坎地沙坦酯的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了坎地沙坦酯的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的坎地沙坦酯的药物组合物中含有坎地沙坦酯和一种从细辛的干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，坎地沙坦酯、化合物(Ⅰ)单独作用时，可以显著改善T2DM大鼠的糖、脂代谢，提高大鼠胸主动脉eNOS蛋白表达和血清SOD活性，增加NO合成，减少NO破坏，保护糖尿病引起的内皮功能损伤；坎地沙坦酯和化合物(Ⅰ)联合作用时，药理作用进一步增强，说明坎地沙坦酯与化合物(Ⅰ)存在协同作用，可以开发成保护糖尿病致内皮损伤的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
坎地沙坦醋的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及坎地沙坦醋的新用途，具体设及坎地沙坦醋的药 物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 坎地沙坦醋化学名称为（±)-1-[[(环己氧代）幾基]氧代]乙基-2-乙氧基-1- [[2'-(lH-四氮挫基-5)-[l，r-联苯基]-4-基]甲基]-IH-苯并咪挫-7-簇酸醋，适用于原发 性高血压。
[0003] 坎地沙坦醋在体内迅速被水解成活性代谢物坎地沙坦，坎地沙坦为选择性血管紧 张素 n受体(ATI)括抗剂，通过与血管平滑肌ATi受体结合而括抗血管紧张素 n的血管收缩 作用，从而降低末梢血管阻力。另有认为，坎地沙坦可通过抑制肾上腺分泌醒固酬而发挥一 定的降压作用。坎地沙坦不抑制激肤酶n，不影响缓激肤降解。
[0004] 迄今为止，尚未见坎地沙坦醋及其药物组合物与糖尿病致内皮损伤的相关性报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种坎地沙坦醋的药物组合物，该药物组合物中含有坎地 沙坦醋和一种结构新颖的天然产物，坎地沙坦醋和该天然产物可W协同保护糖尿病致内皮 损伤。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[000引
[0009] -种坎地沙坦醋的药物组合物，包括坎地沙坦醋、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[ocm]进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将细辛的干燥根茎粉碎，用85 ~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的 正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下 醇取物用大孔树脂除杂，先用35%乙醇洗脱8个柱体积，再用90%乙醇洗脱12个柱体积，收 集90%洗脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中90%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个 组分；（d)步骤(C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为40:1、30:1和10:1的二 氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为85 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用90%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0015] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烧代替乙酸乙醋进行萃 取，得到二氯甲烧萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备保护糖尿病致内皮损伤的药物中的应用。
[0017] 上述坎地沙坦醋的药物组合物在制备保护糖尿病致内皮损伤的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点:本发明提供的坎地沙坦醋的药物组合物中含有坎地沙坦醋和一种 从细辛的干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物，坎地沙坦醋和该天然产物单独作用 时，对糖尿病致内皮损伤具有保护作用;二者联合作用时，对糖尿病致内皮损伤的保护效果 进一步提高，可W开发成保护糖尿病致内皮损伤的药物。