用于结合血小板特异性糖蛋白iib/iiia的金属螯合物的制作方法

用于结合血小板特异性糖蛋白iib/iiia的金属螯合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及与糖蛋白IIb/IIIa结合并可用于血栓的诊断成像，特别是磁共振成像的化合物。所公开的化合物能够与糖蛋白IIb/IIIa受体结合，兼具足够的成像灵敏度。
【专利说明】用于结合血小板特异性糖蛋白I IB/I I ΙΑ的金属螯合物 发明领域
[0001] 本发明涉及专利权利要求中表征的主题，即可用于血栓的磁共振成像的金属螯合 物及其用于使哺乳动物体内的血栓成像的用途。更具体地，本发明涉及用于使血栓成像的 用顺磁性螯合物标记的高亲合性特异性结合糖蛋白Ilb/IIla诘抗剂。
【背景技术】
[0002] 1.介绍 心肌梗塞(MI)、中风、短暂性脑缺血发作(TIA)和肺栓塞(PE)是全世界范围发病率和死 亡率的主要原因。这些危及生命的临床事件主要是由血栓所引起的，血栓可能位于遍及全 身的不同血管并且可具有不同的尺寸和组成。中风或TIA的起因可能例如为心脏左心房 (LA)中的血栓或者心脏与脑之间的大动脉之一(例如颈动脉）中的血栓。在PE的情况下，通 常位于小腿中的静脉血栓形成可能是病因。
[0003] 在血栓生长中，血小板凝聚的最终常见步骤的特征在于活化的糖蛋白Ilb/IIIa (GPIIb/II la)与血液纤维蛋白原结合，导致在血小板内交联。糖蛋白Ilb/II la抑制剂的设 计和开发（Scarborough R.M·，Gretler D.D·，2000，妨，3453-3473)已 经在抗血小板和抗血栓活性方面的药物学研究中引起极大关注。
[0004] 但是，健康护理专业人员不仅需要在急性护理设置中防止血栓形成的化合物，而 且需要令人满意的使血栓成像的方法。
[0005] 更具体地，血栓成像对于临床应用（例如溶栓干预）而言非常重要，其中血栓形成 部位的确定对监测治疗效果是至关重要的。
[0006] 因此血栓成像有助于避免不必要的预防性应用和随之而来的危险的抗凝血剂治 疗(例如由于凝血能力降低而严重失血）。
[0007] 可受益于这种诊断程序的患者人数众多。根据American Heart Association的 "Heart disease and Stroke Statistics-2010 Update"，仅美国就有17.6百万人受冠心 病困扰。每年估计有785,000名美国人将患有首发的冠心病发作，并且约有470,000人将患 有复发性发作。每年约有795，000名患者经历首发或复发性中风。这些患者中约610，000人 为首次发作。所有中风之中87%为缺血性中风，其中大部分是由于血栓栓塞病因导致 (Lloyd-Jones, D.等，Ci_rct/_/aiio/3, 2010，(7):第e46_215页）。在美国，短暂性脑 缺血发作(TIA)的发生率已经估计为每年大约200,000至500,000人，2.3%的人群患病率，转 换为约5百万人(Easton, J.D.等，Stroke, 2009，你（6):第2276-2293页）。患有TIA的 个体具有3.0%至17.3%的90天中风风险和18.8%的10年中风风险。经合并10年中风、心肌梗 塞或血管性死亡风险甚至达到42.8%(Clark, T.G·，M.F.G. Murphy和P.M. Rothwell, Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry, 2003. 74 (5):第577-580页）〇
[0008] 成像是识别血栓的最前沿。目前，血栓成像依赖于不同的模式，这取决于血管分布 区。颈动脉超声用于搜寻颈动脉血栓，经食道超声心动描记术(TEE)用于搜寻心腔凝块，超 声用于搜寻深静脉血栓形成，CT已经变成PE检测的黄金标准。
[0009] 2.现有技术，要解决的问题及其解决方案的描述 尽管有上述技术的成功，仍然强烈需要一种用于血栓检测和监测的成像方案:首先，仍 存在某些血管分布区不能成像。例如，即使尽最大努力来成像，但仍然有30%至40%的缺血性 中风是"成因不明的"，即病因不确定，或换言之仍令人遗憾地未能识别血栓栓塞的来源 (Guercini, F.等，Journal of Thrombosis and Hemostasis, 2008. 6 (4):第549-554 页）。成因不明的中风的潜在来源包括主动脉弓或颅内动脉中的动脉粥样硬化。主动脉弓或 其它主要血管中的斑块破裂(plaque rupture)据信是成因不明的中风的主要来源，并且用 常规方法很难检测。来自经食道超声心动描记术(TEE)研究的最新临床试验数据显示，虽然 溃疡型主动脉弓斑块与成因不明的中风有关，但是主动脉弓中存在增厚血管壁并不是缺血 性中风的先兆。血栓靶向的特异性成像方法对于在动脉粥样硬化斑块存在下识别凝块具有 重大潜力。
[0010] 另外，仍然强烈需要一种方法，其中使用单一模式来识别全身的血栓。例如，在TIA 或中风返诊(follow-up)中，目前需要多种检查来搜寻栓塞来源(Ciesienski，K.L.和P. Caravan, Curr Cardiovasc Imaging Rep., 2010. 4 (1):第77-84页）。
[0011] 糖蛋白 Ilb/IIIa抑制剂的治疗应用（Scarborough R.M. , Gretler D.D.,, CAeffi. 2000，妨，3453-3473)在过去已受到相当大的关注。同时，三种糖蛋白lib/ 111 a诘抗剂是市售的：重组抗体（阿昔单抗（Ab c i X i mab ))、环状七肽（依替巴肽 (Ept i f ibat i d))和合成的非肽抑制剂（替罗非班（Tirof iban ))。替罗非班（商标名 AGGRASTAT ? )属于磺酰胺类，并且是上述药物中唯一的合成小分子。Duggan等，1994，US 5， 292,756公开了作为治疗剂的磺酰胺纤维蛋白原受体拮抗剂，其用于预防和治疗由血栓形 成引起的疾病。
[0012]高度特异性非肽糖蛋白Ilb/IIIa诘抗剂已经描述在现有技术（Damiano等， 7?esea_rcA 2001 川4，113_126;Hoekstra, W.J.等，上 ifec/. CAe?·，1999， 4足5254-5265)中。已知这些化合物是GPIIb/IIla拮抗剂，有效用作具有抗血小板和抗血 栓活性的治疗剂（参见 W099/21832、W097/41102、W095/08536、W096/29309、W097/33869、 W09701/60813、US 6,515,130)。
[0013]迄今为止，只有少数出版物报道用于血栓成像的糖蛋白Ilb/IIIa特异性造影剂 ((3〇1181:抑8〖386111:)。1]3 5,508,020描述了放射性标记的肽，制造此类肽的方法及试剂盒， 以经由Tc-99m结合部分使哺乳动物体内用锝-99m标记的部位成像。SPECT示踪剂阿替塞得 (Apticide)(AcuTect ? )是一种满足血栓成像需要的方法。Apticide为Tc-99m标记的肽，其 与GPIIb/IIIa受体特异性结合。Dean和Lister-James描述了与活化血小板表面上的GPIIb/ Ilia受体特异性结合的肽(US 5,645,815;US 5,830,856和US 6,028,056)。作者展示了使 用Apticide检测深静脉血栓形成。但是，经锝标记的肽的非特异性结合和低信噪比是该方 法的缺点，导致血栓成像的分辨率低。US 2007/0189970描述了能够与糖蛋白Ilb/IIIa结合 的化合物。所公开的化合物用正电子发射同位素或nC标记。W02013/023795公开了用于与 GPIIb/IIIa受体结合的18F标记化合物，及其作为特别用于通过使用正电子发射断层成像 (PET)使血栓成像的诊断剂的用途。除了用于特异性血栓成像的核医学方法之外，US 2004/ 112839 A2和US 2006/0239926 A1中描述了可用于多种病理(特别是心血管、癌症相关和炎 性病理)诊断的磁共振成像用的特异性高弛豫效能化合物。K1 ink等(Arierioscier Kasc5io_/. 2010，30 (3): 403-410)描述了通过经由小的连接体（small linker)将环肽 (环[Cys-Arg-Gly-Asp-Cys])与Gd-DOTA(P975)偶联的钆基造影剂。P975的弛豫效能/钆为9 L/(mmol s)，对于血栓形成的MRI检测使用标准IL剂量（100 μπιο? Gd/kg体重）。
[0014] Uppal等如2010，41 (6): 1271-1277)描述了通过偶联纤维蛋白靶向肽 (EP2104R)的IL基造影剂。EP2104R的弛豫效能/IL为10·6 L/(mmol s)(Overoye-Chan等， J.Am. Chem. Soc. 2008，130，6025-6039)。对于血栓形成的MRI成像，使用30 μπιο? Gd/ kg体重的,L剂量（7.5 μπιο? EP2104R/kg bw) t〇
[00?5]虽然使革E向特异性结合剂（biovector)与顺磁性螯合物缔合的原理已经久为人 知，但是在临床试验中尚未测试特异性MRI造影剂。
[0016] 然而，靶向MRI方法存在一些难点。主要难点源于MRI技术的相对较低的灵敏度。由 于MRI的固有低灵敏度，要求造影剂在靶向部位处的局部浓度高，以产生可检测的MR对比。 对于体外和临床前动物试验，临床可用造影剂的检测限为约20 μπιο? Gd/L(Ciesienski等， Ckrr Ca_rc/iorasc 2010，4 (1)，77-84)，并且对于实用临床应用（robust clinical application)，为125 μπιο? Gd/L(Caravan等，Chem. Soc. Rev. , 2006, 35， 512-523)。
[0017] 满足该要求的一种方法是提高弛豫效能或每分子钆含量。
[0018] 在W02004/112839中，在第9页，1.10-15陈述"发明人反对优选将小分子用于特异 性医学成像产物的技术偏见。实际上，他们能够注意到所使用的HR螯合物的位阻并不损害 特异性产物对于其靶标的亲合性。尽管分子量为大约8至20 kD，但是该产物有效地到达其 特异性靶向部位。" 现已发现，尽管大的钆螯合物标记物有位阻，但是本发明的化合物对于GPIIbllla靶标 具有尚她豫效能和尚未合性。
[0019] 本发明的化合物的令人惊讶的技术效果是其显著降低剂量的潜力。
[0020] 这种令人惊讶的效果通过磁共振成像实验得以证实。本发明的高亲合性结合剂的 所用浓度显著低于(数量级)所用的临床标准剂量。所确立的造影剂的所用标准剂量为1〇〇 μπιο? Gd/kg体重，施用后2分钟导致约590 μπιο? Gd/L的平均血衆浓度（产品特征概要： Gadovi st 1.0 mmo1/ml 注身才溶液，Fachinformation Gadovi st ?'1,0 mmo1/ml Injektionsl6sung)。所述化合物的所用血衆体浓度(0.8 μπιο? Gd/L)在数量级上低于批准 的市售产品。
