蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物的合成方法，通过将式IV表示的二肽中间体，脱保护后与式VIII表示的肽末端环氧酮片段反应后制备获得。本发明提供的方法合成蛋白酶体抑制剂Oprozomib，将二肽中间体和肽末端环氧酮片段分别制备，最后再进行缩合得到目标化合物，其合成收率为42％，避免了氨基酸的消旋化，同时省去对最后终产物的HPLC提纯，大大缩短了反应周期，降低了生产成本，提高了产品的收率和纯度。结构通式：
【专利说明】
蛋白酶体抑制剂Oprozomi b及其类似物的制备方法
技术领域
[000?]本发明属于化学合成方法，具体涉及蛋白酶体抑制剂oprozomib及其类似物的制 备方法。
【背景技术】
[0002] Oprozomib的分子式为：0-甲基-N-[ (2-甲基噻唑-5-基）羰基]-L-丝氨酰基-0-甲 基-N_{ (1S)_1_苄基_2_[ (2R)_2_甲基环氧乙烧_2_基]_2_氧乙烧}_L_丝氨酰胺，化学结构 式为：
[0004] 0prozomib(0NX 0912)是由美国安进和日本0no制药公司共同开发的可口服、具高 选择性26S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的抑制剂，其抑制20S蛋白酶的CT-L活性， IC50为36nM/82nM。目前该化合物已进入临床II期研究，用于治疗骨髓瘤和套细胞淋巴瘤。
[0005] 当前报道合成Oprozomib及其类似物的路线有两条，其区别主要在于关键中间体 的不同。
[0006] 合成路线之一以N端保护的0-甲基-L-丝氨酸为原料，依次经氯甲酸苄酯保护羧 基，脱保护基得到中间体氨基苄酯片段，再与一分子〇-甲基丝氨酸缩合得到二肽片段，然后 脱苄基与氨基环氧酮片段缩合，再N端脱保护得到肽片段，进一步与噻唑甲酸片段进行缩 合，合成Oprozomib及其类似物。
[0008] 分析Oprozomib的这一传统合成路线，手性环氧酮片段在合成早期引入，提高了终 产品oprozomib的成本；同时，环氧酮片段不稳定，早期引入会增加环氧酮片段参与反应的 时间并导致杂质生成的风险，不利于产品的纯度，也增加了后处理的难度和时间。另外，在 脱苄基保护反应中，二肽丝氨酸结构中的手性部分容易发生消旋，使得终产物Opzozomib需 要经HPLC提纯（J · Med · Chem · 2009，52，3028- 3038) 〇
[0009] 合成路线二中N-Fmoc 0-甲基丝氨基酸采用固相合成得到相应二肽片段，再与异 恶唑甲酸缩合得到关键中间体，如PCT专利申请W02008140782，经脱保护再与环氧酮片段缩 合完成Oprozomib类似物骨架的构造，常用的反应路线如下：
[0011]固相合成方法中，羟甲基树脂和Fmoc-氨基酸用Η0ΒΤ及HBTU缩合剂缩合得到Fmoc-氨基酸的固相甲酯。但是，这种甲酯结构在固相肽合成反应中可能出现两方面的问题。一是 在每次循环中用酸脱除α氨基的保护基以延长肽链时，总是伴随着少量肽链与树脂间连接 的苄酯键被酸解断裂，出现所谓"连根枝"现象，造成已合成肽链的严重损失。二是将肽链从 树脂上切落下来时，需要用HF、TFA等较为强烈的酸性条件，这也同样会带来一些副反应，使 得操作变得繁杂。
[0012] 无论是路线一还是路线二，两个氨基酸缩合过程中容易造成氨基酸的手性部分消 旋，使得在最后一步反应中都需制备HPLC分离纯化，导致了生产周期的延长及成本的提高。 因此，提供一种工艺操作简单、成本低、产品纯度高的Oprozomib及其类似物的制备方法，对 于Oprozomib在工业化生产具有非常重要的现实意义。
【发明内容】
[0013] 本发明的目的是提供一种Oprozomib及其类似物的新制备方法，对传统的反应条 件进行了一系列的改造，以避免传统合成方法中的诸多弊端。
[0014]本发明提供的一种Oprozomib及其类似物式IX的制备方法，通过以下步骤实现：
[0016]将R3取代的N保护氨基酸I保护羧基后得N-保护的氨基酸酯II，脱除N保护基团与R2 取代羧酸缩合得式IV表示的二肽中间体，同时将R4取代的N保护氨基酸VI与环氧酮片段缩 合反应得VII，经脱去氨基保护基团得式VIII表示的肽末端环氧酮片段。最后式IV表示的二 肽中间体脱保护后得到的V与式VIII表示的肽末端环氧酮片段反应后制备获得IX。反应式：
[0018] 其中心代表甲基、乙基、叔丁基、苄基;办代表甲基、苯基、叔丁氧基、苄氧基、2-甲基 噻唑基、2，4-二氯苯基、1，2-二氯苯基、2-吡嗪基、吡唑、5-乙氧基异恶唑、5-甲基异恶唑;R 3 代表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、单氟甲氧基或其他天然或非天然氨基酸残基;R4代 表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、单氟甲氧基;Rs代表如亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨 酸、萘丙氨酸的残基。
