一种从牛血中提取多种蛋白的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从牛血中提取多种蛋白的方法，包括取牛血液加入抗凝剂，分离成血细胞和血浆的血液分离步骤；将血细胞经破碎、变性、压滤、纯化处理后得到超氧化物歧化酶、血红素以及血球蛋白粉至少其中之一的血细胞提取步骤，以及将血浆经压滤、纯化后得到纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG以及血浆蛋白粉至少其中之一的血浆提取步骤。该方法充分利用生物分离技术，按先分离相近组分，再进行精细分离的原则，高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血红素、纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG逐一地高纯度地提取出来，充分挖掘血液的潜在价值，提高了牛血液的利用率。
【专利说明】
一种从牛血中提取多种蛋白的方法
技术领域
[0001]本发明涉及牛血加工技术领域，具体而言，涉及一种从牛血中提取多种蛋白的方法。【背景技术】
[0002]目前，牛血加工技术主要指从牛血中提取各种蛋白的工艺，以提供牛血的附加价值，提高其利用率。但现有的提取工艺效率低、提取的蛋白品种少且提取成分的含量也低纯度不高，且存在滤液滤渣大量丢弃的现象，大大地限制了对牛血的深加工和利用率。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种从牛血中提取多种蛋白的方法，此方法能够从牛血液样品中逐一提取出多种蛋白质，且提取的纯度高，充分挖掘了牛血液的潜在价值，提高了牛血液的利用率。
[0004]本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0005]—种从牛血中提取多种蛋白的方法，其包括:
[0006]血液分离步骤:取新鲜牛血液，加入抗凝剂，分离，收集血细胞和血浆；
[0007]血细胞提取步骤:血细胞经破碎、变性、压滤、纯化处理后分别得到超氧化物歧化酶、血红素以及血球蛋白粉至少其中之一；
[0008]血浆提取步骤:血浆经压滤、纯化后分别得到纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、 牛纤维连接蛋白、牛IgG以及血浆蛋白粉至少其中之一。
[0009]本发明提供的一种从牛血中提取多种蛋白的方法的有益效果是:相对于传统的提取工艺，本发明的牛血提取方法包括血液分离步骤、血细胞提取步骤和血浆提取步骤，充分利用生物分离技术，按先分离相近组分，再进行精细分离的原则，可以高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血红素、纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG逐一地高纯度地提取出来，并加工得到血球蛋白粉和血浆蛋白粉等有效成分，充分挖掘血液的潜在价值，提高了牛血液的利用率。【附图说明】
[0010]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0011]图1为本发明实施例的从牛血中提取多种蛋白的方法的流程图。【具体实施方式】
[0012]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0013]下面对本发明实施例的从牛血中提取多种蛋白的方法进行具体说明。
[0014]请参阅图1，本发明实施例提供的从牛血中提取多种蛋白的方法，包括以下步骤。
[0015]S1:血液分离步骤
[0016]取新鲜牛血液，加入抗凝剂，通过血球分离机分离，并收集血细胞和血浆。需要说明的，先处理血细胞时，可将血浆于-20°C冷冻保存，若先处理血浆，则可将血细胞于-20°C 冷冻保存。先处理血细胞还是先处理血浆可根据实际情况选择。
[0017]其中，较佳地，抗凝剂为柠檬酸三钠。进一步地，按在血液中的终浓度为3.6?4 % 的量加入梓檬酸三钠，防止牛血液凝固。
[0018]S2:血细胞提取步骤[〇〇19] 血细胞经破碎、变性、压滤、纯化处理后可分别得到超氧化物歧化酶、血红素以及血球蛋白粉至少其中之一。换句话说，血细胞提取步骤包括超氧化物歧化酶提取步骤、血红素提取步骤和血球蛋白粉提取步骤至少其中之一。以下对超氧化物歧化酶提取步骤、血红素提取步骤和血球蛋白粉提取步骤进行具体说明。
[0020](1)超氧化物歧化酶提取步骤
