微生物油及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种微生物油及其制备方法，其多不饱和脂肪酸的含量大于30wt%，甘油三酯含量小于90wt%，甘油二酯含量不低于5wt%且不高于20 wt%。其制备包括以下步骤：利用产油微生物发酵得到富含PUFA微生物油的发酵液；收集富含PUFA微生物油的菌体，萃取过滤后得到混合油；在混合油中加入脂肪酶和水进行酶解，纯化后得到微生物油，或向混合油中添加含有甘油二酯的混合物，混合均匀后去除溶剂得到微生物油。其含有适量的甘油二酯，有利于微生物油形成稳定的乳化液。在制备微胶囊的过程中，能使微生物油更好地被包埋，进而可降低微胶囊的表面油含量，提高微胶囊的抗氧化能力，并可适度延长微胶囊的货架期，有利于后续进一步的生产及利用。
【专利说明】
微生物油及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及微生物油及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid,PUFA)是指含有两个或两个W上 双键的脂肪酸，一般含18~22个碳原子。工业化的PUFA大多由真菌、藻类等单细胞微生物产 生，故也称为微生物油。
[0003] 多不饱和脂肪酸因其结构特点主要分为CO-3及CO-6两个系列。CO-3系列包括十八 碳S締酸(俗称a-亚麻酸，ALA)、二十碳五締酸(EPA)、二十二碳六締酸(DHA)。CO-6系列包括 十八碳二締酸(俗称亚油酸，LA)、十八碳S締酸(俗称丫-亚麻酸，GLA)、二十碳四締酸(俗称 花生四締酸）。多不饱和脂肪酸是人体细胞膜憐脂的主要成分，对细胞膜功能有决定性影 响。一些特定的多不饱和脂肪酸如花生四締酸和DHA是脑和视网膜中两种主要的多不饱和 脂肪酸，特别对于胎儿和婴幼儿影响显著，摄入不足可能导致脑功能和视神经发育障碍。
[0004] 工业化生产得到的微生物油主要是W甘油醋的形式存在。甘油醋是甘油与脂肪酸 醋化而成的化合物，根据反应程度的不同，分为甘油一醋(单甘醋、MG)、甘油二醋(双甘醋、 DG)、甘油S醋(甘S醋、T口。其中，甘油S醋(TG)由3分子脂肪酸和1分子甘油醋化而成，是 体内能量的主要来源，也是自然界各类生物体内油脂储存的主要形式。甘油二醋(DG)是由2 分子脂肪酸与1分子甘油醋化得到的产物，是油脂的天然成分，也是油脂在人体内代谢的中 间产物。同时，甘油二醋还是细胞内肌醇憐脂信号传递途径的中间物质。
[0005] 工业化生产得到的微生物油很多都是功能性或针对性很强的油脂，一般用于大众 消费品如乳制品的添加剂或营养强化剂，很少直接食用。由于其富含多不饱和脂肪酸，很容 易被氧化而导致风味恶化，因此其在用作食品添加剂或营养强化剂时，通常需要先进行微 胶囊包埋处理。微胶囊包埋主要是将微生物油忍材与适当材料及水混合、剪切、均质、乳化 后，在喷雾干燥的同时加入壁材(例如麦芽糊精等)进行包埋，使油脂被紧密包裹于壁材中。 运样的微胶囊产品既可W防止油脂被氧化，又能改善产品的风味和口感。通常情况下，油脂 的乳化性能越强，则包埋效果越好，所生产出来的微胶囊风味和稳定性也越好。
[0006] 公开号为CN1662642A的专利申请公开了一种含有至少40%多不饱和脂肪酸的微生 物油，该微生物油中的甘油S醋含量大于90%。该微生物油存在W下缺陷：由于甘油S醋无 亲水基团，无乳化性能，因此，该微生物油的乳化性能较差。在后续微胶囊生产的过程中，微 生物油不能形成良好的包埋，最终得到的微胶囊产品，其表面油含量较高，不利于后续进一 步的生产及应用。
[0007] 因此，提供一种改进的微生物油实为必要。
【发明内容】
[000引本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种具有良好乳化性能、利于包埋的微 生物油。
[0009] 本发明所要解决的技术问题之二在于提供一种制备上述微生物油的方法。
[0010] 本发明所要解决的技术问题之=在于提供一种具有良好包埋效果、表面油含量低 的微胶囊。
[001。 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是： 提供一种微生物油，其特征在于:其多不饱和脂肪酸的含量大于30wt%，甘油S醋含量 小于90wt%，甘油二醋含量不低于5wt%且不高于20 Wt %。
[0012] 上述方案中，所述微生物油中甘油二醋的含量不低于lOwt%，所述甘油S醋的含量 不低于75 Wt %。
[0013] 上述方案中，所述多不饱和脂肪酸为花生四締酸、二十二碳六締酸或者二十碳五 締酸。上述方案中，所述微生物油为粗油。
