一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针及试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针及试剂盒。所述引物和探针的序列如SEQ ID NO:1?4，和SEQ ID NO:5?8，和SEQ ID NO:9?12，和SEQ ID NO:13?16，和SEQ ID NO:17?20，和SEQ ID NO:21?24，和SEQ ID NO:25?28，和SEQ ID NO:29?32，和SEQ ID NO:33?36；其中SEQ ID NO:3?4,7?8,11?12,15?16,19?20，23?24,27?28,31?32,35?36的5’端和3’端分别连接不同荧光标记。还公开了利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法。了解客户皮肤过敏的内因和外因，为其提供个性化美容健康解决方案，使抗过敏美容产品效果最大化。
【专利说明】
一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针及试剂盒
技术领域
[0001] 本发明涉及美容领域，尤其涉及一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针及试 剂盒。
【背景技术】
[0002] SNP(单核苷酸多态性)是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失 和插入，是一种最常见的遗传标记，在人群中的携带频率大于1%，广泛应用于人类疾病诊 断、药物个体化使用、生物学基础研究等领域。随着对不同SNP位点研究的深入，通过多个 SNP位点的组合检测以及后续的数据分析，可以针对不同人群的基因信息制定个性化健康 解决方案。
[0003] 人体的皮肤外观受到内因和外因的影响，外因包括紫外线、环境污染、不当美容产 品使用等，内因则体现在与皮肤相关的生化变化，包括蛋白活性、荷尔蒙水平等，这些变化 大多是由遗传基因决定的。现阶段的皮肤保养方法多是根据外因采取的，如使用防晒霜、保 湿剂等，然而这些无针对性的保养方法大多效果甚微，治标不治本。随着生活水平的提高， 对于提高皮肤光滑和紧固度的需求越来越大，结合内外因进行针对性美容护肤将比传统方 法更具优势，因此准确了解内因显得至关重要。
[0004] 皮肤的过敏反应受到多个基因影响，每个基因又存在多个SNP位点，这些位点会影 响相关基因的酶活性。通过相关基因的SNP位点检测可以评测不同个体的皮肤抗过敏能力， 还可以评估相关美容产品是否适用于检测者，使产品效果达到最大化，在此基础上结合日 常生活习惯调整，使美容效果进一步提升。对于这种检测方法，选取准确的位点组合以及后 续数据分析尤为重要。国内外已有专利报道利用SNP位点基因型判断美容产品适用皮肤类 型，但仍存在着易感SNP位点选取不准确、检测结果未能量化综合分析问题。此外，当前未见 结合不同基因 SNP位点组合检测和量化算法评估皮肤抗过敏能力的报道。
[0005] 中国实用新型专利201320009798.7公开了一种基因芯片，利用该基因芯片检测美 白和老化相关基因 SNP位点，美白基因的SNP位点包括SLC45A2(re35391 )、KITLG (rs642742)、ASIP(rsl015362)、TYR(rsl042602)、0CA2(rsl800414)、DCT(rs2031526)、MClR (rs885479)，老化基因的SNP包括MMPl(rsl799750)、TIMPl(rs4898)、SIRT6(rsl07251)、 S0D2(rs4880)、NQ01(rsl800566)、TNFA(rsl800629)、EPHX(rsl051740)，但该专利采用的基 因芯片方法较繁琐，难以适用大量检测。中国发明专利申请201180056031.3筛选到了一组 与皮肤老化相关的基因（LPL、ADIP0Q、PLN等），并根据该组基因筛选到一种抗老化新材料， 该专利申请中未提及基因相关SNP位点。中国专利申请201080044917.1提供了一种利用天 然反义多核苷酸或化合物调控FLG基因表达，从而达到预防或治疗与FLG相关的疾病。
[0006] 美国专利US200812286033通过单萜类物质诱导相关基因表达以达到改善皱纹的 效果。美国专利US200912512368通过含有异戊烯异黄酮的化妆品诱导ELN和C0L3A1基因的 表达，达到了改善皮肤外观的效果。美国专利US201514618080和US201313932565通过在皮 肤过敏位置使用朝鲜蓟提取物和橄榄油提取物，使包括ELN和C0L3A1在内的相关基因受到 调控上调表达，从而达到改善过敏皮肤的功效。