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0020] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0021] 分离方法：（a)将细辛的干燥根茎(2kg)粉碎，用90%乙醇热回流提取（lf5LX3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的 正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙醋萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用35 %乙醇洗脱8个柱体积，再用90 %乙 醇洗脱12个柱体积，收集90%洗脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中90% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为120:1(11个柱体积）、60:1(9个柱体积）、 30:1(9个柱体积)和15:1(8个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C) 中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为40:1(6个柱体积）、30:1(8个柱体积)和 10:1(6个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为85%的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18个 柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I)(322mg，HPLC归一化纯度大于98 % )。
[0022] 结构确证：白色粉末，皿-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 469.3233，结合核磁特征可得 分子式为C30H44O4，不饱和度为9。核磁共振氨谱数据如(ppm，CDCb，600MHz): H-I (1.62，dd，J = 12.4,8.9Hz)，H-l(2.11，dd，J=12.4,3.6Hz)，H-2(5.82，ddd J=10.9,8.9,3.6Hz)，H-3 (5.68，d J=10.9Hz)，H-5(0.93，d J = 11.2Hz)，H-6(1.68，m)，H-6(1.93，m)，H-7(1.73，m)， H-7(1.87，m)，H-9(1.60，d，J = 9.4Hz)，H-11(4.17，d，J = 9. IHz)，H-16(2.21，d，J = 13.1Hz)，H-16(2.43，d，J=13.1Hz)，H-18(2.46，d，J = 8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10， m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.32，s)，H-24 (9.82，s)，H-25(1.06，s)，H-26(1.17，s)，H-27(1.24，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.90，d，J= 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6.1Hz)，0H-ll(3.13，s)，0H-12(4.73，br，s);核磁共振碳谱数据 5c(ppm，CDC13,125MHz ):40.3(C 此，1-C)，124.3(CH，2-C)，133.6(CH，3-C)，48.3(C，4-C)， 60.2(CH，5-C)，20.4(Ol2,6-C)，40.9(ai2,7-C)，49.8(C，8-C)，51.6(CH，9-C)，41.2(C，10- C)，71.9(CH，11-C)，146.7(C，12-C)，119.2(C，13-C)，58.6(C，14-C)，209.9(C，15-C),52.5 (CH2，16-C)，53.9(C，17-C)，47.3(CH，18-C)，40.1(CH，19-C)，40.7(CH，20-C)，30.7(CH2,21- C)，39.2(Ol2,22-C)，22.3(CH3,23-C)，201.1(CH，24-C)，15.7(CH3,25-C)，19.4(ai3,26-C)， 20.9(C出，27-C)，19.1 (CH3，28-C)，17.2(C出，29-C)，21.3(CH3，30-C)。红外波谱表明该化合 物含有径基（3478cm-i)，幾基（1760cm-i)，双键（1663cm-i)和醒基（1641cm-i)Di3C-NMR、DEPT 和HSQ幻普中显示有30个碳信号，包括屯个甲基，六个亚甲基，九个次甲基(一个连氧碳，两个 締控碳和一个醒基），W及八个季碳(一个酬幾基，一个连氧締属季碳，一个締属季碳），W上 功能结构再结合不饱和数表明该化合物为五环结构。Ih-NMR谱结合服Q村普显示的五个单峰 甲基质子信号 Sh 1.32(3山3)，1.06(3山3)，1.17(3山3)，1.24(3山3)和0.87(3山3)，两个双 峰甲基质子信号Sh 0.90(3山(1，1 = 6.3化），0.93(3山(1，1 = 6.1化似及1护醒1鄕据表明该化 合物为乌苏烧型=祗类化合物。在该乌苏烧型化合物中，存在一个醒基质子信号Sh 9.82 (1山3)，丽8村普中护3、护5和曲-23与(：-24的相关性表明0-4位连有一个醒基，^)65￥谱中护 24与出-25相关信号暗示醒基处在0位。