[0019 ] 上述路线中涉及的缩合反应中采用EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或 PyBOP中的一种或两种以上的混合物的缩合催化剂。以二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、乙腈 或二氧六环为溶剂。
[0020] 所述缩合反应的催化剂，更优选为HBTU和HOBt，以四氢呋喃为溶剂，室温反应得到 的产物，经柱层析分离得到目标化合物。
[0021] 上述路线中涉及的脱保护反应，当脱除氨基保护基团时使用HC1饱和的乙酸乙酯 溶液、二氧六环或三氟甲酸溶液。脱除羧基的保护基团使用无机盐LiOH在水和甲醇溶液中 进行。
[0022] 在本发明优选的实施方式中，Ri代表叔丁基，R2代表2-甲基噻唑，R3代表甲氧基时 式IV表示的二肽中间体的结构为：
[0024]在本发明优选的实施方式中，R4代表甲氧基，R5代表苯基时式VIII的结构为：
[0026]在本发明优选的实施方式中，办为2-甲基噻唑，R3、R4均为甲氧基，R5为苯基时合成 得到的化合物为以下结构：
[0028] 即为蛋白酶体抑制剂Oprozomib。
[0029] 在本发明提供的方法中，式IV表示的二肽中间体按照如下方法合成：
[0030] (1)N-保护氨基酸酯包括N-保护氨基酸甲酯、N-保护氨基酸乙酯N-保护的氨基酸 苄酯和N保护的氨基酸叔丁酯的合成：
[0031] a)N_保护氨基酸甲酯的合成:将R3取代的N-保护氨基酸于-10°C加入甲醇和二氯 亚砜，再回流10小时反应；
[0032] b)N_保护氨基酸乙酯的合成：将R3取代的N-保护氨基酸于-10°C加入乙醇和二氯 亚砜，再回流10小时反应。
[0033] C)N-保护氨基酸苄酯的合成:将R3取代的N-保护氨基酸于N2保护下溶于保护碳酸 钠溶液中，冰浴下逐滴加入氯甲酸苄酯，升至室温反应4小时。
[0034] d)N_保护氨基酸叔丁基酯的合成：将R3取代的N-保护氨基酸溶于乙酸乙酯中，将 叔丁基三氯乙酰亚胺酯溶液正己烷中，然后将上述溶液缓慢滴加到乙腈溶液中，室温反应 18小时；
[0035]其中R3的定义同权利要求1
[0036] (2)R2取代的羧酸与N-保护氨基酸酯缩合反应:将步骤（1)的产物溶于四氢呋喃 中，加入HBTU、Η0ΒΤ和R 2取代的酸反应即得到二肽中间体（IV)。
[0037] 其中，步骤(1)所述N-保护氨基酸酯的合成路线：
[0039] R3的定义同权利要求1，R6代表N保护基，包含叔丁氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、 三氟乙酰基、对甲苯磺酰基等，优选叔丁氧羰基。
[0040]其中，步骤(2)取代羧酸与氨基脱保护后的氨基酸缩合反应式：
[0042] 1^、1?2、1?3、1?6的定义同前。
[0043]在本发明提供的方法中，式VIII表示的肽末端环氧片段通过以下步骤合成：
[0045]以环氧酮片段为原料，经me、DCC、HOB t、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或Py Β0Ρ 中的 一种或两种以上的混合物为缩合催化剂，同R4取代的氨基酸酸缩合，以二氯甲烷、四氢呋 喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六环为溶剂，在0°C至25°C下反应得到相应中间体，然后经脱去氨 基保护基团得到式VIII所示化合物，其中R4、R5的定义同上。
[0046] 优选是以H0Bt、HBTU为缩合剂，四氢呋喃为溶剂，室温下反应，得到的相应二肽环 氧酮片段。
[0047] 其中，我们重复了文献报道Oprozomib的合成路线，其合成收率为18.6%，通过液 相及LC-MS验证发现所得终产物含有两个同分异构体，需制备HPLC分离。
[0048]本发明提供的方法合成蛋白酶体抑制剂Oprozomib，将二肽中间体和肽末端环氧 酮片段分别制备，最后再进行缩合得到目标化合物，其合成收率为42%，避免了氨基酸的消 旋化，同时省去对终产物的HPLC提纯，大大缩短了反应周期，降低了生产成本，提高了产品 的收率和纯度。
【具体实施方式】
[0049] 本发明结合具体的实施例作进一步的说明。
[0050] 以下实施例中的缩略语说明：
[0051 ] TFA:三氟甲酸，
[0052] DEA:二乙胺，