[0007] 以上专利/专利申请均利用外来物质调控体内基因的表达，但每个个体的基因中 却存在差异SNP位点，这种方法难以达到个性化保养或治疗。英国专利GB20110021917检测 了与美容产品成分生物学途径相关的靶基因 SNP位点，进而判断该产品是否适用于使用者， 该专利涉及的 SNP 位点有 MMP-l(rsl799750)、NQ01(rsl800566)、GSTPl(rsl695)、hGPXl (rsl0504)〇
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针。
[0009] 为实现上述目的，本发明提供一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针，其特 征在于，所述序列如SEQIDN0:1-4，和SEQIDN0:5-8，和SEQIDN0:9-12，和SEQIDN0: 13-16jPSEQIDN0:17-20jPSEQIDN0:21-24jPSEQIDN0:25-28jPSEQIDN0:29-32,和SEQ ID N0:33-36;其中SEQ ID ， 35-36的5 ' 端和 3 ' 端分别 连接不同荧光标记。
[0010] 本发明提供一种用于评估皮肤抗过敏情况的试剂盒，其特征在于，含有所述的引 物和探针。
[0011] 本发明还提供一种利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在 于，使用所述引物和探针，或所述的试剂盒。
[0012] 进一步，步骤为：
[0013] 1)使用所述引物和探针或所述试剂盒对客户进行SNP位点检测；
[0014] 2)根据易感SNP位点组合计算出客户的皮肤抗过敏能力值;所述易感SNP位点组合 为ΤΜΕΜ232 rs7701890、TMEM232 rs100 67777、RTELl-TNFRSF6B rs6010620、FLG-ASl rs3126085、IL-13 rsl800925、IL-13 rs20541、IL-13 rs848、TNFA rsl800629、TNFAIP3 rs2230926；
[0015] 3)结合1)的SNP位点检测结果及2)的皮肤抗过敏能力值，进行结果判断。
[0016]进一步，所述步骤1)为，
[0017] 提取客户的DNA样本；
[0018] 采用所述引物和探针或所述试剂盒进行PCR扩增;优选的，PCR扩增的反应程序为 50Γ2π?η，95Γ?0π?η，95Γ?58、60-(：1π?η 循环 40 次。
[0019]进一步，所述步骤2)为，
[0020] 根据已知易感SNP位点组合的各个位点基因型的致病风险比值比计算出个体综合 风险比值比〇R(C)，计算方程式为：
[0021] 通过已知中国人群不同年龄段皮肤过敏产生平均风险比值odds(D)，计算出检测 个体的皮肤过敏产生风险值比值〇dds(X)，计算式为odds(X) =0R(C) Xodds(D);
[0022] 计算出综合风险值：
[0023]根据已知正常基因型人群风险值F(N)，计算出个体皮肤抗过敏能力值^
[0024]进一步，所述步骤3)的结果判断为，
[0025] 1)若个体皮肤抗过敏能力值低于100%，则表示该个体的皮肤抗过敏能力低于该 年龄段人群的正常值，抗过敏能力差，属于易过敏的体质;值越低，抗过敏能力越差；
[0026] 2)若个体皮肤抗过敏能力值等于100%，则表示该个体的皮肤抗过敏能力与该年 龄段人群的正常值一样，抗过敏能力一般；
[0027] 3)若个体皮肤抗过敏能力值高于100%，则表示该个体的皮肤抗过敏能力高于该 年龄段人群的正常值，抗过敏能力较好，属于不易过敏的体质;值越高，抗过敏能力越好；
[0028]同时；
[0029] 若基因 TMEM232的SNP位点rs7701890为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮 炎;若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型；
[0030] 若基因 TMEM232的SNP位点rs100 67777为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮 炎;若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型；
[0031] 若基因 RTEL1-TNFRSF6B的SNP位点rs6010620为A/G，表明携带杂合突变，容易得过 敏性皮炎;若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型； [0032] 若基因 FLG-AS1的SNP位点rs3126085为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮 炎;若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型；