从红外谱中可知结构中含有径基，而从Ih-NMR数据可 知含有2个径基，在HMBC谱中H-9和H-18与C-12，H-1巧肌3-27与C-13W及0H-12与C-12相关 信号W及它们的碳化学位移表明该化合物存在締醇式结构，径基连接在C-12位与C-12和C- 13形成的双键构成締醇式结构。此外，根据HMB幻普中OH-Il与C-Il的相关信号W及化学位移 确认另一个-OH连在C-11位上。另C-2与C-3也形成双键结构，C-15位形成酬基，在HMBC谱中 出-16和出-27与C-15相关信号W及它们的碳化学位移进一步确证C-15形成酬基。综合氨谱、 碳谱、HMB村普和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示， 立体构型进一步通过EC的式验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编 号如下：
[0023]
[0024] 实施例2:药理作用
[0025] 本实施例使用小剂量链脈佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养的方法建立2型糖尿病 大鼠（T2DM)模型，检测各组动物血清中空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油立醋巧6)、空腹 血清膜岛素(FINS)的水平;检测血清中一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。观察药 物对糖尿病大鼠胸主动脉内皮损伤的保护作用
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物及饲料
[00%]选用健康清洁级雄性Wistar大鼠，体重160~180g，由吉林大学实验动物中屯、提 供。普通饲料成分及其热量:脂肪5%、碳水化合物53%、蛋白质23%、包括纤维素及水分在 内的其他成分占19%，总热量为25kJ/kg;高脂饲料成分及其热量:脂肪22%、碳水化合物 48 %、蛋白质20 %、包括纤维素及水分在内的其他成分占10 %，总热量为44.3kJ/kg。
[00巧]1.2试剂与样品
[0030] 坎地沙坦醋购自中国食品药品检定研究院。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。 链脈佐菌素(STZ)为Sigma公司产品；葡萄糖、总胆固醇(TC)、甘油S醋(TG)检测试剂盒均为 北京北化康泰临床试剂有限公司产品;膜岛素放射免疫分析药盒购自天津九鼎生物技术有 限公司；一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒购于南京建成生物技术有限公 司；其他试剂均为国产分析纯。
[0031] 1.3 仪器
[0032] 酶标仪Model550,为Bio-Rad公司产品。755B型紫外可见分光光度计，系上海精密 科学仪器有限公司分析仪器总厂产品；台式高速低溫离屯、机，美国索福公司产品；1261型丫 放射免疫计数仪，LKB公司产品。
[00削 1.4小鼠分组及模型制备
[0034] 60只Wistar雄性大鼠，随机分为5组，每组12只，分出正常对照组W普通饲料喂养； 其余用于建立2型糖尿病大鼠（T2DM)模型，W高脂饲料喂养。大鼠高脂饲料喂养4w后，腹腔 注射小剂量STZ(30mg/kg)2次，间隔Iw; 2w后检测空腹血糖(FPG)，WFPG^7. Smmo 1/L作为判 断模型成功的标准。将制备成功的T2DM大鼠40只随机分为模型对照组、坎地沙坦醋组 (IOOmg ? kg-I)、化合物（I)组（IOOmg ? kg-I)、坎地沙坦醋与化合物（I)组合物组【50mg ? kg-I 坎地沙坦醋巧Omg ? kg-i化合物（I)】。连续灌胃8w，正常对照组和模型对照组给予等体积溶 媒灌胃8w。
[0035] 1.5血清中FPG、TG、TC和空腹血清膜岛素(FINS)的检测
[0036] 大鼠治疗8w后，禁食12~16h，乌拉坦（lOOmg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血并 处死动物。每只大鼠约可W取血4~5ml，分离血清，分装入化pendorf管，-70°C冻存，用于检 测FPG、TG、TC和FINSdFPG、TG和TC采用酶学方法检测。FINS由吉林大学第S医院核医学科采 用放免法检测。
[0037] 1.6血清中NO和SOD的检测
[003引分别按照NO和SOD试剂盒说明书方法测定血清中NO及SOD的含量。
[0039] 1.7统计学方法
[0040] 实验数据用x±s表示，统计分析采用SPSS13.0软件处理，多组间比较用单因素方 差分析(OneWayANOVA)方法，两组间比较采用最小显著差异化SDH检验。
[0041 ] 2、实验结果
[0042] 2.1对T2DM大鼠模型对生化指标的影响
[0043] 模型对照组FPG、TC、TG含量高于空白对照组(P<0.05 )，膜岛素含量低于空白对照 组(P<0.05)，说明造模成功。与模型对照组比较，坎地沙坦醋与化合物（I)组合物组小鼠实 验后FPG、TC、TG含量明显增高(P<0.01)，膜岛素含量明显降低(P<0.01);与模型对照组比 较，坎地沙坦醋组、化合物（I)组FPG、TC、TG含量增高（P<0.05)，膜岛素含量降低（P< 0.05)。结果见表1。