[0014] 提供一种微生物油的制备方法，包括W下步骤： (1) 利用产油微生物发酵得到富含PUFA微生物油的发酵液； (2) 收集富含PUFA微生物油的菌体，萃取过滤后，得到混合油； (3) 在混合油中加入脂肪酶和水进行酶解，纯化后得到微生物油。
[0015] 上述方案中，所述步骤(3)中，酶解参数包括:在脂肪酶最适溫度下揽拌反应0.5~2 小时，脂肪酶用量为混合油质量的0.25wt%~2wt%，水用量为混合油质量的15wt%-30 wt%。
[0016] 上述方案中，所述步骤(3)中纯化的具体步骤包括:将混合油静置，待油相与水相 分层后，除去水层，过滤除去脂肪酶，蒸发脱除溶剂，通过分子蒸馈设备除去游离脂肪酸，得 到微生物粗油。
[0017] 上述方案中，所述微生物油的制备方法还包括在步骤(3)之后对微生物油进行精 制。
[0018] 提供另外一种微生物油的制备方法，包括W下步骤： (1) 利用产油微生物发酵得到富含PUFA微生物油的发酵液； (2) 收集富含PUFA微生物油的菌体，萃取过滤后得到混合油； (3) 向混合油中添加含有甘油二醋的混合物，混合均匀后去除溶剂得到微生物油。
[0019] 上述方案中，所述微生物油的制备方法包括在步骤(3)之后对微生物油进行精制。
[0020] 提供一种微胶囊，其特征在于:该微胶囊包括作为忍材的上述微生物油及包裹所 述微生物油的壁材。
[0021] 本发明的微生物油具有如下有益效果： 微生物油中含有适量的甘油二醋，由于甘油二脂具有较好的乳化性能，其有利于微生 物油形成稳定的乳化液。在制备微胶囊的过程中，能使微生物油更好地被包埋，进而可降低 微胶囊的表面油含量，提高微胶囊的抗氧化能力，并可适度延长微胶囊的货架期，有利于后 续进一步的生产及利用。
【具体实施方式】
[0022] W下实施例更详细的说明本发明的微生物油生产及应用方法。
[0023] 实施例一 W高山被抱霉为出发菌种，详细描述本发明含有花生四締酸的微生物油的生产及应 用。
[0024] I.发酵 配制葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/mL的培养基溶液于500ml摇瓶中，可 配制多瓶，灭菌后接入适量高山被抱霉菌丝及抱子，置于28 °C恒溫摇床，150巧m，2天后合并 摇瓶，移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/mL的培养基溶液 的Im3发酵罐(一级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28±2°C。一级种子罐培养 2天后，将全部培养液移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/ mL的培养基溶液的IOm3发酵罐(二级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28±2 °C。二级种子罐培养1天后，将全部培养液移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.05g/mL、酵 母粉含量为〇.〇2g/mL的培养基溶液的45m3发酵罐中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28 ±2°C，根据葡萄糖消耗速度分批补加总量约0.02~0.05g/mL培养基溶液的灭菌葡萄糖溶 液，再培养7天后可获得发酵产物，其中生物质含量32g/L、菌体干基中总油含量51.9wt%、总 油中花生四締酸含量50.4wt%。
[0025] 2.制备富含花生四締酸的微生物油 可采用W下不同的工艺手段制备本发明的微生物油。
[002引 手段一 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0027] 向混合油中加入市售脂肪酶和水进行酶解处理，该市售脂肪酶具有将甘油醋水解 的功能，下述实施例均与此相同。所述的酶解处理参数包括:脂肪酶用量为微生物混合油重 量的0.25wt%;水用量为微生物混合油重量的15wt%，反应溫度约37°C，揽拌反应时间0.化。 酶解反应结束后对混合油进行纯化，纯化的具体步骤包括:将混合油静置，待油相与水相分 层后，除去水层，过滤除去酶，蒸发脱除溶剂，通过分子蒸馈设备除去游离脂肪酸，得到微生 物粗油。测得该粗油具有如下指标:多不饱和脂肪酸含量61.5wt%，TG含量88.7wt%，DG含量 5.5wt%〇