[0033] 若基因 IL-13的SNP位点rsl800925为C/T，表明携带杂合突变，皮肤湿疹风险更高； 若为T/T，表明携带纯合突变，皮肤湿疹风险更高;若为C/C，则为正常基因型；
[0034] 若基因 IL-13的SNP位点rs20541为A/G，表明携带杂合突变，哮喘、牛皮藓、过敏性 鼻炎风险更高;若为G/G，表明携带纯合突变，但风险正常;若为A/A，则为正常基因型，但由 于携带A，哮喘、牛皮藓、过敏性鼻炎风险更高；
[0035]若基因 IL-13的SNP位点rs848为A/C，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎风险更高； 若为C/C，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎风险更高;若为A/A，则为正常基因型；
[0036] 若基因 TNFA的SNP位点rsl800629为A/A，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎、哮喘 风险更高;若为A/G，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎、哮喘风险更高;若为G/G，则为正常 基因型；
[0037] 若基因 TNFAIP3的SNP位点rs2230926为G/T，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎风 险更高;若为G/G，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎风险更高;若为T/T，则为正常基因型。 [0038] 本发明（1)筛选出一组可经过多篇文献验证，且分子机制清晰，可用于全面准确评 估皮肤抗过敏能力的SNP位点组合；（2)采用特异性强、灵敏度高的TaqMan-MGB探针检测方 法进行检测，可同时检测多个样本；（3)通过算法精确量化过敏风险以评估皮肤抗过敏能 力，为检测者提供个性化的皮肤抗过敏方案。
[0039] 本发明采用的技术方案为:结合分子机制研究、文献检索和临床数据筛选，得到一 组皮肤抗过敏相关的易感SNP位点组合，所述组合位点分别为TMEM232(rs7701890、 rs100 67777)、RTEL卜TNFRSF6B(rs6010620)、FLG-ASl(rs3126085)、IL-13(rsl800925、 rs20541、rs848)、TNFA(rsl800629)、TNFAIP3(rs2230926)，所述组合的位点信息见表1，该 组合位点可以准确评估不同个体的皮肤抗过敏能力。
[0040] 表1易感SNP位点信息表
[0043] 为了检测所述位点，根据引物和荧光探针最优原则设计检测所需的引物和探针， 所述引物及荧光探针如下(下划线为SNP位点）：
[0044] TMEM232(rs7701890)引物及荧光探针序列：
[0089] 所述位点检测方法具体步骤如下：
[0090] 1、人体唾液样本采集。采用无创唾液自动流出采集方式，在唾液采集前30min需用 饮用水清理口腔中杂物，采集2mL唾液存放于唾液保存液以供检测。
[0091] 2、人体全基因组DNA提取。采用碘化钾法，参考具体步骤为：取0 . lmL唾液于1.5mL 离心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反复吹打，lOOOOrpm离心5min;去上清，沉淀加入 50yL 5mol/LKI溶液，震荡混匀，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震荡30s，lOOOOrpm离心5min;取200yL上清，加入200yL异丙醇，混勾，lOOOOrpm离心 5min;去上清，沉淀加入lmL无水乙醇洗涤，lOOOOrpm离心5min;弃无水乙醇，沉淀在超净台 中吹干，加50yL TE缓冲液溶解，-20°C保存备用。
[0092] 3、PCR反应体系及反应程序。10yL反应体系含TaQMgin?Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司）5yL、DNA模板lyL、荧光探针(每个SNP 位点的检测对应探针混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液(每个SNP位点的检测对应引物混 合在一起）1.5yL、ddH 20 2.5yL。反应程序为501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循环 40次。检测仪器为StepOnePlus实时焚光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国应用生物技 术有限公司）。
