一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法；步骤如下：1、在营养琼脂培养基斜面划线接种，作为斜面保藏菌；2、在琼脂斜面中挑取1个典型的细菌菌落，接种于营养肉汤中得到细菌菌悬液；3、吸取细菌菌悬液，移入装有PBS的试管中，充分混匀、稀释后作为接种菌悬液；4、制作加样袋；5、将加样袋加入无菌水预润湿作为空白对照品，加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入无菌水预润湿作为待测样品及对照样品；6、将待测样品、对照样品和空白对照品分别置于涂布接种菌悬液的琼脂平板表面，取少量接种菌悬液滴加于三个样品上；7、在培养期间，记录并获得蚕砂制品的抗菌性能。通过上述方式，本发明操作简单、速度快、使用成本低。
【专利说明】
一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法
技术领域
[0001]本发明涉及蚕砂制品抗细菌性能，特别是一种操作简单、速度快、使用成本低的检测蚕砂制品抗细菌性能的方法。
【背景技术】
[0002]蚕砂，又名蚕矢，多产于江苏、浙江、四川等地，为蚕蛾科昆虫家蚕蛾幼虫的干燥粪便。性味甘温，有燥湿、祛风、化浊、活血定痛之功效。民间用蚕砂作枕芯的填充物，有清肝明目、养目、养脑、治高血压、耳鸣等功效，婴幼儿使用效果更为明显。蚕砂枕采用优质蚕砂为原料，保持头部温度均恒。做到真正凉头热脚、健康睡眠，老年人使用可祛风除湿、聪耳明目、和胃化浊。无毒无副作用，常年有效，老幼咸宜。医学证明，蚕砂枕能祛风除湿，凉爽止汗，祛署退火，健脑益智。特别有益于青少年和幼儿枕出健康周正的头型。但蚕砂制品易发生腐败，腐败后的产品不仅影响其使用功效，严重时亦会对人体产生危害，敏感体质的人可能会产生过敏反应等。因此，蚕砂制品生产厂家将蚕砂用作填充物时一般多采用抗菌抑菌处理以防止其发生腐败，以期使得蚕砂制品更好的应用于人们日常生活中。
[0003]然而，要对蚕砂制品进行抗菌检测，判断其抗菌性能及功效，目前没有现存的检测方法可以采用，最终无法实施蚕砂制品的抗菌性能评估。为此，本发明反复探索了各种抗菌检测实验方法，并进行了对比试验，最终采用琼脂平皿法实现了对蚕砂制品的抗菌性能检测。蚕砂大小不一，呈颗粒状，因而导致其检测操作困难，针对这一问题，本发明采用与蚕砂材料类同的家蚕丝绸制成蚕砂试验套，将蚕砂放入套中完成了蚕砂的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抗菌检测试验，为蚕砂抗菌制品的开发以及对现有的各种抗菌产品的检测提供基础，对建立香砂制品抗囷性能的标准检测方法具有现实意乂。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题是提供一种操作简单、速度快、使用成本低的检测蚕砂制品抗细菌性能的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，具体步骤如下:
步骤I:细菌冻干菌菌粉中加入溶菌肉汤，37 °C ± 1°C恒温振荡培养18小时，然后用接种针于营养琼脂培养基斜面划线，37°C±1°C，培养24小时，此斜面可在2?8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌；
步骤2:在步骤I得到的琼脂斜面中挑取I个典型的细菌菌落，接种于20mL营养肉汤中，37 °C ± TC，振荡培养18?20小时，得到细菌菌悬液;然后利用分光光度法测定细菌浓度，此菌悬液活菌数应达到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步骤3:吸取步骤2中的细菌菌悬液1.8mL~2.5mL，移入装有9mL PBS的试管中，充分混匀，依次进行10倍梯度稀释，稀释至活菌数为200CFU?250CFU的范围，作为接种菌悬液；
步骤4:剪取真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°〇湿热灭菌15min;
步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品。
[0006]步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品；
步骤7:取步骤3制备的接种菌悬液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，取少量步骤3制备的接种菌悬液分别滴加于每个待测样品、对照样品及空白对照品上，37°C±1°C培养18?24小时，每个样品至少3个平行试验；
步骤8:在培养期间，记录各样品表面细菌生长情况，将待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的实际活菌数值的平均值分别记为数值A、B和C。按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。
[0007]优选的，所述菌株选用金黄色葡萄球菌ATCC6538或大肠杆菌ATCC 11299或大肠杆菌ATCC8739或大肠杆菌ATCC29522。
[0008]优选的，步骤3中的细菌菌悬液吸取量，根据大肠杆菌取吸取量的下限，金黄色葡萄球菌取吸取量的上限。
[0009]优选的，步骤4中的真丝加样袋为GB/T7568.6-2002标准真丝制品，直径3.8 土0.5 cm，真丝边缘不超过0.3mm。
[0010]本发明的有益效果是:本发明所述的一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，操作简单、速度快、使用成本低;通过利用溶出性抗菌剂可以离开蚕砂制品进入培养皿的特性，采用在蚕砂制品上接种测试菌的方法，利用肉眼及显微镜镜检等方法观察蚕砂制品的微生物生长情况，来检测蚕砂制品的抗细菌性能，从而实现对蚕砂制品的抗细菌性能的评估。适用于抗菌剂整理的蚕砂制品的抗细菌性能评估。
【具体实施方式】
[0011]下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0012]本发明实施例包括:
一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，具体步骤如下:
步骤1:细菌冻干菌菌粉中加入2mL溶菌肉汤，所述菌株选用金黄色葡萄球菌ATCC 6538或大肠杆菌ATCC 11299或大肠杆菌々10:8739或大肠杆菌410:29522;在371€±1°(:恒温振荡培养18小时，然后用接种针于营养琼脂培养基斜面划线，37°C ±1°C，培养24小时，此斜面可在2?8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌；
步骤2:在步骤I得到的琼脂斜面中挑取I个典型的细菌菌落，接种于20mL营养肉汤中，在371:±1°(:，13(^/1^11，振荡培养18~20小时，得到细菌菌悬液;然后利用分光光度法测定细菌浓度，此菌悬液活菌数应达到I X 19?5 X 109CFU/mL;