[0021]用超声波破碎血细胞(KQ-100型超声仪，功率100W、频率60K、超声10分钟)，释放出胞内涵物，得到血细胞破碎液。往血细胞破碎液中加入氯化铜和氯化锌，经热变性处理后、 得到血细胞变性液。压滤(型号SHXB-Z，压力0.2Mpa，两级过滤，第一级孔径为6m1、第二级孔径为1.2mi，先过第一级再过第二级)血细胞变性液，收集第一滤液和第一滤渣。用阴离子交换层析纯化第一滤液，收集超氧化物歧化酶，即得到高纯度的超氧化物歧化酶。[〇〇22]其中，较佳地，按在血细胞破碎液中的终浓度为0.48?0.52% (质量比)的量加入氯化铜和按终浓度为〇.28?0.32 % (质量比)的量加入氯化锌。[〇〇23] 其中，较佳地，热变性处理血细胞破碎液时，在72?77°C条件下热处理血细胞破碎液30?35min。
[0024](2)血红素提取步骤用水或者缓冲液溶解上述步骤中得到的第一滤渣，调节pH至 1.8?2.2，加入羧甲基纤维素钠，得到第一滤渣溶解液。其中，羧甲基纤维素钠能够吸附血红素，利于血红素的纯化。
[0025]再压滤第一滤渣溶解液，收集第二滤液和第二滤渣。第二滤渣中含有血红素，用水或缓冲液洗涤第二滤渣。收集洗涤后的残渣即为高纯度的血红素，并收集洗涤第二滤渣后的洗涤液。[〇〇26](3)血球蛋白粉提取步骤
[0027]喷雾干燥上述洗涤液和收集得到的第二滤液的混合液，即得到血球蛋白粉。
[0028]需要说明的是，上述步骤可选择性地进行，例如，只进行超氧化物歧化酶提取步骤，得到超氧化物歧化酶;或者只进行超氧化物歧化酶提取步骤和血红素提取步骤，得到超氧化物歧化酶和血红素；当然，也可以进行超氧化物歧化酶提取步骤、血红素提取步骤以及血球蛋白粉提取步骤，得到超氧化物歧化酶、血红素和血球蛋白粉。[〇〇29]S3:血浆提取步骤
[0030]血浆经压滤、纯化后分别得到纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG以及血浆蛋白粉至少其中之一。换句话说，血浆提取步骤包括纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤、凝血酶提取步骤、牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤、牛IgG提取步骤以及血浆蛋白粉提取步骤至少其中之一。以下对纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤、凝血酶提取步骤、牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤、牛IgG提取步骤以及血浆蛋白粉提取步骤至少其中之一进行具体说明。
[0031](1)纤维蛋白原提取步骤
[0032]用浓度为0.85?0.9% (质量比)的氯化钠溶液稀释血浆，得到血浆稀释液。可以理解的是，若是血浆被冷冻处理，应先融解冷冻的血浆，再进行稀释操作。[〇〇33]压滤血浆稀释液，收集第三滤液和第三滤渣。第三滤渣中含有纤维蛋白原，用水或缓冲液洗涤第三滤渣，收集洗涤后的残渣即为高纯度的纤维蛋白原。
[0034]其中，较佳地，按体积比为4?6:1的量往血浆中加入氯化钠溶液。[〇〇35](2)凝血酶原提取步骤[〇〇36]取部分第三滤液，并加入草酸钾和氯化钡，搅拌18?20min，使其充分溶解。其中， 较佳地，按在第三滤液中的终浓度为0.08?0.12% (质量比)的量加入草酸钾和按0.18? 0.22%的量加入氯化钡。[〇〇37] 再压滤该部分第三滤液，收集第四滤液和第四滤渣，用pH6.8?7.2的0.018? 0.022M磷酸盐缓冲液溶解第四滤渣，得到第四滤渣溶解液。用阴离子交换层析纯化(DEAE Beads 6FF，平衡用pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，洗脱用0.1-lmol/L NaCl和 pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，再生用2mol/LNaCl)第四滤渣溶解液，收集得到高纯度的凝血酶原。[〇〇38]质量比[〇〇39](3)凝血酶提取步骤
[0040] 往凝血酶原中加入氯化钙进行激活处理，得到激活后凝血酶原溶液，再层析(SP Beads 6FF，平衡用pH5.2?6.0的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，洗脱用0.1-lmol/L NaCl和 pH5.2?6.0的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，再生用2mol/LNaCl)该激活后凝血酶原溶液， 收集得到高纯度的凝血酶。[〇〇41](4)牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤[〇〇42]往第三滤液中加入终浓度为18?22% (质量比)硫酸铵，搅拌18?20min，使其充分溶解。再压滤该另取的第三滤液，收集第五滤液和第五滤渣。用PH5.0?5.5的0.008? 0.012M醋酸盐缓冲液溶解第五滤渣，得到第五滤渣溶解液。