[0021] 使用极低剂量的令人惊讶的效果在猴子体内实验中得以证实。（总剂量:4 μπιο? Gd/kg体重等于0.5 μπιο?分子/kg bw)。
[0022] 与Klink等（100 μπιο? Gd/kg bw, Arie_riosc_/e_r ΓΑι?λ;/? Kasc 2010，30 (3): 403-410)和Uppal等（30ymol Gd/kg/bw, *Siro々e2010，41 (6): 1271-1277)所述 的最先进的临床前血栓特异性成像MRI实验相比，剂量低至少7.5倍直至25倍。

【发明内容】

[0023] 本发明涉及与糖蛋白Ilb/IIIa结合并可用于血栓的诊断成像，特别是磁共振成像 的化合物。所公开的化合物能够与糖蛋白Ilb/IIIa受体结合，兼具充足的成像灵敏度。 [0024]发明描述 根据第一个方面，本发明涵盖通式(I)的化合物：
其中： X表示选自以下的基团：

其中： R1表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； R2表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； R3表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； G表；^基团：
其中： R4表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基； R5表示氢、甲基、乙基或丙基； R6表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。 [0025]本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，取决于所需的各种取代基的位 置和性质。不对称碳原子可以以（R)或(S)构型存在，在单个不对称中心的情况下产生外消 旋混合物，在多个不对称中心的情况下产生非对映混合物。在某些情况下，由于围绕给定键 (例如连接所指定化合物的两个取代芳族环的中心键)的受限旋转，也可能存在不对称性。 [0026]优选的化合物是产生更理想的生物活性的那些化合物。本发明化合物的单独的、 纯净的或部分纯化的同分异构体和立体异构体或者外消旋或非对映混合物也包括在本发 明范围内。这种材料的纯化和分离可以通过本领域中已知的标准技术来实现。
[0027] 可以通过根据常规方法拆分外消旋混合物，例如通过使用光学活性酸或碱形成非 对映异构盐或者形成共价非对映异构体，来获得旋光异构体。合适的酸的实例为酒石酸，二 乙酰基酒石酸，二甲苯酰基酒石酸和樟脑磺酸。非对映异构体的混合物可以通过本领域中 已知的方法，例如通过色谱法或分步结晶法，基于它们的物理和/或化学差异分离成它们的 独立非对映异构体。光学活性碱或酸因此由分离的非对映异构盐释放。分离旋光异构体的 不同方法涉及在有或没有常规衍生化下使用手性色谱法(例如手性HPLC柱），其经过优选以 使对映异构体的分离最大化。合适的手性耶]^柱由〇3；[06 1制造，例如01；^306 100和 Chiracel 0J，以及许多其它手性HPLC柱，所有这些都可常规选择。还可使用有或没有衍生 化的酶分离。本发明的光学活性化合物同样可以由利用光学活性起始材料的手性合成获 得。
[0028] 为了限制彼此不同类型的异构体，参考IUPAC Rules Section E(Pure Appl Chem 45， 1卜30， 1976)〇
[0029] 本发明包括本发明化合物的所有可能的立体异构体，其为单一立体异构体的形 式，或为所述立体异构体(例如R-或S-异构体，或E-或Z-异构体）以任何比率的任何混合物 的形式。本发明化合物的单一立体异构体，例如单一对映异构体或单一非对映异构体的分 离可以由任何合适的现有技术方法，例如色谱法，特别是例如手性色谱法来实现。
[0030] 此外，本发明的化合物可以以N-氧化物的形式存在，其定义为本发明化合物的至 少一个氮被氧化。本发明包括所有此类可能的N-氧化物。
[0031] 本发明还涉及如本文所公开的化合物的有用形式，例如代谢物、水合物、溶剂合 物、前体药物、盐(特别是可药用盐)和共沉淀物。
[0032] 本发明的化合物可以以水合物或溶剂合物的形式存在，其中本发明的化合物含有 作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂(特别 是水）的量可以以化学计量比或非化学计量比存在。在化学计量的溶剂合物（例如水合物） 的情况下，可能分别是，半(hemi-)溶剂合物或水合物、半（semi-)溶剂合物或水合物、一溶 剂合物或水合物、倍半溶剂合物或水合物、二溶剂合物或水合物、三溶剂合物或水合物、四 溶剂合物或水合物、五溶剂合物或水合物等。本发明包括所有此类水合物或溶剂合物。
[0033] 此外，本发明的化合物可以以盐的形式存在。所述盐可以为任何盐，其可为有机或 无机加成盐，特别是药学中通常使用的任何可药用有机或无机加成盐。
[0034] 术语"可药用盐"是指本发明化合物的相对无毒的无机酸或有机酸加成盐。例如， 参见S. M. Berge等，"Pharmaceutical Salts"，J. Pharm. Sci. 1977,66,1-19。特别地， 中性盐的制造描述在US 5,560,903中。
[0035] 本发明化合物的合适的可药用盐可以为，例如，在链或环中带有氮原子的具有足 够碱性的本发明化合物的酸加成盐，例如与以下无机酸形成的酸加成盐:例如，盐酸、氢溴 酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸(bisulfuric)、磷酸或硝酸，或者与以下有机酸形成的酸加成盐： 例如，甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、 苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基）苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸 (digluC〇nic)、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊 酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯 磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、 琥珀酸、苹果酸、己二酸、海藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚糖酸 (glucoheptanoic)、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸(hemisulfuric)、或硫氰酸。
[0036] 此外，具有足够酸性的本发明化合物的另一种合适的可药用盐为碱金属盐，例如 钠盐或钾盐;碱土金属盐，例如钙盐或镁盐;铵盐或与提供生理学上可接受的阳离子的有机 碱形成的盐，例如与以下物质形成的盐:N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨 酸、二环己基胺、1，6_己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基 丙二醇、sovak碱、1-氨基_2,3,4_ 丁三醇。另外，碱性含氮基团可以用以下试剂季铵化:低级 烷基卤，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物;硫酸二烷基酯，例如硫酸二 甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基，月桂基，肉豆蔻基和 硬脂基氯化物、溴化物和碘化物;芳烷基卤化物，例如苄基和苯乙基溴化物等。
[0037]本领域技术人员还会认识到，所要求保护的化合物的酸加成盐可以通过多种已知 方法中的任一种使该化合物与合适的无机酸或有机酸反应来制备。或者，本发明的酸性化 合物的碱金属盐和碱土金属盐通过各种已知的方法使本发明化合物与合适的碱反应来制 备。
[0038]本发明包括本发明化合物的所有可能的盐，其可为单一盐的形式，或为所述盐以 任何比率的任何混合物的形式。
[0039] 在本文中，特别是在实验部分，对于本发明的中间体和实施例的合成，当作为与相 应碱或酸的盐的形式提及化合物时，如通过各制备和/或纯化方法获得的所述盐的形式的 精确化学计量组成在大多数情况下是未知的。
[0040] 除非另外指明，否则化学名称或结构式的后缀，例如"氢氯化物"、"三氟乙酸盐"、 "钠盐"、或"X HC1"、"X CF3C00H"、"X Na+"应理解为并非化学计量说明，而仅作为盐的形 式。
[0041] 这一点类似地适用于其中已经通过所述制备和/或纯化方法获得合成中间体或实 施例化合物或其盐，作为具有(如果限定)未知的化学计量组成的溶剂合物(例如水合物）的 情况。
[0042] 术语"血栓"描述所有类型的血块(静脉血栓和动脉血栓）。术语"血栓"还包括短语 如"血栓沉积物"和"血栓形成部位"的任何术语。血栓通常源于止血中的凝血步骤，或者在 病理学上源于不同的病因（如血栓性疾病）。在本研究中，包括所有含血小板的血栓，以及使 阻塞在血管树中某处的血栓(栓塞)流通。
[0043]在第二个方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：

其中： R1表示氢或甲基； R2表示氢或甲基； R3表示氢或甲基； G表；^基团：
其中： R4表示氢或甲基； R5表示氢或甲基； R6表示氢或甲基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。 [0044]在第三个方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：

其中基团： R1表;^氢； R2表;^氢； R3表;^氢； G表；^基团：
其中： R4表示氢或甲基； R5表示氢或甲基； R6表示氢； Μ表示,L; m表不1; η表示2、3或4的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。 [0045]在第四个方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：

其中： R1表;^氢； R2表;^氢； R3表;^氢； G表；^基团：
其中： R4表示氢或甲基； R5表示氢； R6表示氢； Μ表示,L; m表不1; η表示3或4; q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。