[0093] 4、实验结果分析。米用StepOnePlus?Software v2.3(Applied Biosystems，美国 应用生物技术有限公司)进行分析，根据不同的荧光信号，得出对应SNP位点的基因型。
[0094]皮肤抗过敏能力量化方法如下：
[0095] 1、皮肤过敏风险比值比计算。已知检测所得的各个位点基因型的过敏风险比值比 为分别为〇Ri、〇R2"_〇Rm(文献查询得知，结果见表3)，可以计算出个体综合风险比值比0R (C),计筧方稈式如下：
[0097] 2、通过步骤1计算出的个体综合风险比值比0R(C)，通过文献或其它统计途径可以 获得中国人群皮肤过敏风险平均风险比值odds(D)(已知中国人群不同年龄段皮肤过敏产 生平均风险比值〇dds(D)分别为：20-35岁：0.43，36-45岁：0.45，46-55岁：0.45)，通过比值 比计算公式可以计算出检测个体的过敏风险值比值〇dds(X)，计算方程式如下：
[0099] 3、通过步骤2计算出的个体的过敏风险值比值odds(X)，即可以通过风险值推算公 式可以计算出综合风险值F(X)，计算方程式如下：
[0101] 4、通过步骤3计算得到的综合风险值可以评估不同个体的皮肤抗过敏能力，已知 正常基因型人群风险值F(N)(已知正常基因型人群风险值F(N)分别为：20-35岁：30%，36_ 45岁：31%，46-55岁：31%)，可以计算出个体皮肤抗过敏能力值V，计算方程式如下：
[0103]检测结果个性化分析及解决方案：
[0104]根据抗过敏能力量化计算结果，结合相关位点的功能及分子机制，判断皮肤过敏 风险，评估检测者可以使用含有何种成分的美容产品，并为其调整有利于护肤的日常生活 饮食习惯。相关基因的分子机制如下：如果TMEM2 3 2、RTEL1-TNFRSF6B、FLG-AS1携带突变，则 皮肤容易发生过敏性皮炎；IL-13携带突变，容易造成湿疹、哮喘、牛皮藓关节炎等症状； TNFA携带突变，会增加哮喘、牛皮藓等风险;TNFAIP3携带突变，增加类风险关节炎、系统性 红斑狼疮风险。
[0105] 有益效果：
[0106] 可以充分了解皮肤过敏的内因和外因，为用户提供个性化美容健康解决方案，使 美容产品使用效果最大化。此外，还可以为检测者调整有利于护肤的日常生活饮食习惯。
【具体实施方式】
[0107] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在旨在用于解释本发明，而不 能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描 述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以 通过市购获得的常规产品。
[0108] 实施例1:引物和探针设计
[0109] 1、设计并合成以下引物和探针，合成单位:Applied Biosystems，美国应用生物技 术有限公司。
[0110] TMEM232(rs7701890)引物及荧光探针序列：
[0111] 正向引物TGTTGGCTTTAATTGTTCAGA SEQ ID N0:1；
[0112] 反向引物TGCCACAGAAATATAAGGATCA SEQ ID NO:2;
[0113] 荧光探针FAM-ATTACTATAT4ATTTAGACTTG-MGB SEQ ID NO:3;
[0114] 荧光探针VIC-ATTACTATATgATTTAGACTTG-MGB SEQ ID NO:4;
[0115] TMEM232(rs100 67777)引物及荧光探针序列：
[0116] 正向引物ACCTTTTCAAAACACAAGCCT SEQ ID NO:5;
[0117] 反向引物GCCTCTATGCTTATGTCAGTCC SEQ ID NO:6;
[0118] 荧光探针FAM-AGACTCTAC4CTTCTTTAAT-MGB SEQ ID NO:7;
[0119] 荧光探针VIC-AGACTCTACgCTTCTTTAAT-MGB SEQ ID NO:8;
[0120] RTELl-TNFRSF6B(rs6010620)引物及荧光探针序列：
[0121] 正向引物CCAGCCTAGAGCTAGAAACGG SEQ ID NO:9;
[0122] 反向引物GCTGCTCCTCTCAACATCTCA SEQ ID NO: 10；
[0123] 荧光探针FAM-CCTGGGAGGAGC4CCTGCTT-MGB SEQ ID NO: 11；
