一种碳酸酯类光敏试剂及其制备方法、5`-光敏保护核苷的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种碳酸酯类光敏试剂及其制备方法、5'?光敏保护核苷的制备方法。碳酸酯类光敏试剂，其结构式为：其中X为-OX’、咪唑基、取代咪唑基；5'-光敏保护核苷的制备方法步骤包括将2’-脱氧核苷与2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯类光敏试剂和三乙胺得5'-光敏保护核苷粗产物、粗产物提纯得到5'-光敏保护核苷。本发明5'-光敏保护核苷制备方法选择性平均提高了3.4倍，减化了提纯过程，提高了产率，大大降低了生产成本，同时避免了使用剧毒的双光气。
【专利说明】
一种碳酸酯类光敏试剂及其制备方法、5光敏保护核苷的制 备方法
技术领域
[0001] 本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种碳酸酯类光敏试剂及其制备方法、 5 光敏保护核苷的制备方法。
【背景技术】
[0002] 基因芯片技术是利用核酸分子杂交原理与微电子技术相结合而形成的一种高新 生物技术。可广泛应用于疾病诊断、药物筛选、生物科学研究，农作物的优选优育、司法鉴 定、食品卫生监督、环境检测等许多领域。由于原位光刻技术可制备高密度寡核苷酸基因芯 片，目前，以原位光刻技术为基础的基因芯片被广泛采用，5 光敏保护核苷及其衍生物5 ' -光敏亚磷酰胺单体是制备该类基因芯片的关键原料之一。但是，现有制备5'-光敏保护核苷 的方法(如下所示）中，
[0004]有二个共同的难题：（1)、在引入5'-光敏基团时，由于使用的是酰氯类光敏试剂， 反应缺乏足够的选择性，特别是大规模反应，酰氯类光敏试剂的选择反应条件较难控制，在 生成5'_光敏保护核苷（5'-Photolabile dN)的同时，有相当量的副产物3'-光敏保护核苷 (3'_Photolabile dN)和3'，5'_双光敏保护核苷（3'，5'_diPhotolabile dN)生成，根据碱 基不同，生成的主产物5'-光敏保护核苷与副产物(3'_光敏保护核苷和3'，5'_双光敏保护 核苷等）的比例一般为5 :1 至2:1 (参考文献：Sigrid Buhler，Irene Lago ja等，Helvetica Chimica Acta，2004，v87(3)，620-659)。由于3'-光敏保护核苷与5'-光敏保护核苷分离性 质很相近，使分离5'-光敏保护核苷与3'-光敏保护核苷相当困难。即使分离，由于两者易 相互交叉，导致5光敏保护核苷产物损失较大，产率偏低。因此，寻找对伯（1°)醇和仲(2°) 醇具有高度选择性的试剂，提高反应的选择性非常重要(参考文献:Abbas-Alli G. Shaikh， Chem Review ,1996, v96,951-976) ; (2)、在制备酰氯类光敏试剂时必须使用双光气 (diphosgene)(参考文献：Woffgang Pfleiderer&Heiner Giegrich，1998，美国专利， US5763599)，双光气毒性很大，操作起来很不方便，并且严重污染环境，在生产中应尽可能 避免使用。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，本发明提供一种碳酸酯类光敏试剂及其制备方法、5'-光敏 保护核苷的制备方法，本发明合成一种新的碳酸酯类光敏试剂，其与对伯（1°)醇和仲(2°) 醇具有高度反应选择性，将光敏基团选择性引入核苷的5'-位，使得5'-光敏保护核苷的产 率大幅提尚。
[0006] 本发明采用的技术方案是：
[0007] 一种碳酸酯类光敏试剂，其结构式为：
[0009] 其中X为-0X'、咪唑基、取代咪唑基，所述取代咪唑基为2-甲基咪唑基、1，2,4_三氮 P坐基;-0X'中X'为对硝基苯基(4-nitrophenyl)，五氟苯基(pentafluorophenyl) ,2-吡啶基 (2-pyridyl)，和琥泊酰亚胺基(succinimidyl)。
[0010] -种碳酸酯类光敏试剂的制备方法，步骤包括：
[0011] A、将2-邻硝基苯-1-丙醇溶于有机溶剂中，加入碳酸二酯类试剂或羰基二唑类试 剂，再加入三乙胺，室温下搅拌反应6-10h;
[0012] B、将反应后的溶液先后用水和饱和氯化钠水溶液萃取，保留有机溶液层，有机溶 液用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液蒸干，真空干燥，得2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯类光敏试 剂。