[0046]在第五个方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：

R3表不氢； G表不基团：
其中： R4表示甲基； R5表示氢； R6表示氢； Μ表示,L; m表示1; η表示4; q表不1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。
[0047] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：
[0048] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示选自以下的基团：
[0049] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示：
[0050] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： X表示：
[0051] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： Y表示：

[0052]在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0053] 在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0054] 在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0055] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R1表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
[0056] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R1表示氢或甲基。
[0057]在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： R1表不氢。
[0058]在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： R1表示甲基。
[0059] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R2表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
[0060] 在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： R2表示氢或甲基。
[0061] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R2表不氢。
[0062] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R2表示甲基。
[0063] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R3表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
[0064] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R3表示氢或甲基。
[0065] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R3表不氢。
[0066] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R3表示甲基。
[0067] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： G表不基团：
[0068] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R4表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基。
[0069] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R4表示氢或甲基。
[0070] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R4表不氢。
[0071] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R4表示甲基。
[0072] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R5表示氢、甲基、乙基或丙基。
[0073] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R5表示氢或甲基。
[0074] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R5表不氢。
[0075] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R5表示甲基。
[0076] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R6表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基。
[0077] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R6表示氢或甲基。
[0078] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R6表不氢。
[0079] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： R6表示甲基。
[0080] 在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： Μ表示,L 〇
[0081] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： m表示1或2。
[0082]在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： m表不1 〇
[0083]在另一方面，本发明涵盖在前通式（I)的化合物，其中： m表不2〇
[0084] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： η表示2、3、4、5或6的整数。
[0085] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： η表示2、3或4的整数。
[0086] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： η表示3或4。
[0087] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： η表不3〇
[0088] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： η表不4〇
[0089] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： q表示0或1。
[0090] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： q表不0。
[0091] 在另一方面，本发明涵盖在前通式(I)的化合物，其中： q表不1 〇
[0092] 在另一方面，本发明涵盖通式(I)的化合物，其选自： 2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(#-{2-[4,7，10-三（羧酸根合甲基 (carboxylatomethyl) )_1，4,7，10-四氮杂环十二烧-1-基]丙酰基}甘氨酰基）氨基]丙酰 基}氨基)丙酰基]氨基}-，(4-{3-[(5-{(1幻-2_羧基-1-[({(37?)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰 基]哌啶-3-基}羰基)氨基]乙基}吡啶-3-基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆。
[0093] 本发明的另一个方面为通式(I)的化合物用于诊断成像的用途。
[0094] 优选地，本发明化合物在诊断中的用途使用磁共振成像(MRI)来实施。
[0095] 本发明还包含用于制造诊断剂的通式（I)的化合物。
[0096] 本发明的另一个方面为通式(I)的化合物或其混合物用于制造诊断剂的用途。
[0097] 本发明的另一个方面为通式(I)的化合物或其混合物用于制造血栓成像用的诊断 剂的用途。
[0098] 使患者的体组织成像的方法，包括以下步骤:给患者施用有效量的在可药用载体 中的一种或多种通式（I)的化合物，并且对患者施以匪R断层成像(t omo gr aphy )。这种方法 描述在US 5,560,903中。
[0099] 为了制造诊断剂，例如向人类或动物受试者给药，可将通式(I)的化合物或混合物 方便地与药物载体或赋形剂一起配制。本发明的造影介质可以方便地包含药物配制助剂， 例如稳定剂、抗氧化剂、pH调节剂、调味剂等。根据本发明的诊断介质的制造同样以本领域 中已知的方法进行，参见US 5，560，903。它们可以经配制以用于肠胃外给药或经肠给药，或 者直接给药至体腔中。例如，肠胃外给药制剂包含剂量为ο. 0001 -5 mmo 1金属/kg体重，特别 是0.005-0.5 mmol金属/kg体重的根据本发明的式（I)化合物的无菌溶液或悬浮液。因此， 本发明的介质可以为生理学上可接受的载体介质，优选注射用水中的常规药物制剂，例如 溶液、悬浮液、分散体、糖浆等。当造影介质经配制以用于肠胃外给药时，将优选是等渗压或 过渗压的，并且接近pH 7.4。
[0100] 在另一方面，本发明涉及一种诊断患者的血栓栓塞性疾病，例如心肌梗塞、肺栓 塞，中风和短暂性脑缺血发作的方法。该方法包括a)将本发明的化合物给药至有此诊断需 要的人，用于如上文和在此所述的那样检测人体中的化合物，和b)优选通过磁共振成像 (MRI)，测量由于将该化合物给药至人而产生的信号。
[0101] 在另一方面，本发明涉及一种诊断患者的危及生命的疾病（例如主动脉动脉瘤 (aortic aneurism)、慢性血栓栓塞肺动脉高血压(CETPH)、心房纤颤和冠状动脉血栓形成） 的方法。该方法包括a)将本发明的化合物给药至有此诊断需要的人，用于如上文和在此所 述的那样检测人体中的化合物，和b)优选通过磁共振成像(MRI)，测量由于将该化合物给 药至人而产生的信号。