[0028] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有花生四締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂肪酸 总含量62.0 Wt %，TG含量为89.8 Wt %，DG含量为6.3 Wt 〇/〇。
[0029] 进一步测定该微生物精制油的部分理化指标:不皂化物1.1 wt%，水分0.01 wt%， 不溶性杂质0.01 Wt%，溶剂残留<1.0 mg/kg，酸价0.1 m排OH/g，过氧化值0.03 meq/kg，反 式脂肪酸0.06 wt%，黄曲霉毒素BK5.0]ig/kg，总神（WAs计)<0.1 mg/kg，铅<0.1 mg/kg。
[0030] 手段二 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重量的0.5wt%，水量为微生物混合油重量的20wt%，反应时间为化。得到的微生物 粗油中，多不饱和脂肪酸含量61.7wt%，TG含量87.0wt%，DG含量7.2wt%。
[0031] 使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量61.5wt%，TG含量88.4wt %，DG含量8. Swt %，其他理化指标与手 段一获得的理化指标接近。
[00扣]手段立 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重的Iwt%，水量为微生物混合油重的20wt%，反应时间为1.化。得到的微生物粗油 中，多不饱和脂肪酸含量60.0 wt%，TG含量84. Owt%，DG含量10.5wt%。
[0033] 使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量61wt%，TG含量为85.3wt %，DG含量为11.4wt %，其他理化指标与 手段一获得的理化指标接近。
[0034] 手段四 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重的Iwt%，水量为微生物混合油重的25wt%，反应时间为化。得到的微生物粗油中， 多不饱和脂肪酸含量65.0wt%，TG含量78.4wt%，DG含量13.7wt%。
[0035] 使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量为63.8wt%，TG含量为80.9wt%，DG含量为15. Iwt%，其他理化指标 与手段一获得的理化指标接近。
[003引手段五 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重的2wt%，水量为微生物混合油重的30wt%，反应时间为化。得到的微生物粗油中， 多不饱和脂肪酸含量57.9wt%，TG含量75.3wt%，DG含量17.8wt%。
[0037]使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量60wt%，TG含量为77.2wt%，DG含量为19. Iwt%，其他理化指标与手 段一获得的理化指标接近。
[00測手段六 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0039] 向混合油中添加含甘油二醋的混合物，例如脂肪酸单双甘醋或其类似物，该混合 物中甘油二醋含量为31.4wt%，添加混合物的比重为总混合油的11.5wt%。对混合油脱溶，混 合均匀后得到微生物粗油。该微生物粗油具有如下指标特征：多不饱和脂肪酸含量 38. Owt%，TG 含量 86.7wt%，DG 含量5.1 wt〇/〇。
[0040] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve作为 抗氧化剂，得到含有花生四締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂肪酸总含 量达37.0 Wt %，TG含量为 89.2 Wt %，DG含量为6.4 Wt %。
[0041 ] 进一步测定该微生物精制油的部分理化指标:不皂化物1.0 wt%，水分0.01 wt%， 不溶性杂质0.01 Wt%，溶剂残留<1.0 mg/kg，酸价0.1 m排OH/g，过氧化值0.03 meq/kg，反 式脂肪酸0.04 wt%，黄曲霉毒素BK5.0]ig/kg，总神（WAs计)<0.1 mg/kg，铅<0.1 mg/kg。