[0013] 所述步骤A中有机溶剂选自二氯甲烷，三氯甲烷，乙酸乙酯、甲苯中的一种；
[0014] 所述步骤A中2-邻硝基苯-1-丙醇、碳酸二酯类试剂或羰基二唑类试剂、三乙胺在 有机溶剂中的浓度分别为 〇 ? 40-0 ? 65mol/L、0 ? 50-0 ? 75mol/L、0 ? 40-0 ? 65mol/L。
[0015] 所述步骤A碳酸二酯类试剂选自双（对硝基苯)碳酸酯、双（五氟苯)碳酸酯、碳酸 二-2-吡啶酯、N，N' -琥珀酰亚胺基碳酸酯中的一种;羰基二唑类试剂选自N ' N-羰基二咪唑、 N'N-羰基二(2-甲基咪唑），N'N-羰基二（1，2，4-三氮唑）中的一种；
[0016] 所述步骤A室温温度为10-3(TC。
[0017] -种5 光敏保护核苷的制备方法，步骤包括：
[0018] a、将干燥的2 脱氧核苷溶于无水吡啶和二氯甲烷的混合溶剂中，冷却至-3°C-3 °C，依次加入2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯类光敏试剂和三乙胺，在室温下搅拌反应14_22h， 减压蒸去反应溶剂，得5'-(2_邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-2'_脱氧核苷粗产物，即5'-光敏保 护核苷粗产物；
[0019] b、将5'-光敏保护核苷粗产物用乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液的混合液萃取，保留 乙酸乙酯层，乙酸乙酯层先后用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后乙酸乙酯层用无水硫酸 钠干燥，过滤，滤液蒸干，将蒸干后的产物用硅胶柱层析提纯，以二氯甲烷/甲醇为洗脱溶 剂，收集产物组分，浓缩得5'_(2_邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-2'_脱氧核苷即5'-光敏保护核 苷。
[0020]所述步骤a中2 脱氧核苷选自2 脱氧胸苷、2 脱氧尿苷，N-乙酰基-2 脱氧胞 苷、N-苯甲酰基-2'-脱氧腺苷、N-异丁酰基-2'-脱氧鸟苷中的一种；
[0021]所述步骤a中2'-脱氧核苷、2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯类光敏试剂和三乙胺在无 水吡啶和二氯甲烷的混合溶剂中的浓度分别为0.25-0.35mol/L、0.29-0.39mol/L、0.26-0?36mol/L。
[0022] 所述步骤a中无水吡啶与二氯甲烷的体积比为4-6:1;
[0023] 所述步骤a中室温温度为10_30°C;
[0024]所述步骤b中乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液体积比为1-2:1;碳酸氢钠水溶液质量百 分浓度为3-5 %;
[0025] 所述步骤b中洗脱溶剂中二氯甲烷与甲醇体积比为20-50:1。
[0026] 5'-光敏保护核苷的制备方法的反应原理如下：
[0028] 在式中，BR为胸腺嘧啶（Thymine，简称T)、N4_乙酰胞嘧啶(N 4_Acetyl Cytosine,简 称Ac-C)，N6-苯甲酰基腺嘌呤(N6-Benzoyl-Adenine，简称Bz-A)，和N2-异丁酰基鸟嘌呤(N 2-ibu-Guanine,简称ibu-G)等。由于5'-(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）中与邻硝基苯相连的碳 原子具有手性，所得5'-光敏保护核苷产物应为比例约为1:1的二个非对映异构体的混合 物，在对产物1H HMR和HPLC分析中，可清晰地观察到二个非对映异构体的存在。
[0029]本发明使用对伯（1°)醇和仲(2°)醇具有高度反应选择性的碳酸酯类光敏试剂，选 择性地与脱氧核苷或碱基保护的脱氧核苷中的伯（1°)醇5'-OH反应，选择性生成5'-光敏 保护核苷，将生成所需产物(5'_光敏保护核苷)与副产物(3'_光敏保护核苷和3'，5'_双光 敏保护核苷)的比例从5:1至2:1(平均为3.5:1)提高到14:1至10:1(平均为12:1)，选择性平 均提高了3.4倍，减化了提纯过程，提高了产率，大大降低了生产成本，同时避免了使用剧毒 的双光气，为制备广泛用于基因芯片技术的5'-光敏保护核苷及其衍生物提供了一种高效 实用的新工艺方法，具有很高的应用价值。