[0102] 在另一方面，本发明涉及一种诊断和健康监测心血管风险患者的方法。该方法包 括a)将本发明的化合物给药至有此诊断需要的人，用于如上文和在此所述的那样检测人 体中的化合物，和b)优选通过磁共振成像(MRI)，测量由于将该化合物给药至人而产生的 信号。
[0103] -般合成 根据本发明的化合物可以按照以下方案1和2来制备。
[0104]如下所述的方案和程序举例说明本发明的通式（I)的化合物的合成路线，且并非 意图加以限制。对于本领域技术人员而言明显的是如在方案中示例的转化顺序可以以各种 方式修改。因此方案中所示例的转化顺序并非意图限制。合适的保护基及其引入和裂解是 本领域技术人员公知的（参见例如T.W. Greene和P.G.M. Wuts Jroieciire fo-ot/jDs i/3 Orga/jic 第三版，Wiley 1999)。具体实施例描述在后续段落中。
[0105]如本文中以其自身或作为另一基团的一部分使用的，术语"胺-保护基"是已知的 或对于本领域技术人而言明显的，其选自但不限于一类保护基，即氨基甲酸酯、酰胺、酰亚 胺、N-烷基胺、N-芳基胺、亚胺、稀胺、硼烧、N-P保护基、N-亚横酰基，N-横酰基和N-甲硅烷 基，并且其选自但不限于教科书Greene and Wuts，Protecting groups in Organic Synthesis，第三版，第494-653页中所描述的那些，在此将其引入作为参考。"胺-保护基"优 选为节氧羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧基羰基(B0C)、9-荷甲氧基羰 基(FM0C)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)、对甲氧基苯基(PMP)、 三苯基甲基(Trityl)、甲氧基苯基二苯基甲基(MMT)或受保护的氨基为1，3_二氧代-1，3-二 氢-2H-异吲哚-2-基(邻苯二甲酰亚胺基)或叠氮基。
[0106]如在本文中以其自身或作为另一基团的一部分使用的，术语"羧基-保护基"是已 知的或对于本领域技术人而言明显的，其选自但不限于一类保护基，即酯、酰胺和酰肼，并 且其选自但不限于教科书Greene and Wuts，Protecting groups in Organic Synthesis， 第三版，第369-453页中描述的那些，在此将其引入作为参考。"羧基-保护基"优选为甲基、 乙基、丙基、丁基、叔丁基、烯丙基、苄基、4-甲氧基苄基或4-甲氧基苯基。
[0107] 一般地，GP Ilb/IIa结合剂部分的合成记载在以下文献中： 1) J. Med. Chem. 1999,^,5254-5265 2) Organic Progress Research & Development 2003,7,866-872 3) WO 2013/023795 立体选择性合成路线详细描述在实验部分。在方案1中示例了获得溴化吡啶A的主要途 径：
方案1 PG:保护基。
[0108] 溴化物A与连接到金属配合物的炔经的钯催化的Sonogashira反应产生通式（I)的 化合物，如方案2所示。优选在使用水溶性钯配合物，如[2-(二甲基氨基甲基)苯基][1，3，5- 三氮杂-7-磷杂金刚烷]氯化钯iaDios 2006,25,5768-5773)或3，3'，3' 磷烷 (phosphane)三基三(4，6-二甲基苯磺酸)三钠作为钯配体下，在部分水性溶剂中进行最终 偶联反应Uur. /. Org·. CAei 2010,3678-3683)。含钆单元通过四聚或八聚酰胺基 (amid)骨架桥接至炔烃官能的合成由本领域专家已知的肽偶联技术来完成，并在实验部分 中详细描述。
方案2。
[0109] 在多钆配合物的情况下，所需的通式（I)的金属配合物共辄物的分离和纯化可以 由常规色谱法，如制备型HPLC或尺寸排阻色谱法，结合超滤法来实现。
【附图说明】
[0110] 图1: 亲合性分析:在第一步中，将由人类血小板纯化的人类GPIIb/II la固定在96-孔固定板 (sol id plate)上。在48小时后，洗涤该板，用Roti ?-Block封闭非特异性结合位点。2.在下 一步中，该板和与提高浓度的新型化合物(抑制剂)混合的氚标记的已知GPIIb/IIIa结合剂 (3H)同时培养。抑制剂的亲合性越高，氚化的已知GPIIb/II la结合剂(3H)的结合率越低。在 微板闪烁计数器中测量未被抑制剂置换的氚化化合物(?)的百分率。
[0111] 图2: 使用3D快速自旋回波序列（1.5 T，Siemens Avanto,小型肢端线圈，TR 1050ms，TE 9.1 ms，0.5 X 0.5 X 0.6 mm3)，进行体外富血小板血栓和培养溶液(实施例1)的磁共振成像。在 图2a中显示了没有添加造影剂的体外对照血栓。对照血栓的信号强度略微高于周围的介 质，但是明显低于用实施例1培养的体外血栓的信号，如图2b中描绘的那样。在图2c中，呈现 出最终浓度为10 μπιο?物质/L人类血浆中的实施例1的培养溶液。信号强度高于体外富血小 板血栓2a和2b中的周围血浆溶液。
[0112]图2b中的体外血栓用图2c中描绘的溶液培养。在20分钟培养期后，用血浆溶液洗 涤血栓三次。图2b中培养的体外血栓的信号强度显示出比图2a中的对照血栓明显更高的信 号。
[0113] 图3: 使用3D快速自旋回波序列（1.5 T，Siemens Avanto,小型肢端线圈，TR 1050ms，TE 9.1 ms，0.5 X 0.5 X 0.6 mm3)，进行体外富血小板血栓和培养溶液(实施例1)磁共振成像。在图 3a中显示了没有添加造影剂的体外对照血栓。对照血栓的信号强度略微高于周围的介质， 但是明显低于用实施例1培养的体外血栓的信号，如图3b中描绘的那样。在图3c中，呈现出 最终浓度为0.1 μπιο?物质/L(0.8 nmol Gd//L)人类血浆中的实施例1的培养溶液。信号强 度与体外富血小板血栓3a和3b中的周围血浆溶液相当。图3b中的体外血栓用图3c中描绘的 溶液培养。在20分钟培养期后，用血浆溶液洗涤血栓三次。图3b中培养的体外血栓的信号强 度显示出比图3a中的对照血栓明显更高的信号。
[0114] 实验部分

[0115] 材料和仪器 用于合成工作的化学品具有试剂级品质并且原样使用。
[0116] 分别在CDC13、D20或DMS〇-d6中测量^-NMR谱（294 K，Bruker DRX Avance 400 MHz NMR波谱仪(BO = 9.40 T)，共振频率:对于1Η 300 MHz波谱仪对于1Η为400.20 MHz。相对于 作为内标物（<?= 〇 ppm)的（三甲基甲硅烷基)丙酸钠_d4(D20)或四甲基硅烷(DMS〇-d6)，化 学位移以ppm给出。
[0117] 由以下HPLC基分析方法分析和表征样品以测定特征保留时间和质谱： 方法 1:UPLC (ACN-HC00H): 仪器：Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001;柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50 X 2 · 1mm;洗脱剂A:水+ 0 · 1%甲酸，洗脱剂B:乙腈;梯度:0-1 · 6分钟1-99%的B，1 · 6-2 · 0分钟99% 的B;流量0.8 ml/min;温度:60°C;进样:2 yhDAD扫描:210-400 nm;ELSD 方法2: UPLC (ACN-HC00H极性）： 仪器：Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001;柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50 X 2.1mm;洗脱剂A:水+ 0.1%甲酸，洗脱剂B:乙腈;梯度:0-1.7分钟卜45%的B，1.7-2.0分钟45- 99%的B;流量0.8 ml/min;温度:60°C;进样:2 yl;DAD扫描:210-400 nm;ELSD〇 实施例
[0118] 实施例1 2,3_ 双-{[2,3_ 双（{2,3_ 双[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4,7，10_ 四氮杂环 十二烧-1_基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (150- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙酰基]哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆
[0119] 实施例la氨基-3-[5_溴啦啶-3-基]丙-2-稀酸叔丁基酯
将二异丙基胺(9.2 mL，65 mmol)在0°C下加入到乙基溴化镁在二乙醚（10.9 mL，32.7 mmo 1)中的3M溶液和附加的二乙醚(20 mL)中。在0 °C下1小时后，添加乙酸叔丁酯(4.3 mL， 32.7 mmol)，继续搅拌30分钟。在0°C下添加在二乙醚(42 mL)中的5-溴吡啶-3-甲腈（2.0 g，10.9 mmol)。在0°C下2小时后，添加饱和氯化铵水溶液。分离各相，用二乙醚萃取水相。用 盐水洗涤合并的萃取液，经硫酸钠干燥。在减压下浓缩该溶液，并在二氧化硅凝胶上通过色 谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，0至60%)，产生1.12 g的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基） 丙-2-烯酸叔丁基酯。 匪R (400 MHz，DMS〇-c/6):S = 1.44 (s，9 H)，4.77 (s，l H)，7.15 (br.，2 H)， 8.22 (t，l Η)，8·75 (d，l Η)，8·76 (d，l H) ppm〇
[0120] 实施例lb ^幻^-氨基^-^-溴啦啶^-基彡丙酸叔丁基酯
在氩气气氛下，向（1，5-环辛二烯）氯铑（I)二聚物（39 mg，80 _〇1)和 [(幻-2-二叔丁基膦基）二茂铁基]乙基二(4-三氟甲基苯基)膦（108 mg，160 μπιο?)中添加 2，2，2-三氟乙醇（5.8 mL)，并将溶液搅拌40分钟。向压力容器中的脱气2，2，2-三氟乙醇 (11.6 mL)中的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙-2-烯酸叔丁基酯（1.59 g，5.32 mmol)中添 加铑催化剂溶液，并将该溶液在50°C，11 bar氢气压力下搅拌22小时。在减压下浓缩该溶 液，并在二氧化硅凝胶上通过色谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，12至100%，随后是乙 酸乙酯中的甲醇，0至15%)，产生1.16 g的对映异构富集的（3幻-3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡 啶-3-基]丙酸叔丁基酯。 匪R (300 MHz，CDC13):S = 1.43 (s，9 H)，2.59 (d，2 H)，4.42 (t，l Η)，7·92 (t，l Η)，8·58 (d，l Η)，8·53 (d，l H) ppm〇 α = -17.6° (c = l.Og /100mL，CHCl3)〇