[0053] EDC: 1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基羰二亚胺，
[0054] HOBt: 1-羟基苯并三唑，
[0055] HBTU:苯并三氮唑-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸盐，
[0056] TBTU:〇-苯并三氮唑-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟硼酸盐，
[0057] DCC:二环己基碳二亚胺，
[0058] HCTU: 6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲四氟磷酸盐，
[0059] TCTU:0-(6-氯苯并三氮唑-1-基)-N，N，N'，N'_四甲基脲四氟硼酸盐，
[0060] HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯，
[0061 ] PyBOP:六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，
[0062] DIPEA:N，N_ 二异丙基乙胺。
[0063] 以Oprozomib为例其合成路线如下：
[0065] 实施例1 N-Fmoc-Ο-甲基-L-丝氨酸叔丁醇酯
[0067] 将N-Fmoc-Ο-甲基-L-丝氨酸（lg，2.93mmol)溶于15mL乙酸乙酯，通过分液漏斗缓 慢滴加溶于6mL正己烷的叔丁基三氯乙酰亚胺酯（1.28g，5.87mmol)，混合物于25°C下搅拌 18小时，饱和碳酸钠(20mL)淬灭反应，分出有机层，有机层再用饱和食盐水洗涤2次，无水硫 酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，经柱层析分离得白色固体1.13g。
[0068] 收率：97% JH MMR(500MHz，CDC13) :δ7.76((1, J = 7.5Hz，2H)，7.62(q，J = 4.0Hz， 2H) ,7.40(t,J = 7.5Hz,2H),7.31 (t,J = 7.4Hz,2H) ,5.66(d,J = 8.0Hz,lH) ,4.417-4.331 (m,3H),4.24(t ,J = 7.5Hz,lH),3.78(dd ,J = 9.5,3.5Hz,lH),3.65(dd ,J = 9.0,3.0Hz,lH), 3.37(s,3H),1.48(s,9H).ESI-MS：m/z = 398[M+l] + 〇
[0069] 实施例2 0-甲基-L-丝氨酸叔丁醇酯
[0071 ] 将实施例1所得的N-Fmoc-Ο-甲基-L-丝氨酸叔丁醇酯（lg, 2.52mmol),溶于9mL乙 腈，冰浴下加入二乙胺lmL，薄层层析检测，反应完毕，减压回收溶剂，白色固体粗品440mg， 直接用于下步。
[0072]收率：100% JH 匪R(500MHz，CDC13) :S4.24(t，J = 7.5，lH)，3.81(dd，J = 9.5， 3.5Hz,lH),3.56(s,lH),3.67(dd,J=9.0,3.0Hz,lH),3.37(s,3H),3.12(s,lH),1.47(s, 9H)〇
[0073] 实施例3 0-甲基-N_(2-甲基-5-噻唑)-L_丝氨酸叔丁酯
[0075] 冰浴下，将实例2所得胺(440mg，2 · 5mmo 1)和2-甲基噻唑-5-甲酸(429mg，3mmo 1)溶 于四氢呋喃（1 OmL)，加入HOBt (135mg，3mmo 1)和HBTU(1 · 1 g，3mmo 1)逐滴缓慢加入N，N-二异 丙基乙胺（（lmL，6mmol)，升至室温反应4小时。加入乙酸乙酯20mL，充分静置后分得有机层， 依次用饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过 滤，减压回收溶剂得残余物，用硅胶柱层析纯化得白色固体〇.6g。
[0076] 收率：80%;1!1匪1?(50010^，0)(：13)38.04(8，1!1)，6.74((1，了 = 7.5取，1!〇,4.74-4.72(m，lH)，3.81(dd，J = 9.5,3.0Hz，lH)，3.71(dd，J = 9.5,3.0Hz，lH)，3.35(s，3H)，2.72 (s,3H),1.48(s,9H).ESI-MS：m/z = 301[M+l] + 〇
[0077] 实施例4 0-甲基-N_(2-甲基-噻唑)-L_丝氨酸
[0079] 将实施例3的0-甲基-N-(2-甲基-5噻唑）-L-丝氨酸叔丁酯(0.458，1.5111111〇1)溶于 3mL二氯甲烷中，将体系冷却至0°C，缓慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL，保持0°C下反应1小时。减 压蒸除溶剂得无色油状物，无需纯化直接用于下步反应。
