，收集槲皮素葡萄糖苷(或半乳糖苷)的流份。本发明首次同时从油茶叶中成功提取出了三种槲皮素的衍生物，收率高、产品纯度高。
【专利说明】
从油茶叶中提取撇皮素衍生物的方法
技术领域
[0001] 本发明设及药物提取技术领域，尤其是设及一种从油茶叶中提取搬皮素衍生物的 方法。
【背景技术】
[0002] 油茶叶为山茶科植物油茶的叶，其富含多种药效成分，尤其是黄酬类化合物、巧类 化合物。黄酬类化合物具有多种生物活性，例如屯、血管系统活性、抗菌及抗病毒活性、抗肿 瘤活性、抗氧化自由基活性、镇痛活性、保肝活性等。巧类化合物具有桂疲止咳、抗肿瘤、抗 真菌、抑菌及降胆固醇等生物活性。
[0003] 如何从油茶叶中提取出搬皮素等生物活性成分，对深度开发油茶作物极其重要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供从油茶叶中提取搬皮素衍生物的方法，所述的提取方法首 次同时从油茶叶中成功提取出了=种搬皮素的衍生物，即搬皮素-3-鼠李糖巧、搬皮素-3- 0-e-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧，并且该提取方法具有收率高、产品纯度高等 优点。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供了 W下技术方案：
[0006] 从油茶叶中提取搬皮素衍生物的方法，包括W下步骤：
[0007] A: W乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液；
[000引B: WDlO 1大孔吸附树脂为填料，依次用水、15-25 %乙醇溶液、75-85 %乙醇溶液对 所述粗提液进行恒定洗脱；
[0009] C:将所述75-85%乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析分离，用9-11:1至1: 2.5-3.5梯度的二氯甲烧-甲醇进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有搬皮 素-3-鼠李糖巧、搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的流份段，命名为 第一顺序组分；
[0010] D:采用DAC色谱柱，用55-65 %甲醇-7jC为流动相对所述第一顺序组分进行恒定洗 脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，收集搬皮素-3-鼠李糖巧流份；同时合并含有搬皮素-3- 0-e-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的流份段，命名为第二顺序组分；
[00川 E:对所述第二顺序组分进行硅胶层析，用90-110:10-14:1的二氯甲烧-甲醇-水进 行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素- 3-O-0-D-半乳糖巧的流份段，命名为第S顺序组分；
[0012] F:对所述第=顺序组分进行半制备液相色谱分离，W20-30%乙腊-水进行恒定洗 脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，收集搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧和搬皮素-3-O-0-D-半乳 糖巧的流份。
[0013] 上述提取方法由粗至精的方式从油茶叶中逐步分离出搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧 (简称为C0-1)的纯净物，W及搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧(简称为C0-8a)、搬皮素-3-O-0-D- 半乳糖巧(简称为C0-8b)运两种非对映异构体的混合物。
[0014] W干油茶叶为基准，本发明对CO-I的提取率在96.4mg/kgW上，在对C0-8a、C0-8b 混合物的提取率在30.3mg/kgW上，并且前后两个产品的纯度均在90% W上。
[0015] 本发明所述的流动相（即洗脱所用的液体)的比例均指体积比，流动相中的"％"指 非水物质所占的体积百分数，乙醇溶液均指乙醇的水溶液，例如，15-25%乙醇溶液指乙醇 体积百分比为15-25 %水溶液。
[0016] 本发明所述的恒定洗脱是指流动相的组成比例固定。
[0017] 本发明所述的梯度洗脱是指在洗脱过程中不断改变流动相的浓度配比，但起始浓 度和终点浓度是固定的，例如步骤C中的梯度洗脱是指:二氯甲烧-甲醇按照起始浓度为9- 11:1、洗脱终点浓度为1:2.5-3.5的方式进行梯度洗脱。
[0018] 本发明所述的提取方法适用于不同种属的油茶叶，尤其适合普通油茶(Camellia oleifera Abel),其提取率高。
[0019 ]本发明所述的DAC色谱柱指轴向动态压缩工业色谱柱。