【具体实施方式】
[0030] 实施例1:
[0031] 5'-NPP0C_dT(互)的制备
[0032] la.光敏试剂的制备反应步骤：
[0034]室温25°C，在反应容器中，将2-邻硝基苯-1-丙醇丄[2-(2-11；[1：1'(^1161171)口1'(^311-1-01，54.4g，0.30mol ]溶于二氯甲烧（544ml)中，加入双（对硝基苯）碳酸酯兰[1318(4-nitrophenyl) carbonate，0 ? 33mol ]，再加入三乙胺(0 ? 303mol);室温搅拌反应体系，6小时 后，HPLC表明反应完全，停止反应，反应溶液先后用水(2x 300ml，表示用300ml水萃取后，再 用300ml水萃取一次，共萃取2次)和饱和氯化钠水溶液(300ml)萃取，保留有机(二氯甲烧） 层，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液蒸干，真空干燥，得对硝基苯碳酸(2-邻硝 基苯)_1_丙酯g，87.3g，HPLC纯度为96%，产率为84%。
[0035] lb.选择偶联反应步骤：
[0037] 将干燥的2'-脱氧胸苷！(Thymidine，0? 20mol)溶于无水吡啶（485ml)和二氯甲烧 (97ml)中，冷却，在0°C先后依次加入硝基苯碳酸（2-邻硝基苯)-1_丙酯}(0.224m〇l)和三 乙胺（0.204mol)，加毕，在室温25°C搅拌反应体系，14小时后，HPLC表明反应完全，停止反 应，减压蒸去反应溶剂，得5'-[对硝基苯碳酸(2-邻硝基苯)-1_丙基碳酸酯]-2'-脱氧胸苷互 (5 ' -NPPOC-dT)反应粗产物。此时，HPLC表明产物(5 ' -光敏保护核苷）与副产物(3 ' -光敏保 护核苷和3 '，5 双光敏保护核苷)的比例为14:1。
[0038] lc、提纯步骤：
[0039] 将上述5 ' -NPPOC-dT反应粗产物用乙酸乙酯（500ml)和3 %碳酸氢钠水溶液 (300ml)萃取，保留乙酸乙酯层，乙酸乙酯层先后用水(300ml)和饱和氯化钠水溶液(300ml) 洗涤，然后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干，得5 ' -NPPOC-dT粗产物。5 ' -NPP0C-dT粗产物用硅胶柱层析提纯，以二氯甲烷/甲醇为洗脱溶剂，收集产物组分，浓缩得 5'-(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2'_脱氧胸苷5'-NPPOC-dT)，73.7g，HPLC纯度为 98.3%，产率为82%。5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2 ' -脱氧胸苷g5 ' -NPPOC-dT)的化 学结构通过1H NMR和LC-MS(M+)证实。
[0040] 5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2 ' -脱氧胸苷g(5 ' -NPPOC-dT): 4 NMR(CDC13， 4001抱）5化口111)8.65(8，顺，非对映异构体），8.63(8，順，非对映异构体），7.76(111，1-厶广11，11-NPP0C)，7 ? 57(t，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 40(m，2Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 31 (s，H-6，非对映异构体）， 7.28(8，11-6，非对映异构体），6.33(^-1'，非对映异构体），6.29(^-1'，非对映异构体）， 4.31-3.87(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)，3.76(m，lH，NPP0(^9-CH)，2.61-2.58 (dd，lH，3'-OH),2.39-2.18(m，2H，H-2'），1.85,1.74(2s，3H，5-CH3)，l.38,1.35(2d，3H， NPP0C的-CH3); LC-MS: m/z f or (M+H) +，计算值C2QH24N3O9，450 ? 41 ?;实测值450 ? 4。