[0080] 咕匪1?(5001〇^，0150-(16)^8.96(8，1!〇,8.42(8，1!1)，4.60-4.57(111，1!1)，3.75-3.92(m,lH),3.66-3.63(m,lH),3.27(s,3H),3.15(s,3H).ESI-MS：m/z=345[M+l] +〇
[0081] 实施例5 N-Boc-L-0-甲基丝氨酰-L-苯丙胺酰环氧酮
[0083] 冰浴下，将N-Boc保护的L-苯丙酰环氧酮（2.5g，12mmol)溶于25mL二氯甲烷中，缓 慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL保持0°C反应1小时。减压蒸除溶剂得无色油状物，直接用于下步 反应。将上述油状物溶于40mL四氢呋喃，加入原料N-Boc-Ο-甲基-L-丝氨酸（2.2g，lOmmol) 同时加入HOBt(1 · 6g，12mmol)和HBTU(4 · 5g，12mmol)并逐滴缓慢加入N，N-二异丙基乙胺 (5.2mL，30mmol)，升至室温反应4小时。加入乙酸乙酯100mL，充分静置后分得有机层，依次 用饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压回收 溶剂得残余物，硅胶柱层析纯化得无水油状物3. lg。
[0084]收率：77% /Η NMR(400MHz，CDC13)S7.3卜7.28(m，2H)，7.26-7.22(m，lH)，7· 15- 7.13(m,2H),7.01(br,lH),5.26(br,lH),4.85-4.80(m,lH),4.17-4.13(m,lH),3.72(d,J= 5.7Hz,lH),3.40-3.26(m,5H),3.13(dd,J=14.0,5.2Hz,lH),2.91-2.83(m,2H),1.50(s, 3H),1.43(s,9H)〇
[0085] 实施例6 L-0-甲基丝氨酰-L-苯丙胺酰环氧酮三氟乙酸盐
[0087] 将实施例5所得N-Boc-L-0-甲基丝氨酰-L-苯丙胺酰环氧酮（0.81g，2mmol)溶于 6mL二氯甲烷中，将体系冷却至0°C，缓慢逐滴加入三氟乙酸2mL保持0°C反应3小时。减压蒸 除溶剂得无色油状物，直接投于下步反应。
[0088] 实施例7 0-甲基-N-[(2-甲基噻唑-5-基)羰基]-L-丝氨酰基-0-甲基-N-{(1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基环氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-丝氨酰胺(Oprozomib)
[0090] 将实施例3的0-甲基-N-(2-甲基-5-噻唑)-L-丝氨酸叔丁酯(0.45g，1.5mmol)溶于 3mL二氯甲烷中，将体系冷却至0°C，缓慢逐滴加入三氟乙酸1.5mL保持0°C反应1小时。减压 蒸除溶剂得无色油状物，直接用于下步反应。将该化合物溶于3mL四氢呋喃中，于冰浴下加 入实施例 5 的环氧酮片段（0.5g，1.25mmol)、H0Bt(0.2g，1.5mmol)&HBTU(0.57g，1.5mmol) 并缓慢滴加 DIPEA(0.65mL，3.75mmol)体系温度缓慢升至室温反应4小时。加入乙酸乙酯 20mL，充分静置后分得有机层，分别用饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液及饱和食盐水溶 液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂得残余物，最后柱层析纯化。
[0091] 收率：85% </H NMR(500MHz，CDCl3)j8.04(s，lH) ,7.07-7.30(m，7H)，6.89(dd，J = 6Hz，lH)，4.87(td，J=5.5，8Ηζ，1Η),4.67-4.70(m，lH),4.46-4.49(m，lH),3.79-3.82(m， 2H),3.55(t ,J = 9Hz,lH) ,3.41 (dd ,J = 6,9Hz, 1H), 3.33(d ,J = 8Hz ,6H) ,3.28(d ,J = 4.5Hz, 1H) ,3.14(dd,J = 5,14Hz, 1H) ,2.86-2.92(m,2H) ,2.74(s,3H), 1.50 (s , 3H) ； 13C NMR (126MHz,CDC13)5207.25,170.82,169.67,169.50,160.56,143.79,135.83,133.30, 129.64,128.61,127.18,71.61,71.33,59.44,59.34,59.24,53.07,53.04,52.66,52.63, 37.25,19.79,16.71.ESI-MS：m/z = 533[M+l] + 〇