[0124] 荧光探针VIC-CCTGGGAGGAGCgCCTGCTT-MGB SEQ ID NO: 12；
[0125] FLG-ASl(rs3126085)引物及荧光探针序列：
[0126] 正向引物TCTGTCTTTGGCTATATGAGT SEQ ID NO: 13；
[0127] 反向引物TAGTTGATGCCAAGATTCCA SEQ ID NO: 14；
[0128] 荧光探针FAM-CTTTATGTAAGT4ACGACTT-MGB SEQ ID NO: 15；
[0129] 荧光探针VIC-CTTTATGTAAGTgACGACTT-MGB SEQ ID NO: 16；
[0130] IL-13(rsl800925)引物及荧光探针序列：
[0131] 正向引物TGACATCAACACCCAACAGGC SEQ ID NO: 17；
[0132] 反向引物AGTCTCTGCAGGATCAACCC SEQ ID NO: 18；
[0133] 荧光探针FAM-CTTCTAGGAAAAgGAGGGAAGA-MGB SEQ ID NO: 19；
[0134] 荧光探针VIC-CTTCTAGGAAAAIGAGGGAAGA-MGB SEQ ID NO:20；
[0135] IL-13(rs20541)引物及荧光探针序列：
[0136] 正向引物AATTTTACCCCTCCCTAACCC SEQ ID NO:21；
[0137] 反向引物GAAGCTGGCTGAATATCCAT SEQ ID NO:22；
[0138] 荧光探针FAM-CAGTTGAAC2GAGCCCAGATCC-MGB SEQ ID NO:23；
[0139] 荧光探针VIC-CAGTTGAAq；GAGCCCAGATCC-MGB SEQ ID NO:24；
[0140] IL-13(rs848)引物及荧光探针序列：
[0141] 正向引物ACCCCAGTGAGGTAGCAGAA SEQ ID NO:25；
[0142] 反向引物TGAGTGTGTTTGTCACCGTT SEQ ID NO:26；
[0143] 荧光探针FAM-CCAGGGACTCCTGGgGTCCACTGC-MGB SEQ ID NO:27；
[0144] 荧光探针VIC-CCAGGGACTCCTGGIGTCCACTGC-MGB SEQ ID NO:28；
[0145] TNFA(rsl800629)引物及荧光探针序列：
[0146] 正向引物CCCCAAAAGAAATGGAGGCAAT SEQ ID NO:29；
[0147] 反向引物AAGGATACCCCTCACACTCCC SEQ ID NO:30；
[0148] 荧光探针FAM-TTGAGGGGCATG4GGACGG-MGB SEQ ID NO:31；
[0149] 荧光探针VIC-TTGAGGGGCATGgGGACGG-MGB SEQ ID NO:32；
[0150] TNFAIP3(rs2230926)引物及荧光探针序列：
[0151] 正向引物TTGCTGGGTCTTACATGCAGA SEQ ID NO:33；
[0152] 反向引物GTATCATAGCAAAGCCCCGTT SEQ ID NO:34；
[0153] 荧光探针FAM-AAGGCGCTGTgCAGCACGCTC-MGB SEQ ID NO:35；
[0154] 荧光探针VIC-AAGGCGCTGTICAGCACGCTC-MGB SEQ ID NO:36；
[0155] 2、SNP位点检测
[0156] 1、样本采集。本实施例中的检测样本采用人体唾液，在唾液采集前30min需用饮用 水清理口腔中杂物，采集2mL唾液存放于唾液保存液以供检测。
[0157] 2、人体全基因组DNA提取。采用碘化钾法，参考具体步骤为：取0 . lmL唾液于1.5mL 离心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反复吹打，lOOOOrpm离心5min;去上清，沉淀加入 50yL5mol/L KI溶液，震荡混匀，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震荡30s，lOOOOrpm离心5min;取200yL上清，加入200yL异丙醇，混勾，lOOOOrpm离心 5min;去上清，沉淀加入lmL无水乙醇洗涤，lOOOOrpm离心5min;弃无水乙醇，沉淀在超净台 中吹干，加50yL TE缓冲液溶解，-20°C保存备用。