[0041 ] 实施例2:
[0042] 5'-NPP0C-N-Ac-dC(竺)的制备 [0043] 2a.光敏试剂的制备反应步骤：
[0045]室温20<€下，在反应容器中，将2-邻硝基苯-1-丙醇1[2-(2-11；[1：1'(^116117141'(^&11-1-01，0.30mol]溶于三氯甲烧（544ml)中，加入双（五氟苯）碳酸酯兰[Bis (pentaf luorophenyl )carbonateO ? 33mol ]，再加入三乙胺（0 ? 303mol)。室温搅拌反应体系， 9小时后，HPLC表明反应完全，停止反应，反应溶液先后用水(2x 300ml)和饱和氯化钠水溶 液(300ml)萃取，保留有机(三氯甲烷)层;三氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后，过滤，蒸干，真 空干燥，得五氟苯碳酸(2-邻硝基苯)-1_丙酯^，95.1 8，即^：纯度为97%，产率为81%。
[0046] 2b ?选择偶联反应步骤：
[0048] 将干燥的N-乙酰基-2'-脱氧胞苷g(N-Ac-dC，0.20mol)溶于无水吡啶（540ml)和二 氯甲烷（108ml)中，冷却，在0°C先后依次加入五氟苯碳酸（2-邻硝基苯）-1_丙酯Z (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加毕，在室温20°C搅拌反应体系，18小时后，HPLC表明反 应完全，停止反应，减压蒸去反应溶剂，得5 ' - (2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-乙酰基-2 ' -脱氧胞苷&(5 ' -NPPOC-N-Ac-dC)反应粗产物。此时，HPLC表明产物(5 ' -光敏保护核苷）与副 产物(3 光敏保护核苷和3 '，5 双光敏保护核苷)的比例为12:1。
[0049] 2c.提纯步骤：
[0050] 将上述5'-即?0(：-^4(3-(1(：反应粗产物用乙酸乙酯（50〇1111)和和3%碳酸氢钠水溶 液（300ml)萃取，保留乙酸乙酯层，乙酸乙酯层先后用水（300ml)和饱和氯化钠水溶液 (300ml)洗涤，然后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-Ac-dC粗 产物。5 ' -NPPOC-N-Ac-dC粗产物用硅胶柱层析提纯，以二氯甲烷/甲醇为洗脱溶液，收集产 物组分，浓缩得5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-N-乙酰基-2 ' -脱氧胞苷^(5'-即?0(：，-Ac-dC)，75.3g，HPLC纯度为98.1 %，产率为79 %。5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-乙酰 基-2' _脱氧胞苷&(5' -NPPOC-N-Ac-dC)的化学结构通过1H NMR和LC-MS(M+)证实。
[0051 ] 5 ' - (2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-N-乙酰基-2 脱氧胞苷&(5 ' -NPPOC-N-Ac-dC) :咕 NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)8.92(br，乙酰基-NH,非对映异构体），8.89(br,乙酰基-NH, 非对映异构体），7.92((1，11-6，非对映异构体），7.89((1，11-6，非对映异构体），7.74(111，1-八广 H，H-NPPOC)，7 ? 55(t，1 -Ar-H，H-NPPOC)，7 ? 38(m，2Ar-H，H-NPPOC)，7 ? 29(d，H-5，非对映异构 体），7.26((1，11-5非对映异构体），6.24(^-1'，非对映异构体），6.19(^-1'，非对映异构 体），4.32-3.89(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)，3.75(m，lH，NPP0(^9-CH)，2.62-2.59(dd，lH，3，-OH)，2.38-2.17(m，2H，H-2，），2.14,2.11(2s，3H，CH3C = 0)，l .40,1.37(2(1， 3H，NPPOC的-CH3); LC-MS:m/z for(M+H) +，计算值C21H25N4O9，477 ? 44 ?;实测值477 ? 5。