[0092] 实施例8 0-甲基-N-[ (5-乙氧基异噁唑-3-基）羰基]-L-丝氨酰基-0-甲基-N-Kis)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基环氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-丝氨酰胺
[0094] 采用5-乙氧基异恶唑-3-甲酸代替2-甲基噻唑-5-甲酸为原料按实施例（1-7)的方 法制备得到。
[0095] 咕 NMR(500MHz，CDCl3)J7.52(d，J= 11.5Hz，1H) ,7.03-7.29(m，5H)，7.05((1, J = 13.5Ηζ,1Η),7.01(d,J=12Hz,lH),5.65(s,lH),4.80-4.86(m,lH),4.64-4.69(m,lH), 4.45-4.49(m，lH) ,4.25-4.28(m，2H) ,3.82(dd，J = 2.0,7 .0Hz,ΙΗ) ,3.80((1, J= 15.5Hz, 1H) ,3.55(dd,J=13.5,15.5Hz,lH) ,3.40(dd,J=10,15Hz,lH),3.33(s,3H) ,3.31(s,3H), 3.28(d,J = 8.0Hz,lH),3.12(dd,J = 8.5,13.5Hz,lH),2.90(d,J = 7.5Hz,lH) ,2.88(dd,J = 10.5,22.5Hz,lH),1.51(s,3H),1.48(t ,J = 11.5Hz,3H)；ESI-MS：m/z = 547[M+l] + 〇
[0096] 实施例9 0-甲基-N-[(5-甲基异噁唑-3-基)羰基]-L-丝氨酰基-0-甲基-N-K1S)-1-苄基-2-[(2R)-2-甲基环氧乙烷-2-基]-2-氧乙烷}-L-丝氨酰胺
[0098] 采用5-甲基异恶唑-3-甲酸代替2-甲基噻唑-5-甲酸，L-亮氨酰环氧酮代替L-苯丙 酰环氧酮按实施例（1-7)的方法制备得到。
[0099] 4 NMR(500MHz，CDCl3)J7.57(d，J= 11.5Hz，1H)，7.05(d，J = 12·5Ηζ，1Η)，7· 00 (d,J = 14.5Hz, 1H) ,6.39(t,J = 2.5Hz,lH),4.73-4.79(m,lH),4.58-4.63(m,lH),4.50-4.53(m,lH),3.80-3.85(m,lH),3.82(dd ,J = 5.5,15.5Hz,lH),3.62(dd ,J=12.0,15.5Hz, 1H) ,3.41(s,3H) ,3.40(dd,J=10,15.5Hz,lH) ,3.34(s,3H),3.30(d,J = 8.5Hz,lH) ,2.83 (d ,J = 8.5Hz,lH),2.47(d ,J=1.00 Hz , 3H), 1.59(m, 1H), 1.51 (m, 1H), 1.48(s, 3H), 1.24 (m,lH),0.89(d ,J = 10.5 Hz,6H) ；ESI-MS：m/z = 517[M+l] + 〇
【主权项】
1. 一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法，其特征在于，通过以下 步骤实现：将R3取代的N保护氨基酸I保护羧基后得N-保护的氨基酸酯II，脱除N保护基团与R2取代 羧酸缩合得式IV表示的二肽中间体，同时将R4取代的N保护氨基酸VI与环氧酮片段缩合反 应得VII，经脱去氨基保护基团得式VIII表示的肽末端环氧酮片段，最后式IV表示的二肽中 间体脱保护后得到的V与式VIII表示的肽末端环氧酮片段反应后制备获得IX;反应式如下：其中办代表甲基、乙基、叔丁基、苄基;此代表甲基、苯基、叔丁氧基、苄氧基、2-甲基噻唑 基、2，4_二氯苯基、1，2_二氯苯基、2-吡嗪基、吡唑、5-乙氧基异恶唑、5-甲基异恶唑;R3代表 甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、单氟甲氧基;R4代表甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、单 氟甲氧基;R 5代表如亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、萘丙氨酸的残基； 其中缩合反应的催化剂为 EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU 或 PyBOP 中的一 种或两种以上的混合物，以二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六环为溶剂。 