[0020] 本发明所述的提取方法的各个步骤可W进一步改进，例如：
[0021] 步骤A中，浸提所用的溶剂、料液比、溫度对粗提液中的杂质含量W及有效成分的 提取率都有影响。溶剂优选用40-60 %的乙醇-水溶液，更优选50 %的乙醇-水溶液。料液比 优选为1:2.5-3.5( Ig固体:2.5-3.5mL溶剂），更优选1:2.5-3。浸提溫度优选为70-80°C，并 且W回流浸提为最佳。采用W上浸提条件能降低粗提液中的杂质含量，提高搬皮素衍生物 的提取率。
[0022] 另外，为了降低后期分离的难度，在浸提之后可W浓缩干燥粗提液，除去乙醇。
[0023] 步骤B中，每个梯度洗脱所用流动相的体积优选为柱体积的3.5-4.5倍，更优选为 4-4.5倍，保证待提取成分能够被充分洗脱出来。所用流动相的浓度优选水、15-20%乙醇溶 液和75-80%乙醇溶液。
[0024] 步骤C中，硅胶层析分离为分离手段，色谱分析为评价分离结果的手段，两者互相 配合，筛选出含有C0-l、C0-8a、C0-8bS个目标提取物的洗脱液。筛选通常为粗筛选，一般是 经色谱分析，先将色谱图相似的洗脱液合并，然后与目标提取物的标准品色谱图对比，从中 筛选出含有=个目标提取物之一的洗脱液，将其合并。
[0025] 所述步骤C中，所用的硅胶的粒径优选为200-300目，所述梯度洗脱优选为：用9-10 :1至1:2.5-3梯度的二氯甲烧-甲醇进行梯度洗脱，采用W上进一步优化的条件，可W提高 分离度和柱效。
[00%]在所述步骤C中，所述硅胶层析分离之前还包括:将所述75-85%乙醇溶液洗脱得 到的洗脱液浓缩干燥，可W避免乙醇对后续硅胶层析的干扰。
[0027] 另外，所述步骤C中的色谱分析可W是薄层色谱(TLC)、高效液相色谱等任意能用 于定性的方法，其中后者更准确。
[0028] 同样，所述步骤D中，经色谱分析可W为:高效液相色谱分析，和/或薄层分析等。
[0029] 所述步骤D中，流动相的浓度优选55-60%甲醇-水时，具有更高的分离度。在该步 骤中即可获得CO-I的纯净物，只要在色谱分析后，将仅含有CO-I的流份段合并即可。此处的 "仅含"是指CO-I的含量只要达到提取物的一般纯度即可，在此基础上，可根据生产需求选 择进一步提纯。
[0030] 另外，在进行硅胶层析时，为了保证待分离物均匀分散在硅胶之中，优选将二氯甲 烧-甲醇稀释待分离物，同时拌入硅胶，之后再水浴蒸干。经过W上处理后的物质再装入娃 胶柱中进行层析。
[0031] 所述步骤E中，所用的硅胶的粒径优选为200-300目，所述二氯甲烧-甲醇-水的比 例优选为90-100:10-12:1，W提高分离度和柱效。所采用的色谱分析可W为高效液相色谱 分析、薄层分析等。
[0032] 所述步骤F中，所述半制备液相色谱分离的色谱柱优选为C18,分离度高。所述乙 腊-水优选为:20-25 %乙腊-水，提局柱效。
[0033 ]与现有技术相比，本发明能达到W下技术效果：
[0034] (1)首次同时从油茶叶中提取了出高纯度的搬皮素衍生物一一搬皮素-3-鼠李糖 巧、搬皮素-3-0-e-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧；
[0035] (2)由粗到精的提取方式利于提取方法的规模化推广；
[0036] (3)提取收率高。
【附图说明】
[0037] 为了更清楚地说明本发明【具体实施方式】或现有技术中的技术方案，下面将对具体 实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的 附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前 提下，还可W根据运些附图获得其他的附图。
[0038] 图1为本发明实施例1提供的80%乙醇洗脱后收集的样品的液相色谱图；
[0039] 图2为CO-I的质谱图；
[0040] 图3为C0-8的质谱图；
[OOW 图 4为CO-I 的 Ih-NMR谱图；
[0042]图 5 为CO-I 的 Uc-NMR谱图；
[00创图6为C0-8的Ih-NMR谱图；
[0044] 图 7 为C0-8 的 Uc-NMR谱图。
【具体实施方式】
[0045] 下面将结合附图和【具体实施方式】对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但 是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的 实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领 域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保 护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂 或仪器未注明生产厂商者，均为可W通过市售购买获得的常规产品。
[0046] 本发明中所述的流动相的比例均指体积比。
[0047] 实施例1 [004引 第一步：