[00创手段屯 该工艺手段与手段六基本相同，不同之处在于:含甘油二醋混合物中，甘油二醋含量为 50.8wt%，添加的混合物的比重为总混合油的17.5wt%。得到的微生物粗油中，多不饱和脂肪 酸含量41.4wt%，TG含量81.2wt%，DG含量10.4wt0/0。
[0043] 更进一步的，使用与手段六相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微 生物精制油中，多不饱和脂肪酸总含量40.4wt %，TG含量为83.6wt %，DG含量为12.2wt %， 其他理化指标与手段六获得的理化指标接近。
[0044] 手段八 该工艺手段与手段六基本相同，不同之处在于:含甘油二醋混合物中，甘油二醋含量为 72.2wt%，添加比例为占总混合油的22.6wt%。得到的微生物粗油中，多不饱和脂肪酸含量 55.7wt%，TG 含量 75.6wt%，DG 含量17.8wt%。
[0045] 更进一步的，使用与手段六相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微 生物精制油中，多不饱和脂肪酸总含量55.9**%^6含量为77.0**%，06含量为19.0**%， 其他理化指标与手段六获得的理化指标接近。
[0046] 上述含有花生四締酸的微生物油制备微胶囊 分别使用市售的花生四締酸油、上述手段一、手段二、手段=制得的花生四締酸精制 油，巧照血下配魁夫讲斤配魁：
上化昔巧化生凹筛酸的徽生物畑制爸奶粉 分别使用市售花生四締酸油、上述手段一至八制得的花生四締酸精制油，按照如下配 料表进行配料：
按照上述配方比例投料后，在5000巧m的转速下剪切IOmin后，在20MPa下进行均质，得 到乳化液。然后经过=级降膜式真空浓缩器将此乳化液浓缩至水分含量50%，最后进行压力 井庶電不幅胃庶電不幅爱撒加 1下.
徽股叢的巧曲畑昔重是巧化徽股叢侦重的一项重妥指顿，具巧不禾椒包埋的畑服巧徽 胶囊表面的比例。微胶囊的表面油含量越高，表明越多表面油脂会被氧化，则产品的质量就 越差。通过W上数据对比可W看出，在同等工艺条件下，由本发明的含有花生四締酸的微生 物油所制得的微胶囊及奶粉，其表面油含量更低。运主要是因为:本发明的微生物油含有较 多的甘油二醋，它可W帮助微生物油形成更稳定的乳化液，使微生物油脂更好地被包埋，从 而降低微胶囊及奶粉的表面油含量，提高微胶囊及奶粉的抗氧化能力，延长微胶囊及奶粉 的货架期。
[0047] 实施例二 W裂殖壶菌为出发菌种，详细描述本发明含有二十二碳六締酸的微生物油的生产及应 用。
[004引1.发酵 配制葡萄糖含量0.04g/mL、酵母浸膏含量0.02g/mL的培养基溶液于1000 ml摇瓶中，可 配制多瓶，灭菌后接入适量冷藏裂殖壶菌液，置于28 °C恒溫摇床，180巧m进行活化。2天后接 入二级扩大摇瓶进行培养，2天后合并摇瓶，移入已灭菌的、含5wt%葡萄糖及2wt%酵母浸膏 的Im3发酵罐(一级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度29±rC。一级种子罐培养 2天后，将全部培养液移入已灭菌的、含葡萄糖含量为0.03g/mL及酵母浸膏含量0.02g/血的 IOm3发酵罐(二级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度29±rC。二级种子罐培养1 天后，移全部培养液入已灭菌的、含葡萄糖含量0.05g/mL及酵母浸膏含量0.02g/mL的45m3发酵罐中，持续通入无菌空气，保持培养溫度29± TC,根据葡萄糖消耗速度批次补加总约 0.02~0.04g/mL的灭菌葡萄糖溶液，再培养5天后可获得发酵产物，其中生物量89.7g/L、总 油含量38.5g/L、总油中二十二碳六締酸含量51.0 Wt %。
[0049] 2.制备富含二十二碳六締酸的微生物油 手段一 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0050] 向混合油中加入市售脂肪酶和水进行酶解处理，该市售脂肪酶具有将甘油醋水解 的功能。所述的酶解处理参数包括:脂肪酶用量为微生物混合油重量的0.25wt%;水用量为 微生物混合油重量的30wt%，反应溫度约37°C，揽拌反应时间0.化。酶解反应结束后对混合 油进行纯化，纯化的具体步骤包括:将混合油静置，待油相与水相分层后，除去水层，过滤除 去酶，蒸发脱除溶剂，通过分子蒸馈设备除去游离脂肪酸，得到微生物粗油。测得该粗油具 有如下指标:多不饱和脂肪酸含量64.0wt%，TG含量86.0wt%，DG含量9.8wt%。