其中脱保护反应中，当脱除氨基保护基团时使用HC1饱和的乙酸乙酯溶液、二氧六环或 三氟甲酸溶液。脱除羧基的保护基团使用无机盐LiOH在水和甲醇溶液中进行。2. 根据权利要求1所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，其中所述缩合反应的催化剂为H)C/H0Bt或HBTU/HOBt，以二氯甲烷或四氢呋喃 为溶剂，室温反应后得到的产物IX。3. 根据权利要求1所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，其中心代表叔丁基，R 2代表2-甲基噻唑，R3代表甲氧基的式IV脱除叔丁基保护后与R4代表甲氧基，R5代表苯基的式VIII化合物I ￥111 缩合反应得到的式IX化合物为OprozomibXXX 〇.4. 根据权利要求1所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，式IV表示的二肽中间体按照如下方法合成： (1) N-保护的氨基酸酯包括N-保护氨基酸甲酯、N-保护氨基酸乙酯、N-保护氨基酸苄酯 和N-保护氨基酸叔丁酯的合成： a) N-保护氨基酸甲酯的合成:将R3取代的N保护氨基酸于-10°C加入甲醇和二氯亚砜，再 回流10小时反应； b) N-保护氨基酸乙酯的合成:将R3取代的N保护氨基酸于-10°C加入乙醇和二氯亚砜，再 回流10小时反应； c) N-保护氨基酸苄酯的合成:将R3取代的N-保护氨基酸于N2保护下溶于饱和碳酸钠溶 液中，冰浴下逐滴加入氯甲酸苄酯，升至室温反应4小时； d) N-保护氨基酸叔丁基酯的合成:将R3取代的N-保护氨基酸溶于乙腈中，将叔丁基三氯 乙酰亚胺酯溶于正己烷中，然后将上述正己烷溶液缓慢滴加到乙酸乙酯溶液中，室温反应 18小时； 其中R3的定义同权利要求1; (2) R2取代的羧酸与N-保护氨基酸酯缩合反应:将步骤(1)的产物溶于四氢呋喃中，加入 HBTU、H0BT和R2取代的羧酸反应即得到二肽中间体IV。5. 根据权利要求4所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，其中步骤(l)a)所述N-保护氨基酸甲酯的合成反应式如下：R3的定义同权利要求1，R6代表N-保护基，包含叔丁氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、三氟 乙酰基或对甲苯磺酰基。6. 根据权利要求4所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，R6选用芴甲氧羰基。7. 根据权利要求4所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，其中步骤(l)b)所述N-保护氨基酸乙酯的合成反应式：步骤(l)c)所述N-保护氨基酸苄酯的合成反应式： π 0" 〇 步骤(1 )d)所述Ν-保护氨基酸叔丁酯酯的合成反应式：其中R3的定义同权利要求1，R6的定义同权利要求5。8. 根据权利要求4所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，其中步骤(2)所述取代羧酸与氨基脱保护后的氨基酸缩合反应式：Ri、R2、R3、同权利要求1; R6的定义同权利要求5;将步骤（1)所得N-保护氨基酸酯在HC1饱 和的乙酸乙酯溶液、二氧六环或三氟甲酸溶液中脱保护后，溶于二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、 苯、乙腈或二氧六环的溶剂，冰浴下加入取代羧酸、HOBt/EDC或HOBt/HBTU的缩合剂，反应体 系升至室温进行反应。9. 根据权利要求1所述的一种蛋白酶体抑制剂Oprozomib及其类似物式IX的制备方法， 其特征在于，式VIII表示的肽末端的环氧酮片段的合成反应式为：以环氧酮片段为原料，经 EDC、DCC、HOBt、TBTU、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP中的一种 或两种以上的混合物为缩合催化剂同R4取代的氨基酸酸缩合，以二氯甲烷、四氢呋喃、甲 苯、苯、乙腈或二氧六环为溶剂，在〇°C至25°C下反应得到相应中间体，然后经脱去氨基保护 基团得到式VIII所示化合物，其中R 4、R5的定义同上。
【文档编号】C07K1/06GK105949279SQ201610273652
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】刘滔, 傅利萍, 胡永洲, 董晓武, 李大强, 何若愚
【申请人】浙江大学