[0052] 实施例3:
[0053] 5'-NPP0C-N-Bz-dA(p)的制备 [0054] 3a.光敏试剂的制备反应步骤：
[0056] 室温25°C下，在反应容器中，将2-邻硝基苯-1-丙醇1[2-(2-11；[1：1'(^116117141'(^已11- 1-01，0 ? 30mol ]溶于乙酸乙酯（ 540ml )中，加入N 'N-羰基二咪唑1_^(1，1/-Carbonyldiimidazole，0 ? 33mol)，再加入三乙胺(0 ? 303mol)。室温搅拌反应体系，7小时后， HPLC表明反应完全，停止反应，反应溶液先后用水(2x 300ml)和饱和氯化钠水溶液(300ml) 萃取，保留有机（乙酸乙酯）层；乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥后，过滤，蒸干，真空干燥，得 N-咪唑碳酸(2-邻硝基苯)-1 -丙酯U，69.4g，HPLC纯度为96 %，产率为84 %。
[0057] 3b.选择偶联反应步骤：
[0059] 将干燥的N-苯甲酰基-2 ' -脱氧腺苷B(N-BZ-dA，71. lg，0.20mol)溶于无水吡啶 (710ml)和二氯甲烷（142ml)中，冷却，在0°C先后依次加入N-咪唑碳酸（2-邻硝基苯)-1_丙 酯U (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加毕，在室温25°C搅拌反应体系，16小时后，HPLC表 明反应完全，停止反应，减压蒸去反应溶剂，得5 '-(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰 基-2 ' -脱氧腺苷5 ' -NPPOC-N-Bz-dA)反应粗产物。此时，HPLC表明产物(5 ' -光敏保护核 苷)与副产物(3 光敏保护核苷和3 '，5 双光敏保护核苷)的比例为11:1。
[0060] 3c ?提纯步骤：
[0061 ] 将上述5'-即?0(：-182-(^反应粗产物用乙酸乙酯（60〇1111)和和3%碳酸氢钠水溶 液（400ml)萃取，保留乙酸乙酯层，乙酸乙酯层先后用水（400ml)和饱和氯化钠水溶液 (400ml)洗涤，然后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-Bz-dA粗 产物。5 ' -NPPOC-N-Bz-dA粗产物用硅胶柱层析提纯，以二氯甲烷/甲醇为洗脱溶剂，收集产 物组分，浓缩得5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰基-2 ' -脱氧腺苷以(5'-即?0(：-N-Bz-dA)，90. lg，HPLC纯度为98.2%，产率为80%。5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯 甲酰基-2' -脱氧腺苷巧(5' -NPPOC-N-Bz-dA)的化学结构通过1H NMR和LC-MS(M+)证实。 [0062] 5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰基-2 ' -脱氧腺苷以(5'-陬?0(：，-82- dA):咕 NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)9.29(br，苯甲酰基-NH,非对映异构体），9.25(br,苯甲 酰基-NH，非对映异构体），8.61 (s，H-2，非对映异构体），8.58(s，H-2，非对映异构体），8.19 (s，H-8，非对映异构体），8.16(s，H-8，非对映异构体），7.86(m，2H，苯甲酰基的Ar-H)，7.75 (m，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 56(t，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 45-7 ? 44(m，3H，苯甲酰基的Ar-H)，7 ? 37 (m，2Ar-H，H-NPP0C)，6.35(t，H-r，非对映异构体），6.31 (t，H-r，非对映异构体），4.31_ 3?88(m，6H，H-3 '，H-4 '，2H-5 '，NPPOC的-CH2)，3?74(m，1H，NPPOC的-CH)，2?83-2?80(dd，1H， 3'-OH),2.39-2.17(m，2H，H-2'），1.41，1.38(2d，3H，NPP0C的-CH3);LC-MS:m/z for(M+H)+， 计算值 C27H27N6〇8，563 ? 53 ?;实测值563 ? 5。