[0121] 实施例lc 4-{3-[(37?)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌 啶-1-羧酸叔丁基酯
向1，2-二甲氧基乙烷（13.5 mL)中的（37?)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基）哌啶-4-基]丙酰 基}哌啶_3_羧酸（1.91 g，5.18 mmoUiooi^·. #ec/. 2005，D，4343-4352,化合物 10)中添加基琥泊酰亚胺(0.60 g，5.18 mmol)和1,3-二环己基碳二亚胺（1.18 g，5.7 mmol)。将溶液在室温下搅拌4小时，同时形成沉淀物。然后将混合物冷却至0°C，过滤，并用 二乙醚洗涤固体。将滤液与二乙醚洗涤液合并且浓缩，产生2.61 g的粗4- {3-[(37?) -3- {[(2,5_二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 1.13 min〇 MS (ES+):m/e = 466.31 (Μ + H)+。
[0122] 实施例1d 4-{3-[(37?)-3-({(1幻-1-[5_溴吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌 啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯
在0°C下向DMF(17 mL)中的（3^-3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸叔丁基酯（1.33 g， 4.42 mmol)中添加二氣甲烧（17 mL)中的4_{3_[ (37?)_3_{ [ (2，5_二氧代P比略烧-1-基)氧 基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯（2.54 g，4.91 mmol)和三乙胺 (1.85 mL，13.2 mmol)。在3小时后，通过添加饱和氯化铵水溶液使混合物淬灭，分离各相， 用二乙醚萃取水相。经硫酸钠干燥合并的有机萃取液，在减压下浓缩，并在二氧化硅凝胶上 通过色谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，12至100%，随后是乙酸乙酯中的甲醇，0至 15%)，产生2.1 g的4-[3-( (37?)-3-{ [ 溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基] 氨基甲酰基}哌啶-1-基)-3_氧代丙基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 1.35 min。 MS (ES+):m/e = 651.4 / 653.4 (Μ + H)+。
[0123] 实施例le (35^-3-(5-溴啦啶-3_基)-3_[ ({(37?)-1-[3_(哌啶4-基)丙酰基]哌啶_3_基}幾基)氨 基]丙酸
将4-[3-((37?)-3-{[(1幻-1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基} 哌啶-1-基)-3_氧代丙基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯(600 mg，0.94 mmol)溶于甲酸，并加热至 100°C持续12分钟。在真空中蒸馏出溶剂，由制备型HPLC(C18-Chromatorex-10 pm)纯化残 留物。产生330 mg的（3^-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-[({(37?)-1-[3-(哌啶4-基)丙酰基]哌啶- 3-基}羰基)氨基]丙酸。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 0.57 min〇 MS (ES+):m/e = 495·2,497·2 (Μ + H)+。
[0124] 实施例1f 2-[4-(3_ 羟苯基)丁基]-If 异吲哚-1,3(2//)-二酮
将3,5-二溴苯酚(6.0 g，23.8 mmol)、2-(丁-3-烯-1-基)-1"_异吲哚-1,3(2扔-二酮 (9.8 g，49 mmol)、乙酸钯（11)(53 mg，0.24 mmol)和三（2-甲基苯基）磷烷（145 mg，0.48 mmol)在90°C下在乙腈（125 mL)和三乙胺(6.6 mL)中搅拌5小时。在室温下搅拌15小时并浓 缩后，获得2-[4-(3_溴-5-羟苯基)丁-3-烯-1-基]-If异吲哚-1，3(2//)-二酮和2,2'-[(5_ 羟基苯-1，3-二基)二丁-1-烯-1，4-二基]双（1炉异吲哚-1，3(2//)-二酮）的混合物，其可以 在二氧化硅凝胶上由色谱法分离（己烷中的乙酸乙酯，0至30%)，产生3.47 g的溴中间体。将 2- [4-(3_溴-5-羟苯基）丁-3-烯-1-基]-1"-异吲哚-1,3(2扔-二酮溶于甲醇（230 mL)、水 (18 mL)和乙酸乙酯（192 mL)中，并在炭载钯（10%，437 mg)存在下，在40°C、氢气气氛下搅 拌2.5小时。经由硅藻土途径过滤反应混合物，在减压下浓缩，并在二氧化硅凝胶上通过色 谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，0至60%)，产生2.41 g的2-[4-(3-羟苯基)丁基]-1"- 异吲哚-1，3(2功-二酮。 匪R (300 MHz，DMS〇-d6):S = 1.41-1.67 (m，4H)，2.47 (m，2H)，3.58 (t，2H)， 6.47-6.65 (m，3H)，6.96-7.10 (t，lH)，7.76-7.92 (m，4H)，9.21 (s，lH) ppm。
[0125] 实施例lg 3-[4-(l，3-二氧代-1，3-二氢-2f异B引哚-2-基)丁基]苯基三氟甲磺酸酯
在0°(：下向吡啶(3〇1^)中的2-[4-(3-羟苯基)丁基]-1"-异吲哚-1，3(2功-二酮(4.24 g，14.4 mmol)中添加三氟甲磺酸酐（3.2 mL，18.7 mmol)。将混合物在0°C下搅拌1小时，添 加水和二乙醚的混合物，分离各相，并用二乙醚萃取水相。用0.5 Μ盐酸洗涤合并的有机萃 取液，经硫酸钠干燥。在减压下浓缩该溶液，同时在蒸馏结束之前两次添加甲苯，并在二氧 化硅凝胶上通过色谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，0至70%)，产生5.34 g的3-[4-(1， 3- 二氧代-1，3-二氢_2//~异Π 引噪-2-基)丁基]苯基二氣甲烧横酸酯。 匪R (300 MHz，DMS〇-d6):S =1.50-1.69 (m，4H)，2.68 (t，2H)，3.55-3.67 (t， 2Η)，7·22-7·38 (m，3H)，7.46 (t，lH)，7.77-7.94 (m，4H) ppm。
[0126] 实施例lh 2-(4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)-lf异吲哚-1,3(2//)-二酮
在50°C下经11小时向DMF(20 mL)中的3-[4-(l，3-二氧代-1,3-二氢-2炉异吲哚-2-基） 丁基]苯基三氟甲烷磺酸酯（5.3 g，12.5 mmol)、双(三苯基磷烷)二氯钯（11)(440 mg，0.63 mmol)、鹏化亚铜（120 mg，0.63 mmol)和二异丙基乙胺（11 mL，63 mmol)中添加 DMF(11 mL)中的乙炔基(三甲基)硅烷(8.7 mL，63 mmo 1)。在50 °C下将混合物搅拌25小时，在18小时 后重复添加在DMF(5.6 mL)中的乙炔基(三甲基)硅烷(4.4 mL，32 mmol)。添加水和二乙醚 的混合物，分离各相，并用二乙醚萃取水相。用盐水洗涤合并的有机萃取液，经硫酸钠干燥， 在减压下浓缩，并在二氧化硅凝胶上通过色谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，〇至25%)， 产生3.86 g的2-(4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)-1"_异吲哚_1，3(2扔-二 酮。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,19Η),1.48-1.65 (m,4H),2.59 (t,2H), 3.59 (t，2H)，7.17-7.33 (m，4H)，7.75-7.91 (m，4H) ppm。
[0127] 实施例li 4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁-1_胺
向THF(83 mL)中的2-(4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)-1"_异吲哚_1，3 (2功-二酮(3.86 g，10.3 mmol)中添加甲基肼(8.1 mL，15.4 mmol)，在40°C下将溶液搅拌 41小时，同时形成沉淀物。将反应混合物浓缩至40 mL体积，并在0 °C下过滤。用少量冷THF洗 涤固体，在减压下浓缩合并的滤液，同时在蒸馏结束之前两次添加甲苯，产生2.63 g的4- {3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基} 丁_1 -胺。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.26-1.41 (m,2H),1.47-1.64 (m, 2Η)，2·52-2·62 (m，4H)，7.10-7.33 (m，4H) ppm。
[0128] 实施例lj #_(叔丁氧基幾基)_3_[(叔丁氧基幾基)氨基]-7V-(4-{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基] 苯基} 丁基)丙氨酰胺