[0049]将自然阴干的油茶干燥叶粉碎过60目筛，取20kg分两批用50 %乙醇按料液比1: 3 在70-80°C加热回流，重复提取2次，每次提取化，合并所得上清液，过滤获得上清液，减压浓 缩至无醇味，得到原体积约一半的粗提液样品，备用。
[0050] 第二步：
[0051] 用工业酒精处理约IOL的DlOl型大孔吸附树脂，用水洗到无醇味，将第一步得到的 提取液分两次上样，依次用水、20 %乙醇、80 %乙醇洗脱，每个梯度洗脱4倍柱体积，根据化C 和HPLC分析结果，各部位合并浓缩。
[0052] 80%乙醇洗脱后收集的样品浓缩干燥(约150g，其HPlX谱图如图1所示，洗脱程序： O-IOmin 50%甲醇水溶液，10-20min 80%甲醇水溶液，20-21min 100%甲醇；检测波长 254nm，进样量10化），溶解于10:1的二氯甲烧-甲醇中，拌入300g薄层层析硅胶（200~300 目），水浴挥干，分两次装柱，其中每次空白层装填硅胶约SOOg。
[0053] 流动相系统为二氯甲烧-甲醇（10:1~1:3梯度洗脱），每SOOmL收集为一次，经过 TLC检测合并为1-化2'（表示:将第一次硅胶柱的第一个流份、第二个流份W及第二次硅胶 柱的第二个流份合并），3-7+3'-7'，8-10+8'-10'，11-13+11'，14-16+12'-13'，17-19+14'， 20-22+15'-18'，19'-21'，23-26+22'-27'，27-40,28'-34'，35'-44'，41-47,48-64,65,66- 67,68-70,71，72-78,45'-51'，52'-63'，64'-67'，68'-71'，72'-84'共计24个组分（两次娃 胶柱的流份用序号后面的符号加 W区分，部分流份进行交叉合并，用加号衔接（同一次 硅胶柱的流份用-衔接），例如，第一次装柱的提取液经洗脱后，收集的液体编号分别为1、 2……78,第二次装柱的提取液经洗脱后，收集的液体编号分别为1'、2'……84'）。
[0054] 第S步：
[0化日]27-40利用DAC制备色谱分离，60 %甲醇-水恒定洗脱，得到化合物CO-I (56.4mg)， W及一个含多个化合物的复杂组分fr.A(865mg)。经高效液相色谱分析，CO-I即为搬皮素- 3-鼠李糖巧。
[0化6] 第四步：
[0057]将打.A流份溶解于一定比例的二氯甲烧-甲醇中，拌入2.5g薄层层析硅胶（200- 300目），水浴挥干，空白层装填硅胶约40g。流动相系统为二氯甲烧-甲醇-水（100:12:1恒定 洗脱），每40mL收集为一个流份，经过化C检测合并为1，2,3,4-12(编号方法同第二步）。
[0化引第五步：
[0059] 利用半制备液相色谱对流份3进行分离，25%乙腊-水恒定洗脱，得到化合物C0-8 (含CO-fe和CO-Sb，10.3mg)。
[0060] 第六步:表征提取物
[0061 ] 将CO-I、C0-8进行质谱检测，如图2和3所示。
[0062] 将CO-I、C0-8进行核磁共振图谱检测，CO-I的iH-NMR、I3C-NMR分别如图4和5所示， C0-8的Ih-NMR、"C-NMR分别如图6和7所示。
[0063] 结合上述表征结果可W确定CO-I的分子式如下式(一）。
[0064]
[00化]UU-Sa卿UU-加巧一X了非X了映井网体，巧'UU-S恆测发现：在IH-NMR中，可见两组糖端 基质子信号，化.24(lH，d，J = 7.甜Z)为葡萄糖基的端基质子信号，扣.14(lH，d，J = 7.細Z) 为半乳糖基的端基质子信号，两组信号的峰面积比约为3:2。两组重叠的苯环间位质子信号 56.37(2H，S)和S6.17(2H，S)分别归属于A环的H-6和H-8;另有两组ABX偶合系统的芳香质子 信号56.83(lH，d，J = 8.4Hz),57.57(lH，d，J = 8.4Hz)和57.69(lH，s)归属于C0-&1 的H-2'， H-3'和H-5'，而56.83(lH，d，J = 8.4Hz) ,57.57(lH，d，J = 8.4Hz)和57.83(lH，s)归属于CO- 8b的H-2'，H-3'和H-5' ；在13C-NMR中，可见不饱和区的碳信号均成对出现，且每一对信号的 化学位移值非常接近，谱峰高度比约为3: 2,另有一组葡萄糖基的碳信号5102.80,74.2， 76.6,69.7,76.9,61.0和一组半乳糖基的碳信号5103.9,71.7,73.6,68.5,75.7,60.4。因 此，可W鉴定C0-8为C0-&1与CO-Sb的混合物，CO-Sa为搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧(结构式如 式(二））CO-Sb鉴定为搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧(结构式如式(S))。
[0066] 经检测，C0-UC0-8的纯度分别为96.4%、95.6%。
[0067]
[006引
[0069] 实施例2
[0070] 第一步：