[0063] 实施例4:
[0064] 5'-NPP0C_dT(互)的制备 [0065] 4a.光敏试剂的制备反应步骤：
[0067] 室温26°C下，在反应容器中，将2-邻硝基苯-1-丙醇丄[2-(2-11；[1：1'(^1161171)口1'(^已11-1-01，54 ? 4g，0 ? 30mol ]溶于二氯甲烧（540ml)中，加入碳酸二_2_吡啶酯 14(Di_2-pyridyl carbonate，0.33mol )，再加入三乙胺(0.303mol)。室温搅拌反应体系，10小时后，HPLC表明 反应完全，停止反应，反应溶液先后用水(2x 300ml)和饱和氯化钠水溶液(300ml)萃取，保 留有机(二氯甲烷)层;二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后，过滤，蒸干，真空干燥，得(2-吡啶） 碳酸-2-邻硝基苯-1-丙酯丛，74 ? 4g，HPLC纯度为97 %，产率为82 %。
[0068] 4b.选择偶联反应步骤：
[0070] 将干燥的N-异丁酰基-2 ' -脱氧鸟苷迟(N-ibu-dG，0.20mol)溶于无水吡啶(670ml) 和二氯甲烷（134ml)中，冷却，在0°C先后依次加入（2-吡啶）碳酸-2-邻硝基苯-1-丙酯也 (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加毕，在室温26°C搅拌反应体系，22小时后，HPLC表明反 应完全，停止反应，减压蒸去反应溶剂，得5'-(2_邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-异丁酰基- 2 ' -脱氧鸟苷5 ' -NPPOC-N-ibu-dG)反应粗产物。此时，HPLC表明产物(5 ' -光敏保护核苷） 与副产物(3 光敏保护核苷和3 '，5 双光敏保护核苷)的比例为10:1。
[0071] 4c ?提纯步骤：
[0072] 将上述5 ' -NPPOC-N-ibu-dG反应粗产物用乙酸乙酯(600ml)和和3 %碳酸氢钠水溶 液（400ml)萃取，保留乙酸乙酯层，乙酸乙酯层先后用水（400ml)和饱和氯化钠水溶液 (400ml)洗涤，然后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-ibu-dG 粗产物。5 ' -NPPOC-N-ibu-dG粗产物用硅胶柱层析提纯，以二氯甲烷/甲醇为洗脱溶剂，收集 产物组分，浓缩得5'-(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯）-.异丁酰基-2'-脱氧鸟苷1^(5'_ NPPOC-N-ibu-dG)，82.8g，HPLC纯度为98.0%，产率为76%。5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸 酯)4-异丁酰基-2'-脱氧鸟苷立(5'-即?0(：4-让11-(16)的化学结构通过 111匪1?和^：-]^(]\〇 证实。
[0073] 5 ' -(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-异丁酰基-2 ' -脱氧鸟苷立(5 ' -NPP0C-N-ibu- dG): NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)10.25(s，鸟嘌呤-NH,非对映异构体），10.21(s,鸟嘌呤- NH,非对映异构体），9.28(br,异丁酰基-NH,非对映异构体），9.24(br,异丁酰基-NH,非对 映异构体），7.97(8，11-8，非对映异构体），7.94(8，11-8，非对映异构体），7.74(111，14^11-NPP0C)，7.57(t，l-Ar-H，H-NPP0C)，7.38(m，2Ar-H，H-NPP0C)，6.19(t，H-l'，非对映异构 体），6.16(t，H-l'，非对映异构体），4.33-3.90(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)， 3.73(111，111，陬？0(：的-〇1)，2.77-2.74(111，111，异丁酰基的-〇〇,2.61-2.58((1(1，111，3'-〇1〇， 2.39-2.17(m，2H，H-2'），1.42，1.39(2d，3H，NPP0C的-CH3)，1.21，1.18(dd，6H,异丁酰基的-CH3); LC-MS :m/z for(M+H) +,计算值C24H29N6O9，545 ? 51,实测值545 ? 5。