[0051] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有二十二碳六締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂 肪酸总含量达64.0*1%^6含量为88.7*1%，06含量为11.5*1%。
[0化2] 进一步测定该微生物精制油的部分理化指标:不皂化物1. Owt%，水分0.0 lwt%，不 溶性杂质0.0 lwt%，溶剂残留<1. Omg/kg，酸价0.1 m排OH/g，过氧化值0.03meq/kg，反式脂肪 酸0.06wt%，黄曲霉毒素BK5.0]ig/kg，总神（WAs计)<0.1 mg/kg，铅<0.1 mg/kg。
[0053] 手段二 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0054] 向混合油中添加含甘油二醋的混合物，例如脂肪酸单双甘醋或其类似物，该混合 物中甘油二醋含量为54.9wt%，添加混合物的比重为总混合油的16.2wt%。对混合油脱溶，混 合均匀后得到微生物粗油。该微生物粗油具有如下指标特征：多不饱和脂肪酸含量 47.2wt%，TG 含量 82.1 wt%，DG 含量10.4wt〇/〇。
[0055] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有二十二碳六締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂 肪酸总含量达48. Iwt %，TG含量为84.Swt %，DG含量为12.Owt %。其他理化指标与手段一 获得的理化指标接近。
[0化6] 3.应用 上述含有二十二碳六締酸的微生物油制备微胶囊 使用市售的二十二碳六締酸油、上述手段一、手段二制得的二十二碳六締酸油，按照如 下配魁夫讲斤配魁：
上述含有二十二碳六締酸的微生物油制备奶粉 使用市售的二十二碳六締酸油、上述手段一、手段二制得的二十二碳六締酸油，按照如 下丽M夫徘巧丽M.
通过W上实验数据可W看出，在同等工艺条件下，由本发明的含有二十二碳六締酸的 微生物油所制得的微胶囊及奶粉，其表面油含量更低。运主要是因为:本发明的微生物油含 有较多的甘油二醋，它可W帮助微生物油形成更稳定的乳化液，使微生物油脂更好地被包 埋，从而降低微胶囊及奶粉的表面油含量，提高微胶囊及奶粉的抗氧化能力，延长微胶囊及 奶粉的货架期。
[0化7] 实施例= W终极腐霉为出发菌种，详细描述含有二十碳五締酸的微生物油的生产及应用。
[005引1.发酵 配制薦糖含量为O. 05g/mL及酵母粉含量为0.005g/mL的培养基溶液于1000 ml摇瓶中， 可配制多瓶，灭菌后接入适量终极腐霉，置于28°C恒溫摇床，ISOrpm进行活化。2天后接入二 级扩大摇瓶进行培养，2天后合并摇瓶，移入已灭菌的、薦糖含量为0.05g/mL及酵母粉含量 为0.005g/mL的Im3发酵罐(一级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28 ± TC。一 级种子罐培养2天后，移全部培养液入已灭菌的、薦糖含量为0.05g/mL及酵母粉含量为 0.005g/mL的IOm3发酵罐(二级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28±rC。二级 种子罐培养1天后，移全部培养液入已灭菌的、薦糖含量为0.05g/mL及酵母粉含量为 0.005g/mL的45m3发酵罐中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28 ± TC，根据薦糖消耗速度 批次补加总约0.02~0.04g/mL的灭菌薦糖溶液，再培养5天后可获得发酵产物，其中二十碳 五締酸含量207.8mg/L。
[0059] 2.制备富含二十碳五締酸的微生物油 手段一 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0060] 向混合油中加入市售脂肪酶和水进行酶解处理，该市售脂肪酶具有将甘油醋水解 的功能。所述的酶解处理参数包括:脂肪酶用量为微生物混合油重量的0.25wt%;水用量为 微生物混合油重量的30wt%，反应溫度约37°C，揽拌反应时间0.化。酶解反应结束后对混合 油进行纯化，纯化的具体步骤包括:将混合油静置，待油相与水相分层后，除去水层，过滤除 去酶，蒸发脱除溶剂，通过分子蒸馈设备除去游离脂肪酸，得到微生物粗油。该粗油具有如 下指标特征:多不饱和脂肪酸含量59.8wt%，TG含量85. lwt%，DG含量8.5wt〇/〇。