在0°C下将DMF(40 mL)中的4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁-1-胺（2.6 g， 9.7 mmol)加入到DMF(50 mL)中的#-(叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酸jV- 环己基环己胺盐（5.0 g，10.2 mmol)、7V，7V-二异丙基乙胺（8.2 mL，48.7 mmol)和HATU(5.2 g，13.6 mmol)的新鲜制备溶液中。在搅拌1小时后，冷过滤该混合物，将滤液浓缩，同时在甲 苯存在下蒸馏DMF的残留痕量，并在氨基相二氧化硅凝胶上通过色谱法纯化(己烷中的乙酸 乙酯，0至40%)，产生4.25 g的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-ΛΚ4-{3-[(三 甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙氨酰胺。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.35-1.43 (m,2H),1.36 (s,18H), 1.44-1.60(m，2H)，2.92-3.21(m，4H)，3.93(dd，lH)，6.62(d，lH)，6.71(t，lH)，7.15- 7.34 (m，4H)，7.80 (t，lH) ppm〇
[0129] 实施例lk 3-氧代-3_[ (4-{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基}丁基)氨基]丙烷-1，2-二铵盐二 氯化物
将DMF(18.5 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-，(4-{3-[(三甲 基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)丙氨酰胺(4.28 g，8.0 mmol)加入到二氧杂环己烷中的盐 酸(4M，18 mL)中。将溶液分到2个压力容器中，将所述压力容器密封并在80°C下在微波反应 器中辐照16分钟。用1，4_二氧杂环己烷(300 mL)稀释合并的反应溶液，浓缩至50 mL体积， 并再次用1，4_二氧杂环己烷(200 mL)稀释。搅拌该混合物，同时形成沉淀物，通过过滤收集 沉淀物，产生1 · 77 g的3-氧代-3-[ (4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙 烷-1，2-二铵盐二氯化物。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.46 (quin,2H),1.61 (m,2H),2.58 (t，2H)，3.02-3.14 (m，lH)，3.17-3.27 (m，3H)，4.19 (t，lH)，7.15-7.38 (m，4H)，8.58 (b;r.，6H)，8.82 (t，lH) ppm〇
[0130] 实施例lm #_(叔丁氧基羰基)_3_[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酰基-3-( {TV-(叔丁氧基羰基)-3- [(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酰基}氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基） 丙氨酰胺
在0°C下将DMF(40 mL)和二异丙基乙胺(4.4 mL)中的3-氧代-3-[(4-{3-[(三甲基 甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)氨基]丙烷-1，2-二铵盐二氯化物（1.77 g，4.38 mmol)加入 到DMF (50 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-丙氨酸，环己基环己胺 盐(4.4 g，9.19 πιπιο1)、7ν，Λ^二异丙基乙胺（14 mL)和HATU(4.66 g，12.3 mmol)的新鲜制备 溶液中。在搅拌60分钟后，将混合物浓缩，并在氨基相二氧化硅凝胶上通过色谱法纯化（己 烷中的乙酸乙酯，0至100%)，产生3.37 g的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙 氨酰基-3-( {ΛΚ叔丁氧基羰基)_3_[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酰基}氨基)-7V-(4-{3-[(二 甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙氨酰胺。 iH-NMR (400 MHz，DMS〇-d6)j = 0.23 (s，9H)，1.39 (s，36H)，1.46 (quin，2H)，1.59 (quin，2H)，2.58 (t，2H)，3.08-3.38 (m，6H)，3.91-4.09 (m，2H)，4.19-4.36 (m，lH)，6.19 (br，lH)，6.31 (br，lH)，6.45 (br，lH)，7.14-7.32 (m，4H)，7.45-7.69 (br，2H) ppm。
[0131] 实施例1n 3-({(3-{[2,3-二铵基丙酰基(0丨&1111]1〇11；[0卩1'0卩311054)]氨基}-1-氧代-1-[(4-{3-[(三 甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙_2_基}氨基)_3_氧代丙烷-1，2-二铵盐四氯化 物
向DMF(21 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酰基-3-({，(叔 丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酰基}氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙 炔基]苯基}丁基）丙氨酰胺（4.48 g，4.46 mmol)中添加二氧杂环己烷中的盐酸（4Μ，33 mL)。密封反应容器并在80°C下在微波反应器中辐照10分钟。在冷却到室温后，将反应混合 物在搅拌下缓慢地加入到1，4_二氧杂环己烷(360 mL)中。通过过滤收集所形成的沉淀物， 产生2.78 g的3-({(3-{[2,3-二铵基丙酰基]氨基}-1-氧代-1-[(4-{3-[(三甲基甲硅烷基） 乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙_2_基}氨基)_3_氧代丙烷-1，2-二铵盐四氯化物。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.42-1.48 (m,2H),1.53-1.58 (m, 2Η)，2·53-2·62 (m，2H)，3.07-3.11(m，2H)，3.50 (br，6H)，4.26 (br.，lH)，4.33 (br·， 1Η)，4·39-4·53 (m，lH)，7.16-7.36 (m，4H)，8.40-9.10 (m，12H) ppm。
[0132] 实施例lo 2，3-双-{[ 2，3-双（{2，3-双[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基} -7V_( 4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺 在20°C下将DMF(16 mL)和二异丙基乙胺(4.7 mL)中的3-({(3-{[2,3-二铵基丙酰 基]氨基}_1_氧代_1_[ (4_{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基}丁基）氨基]丙_2_基}氨 基)-3_氧代丙烷-1,2-二铵盐四氯化物（1.0 g，1.39 mmol)加入到DMF(16 mL)和見妒二异 丙基乙胺(4.7 mL)中的，(叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-丙氨酸，环己基环 己胺盐(3.1 g，6.37 mmol)和HATIK2.95 g，7.76 mmol)的新鲜制备溶液中。在搅拌1小时和 在6 °C下存储18小时后，过滤冷的混合物，用DMF洗涤沉淀物。浓缩滤液，用甲苯共蒸馏，并在 氨基相二氧化硅凝胶上通过色谱法纯化残留物（己烷中的乙酸乙酯，〇至100%)，产生1.38 g 的2,3-双-{[2，3-双（{2，3-双[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基}氨基）丙酰基]氨基}-7V_(4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺。
iH-NMR (400 MHz，DMS〇-d6)j = 0.23 (s，9H)，1.39 (s，36H)，1.46 (quin，2H)，1.59 (quin，2H)，2.58 (t，2H)，3.08-3.38 (m，6H)，3.91-4.09 (m，2H)，4.19-4.36 (m，lH)，6.19 (br，lH)，6.31 (br，lH)，6.45 (br，lH)，7.14-7.32 (m，4H)，7.45-7.69 (br，2H) ppm。
[0133] 实施例lp 2,3-双（{2,3-双[(2,3-二铵基丙酰基)氨基]丙酰基}氨基)-，(4-{3-[(三甲基甲硅烷 基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物
向DMF(7.8 mL)中的2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基}氨基） 丙酰基]氨基[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基）丙酰胺（1.15 g，0.7 mmo 1)中添加二氧杂环己烷中的盐酸(4M，7.8 mL)。密封反应容器并在80°C下在微波反应器 中辐照1 〇分钟。向混浊的混合物中添加额外的二氧杂环己烷中的盐酸（4M，4 mL )和DMF (6 mL)，重复在80°C下在微波反应器中辐照10分钟。在冷却到室温后，将溶液在搅拌下缓慢地 加入到1,4-二氧杂环己烧（100 mL)中。通过过滤收集所形成的沉淀物，产生810 mg的2, β? ?α?』-双 [(2 ，3_ 二铵基丙酰基) 氨基] 丙酰基} 氨基)-，(4-{3-[(三甲基甲硅烷基 ） 乙炔 基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.44 (br,2H),1.55 (br,2H),2.53- 2.62 (m，2H)，3.08 (br，2H)，3.30-3.78 (br. m，21H)，4.28 (br.，3H)，4.43 (br.，2H)， 4.53 (br.，lH)，4.64 (br.，lH)，7.20-7.36 (m，4H)，8.40-9.10 (br. m，24H) ppm。