[0043] 然后用阳离子交换层析纯化(SP Beads 6FF，平衡用pH5.0?5.5的0.018?0.022M 醋酸盐缓冲液，洗脱用〇.1-lmol/L NaCl和pH5.0?5.5的0.018?0.022M醋酸盐缓冲液，再生用2mol/LNaCl)第五滤渣溶解液，收集得到牛IgM和牛纤维连接蛋白。[〇〇44]其中，较佳地，按在第三滤液中的终浓度为20%的量加入酸铵。[〇〇45](5)牛IgG提取步骤[〇〇46]往第三滤液中加入终浓度为33?37% (质量比)的硫酸铵，搅拌18?22min，使其充分溶解。压滤该再另取的第三滤液，收集第六滤液和第六滤渣。用PH6.8?7.2的0.008? 0.012M的磷酸盐溶液溶解第六滤渣，得到第六滤渣溶解液。
[0047] 用阳离子交换层析纯化(SP Beads 6FF，平衡用pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，洗脱用〇.l-lmol/L NaCl和pH6.8?7.2的0.018?0.02211磷酸盐缓冲液，再生用 2mol/LNaCl)第六滤渣溶解液，收集得到牛IgG。[〇〇48]其中，较佳地，按在第三滤液中的终浓度为35%的量加入酸铵。[〇〇49](6)血浆蛋白粉提取步骤[〇〇5〇]喷雾干燥第三滤液、第四滤液、第五滤液、第六滤液和第七滤液的混合液，即得到血浆蛋白粉。[0051 ] 也需要说明的是，上述步骤可选择性地进行，例如，只进行纤维蛋白原提取步骤， 得到纤维蛋白原;或者只进行纤维蛋白原提取步骤和凝血酶原提取步骤，得到纤维蛋白原和凝血酶原;或者只进行纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤和凝血酶提取步骤，得到纤维蛋白原、凝血酶原和凝血酶;或者只进行纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤、凝血酶提取步骤、以及牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤，得到纤维蛋白原、凝血酶原提取步骤、凝血酶、牛IgM和牛纤维连接蛋白；又或者上述步骤全部进行，即依次进行纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤、凝血酶提取步骤、牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤、以及牛 IgG提取步骤，得到纤维蛋白原、凝血酶原提取步骤、凝血酶、牛IgM、牛纤维连接蛋白以及牛 IgG〇
[0052]本发明的从牛血提取多种蛋白的方法，充分利用生物分离技术，尤其是压滤分离技术和离子交换层析技术，按先分离相近组分，再进行精细分离的原则，先从血细胞中逐一分离出超氧化物歧化酶、血红素等蛋白，并得到血球蛋白粉;然后从血浆中逐一分离出纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、纤维连接蛋白、牛IgG等蛋白，并得到血浆蛋白粉。相对于传统的提取工艺，本发明的提取方法能够从一份血液样品出提取出多种蛋白质，节约了原材料成本和时间，充分挖掘血液的潜在价值，提高了牛血液的利用率。[〇〇53]以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。[〇〇54] 实施例
[0055]本实例以从牛血液中提取超氧化物歧化酶、血红素、纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG、血球蛋白粉以及血浆蛋白粉为例，详细说明本发明提供的从牛血中提取多种蛋白的方法的操作过程。[〇〇56]首先，进行血液分离步骤。[〇〇57]取10L新鲜牛血液，加入柠檬酸三钠使其在牛血液中的终浓度为3.8 %抗凝。利用血球分离机分离得到5.0kg的血细胞和5.2L的血浆。本实施例中，先处理血细胞，血浆于-20 °C冷冻保存。
[0058]其次，从血细胞中依次提取超氧化物歧化酶、血红素，并得到血球蛋白粉。其具体提取步骤如下。[〇〇59](1)提取超氧化物歧化酶
[0060]用生理盐水洗涤血细胞后，再用超声波破碎仪对血细胞进行超声波破碎，使其释放出胞内涵物，得到血细胞破碎液。
[0061]压滤血细胞破碎液，去除细胞碎片残渣，将去除细胞碎片残渣后的血细胞破碎液转入反应釜中进行热处理，并加入终浓度为〇.5 %的氯化铜和0.3 %的氯化锌，升温至75 °C， 保温20min。