【主权项】
1. 一种5 光敏保护核巧的制备方法，步骤包括： a、 将干燥的2'-脱氧核巧溶于无水化晚和二氯甲烧的混合溶剂中，冷却至-3°C-3°C，依 次加入2-邻硝基苯-1-丙基碳酸醋类光敏试剂和Ξ乙胺，在室溫下揽拌反应14-2化，减压蒸 去反应溶剂，得5 '-(2-邻硝基苯-1-丙基碳酸醋)-2 ' -脱氧核巧粗产物，即5 ' -光敏保护核巧 粗产物； b、 将5'-光敏保护核巧粗产物用乙酸乙醋和碳酸氨钢水溶液萃取，保留乙酸乙醋层，乙 酸乙醋层先后用水和饱和氯化钢水溶液洗涂，然后乙酸乙醋层用无水硫酸钢干燥，过滤，滤 液蒸干，将蒸干后的产物用硅胶柱层析提纯，W二氯甲烧/甲醇为洗脱溶剂，收集产物组分， 浓缩得5 ' -(2-邻硝基苯-1 -丙基碳酸醋)-2 ' -脱氧核巧即5 ' -光敏保护核巧。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤a中2'-脱氧核巧选自2'-脱氧 胸巧、2'-脱氧尿巧，N-乙酷基-2'-脱氧胞巧、N-苯甲酯基-2'-脱氧腺巧、N-异下酷基-2'-脱 氧鸟巧中的一种。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤a中2'-脱氧核巧、2-邻硝基苯- 1-丙基碳酸醋类光敏试剂和Ξ乙胺在无水化晚和二氯甲烧的混合溶剂中的浓度分别为 0.25-0.35mol/L、0.29-0.39mol/L、0.26-0.36mol/L。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤a中无水化晚与二氯甲烧的体 积比为4-6:1。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤b中乙酸乙醋和碳酸氨钢水溶 液体积比为1-2:1;碳酸氨钢水溶液质量百分浓度为3-5%;洗脱溶剂中二氯甲烧与甲醇体 积比为20-50:1。6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述2-邻硝基苯-1-丙基碳酸醋类光敏 试剂的结构式为：其中X为-OX'、咪挫基、取代咪挫基;-OX'中X'为对硝基苯基、五氣苯基、2-化晚基、和班 巧酷亚胺基。7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于： 所述2-邻硝基苯-1-丙基碳酸醋类光敏试剂的制备步骤包括： A、 将2-邻硝基苯-1-丙醇溶于有机溶剂中，加入碳酸二醋类试剂或幾基二挫类试剂，再 加入Ξ乙胺，室溫下揽拌反应6-lOh; B、 将反应后的溶液先后用水和饱和氯化钢水溶液萃取，保留有机溶液层，有机溶液用 无水硫酸钢干燥后，过滤，滤液蒸干，真空干燥，得2-邻硝基苯-1-丙基碳酸醋类光敏试剂。8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述步骤A中有机溶剂选自二氯甲烧，Ξ 氯甲烧，乙酸乙醋或甲苯中的一种。9. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述步骤A中2-邻硝基苯-1-丙醇、碳酸 二醋类试剂或幾基二挫类试剂、Ξ乙胺在有机溶剂中的浓度分别为0.40-0.65111〇1/1、0.50- 0.75mol/L、0.4〇-〇.65mol/L。10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述步骤A碳酸二醋类试剂选自双(对 硝基苯)碳酸醋、双(五氣苯)碳酸醋、碳酸二-2-化晚醋、N，N'-班巧酷亚胺基碳酸醋中的一 种;幾基二挫类试剂选自N'N-幾基二咪挫、N' N-幾基二(2-甲基咪挫），N' N-幾基二（1，2，4- Ξ氮挫）中的一种。
【文档编号】C07C205/43GK105968016SQ201610325613
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2015年2月12日
【发明人】石平, 林金来
【申请人】石平, 林金来