步骤3:吸取步骤2中的细菌菌悬液1.8mL~2.5mL，所述细菌菌悬液吸取量，根据大肠杆菌取吸取量的下限，金黄色葡萄球菌取吸取量的上限;移入装有9mL PBS的试管中，充分混匀，依次进行10倍梯度稀释，稀释至活菌数为200CFU?250CFU的范围，作为接种菌悬液；
步骤4:剪取直径为3.8 ± 0.5cm真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3臟，121°(^湿热灭菌15111；[11;
步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有
0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品；
步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品；
步骤7:取步骤3制备的接种菌悬液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，在每个待测样品、对照样品及空白对照品上分别均匀滴加0.2±0.0lmL接种菌悬液，每个样品至少3个平行试验，37°C± 1°C培养18?24h，记录抗菌性能检测结果；
步骤8:在培养期间，记录蚕砂制品表面细菌增长情况、通过显微镜下观测的微观增长和通过肉眼范围内观察的宏观增长，记录待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的实际活菌数值的平均值，分别记为数值A、B和C。按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。
[0013]本实施例的具体实施步骤如下，(I)金黄色葡萄球菌冻干菌菌粉中加入2mL溶菌肉汤，37°C 土 1°C恒温振荡培养18h，用接种针于营养琼脂培养基斜面划线，37°C 土 1°C，培养24小时，挑取典型的细菌菌落，接种于20mL营养肉汤中，37 °C ± TC，130r/min，振荡培养18小时，得到活菌数为2 X 19CFlVmL细菌菌悬液；
(2)吸取2.5mL金黄色葡萄球菌菌悬液，加入含有9mL PBS的试管中，充分混匀，依次10倍稀释至活菌数为220CFU的浓度，作为接种菌悬液；
(3)采用GB/T7568.6-2002标准真丝制品，剪取直径为3.8±0.5cm的真丝圆片，真丝边缘不超过0.3mm，两片对称缝制真丝加样袋，121°C湿热灭菌15min;
(4)在加样袋中分别加入1.5g抗菌蚕砂及1.5g非抗菌蚕砂，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品。以不加蚕砂的加样袋作为空白对照品。
[0014](5)用涂布棒将ImL浓度为220CFU的金黄色葡萄球菌菌悬液均匀分散于营养琼脂平板表面，将待测样品、对照样品及空白对照品分别置于琼脂平板表面，在每个待测样品、对照样品及空白对照品上分别均匀滴加0.2mL浓度为220CFU的金黄色葡萄球菌菌悬液，每个样品3个平行试验，37°C±1°C培养24h，得到抗菌性能检测结果。
[0015]本发明的有益效果是:本发明所述的一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，操作简单、速度快、使用成本低;通过利用溶出性抗菌剂可以离开蚕砂制品进入培养皿的特性，采用在蚕砂制品上接种测试菌的方法，利用肉眼及显微镜镜检等方法观察蚕砂制品的微生物生长情况，来检测蚕砂制品的抗细菌性能，从而实现对蚕砂制品的抗细菌性能的评估。适用于抗菌剂整理的蚕砂制品的抗细菌性能评估。
[0016]以上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。
【主权项】
1.一种检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，其特征在于:具体步骤如下: 步骤1:细菌冻干菌菌粉中加入溶菌肉汤，37°C ± 1°C恒温振荡培养18小时，然后用接种针于营养琼脂培养基斜面划线，37°C±1°C，培养24小时，此斜面可在2?8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌； 步骤2:在步骤I得到的琼脂斜面中挑取I个典型的细菌菌落，接种于20mL营养肉汤中，37 °C ± TC，振荡培养18?20小时，得到细菌菌悬液;然后利用分光光度法测定细菌浓度，此菌悬液活菌数应达到I X 19?5 X 109CFU/mL; 步骤3:吸取步骤2中的细菌菌悬液1.8mL~2.5mL，移入装有9mL PBS的试管中，充分混匀，依次进行10倍梯度稀释，稀释至活菌数为200CFU?250CFU的范围，作为接种菌悬液； 步骤4:剪取真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°〇湿热灭菌15min; 步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品； 步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品； 步骤7:取步骤3制备的接种菌悬液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，取少量步骤3制备的接种菌悬液分别滴加于每个待测样品、对照样品及空白对照品上，37°C±1°C培养18?24小时，每个样品至少3个平行试验； 步骤8:在培养期间，记录各样品表面细菌生长情况，将待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的实际活菌数值的平均值分别记为数值A、B和C。按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。2.根据权利要求1所述的检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，其特征在于:所述菌株选用金黄色葡萄球菌ATCC 6538或大肠杆菌ATCC 11299或大肠杆菌ATCC8739或大肠杆菌ATCC29522。3.根据权利要求1所述的检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，其特征在于:步骤3中的细菌菌悬液吸取量，根据大肠杆菌取吸取量的下限，金黄色葡萄球菌取吸取量的上限。4.根据权利要求1所述的检测蚕砂制品抗细菌性能的方法，其特征在于:步骤4中的真丝加样袋为GB/T7568.6-2002标准真丝制品，直径3.8 ±0.5cm，真丝边缘不超过0.3mm。
【文档编号】C12R1/19GK105925662SQ201610420306
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】王毅婧, 董斌
【申请人】苏州市职业大学