[0134] 实施例lq 2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(AM2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-l，4,7，10-四氮杂环 十二烧-1-基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}-#-(4-{3_[(二甲基甲 硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆
在60°C下将2,2'，2' '-[10-(1-{[2-(4_硝基苯氧基)_2_氧代乙基]氛基}_1_氧代丙_2_ 基)-l，4,7，10-四氮杂环十二烷-1，4,7-三基]三乙酸钆(2.43 g，3.2 mmol)以固体形式加 入到DMS0(8.5 mL)、DMF(9.0 mL)和吡啶(0.6 mL)中的2,3-双-({2,3-双[(2,3-二铵基丙酰 基)氨基]丙酰基}氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物 (200 mg，170 μπιο?)中。在60°C下将混合物搅拌6天，同时添加三乙胺(第1天:33 yL，第4天： 153 yL，第5天：120 uL)，并在第4天后用额外的DMF(8.0 mL)和DMS0(12 mL)稀释。在第4天 后重复添加2,2'，2' '-[10-(1-{[2-(4_硝基苯氧基)_2_氧代乙基]氨基}_1_氧代丙_2_基)- 1，4,7，10_四氮杂环十二烷-1，4,7-三基]三乙酸钆（1.0 g，1.3 mmol)。将混合物在真空下 冷凝，用水稀释，通过氢氧化钠水溶液调节pH至7,并经由超滤（醋酸纤维素膜，最低NMWL 5000 g/mol，Millipore)分离低分子量组分。收集截留物，产生0.69 g的部分脱甲娃基 (desilylated)的2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(#-{2-[4,7，10-三（羧酸根合甲基）-1，4,7， 10-四氮杂环十二烧-1-基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}-ΛΚ 4-{3- [(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆。 UPLC (ACN-HC00H极性）：Rt. = 0.81 min。 MS (ES-):m/e = 2870.0 (M-2H)2-。
[0135] 实施例lr 2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-l，4,7，10-四氮杂环 十二烧-1_基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (150- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙酰基]哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆 向水(0.3 mL)和乙腈(0.7 mL)中的（3^-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-[({(37?)-1-[3-(哌 啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸（13 mg，26 _〇1)、三乙胺(20仙，130 _〇1) 和四甲基氟化铵（1.2 mg，13 μπιο?)的脱气溶液中添加1.4 mL的红色催化剂溶液，所述溶液 通过将乙酸钯（11)(6.0 mg，27 nmol)与3,3'，3''_磷烷三基三(4,6_二甲基苯磺酸）三钠 (70 mg，107 _〇1)在水(7 mL)中加热至80°C持续30分钟来制备。在60°C下经10小时添加在 脱气水(20 mL)中的2,3_双-{[2,3_双（{2,3_双[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4， 7，10-四氮杂环十二烧-1-基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}_Λ^( 4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基）丙酰胺合八钆（302 mg，52 μπιο?)。在60°C下将 混合物再加热15小时，同时重复添加预先制备的钯催化剂溶液(0.7 mL)。在冷却至室温后， 使混合物冷凝，用水（150 mL)稀释残留物，经由醋酸纤维素膜过滤，最低NMWL 10000 g/mol (Mi 11 ipore)。收集滤液，经由醋酸纤维素膜重复超滤，最低NMWL 5000 g/mol (Mi 11 ipore)。 使截留物冷凝，并通过制备型HPLC纯化(C18-YMC 0DS AQ-10 _，水中的乙腈+ 0.1%甲酸， 1%至25%)，冷凝后产生14.4 mg的标题化合物。 UPLC (ACN-HC00H极性）：Rt. = 0.84 min。 MS (ES-):m/e = 3040.6 (M-2H)2-。
[0136] 参比化合物 (3幻-3-[({(37?)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]-3-{6-[3仞吡啶- 3_基}丙酸
将(3^)-3-(6-溴吡啶-3-基)-3-{[(37?)-1-(3-哌啶-4-基-丙酰基)哌啶-3-羰基]氨基} 丙酸（1.85 mg，3.73 nmol)溶于DMF(500 yL)和三乙胺（25 yL)的混合物。向该溶液中添加 炭载钯(20%) (6.45 mg)，将混合物连接到氚歧管，以用氚气氚化整夜。然后在歧管中将反应 混合物低温恒温（cryostatically)蒸发3次。在半制备型HPLC(Kromasil 100 C8 5 μηι(250 Χ4.6 mm)，洗脱剂:35 mM氨/甲醇，流量:1 mL/min)上纯化获得的粗产物。收集的级分包含 2061 MBq的（幻-3-{5-3,吡啶-3-基}-3-{[(7?)-1-(3_哌啶-4-基-丙酰基)哌啶-3-羰基]氨 基}丙酸(放射化学产率:12.6%;放射化学纯度:98%;比活度:7.81 Ci/mmo 1)。
[0137] 实施例2 所研究的化合物对人类GPIIb/II la受体的亲合性 所用的GPIIb/IIIa亲合性分析的程序在图1中示意性说明。
[0138] 经纯化的人类糖蛋白1113/111&(2〇111]\11^8-!1(：1，0.1]\1他(：1，0.1%1^七〇11父- 100，1 mM CaCl2,0.05% NaN3,50%甘油，pH 7.4)购自Enzyme Research Laboratories Inc. (South Bend，IN) XPIIb/IIla受体在具有0.01%牛血清白蛋白（来自牛血清-冷冻干燥粉末 的白蛋白，彡96 %，Sigma)的磷酸盐缓冲盐水(Dulbecco的具有钙和镁的磷酸盐缓冲盐水 (D-PBS ( + ))，GIBC0?，Invitrogen)中稀释。
[0139] 将GPIIb/IIIa受体在277 K至280 K，和以每孔(hi yg至每孔1 yg的浓度，在96-孔 固定板（11111]11111〇?1&七6]\^1丨3〇印11|，仙11(3，1?〇81<:;[1(16，丹麦）上固定至少48小时（100口1^每 孔，48至最大96小时）。作为阴性对照，仅用2%牛血清白蛋白（200 uL每孔，来自牛血清-冷冻 干燥粉末的白蛋白，彡96%，Sigma，在D-PBS ( + )中稀释)培养该板的一排(η = 8)。
[0140] 在用洗涤缓冲液（230 yL/孔，Dulbecco的不含钙或镁的磷酸盐缓冲盐水(D-PBS (_))，GIBC0?，Invitr〇gen)洗涤三次后，通过用包含2%牛血清白蛋白（来自牛血清-冷冻干 燥粉末的白蛋白，彡96%，Sigma)的特殊封闭溶液（200 yL每孔，Roti ? -Block，Car Roth GmbH Co KG，Karlsruhe)在室温下培养该板1小时来封闭残留的暴露的适应性(plastic)和 非特异性结合位点。
[0141] 在用洗涤缓冲液洗涤三次后，向每个孔中同时添加50 yL的氚化参比化合物（60 nM，3H-标记化合物)和50 nL的新型化合物(抑制剂），并在室温下培养1小时。研究每个新型 抑制剂的若干浓度（〇.1、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000 和 20000 nM)。在每个抑制剂浓度下进行四次测定。检验的抑制剂的结果概括在表1中。
[0142] 在不添加抑制剂下测定氣化的参比化合物的最大值(η = 8)。为排除3H-参比化合 物的非特异性结合，没有糖蛋白受体的孔用作阴性对照(η = 12,相同处理，仅没有GPIIb/ II la受体）。
[0143] 在1小时后，用磷酸盐缓冲盐水（200 yL/孔，Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水(D-PBS (+))，GI?，Invi trogen)洗涤板三次。随后向每个孔添加140 μL的液体闪烁调配液 (liquid scintillation cocktail)(MicroScint ? 40 aqueous,Perkin Elmer)。在室温 下 15分钟后，在微板闪烁计数器（TopCount NXT v2.13，Perkin Elmer，Packard Instrument Company)下测量该板。
[0144] 图1显示GPIIb/IIIa分析的示意图。在第一步中，将由人类血小板纯化的人类糖蛋 白Ilb/IIIa固定在96-孔固定板上。在至少48小时后，洗涤该板，并用Roti ?-Block封闭非 特异性结合位点。2.在下一步中，用氚标记的参比化合物和新型小分子化合物(抑制剂)培 养该板。3.抑制剂的亲合性越高，参比化合物的结合率越小。在微板闪烁计数器中测量未 被抑制剂置换的氚化的参比化合物的百分率。抑制剂的亲合性越高，氣标记的参比化合物 的结合率越小。通过该分析，可以确定亲合性(IC5Q值）。上述研究表明式(I)的化合物可用作 血栓成像的造影剂。结果概括于表1中。
[0145] 表1:化合物对人类GPIIb/IIIa受体的结合亲合性。