[0044] 表1对T2DM模型大鼠生化指标变化(X ± S)的影响
[0045]
[0046] 2.2对T2DM大鼠模型血清NO含量和SOD活性的影响
[0047] 模型对照组NO含量和SOD活性低于空白对照组(P<0.05)，说明造模成功。与模型对 照组比较，坎地沙坦醋与化合物（I)组合物组小鼠实验后NO含量和SOD活性明显升高（P< 0.01);与模型对照组比较，坎地沙坦醋组、化合物（I)组NO含量和SOD活性升高(P<0.05)。 结果见表2。
[004引表2对T2DM模型大鼠血清NO含量和SOD活性的影响
[0049]
[0050] 血管内皮损伤是糖尿病血管并发症的主要发病机制之一。高血糖、高血脂、高膜岛 素血症均会使氧化应激增加，氧自由基产生增多，造成血管内皮细胞损伤。因此，要想维持 T2DM患者血管内皮的正常功能，同时改善患者的糖、脂、膜岛素代谢是十分重要的。
[0051] NO是内皮来源的最重要的血管舒张因子，主要调节较大的输送血管张力。NO除了 具有强烈的血管舒张功能外，还具有抗血小板聚集、抗平滑肌细胞增殖和抑制单核巨隧细 胞向血管迁移等作用。因此，NO生物活性下降可导致内皮依赖性血管舒张功能损害和促进 动脉粥样硬化的形成。NO被认为是动脉粥样硬化的一个最重要保护因子，是机体对抗动脉 粥样硬化的第一道防线。糖尿病时NO减少可能是合成减少和灭活增加造成的。内皮细胞NO 的来源主要通过存在于胞内的eNOS催化k精氨酸脱脈基而产生NO。研究表明，糖尿病时高 血糖、IR状态、脂代谢异常、炎性细胞因子分泌上调等多种因素均可引起eNOS活性下降或表 达降低，从而使NO合成和分泌减少，造成糖尿病内皮依赖性血管舒张功能障碍而出现屯、血 管并发症。SOD是体内清除自由基的主要酶系之一，可将超氧阴离子迅速氧化为化和出化，有 效清除体内的氧自由基，减轻组织损伤。糖尿病高血糖可与SOD活性中屯、的赖氨酸结合，产 生糖基化反应，使SOD活性下降，清除自由基能力下降。
[0052] 上述试验结果表明，坎地沙坦醋、化合物（I)单独作用时，可W显著改善T2DM大鼠 的糖、脂代谢，提高大鼠胸主动脉eNOS蛋白表达和血清SOD活性，增加 NO合成，减少NO破坏， 保护糖尿病引起的内皮功能损伤;坎地沙坦醋和化合物（I)联合作用时，药理作用进一步增 强，说明坎地沙坦醋与化合物（I)存在协同作用，可W开发成保护糖尿病致内皮损伤的药 物。
[0053] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物α)，2. -种坎地沙坦酯的药物组合物，其特征在于：包括坎地沙坦酯、如权利要求1所述的 化合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的坎地沙坦酯的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载 体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载 体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的坎地沙坦酯的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、 胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射 剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将细 辛的干燥根茎粉碎，用85~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用35%乙醇洗脱8个柱体积，再用90% 乙醇洗脱12个柱体积，收集90%洗脱液，减压浓缩得90%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中 90 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为120:1、60 :1、30:1和15:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为85%的甲醇水溶液等度洗脱，收集14~18 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用90%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备保护糖尿病致内皮损伤的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的坎地沙坦酯的药物组合物在制备保护糖尿病致内皮损伤 的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/4184GK105924490SQ201610264617
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】徐月苗
【申请人】徐月苗