[0062] 压滤热处理后的血细胞破碎液得到第一滤液和第一滤渣。[〇〇63]第一滤液用生理盐水稀释5陪即按4:1的体积比加入生理盐水到第一滤液中，并调节其pH至7.6，用阴离子交换层析纯化稀释后的第一滤液，洗脱后收集得到超氧化物歧化酶纯品200mg。[〇〇64](2)提取血红素
[0065]用水或者缓冲液溶解上述步骤得到的第一滤渣，调节pH至2.0，再加入羧甲基纤维素钠吸附，得到第一滤渣溶解液。
[0066]压滤第一滤渣溶解液，收集得到第二滤液和第二滤渣。
[0067]第二滤渣用酸性丙酮抽提，经回流后回收丙酮，浓缩物用稀碱溶解后，得到血红素溶解液，调节血红素溶解液pH至4.0，再抽滤，得血红素滤渣，用水洗涤该血红素滤渣，得高纯度的血红素50g。并收集洗涤第二滤渣后的洗涤液。[〇〇68](3)提取血球蛋白粉
[0069]喷雾干燥上述步骤得到的洗涤液和第二滤液的混合液，即得到血球蛋白粉。
[0070]接着，从血浆中提取纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纤维连接蛋白以及牛IgG。其具体提取步骤如下。
[0071](4)提取纤维蛋白原[〇〇72]融解冷冻的血浆，取5L血浆，用浓度为0.9%的氯化钠溶液稀释即按体积比为5:1 的量加入氯化钠溶液到血浆中，得到血浆稀释液。压滤血浆稀释液，收集得到第三滤液和第三滤渣，用水洗涤第三滤渣，收集洗涤后的残渣即得到高纯度的纤维蛋白原。[〇〇73](5)提取凝血酶原[〇〇74]往第三滤液中并加入终浓度为0.01 %的草酸钾和0.2%的氯化钡，搅拌20min，使其充分溶解，压滤，收集得到第四滤液和第四滤渣。用PH7的0.02M磷酸盐缓冲液溶解第四滤渣，得到第四滤渣溶解液。用阴离子交换层析纯化(DEAE Beads 6FF，平衡用pH7.0的0.02M 磷酸盐缓冲液，洗脱〇.1-lmol/L NaCl和pH7.0 0.02M磷酸盐缓冲液，再生利用2mol/L NaCl)第四滤渣溶解液，收集得到高纯度的凝血酶原。[〇〇75](6)提取凝血酶[〇〇76] 往凝血酶原中加入0.05M氯化钙进行激活处理，得到激活后凝血酶原溶液，再层析该激活后凝血酶原溶液，收集得到高纯度的凝血酶50mg。[〇〇77](7)提取牛IgM和牛纤维连接蛋白[〇〇78]往第三滤液中并加入终浓度为20 %的硫酸铵，搅拌20min，使其充分溶解，再压滤， 收集得到第五滤液和第五滤渣。用PH5.0的0.01M醋酸盐缓冲液溶解第五滤渣，得到第五滤渣溶解液。[〇〇79]用阳离子交换层析纯化(SP Beads 6FF，平衡用pH5.0的0.01M醋酸盐缓冲液，洗脱用0.1-lmol/L NaCl和pH5.0的0.01M醋酸盐缓冲液，再生用2mol/LNaCl)第五滤渣溶解液， 收集得到牛IgM1g和牛纤维连接蛋白lg。
[0080](8)提取牛IgG[〇〇811往第三滤液中加入终浓度为35%的硫酸铵，搅拌20min，使其充分溶解。[〇〇82] 压滤第三滤液，收集得到第六滤液和第六滤渣。用pH7的0.01M的磷酸盐盐溶液溶解第六滤渣，得到第六滤渣溶解液。
[0083]用阳离子交换层析纯化(SP Beads 6FF，平衡用pH7.0的0.01M磷酸盐缓冲液，洗脱用0.1-lmol/L NaCl和pH7.0的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液，再生用2mol/LNaCl)第六滤渣溶解液，收集得到牛IgG40g。[〇〇84](9)提取血浆蛋白粉[〇〇85]喷雾干燥第三滤液、第四滤液、第五滤液和第六滤液的混合液，即得到血浆蛋白粉。
[0086]需要说明的是，在其他的实施例中，上述步骤可以不用全部进行，可以选择性进行。根据实际需求进行提取。
[0087]综上，本实施例的从牛血提取多种蛋白的方法，充分利用生物分离技术，按先分离相近组分，再进行精细分离的原则，高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血红素、纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG逐一地高纯度地提取出来，并加工得到血球蛋白粉和血浆蛋白粉等有效成分，其中每一步骤的滤液或滤渣都能都得到利用， 不会有废液或废渣的丢弃情况，其充分挖掘血液的潜在价值，提高了牛血液的利用率。