[0146] 实施例3 所研究的化合物与人类活化血小板的结合 对于每个实验，使用10 mL朽1檬酸盐-试管（Sarstedt S-Monovette 02·1067·001，10 mL，柠檬酸盐3.13%)采集来自志愿者的新鲜血液。将10 mL柠檬酸盐-试管小心地倒置10次， 以使血液和抗凝血剂混合。将试管保存在37 °C下恒温箱中直到离心处理（Heraeus miniTherm CTT，具有集成的旋转装置和翻转装置，翻转速率：每分钟19转，Heraeus Instruments GmbH，Hanau/德国）。
[0147] 对于血浆制剂，在室温下以1811 g进行试管离心处理15分钟（Eppendorf， Centrifuge 5810R)。为产生富血小板血浆，将201 g血液在室温下离心处理15分钟。将试管 在室温下静置30分钟，以获得更好的分离。最后将453 g的分离的富血小板血浆进一步离心 处理3分钟，以去除残留的红细胞。使用最终浓度为5 μΜ的二磷酸腺苷(ADP，Sigma)活化富 血小板的血浆。用不同浓度的钆标记化合物培养富活化血小板的血浆20分钟和3分钟，随后 以1360 g离心处理3分钟。取出20 uL上清液以测定浓度(η = 3)。使颗粒再悬浮，用至少750 yL血浆洗涤两次，随后再分散在750 uL血浆和50 uL氯化钙(50 uL 2%)中。使用电感耦合等 离子体质谱法（ICP-MS Agilent 7500a)测定上清液和颗粒的钆浓度。
[0148] 培养浓度为10 μΜ、1 μΜ和0.1 μΜ的钆标记化合物的结果概括在表2中。
[0149] 表2:化合物与人类活化血小板的结合
[0150] 实施例4 磁共振成像 用富血小板血浆进行MRI成像实验。使用新鲜血液制备富血小板血浆描述在LK Jennings等，Blood 1986 1，173-179中，但是对于离心处理程序进行了改进。简单来说，使 用 10 mL柠檬酸盐-试管（Sarstedt S-Monovette 02·1067·001，10 mL，柠檬酸盐3.13%)采 集来自志愿者的新鲜血液。将10 mL柠檬酸盐-试管小心地倒置10次，以使血液和抗凝血剂 混合。将110 g血样在室温下离心处理15分钟（Eppendorf，Centrifuge 5810R)。将试管在室 温下存储30分钟，以获得更好的分离。将240 g分离的血浆级分在室温下离心处理3分钟，以 去除残留的红细胞。消除红细胞颗粒。使用最终浓度为5 μπιο 1 /L的二磷酸腺苷(ADP，Sigma) 活化上清液中的血小板。
[0151] 将富活化血小板的血浆溶液在37°C下用实施例1培养20分钟，获得10 μπιο?物质/L (图2)和0.1 μπιο?物质/L(图3)的最终浓度。在培养后，将720 g试样离心处理3分钟。弃去上 清液，用750 uL人类血浆通过重复再分散和后续的离心处理洗涤颗粒三次。在最后的洗涤 步骤中，向人类血浆中添加氯化钙(70 yL 2%)，引起血小板凝聚。在40分钟后，在2.0 mL试 管(2.0 mL Eppendorf微离心试管）中固定所得的体外富血小板血栓，在室温下进行人类血 浆中的磁共振成像。
[0152] 使用装有小型肢端线圈的临床1.5T系统（Siemens Avanto)进行成像。使用T1-加 权3D快速自旋回波序列（3D TSE)，重复时间（TR)为1050 ms，回波时间为9.1 ms，快速因子 为253D模块包含18个切片，每个切片厚度为0.6 mmdD TSE序列的空间分辨率为0.5X0.5 X0.6 mm3，图像矩阵为256X 172X 18像素。信号平均数为16,最终全部采集时间为17分41 秒。
[0153] 磁共振成像结果描绘在图2和图3中。
[0154] 在图2a中，显示没有添加造影剂的体外对照血栓。对照血栓的信号强度略微高于 周围介质，但是明显低于用实施例1培养的体外血栓的信号，如图2b中描绘的那样。在图2c 中，显示最终浓度为10 nmol物质/L的人类血浆中的实施例1的培养溶液。信号强度高于体 外富血小板血栓2a和2b中的周围血浆溶液。
[0155] 图2b中的体外血栓用图2c中描述的溶液培养。在20分钟培养期后，用血浆溶液洗 涤血栓三次。图2b中培养的体外血栓的信号强度显示比图2a中的对照血栓明显更高的信 号。
[0156] 在图3a中，显示没有添加造影剂的体外对照血栓。对照血栓的信号强度略微高于 周围介质，但是明显低于用实施例1培养的体外血栓的信号，如图3b中描绘的那样。在图3c 中，显示最终浓度为0.1 μπιο?物质/L(0.8 nmol Gd//L)的人类血浆中的实施例1的培养溶 液。信号强度可与体外富血小板血栓3a和3b中的周围血浆溶液相比。图3b中的体外血栓用 图3c中描述的溶液培养。在20分钟培养期后，用血浆溶液洗涤血栓三次。图3b中培养的体外 血栓的信号强度显示比图3a中的对照血栓明显更高的信号。
[0157] 实施例5 食蟹猴(Cynomo 1 gus Monkey)中的特异性血栓结合 在食蟹猴(雌性，3,0 kg体重）中研究实施例1中描述的化合物的特异性结合。
[0158] 用Xylazin(Rompun ?，Bayer HealthCare，Leverkusen，德国），0· 12 mL/Kg和氯胺 酮(Ketavet ?，Pfizer)0.12 mL/Kg体重肌肉注射（i ·ηι·)的混合物使猴子麻醉。研究的同 时，如果需要已经肌肉注射（i .m.)少量的Xylazin/Ketamine (1 + 1)。用氯化铁III溶液 (10%)，使左颈总动脉暴露10分钟。在血栓诱发后，猴子接受1 μπιο?钆/ kg体重(等于0.125 μπιο?分子/kg体重)静脉注射（i . v.)。然后，用氯化铁III溶液（10%)，使右颈动脉暴露8分钟， 猴子接受1 ymolIL/ kg体重静脉注射(iv)的重复剂量。
[0159] 在第一次施用两种造影介质后，通过外科手术使右颈动脉暴露，将预先用砂纸（名 称600-CAMI Grit)粗糖化的聚乙稀试管（INTRAMEDIC Polyethylene Tubing，Clay Adams， PE50)插入血管中，推进至降主动脉中，留在那里30分钟，以在试管的粗糙表面上形成血栓。 导管插入术后30分钟和90分钟，猴子接受1 ymolIL/ kg体重（等于0.125 μπιο?分子/kg体 重)静脉注射(i .v.)。在最后施用造影介质后40分钟，使用戊巴比妥(Narcoren)使动物死亡 (sacrificed)。使用电感親合等离子体质谱法（ICP-MS Agilent 7500a)确定血液、左右颈 动脉的血栓、右颈动脉、左颈动脉、颈静脉和主动脉中的钆浓度。数据概括在表3中。
[0160] 表3:在实施例1的重复剂量后食蟹猴的不同组织中钆测定的电感耦合等离子体质 谱法数据(最后注射之后40分钟，4次1 yM|L/kg体重的重复剂量，总剂量4 yM|L/ kg体重）。
【主权项】
1.通式(I)的化合物：⑴， X表示选自以下的基团：其中： Y表示：其中： R1表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； R2表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； R3表示氢、甲基、乙基、丙基或异丙基； G表不基团：其中： R4表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基； R5表示氢、甲基、乙基或丙基； R6表示氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或苄基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。2.根据权利要求1的化合物，其中： X表示选自以下的基团：其中： Y表示：其中： R1表示氢或甲基； R2表示氢或甲基； R3表示氢或甲基； G表不基团：其中： R4表示氢或甲基； R5表示氢或甲基； R6表示氢或甲基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、Ν-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。3.根据权利要求1或2的化合物，其中： X表示选自以下的基团：其中： Υ表示：其中： R1表;^氢； R2表;^氢； R3表;^氢； G表；^基团：其中： R4表示氢或甲基； R5表示氢或甲基； R6表示氢； Μ表示,L; m表不1; η表示2、3或4的整数； q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。4.根据权利要求1，2或3任一项的化合物，其中： X表示选自以下的基团： 其中：Y表示：其中： R1表;^氢； R2表;^氢； R3表;^氢； G表；^基团： 共T :R4表示氢或甲基； R5表示氢； R6表示氢； Μ表示,L; m表亦1; η表示3或4; q表示0或1; 或其立体异构体、互变异构体、Ν-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。5.根据权利要求1至4任一项的化合物，其中： X表示选自以下的基团：其中： Υ表示：其中： R1表示氢； R2表;^氣； R3表不氢； G表不基团：其中： R4表示甲基； R5表示氢； R6表示氢； Μ表示,L; m表示1; η表示4; q表不1; 或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，或者它们的混合物。6. 根据权利要求1至5任一项的化合物，其选自： 2,3-双-{[2,3-双（{2,3-双[(#-{2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4,7，10-四氮杂环 十二烧-1_基]丙酰基}甘氨酰基)氨基]丙酰基}氨基)丙酰基]氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (15〇- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙酰基]哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八钆。7. 权利要求1至6任一项的化合物用于诊断成像的用途.7. 根据权利要求1至6任一项的化合物用于制造诊断剂。8. 根据权利要求1至6任一项的化合物或其混合物用于制造诊断剂的用途。9. 根据权利要求1至6任一项的化合物或其混合物用于制造血栓成像用的诊断剂的用 途。10. 使患者的体组织成像的方法，其包括以下步骤:给患者施用有效量的在可药用载体 中的一种或多种根据权利要求1至6任一项的化合物，并且对患者施以NMR断层成像。
【文档编号】A61K49/06GK105960403SQ201580008204
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2015年2月6日
【发明人】M.贝格尔, J.洛尔克, G.约斯特, M.赖因哈特
【申请人】拜耳制药股份公司