[0071] 将自然阴干的油茶干燥叶粉碎过60目筛，取20kg分两批用40%乙醇按料液比1: 2.5在70-80°C加热回流，重复提取2次，每次提取化，合并所得上清液，过滤获得上清液，减 压浓缩至无醇味，得到原体积约一半的粗提液样品，备用。
[0072] 第二步：
[0073] 用工业酒精处理约IOL的DlOl型大孔吸附树脂，用水洗到无醇味，将第一步得到的 提取液分两次上样，依次用水、15%乙醇、75%乙醇洗脱，每个梯度洗脱4.5倍柱体积，根据 TLC和HPLC分析结果，各部位合并浓缩。
[0074] 80%乙醇洗脱后收集的样品浓缩干燥(约150g)，溶解于10:1的二氯甲烧-甲醇中， 拌入300g薄层层析硅胶(200~300目），水浴挥干，分两次装柱，其中每次空白层装填硅胶约 SOOgo
[0075] 流动相系统为二氯甲烧-甲醇(9:1~1:2.5梯度洗脱），每SOOmL收集为一次，经过 TLC检测合并含有搬皮素-3-鼠李糖巧、搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳 糖巧中至少一种的流份段，命名为第一顺序组分。
[0076] 第S步：
[0077] 第一顺序组分利用DAC制备色谱分离，55 %甲醇-水恒定洗脱，经色谱分析，合并得 到化合物CO-I (57. Img)，W及一个含搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖 巧的复杂组分，命名为第二顺序组分。经高效液相色谱分析，CO-I即为搬皮素-3-鼠李糖巧。 [007引第四步：
[0079] 将第二顺序组分溶解于一定比例的二氯甲烧-甲醇中，拌入2.5g薄层层析硅胶 (200-300目），水浴挥干，空白层装填硅胶约40g。流动相系统为二氯甲烧-甲醇-水(90:10:1 恒定洗脱），每40mL收集为一个流份，经过化C检测合并为四个组分，其中一个组分中是将含 有搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的流份段合并，命名为第S顺序 组分。
[0080] 第五步：
[0081] 利用半制备液相色谱对第=顺序组分进行分离，20%乙腊-水恒定洗脱，得到化合 物C0-8(含CO-fe和CO-Sb，10.5mg)。
[0082] 第六步:表征提取物
[008；3]同样，采用质谱和ih-nmr、i3c-nmr进行表征，结果与实施例1相同，CO-巧搬皮素- 3-鼠李糖巧，C0-8为搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的混合物。
[0084] 实施例3
[0085] 第一步：
[0086] 将自然阴干的油茶干燥叶粉碎过60目筛，取20kg分两批用60%乙醇按料液比1: 3.5在70-80°C加热回流，重复提取2次，每次提取化，合并所得上清液，过滤获得上清液，减 压浓缩至无醇味，得到原体积约一半的粗提液样品，备用。
[0087] 第二步：
[0088] 用工业酒精处理约IOL的DlOl型大孔吸附树脂，用水洗到无醇味，将第一步得到的 提取液分两次上样，依次用水、25 %乙醇、85 %乙醇洗脱，每个梯度洗脱3.5倍柱体积，根据 TLC和HPLC分析结果，各部位合并浓缩。
[0089] 80%乙醇洗脱后收集的样品浓缩干燥(约150g)，溶解于10:1的二氯甲烧-甲醇中， 拌入300g薄层层析硅胶(200~300目），水浴挥干，分两次装柱，其中每次空白层装填硅胶约 SOOgo
[0090] 流动相系统为二氯甲烧-甲醇（11:1~1:3.5梯度洗脱），每SOOmL收集为一次，经过 TLC检测合并含有搬皮素-3-鼠李糖巧、搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳 糖巧中至少一种的流份段，命名为第一顺序组分。
[0091] 第S步：
[0092] 第一顺序组分利用DAC制备色谱分离，65 %甲醇-水恒定洗脱，经色谱分析，合并得 到化合物CO-I (57. Img)，W及一个含搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖 巧的复杂组分，命名为第二顺序组分。经高效液相色谱分析，CO-I即为搬皮素-3-鼠李糖巧。
[0093] 第四步：
[0094] 将第二顺序组分溶解于一定比例的二氯甲烧-甲醇中，拌入2.5g薄层层析硅胶 (200-300目），水浴挥干，空白层装填硅胶约40g。流动相系统为二氯甲烧-甲醇-水（110:14: 1恒定洗脱），每40mL收集为一个流份，经过化C检测合并为四个组分，其中一个组分中是将 含有搬皮素-3-0-e-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的流份段合并，命名为第S顺 序组分。
[0095] 第五步：
[0096] 利用半制备液相色谱对第=顺序组分进行分离，30%乙腊-水恒定洗脱，得到化合 物C0-8(含CO-fe和CO-Sb，11.4mg)。
[0097] 第六步:表征提取物