[0158] 3、反应体系及反应程序10yL反应体系含TaqMan?Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美国应用生物技术有限公司）5yL、DNA模板lyL、荧光探针(每个SNP 位点的检测对应探针混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液(每个SNP位点的检测对应引物混 合在一起）1.5yL、ddH 20 2.5yL。反应程序为501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循环 40次。检测仪器为StepOnePlus实时焚光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国应用生物技 术有限公司）。
[0159] 4、检测程序运行结束后，采用 StepOnePl us?Sof twar e v2 · 3 (App 1 i ed Biosystems，美国应用生物技术有限公司）对检测结果进行分析，得出对应SNP的基因型（见 表2)。
[0160] 表2SNP位点检测结果表
[0162] 3、抗过敏能力量化评估及个性化解决方案
[0163] 1)、过敏综合风险值计算。通过文献查询得知，不同位点的过敏风险比值比如表3 所示。
[0164] 表3相关位点基因型的风险比值比(0R)表
[0166] (1)个体过敏综合风险比值比计算。不同位点的OR值如表3所示，则
[0167] (2)通过步骤（1)计算出个体综合风险比值比0R(C)，综合文献和调查数据得知中 国人群过敏性肤质的比值odds (D)约为0.43 (本实施例的检测样本属于该年龄段，故选择该 年龄段的数据），通过比值比计算公式可以计算出检测个体的皮肤过敏风险值比值odds(X) = 0R(C) Xodds(D) =4.19X0.43 = 1.76。
[0168] (3)通过步骤(2)计算出的检测个体过敏风险比值odds(X)，综合风险值
[0169] (4)已知正常基因型人群风险值F(N)为30%，可以计算出皮肤抗过敏能力值
[0170] 2)、检测结果综合分析。该检测者的皮肤抗过敏能力值为47%，皮肤遗传抗过敏能 力较差。同时结合相关基因的分子机制，由表2可知该检测个体中的RTEL1-TNFRSF6B携带易 感位点纯合突变，IL-13、TNFAIP3携带易感位点杂合突变，这些突变会影响相关蛋白活性， 受到外界因素刺激后容易发生过敏性皮炎、湿疹、哮喘等过敏反应。
[0171] 3)、个性化解决方案:多个相关基因的突变，使得该个体皮肤抗过敏能力较正常基 因型弱，皮肤易过敏，应慎重注意化妆品的选择。不宜使用磨砂膏、去死皮膏等，因为皮肤的 角质层薄和角质层损伤是造成敏感的主要原因，因而保养的首要原则就是维护角质层不受 伤害。不建议选择含有酒精和化学成分的化妆品，这些化妆品对于对于过敏性脆弱皮肤伤 害很大。日常生活中多吃含丰富维生素 C的蔬果，胡萝卜中的β-胡萝卜素能有效预防花粉过敏 症、过敏性皮炎等过敏反应;红枣中含有大量抗过敏物质一环磷酸腺苷，可阻止过敏反应的 发生，凡有过敏症状的患者，可以经常服用红枣;忌海鲜、烧烤、油炸、辛辣食品。
[0172] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨 的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种用于评估皮肤抗过敏情况的引物和探针，其特征在于，所述序列如SEQ ID NO: lUPSEQIDN0:5UPSEQIDN0:9-12jPSEQIDN0:13-16jPSEQIDN0:17-20jP SEQ ID NO: 21-24,和SEQ ID NO: 25-28,和SEQ ID NO: 29-32,和SEQ ID NO: 33-36;其中SEQ ID NO: 3-4，7-8，11-12，15-16，19-20，23-24，27-28，31-32，35-36的5 ' 端和3 ' 端分别连接不 同焚光标记。2. -种用于评估皮肤抗过敏情况的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物和 探针。3. -种利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在于，使用权利要求1 的引物和探针，或使用权利要求2的试剂盒。4. 权利要求3所述利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在于，步骤 为： 1) 使用权利要求1的引物和探针或权利要求2的试剂盒对客户进行SNP位点检测； 2) 根据易感SNP位点组合计算出客户的皮肤抗过敏能力值；所述易感SNP位点组合为 TMEM232 rs7701890、TMEM232 rs100 67777、RTEL卜TNFRSF6B rs6010620、FLG-ASl rs3126085、IL-13 rsl800925、IL-13 rs20541、IL-13 rs848、TNFA rsl800629、TNFAIP3 rs2230926； 3) 结合1)的SNP位点检测结果及2)的皮肤抗过敏能力值，进行结果判断。