[0088]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，其包括:血液分离步骤:取新鲜牛血液，加入抗凝剂，分离成血细胞和血浆；血细胞提取步骤:所述血细胞经破碎、变性、压滤、纯化处理后分别得到超氧化物歧化 酶、血红素以及血球蛋白粉至少其中之一；血浆提取步骤:所述血浆经压滤、纯化后分别得到纤维蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛 IgM、牛纤维连接蛋白、牛IgG以及血浆蛋白粉至少其中之一。2.根据权利要求1所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，所述血细胞提取 步骤包括超氧化物歧化酶提取步骤、血红素提取步骤和血球蛋白粉提取步骤至少其中之 一，其中所述超氧化物歧化酶提取步骤是用超声波破碎所述血细胞，得到血细胞破碎液，往所 述血细胞破碎液中加入氯化铜和氯化锌，经热变性处理后得到血细胞变性液，压滤所述血 细胞变性液，收集第一滤液和第一滤渣，用阴离子交换层析纯化所述第一滤液，得到所述超 氧化物歧化酶；所述血红素提取步骤是用水溶解所述第一滤渣，调节pH至1.8?2.2，加入羧甲基纤维 素钠，得到第一滤渣溶解液，压滤所述第一滤渣溶解液，收集第二滤液和第二滤渣，洗涤所 述第二滤渣，得到所述血红素；所述血球蛋白粉提取步骤是喷雾干燥洗涤所述第二滤渣收集的洗涤液和所述第二滤 液的混合液，得到所述血球蛋白粉。3.根据权利要求2所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，按在所述血细胞 破碎液中的终浓度分别为0.48?0.52 %和0.28?0.32 %的量加入所述氯化铜和所述氯化锌。4.根据权利要求2所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，所述热变形处理 为在72?77 °C条件下热处理所述血细胞破碎液30?35min。5.根据权利要求2所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，所述血浆提取步 骤包括纤维蛋白原提取步骤、凝血酶原提取步骤、凝血酶提取步骤、牛IgM和牛纤维连接蛋 白提取步骤、牛IgG提取步骤以及血浆蛋白粉提取步骤至少其中之一，其中所述纤维蛋白原提取步骤是用浓度为〇.85?0.9%的氯化钠溶液稀释所述血浆，得到 血浆稀释液，压滤所述血浆稀释液，收集第三滤液和第三滤渣，洗涤所述第三滤渣，得到所 述纤维蛋白原；所述凝血酶原提取步骤是往所述第三滤液中加入草酸钾和氯化钡，搅拌18?20min，再 压滤，收集第四滤液和第四滤渣，用PH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸盐缓冲液溶解所述第 四滤渣，得到第四滤渣溶解液，用阴离子交换层析纯化所述第四滤渣溶解液，得到所述凝血 酶原；所述凝血酶提取步骤是向所述凝血酶原加入氯化钙进行激活处理，得到激活后凝血酶 原溶液，再层析所述激活后凝血酶原溶液，得到所述凝血酶；所述牛IgM和牛纤维连接蛋白提取步骤是往所述第三滤液中加入终浓度为18?22%硫 酸铵，搅拌18?20min，再压滤所述第三滤液，收集第五滤液和第五滤渣，用pH6.8?7.2的 0.008?0.012M醋酸盐缓冲液溶解所述第五滤渣，得到第五滤渣溶解液，然后用阳离子交换 层析纯化所述第五滤渣溶解液，得到所述牛IgM和所述牛纤维连接蛋白；所述牛IgG提取步骤是往所述第三滤液中加入终浓度为33?37%硫酸铵，搅拌18? 22min，压滤所述三滤液，收集第六滤液和第六滤渣，用pH6.8?7.2的0.008?0.012M的醋酸 盐溶液溶解所述第六滤渣，得到第六滤渣溶解液，用阳离子交换层析纯化所述第六滤渣溶 解液，得到所述牛IgG;所述血浆蛋白粉提取步骤是喷雾干燥收集得到的所述第三滤液、所述第四滤液、所述 第五滤液和所述第六滤液的混合液，得到所述血浆蛋白粉。6.根据权利要求5所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，按体积比为4? 6:1的量往所述血浆中加入所述氯化钠溶液。7.根据权利要求5所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，按在所述第三滤 液中的终浓度分别为0.08?0.12%和0.18?0.22%的量分别加入所述草酸钾和所述氯化 钡。8.根据权利要求5所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，按在所述第三滤 液中的终浓度为20 %的量加入硫酸铵。9.根据权利要求5所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，在所述第三滤液 中的终浓度为35 %的量加入硫酸铵。10.根据权利要求1所述的从牛血中提取多种蛋白的方法，其特征在于，所述抗凝剂为 朽1檬酸三钠，按在所述血液中的终浓度为3.6?4%的量加入所述梓檬酸三钠。
【文档编号】C07K14/47GK105950576SQ201610364078
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月26日
【发明人】贾芳苗, 熊川, 邓飞
【申请人】成都远睿生物技术有限公司