[0061] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有二十碳五締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂肪 酸总含量达59.4wt %，TG含量为87.5wt %，DG含量为10.4wt 〇/〇。
[0062] 进一步测定该微生物精制油的部分理化指标:不皂化物0.8wt%，水分0.0 lwt%，不 溶性杂质0. oiwt%，溶剂残留<1. Omg/kg，酸价0.1 m排OH/g，过氧化值0.03meq/kg，反式脂肪 酸0.06wt%，黄曲霉毒素BK5.0]ig/kg，总神（WAs计)<0.1 mg/kg，铅<0.1 mg/kg。
[0063] 手段二 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0064] 向混合油中添加含甘油二醋的混合物，例如脂肪酸单双甘醋或其类似物，该混合 物中甘油二醋含量为56. Iwt%，添加的混合物的比重为总混合油的15.Owt%。对混合油脱溶， 混合均匀后得到微生物粗油。该粗油具有如下指标特征：多不饱和脂肪酸含量45. Owt%，TG 含量 82. Owt%，DG 含量 9.9wt〇/〇。
[0065] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有二十碳五締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂肪 酸总含量达44.9wt %，TG含量为84.3wt %，DG含量为11.9wt %。其他理化指标与手段一获 得的理化指标接近。
[0066] 3.应用 上述含有二十碳五締酸的微生物油制备微胶囊 使用市售的二十碳五締酸油、上述手段一、手段二制得的二十碳五締酸油，按照如下配 料表进行配料：
上述含有二十碳五締酸的微生物油制备奶粉 使用市售的二十碳五締酸油、上述手段一、手段二制得的二十碳五締酸油，按照如下配 料表进行配料：
按照上述配方比例投料后，在SOOOrpm的转速下剪切IOmin后，在20MPa下进行均质，得 到乳化液。然后经过=级降膜式真空浓缩器将此乳化液浓缩至水分含量50%，最后进行压力 式喷雾干燥，喷雾干燥参数如下：
化化W王头例仪头腦数化W W有出，化问苛丄艺朱巧h，田伞及明的^下恢立师酸 微生物油所制得的微胶囊及奶粉，其表面油含量更低。运主要是因为:本发明的微生物 油含有较多的甘油二醋，它可W帮助微生物油形成更稳定的乳化液，使微生物油脂更好地 被包埋，从而降低微胶囊及奶粉的表面油含量，提高微胶囊及奶粉的抗氧化能力，延长微胶 囊及奶粉的货架期。
【主权项】
1. 微生物油，其特征在于：其多不饱和脂肪酸的含量大于30wt%，甘油三酯含量小于 90wt%，甘油二酯含量不低于5wt%且不高于20 wt %。2. 根据权利要求1所述的微生物油，其特征在于:所述甘油二酯的含量不低于10wt%， 所述甘油三酯的含量不低于75 wt %。3. 根据权利要求1或2所述的微生物油，其特征在于:所述多不饱和脂肪酸为花生四烯 酸、二十二碳六烯酸或者二十碳五烯酸。4. 根据权利要求1或2所述的微生物油，其特征在于:所述微生物油为粗油。5. 权利要求1所述的微生物油的制备方法，其特征在于:包括以下步骤： (1) 利用产油微生物发酵得到富含PUFA微生物油的发酵液； (2) 收集富含PUFA微生物油的菌体，萃取过滤后得到混合油； (3) 向混合油中添加含有甘油二酯的混合物，混合均匀后去除溶剂得到微生物油。6. 根据权利要求5所述的微生物油的制备方法，其特征在于：步骤(3)中添加的含有甘 油二酯的混合物中，甘油二酯的含量为31.4 %- 7 2.2 %，添加混合物的比重为总混合油的 11.5%-22.6%〇7. 根据权利要求5所述的微生物油的制备方法，其特征在于:在步骤(3)之后对微生物 油进彳丁精制。8. 微胶囊，其特征在于:该微胶囊包括权利要求1-4任一所述的微生物油。9. 奶粉，其特征在于:该奶粉包括权利要求1-4任一所述的微生物油。
【文档编号】A23C9/152GK105925627SQ201610271571
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2014年3月14日
【发明人】汪志明, 周强, 陆姝欢, 肖敏, 田勇, 李翔宇
【申请人】嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司