[009引同样，采用质谱和ih-nmr、i3c-nmr进行表征，结果与实施例1相同，CO-巧搬皮素- 3-鼠李糖巧，C0-8为搬皮素-3-O-0-D-葡萄糖巧、搬皮素-3-O-0-D-半乳糖巧的混合物。 [0099]最后应说明的是：W上各实施例仅用W说明本发明的技术方案，而非对其限制;尽 管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依 然可W对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进 行等同替换；而运些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术 方案的范围。
【主权项】
1. 从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤： A:以乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液； B:以DlOl大孔吸附树脂为填料，依次用水、15-25%乙醇溶液和75-85%乙醇溶液对所 述粗提液进行恒定洗脱； C:将所述75-85 %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析分离，用9-11:1至1: 2.5-3.5梯度的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有槲皮素-3-鼠李糖苷、槲皮素-3_(H3-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-(H3-D-半乳糖苷的流份段，命名为第一 顺序组分； D:采用DAC色谱柱，用55-65 %甲醇-水为流动相对所述第一顺序组分进行恒定洗脱，分 段收集洗脱液，经色谱分析，收集仅含有槲皮素-3-鼠李糖苷的流份;同时合并含有槲皮素_ 3-Ο-?Η)-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-?Η)_半乳糖苷的流份段，命名为第二顺序组分； E:对所述第二顺序组分进行硅胶层析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水进行恒 定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-β-D-半乳糖苷的流份段，命名为第三顺序组分； F:对所述第三顺序组分进行半制备液相色谱分离，以20-30 %乙腈-水进行恒定洗脱， 分段收集洗脱液，经色谱分析，收集仅含有槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷和槲皮素-3-〇-i3_D-半乳糖苷的流份。2. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 A中，浸提的方法为:料液比为1:2.5-3.5，在70-80°C下回流提取，乙醇溶液优选为40-60% 的乙醇-水溶液。3. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 B中，每个梯度洗脱所用流动相的体积为柱体积的3.5-4.5倍。4. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 C中，所用的硅胶的粒径为200-300目，所述梯度洗脱优选为：用9-10:1至1:2.5-3梯度的二 氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱。5. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 D中，经色谱分析为:经高效液相色谱分析，和/或薄层分析。6. 根据权利要求1或5所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述 步骤D中，所述55-65 %甲醇-水为55-60 %甲醇-水。7. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 E中，所用的硅胶的粒径为200-300目，所述二氯甲烷-甲醇-水的比例优选为90-100:10-12: 1〇8. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 F中，所述半制备液相色谱分离的色谱柱为C18。9. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，所述步骤 F中，所述乙臆-水为:20-25%乙臆-水。10. 根据权利要求1所述的从油茶叶中提取槲皮素衍生物的方法，其特征在于，在所述 步骤C中，所述硅胶层析分离之前还包括:将所述75-85 %乙醇溶液洗脱得到的洗脱液浓缩 干燥。
【文档编号】C07H17/07GK105924484SQ201610283456
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】曹清明, 王元清, 王蔚婕, 钟海雁, 兰芳
【申请人】中南林业科技大学