5. 权利要求4所述利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在于，所述 步骤1)为， 提取客户的DNA样本； 采用权利要求1所述引物和探针或权利要求2所述试剂盒进行PCR扩增;优选的，PCR扩 增的反应程序为 50°C2min，95°C10min，95°C15s、60°Clmin 循环 40 次。6. 权利要求4所述利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在于，所述 步骤2)为， 根据已知易感SNP位点组合的各个位点基因型的致病风险比值比计算出个体综合风险 比值比〇R(C)，计算方程式为：通过已知中国人群不同年龄段皮肤过敏严生平均风险比值〇dds(D)，计算出检测个体 的皮肤过敏产生风险值比值odds(X)，计算式为odds(X) =0R(C) X odds(D);计算出综合风 险值根据已知正常基因型人群风险值F(N)，计算出个体皮肤抗过敏能力.7. 权利要求4所述利用基因检测辅助客户选择正确美容方法的方法，其特征在于，所述 步骤3)的结果判断为， 1) 若个体皮肤抗过敏能力值低于100 %，则表示该个体的皮肤抗过敏能力低于该年龄 段人群的正常值，抗过敏能力差，属于易过敏的体质;值越低，抗过敏能力越差； 2) 若个体皮肤抗过敏能力值等于100 %，则表示该个体的皮肤抗过敏能力与该年龄段 人群的正常值一样，抗过敏能力一般； 3) 若个体皮肤抗过敏能力值高于100 %，则表示该个体的皮肤抗过敏能力高于该年龄 段人群的正常值，抗过敏能力较好，属于不易过敏的体质;值越高，抗过敏能力越好； 同时； 若基因 TMEM232的SNP位点rs7701890为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮炎;若 为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型； 若基因 TMEM232的SNP位点rs100 67777为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮炎； 若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型； 若基因 RTEL1-TNFRSF6B的SNP位点rs6010620为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性 皮炎;若为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型； 若基因 FLG-AS1的SNP位点rs3126085为A/G，表明携带杂合突变，容易得过敏性皮炎;若 为G/G，表明携带纯合突变，容易得过敏性皮炎;若为A/A，则为正常基因型； 若基因 IL-13的SNP位点rsl800925为C/T，表明携带杂合突变，皮肤湿疹风险更高;若为 T/T，表明携带纯合突变，皮肤湿疹风险更高;若为C/C，则为正常基因型； 若基因 IL-13的SNP位点rs20541为A/G，表明携带杂合突变，哮喘、牛皮藓、过敏性鼻炎 风险更高;若为G/G，表明携带纯合突变，但风险正常;若为A/A，则为正常基因型，但由于携 带A，哮喘、牛皮藓、过敏性鼻炎风险更高； 若基因 IL-13的SNP位点rs848为A/C，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎风险更高;若为 C/C，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎风险更高;若为A/A，则为正常基因型； 若基因 TNFA的SNP位点rsl800629为A/A，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎、哮喘风险 更高;若为A/G，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎、哮喘风险更高;若为G/G，则为正常基因 型； 若基因 TNFAIP3的SNP位点rs2230926为G/T，表明携带杂合突变，牛皮藓关节炎风险更 高;若为G/G，表明携带纯合突变，牛皮藓关节炎风险更高;若为T/T，则为正常基因型。
【文档编号】C12N15/11GK105950738SQ201610367539
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】纪志梁, 王毛阳, 杨志云, 刘晓瑜
【申请人】福建爱我健康生物科技有限公司