一种新的二苯乙烯类化合物及其制备方法和医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种新的二苯乙烯类化合物及其制备方法和医药用途，提供了该化合物结构，含其的药物组合物及其制备方法和应用。该化合物为首次报道，是一种结构新颖的二苯乙烯类化合物，可以从大黄的干燥根及根茎中提取、分离纯化得到。体外试验证明该化合物能明显提高ox?LDL损伤的人脐静脉内皮细胞的细胞活力，说明其具有抑制ox?LDL诱导的HUVEC损伤的作用。同时该化合物能显著减少ox?LDL诱导的HUVEC凋亡，并且效果呈剂量依赖性，可以用来开发成内皮细胞保护的药物。
【专利说明】
一种新的二苯乙烯类化合物及其制备方法和医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从大黄的干燥根及根茎中分离得到的一种具 有内皮细胞保护作用的二苯乙烯类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 大黄(Rhubarb)为历代医家本草和历版《中国药典》收载的常用中药，是传统泻下 类中药的代表，来源于寥科植物掌叶大黄jOaiffatuff L.、唐古特大黄 Maxim, ex Balf.或药用大黄他et/ff o/fici/3a_/e Baill?的干燥根及根莖。大 黄是中医常用的泻火药物，现代医学对大黄的功效与作用进行了药理研究，并且分析了大 黄在治病方面的应用。大黄的主要功效有泻火通便等，主要用来降血压、降血脂等。在中国， 大黄主要作药用，但在欧洲及中东，其大黄往往指另外几个作食用的大黄属品种，茎红色。 气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。除去细根，刮 去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。
[0003] 大黄具多类药效活性成分，其中以蒽醌类、二蒽酮类、芪类、鞣质和多糖研究最多。 大黄中具有致泻作用的主要成分是蒽醌苷及双蒽酮苷，其泻下作用较相应苷元强。蒽醌苷 有:大黄酚-1-葡萄糖苷或大黄酚苷、大黄素-6-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-葡萄糖苷、大黄素 甲醚葡萄糖苷、大黄酸-8-葡萄糖苷;掌叶大黄中还含有大黄素双葡萄糖苷、芦荟大黄素双 葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷。双蒽酮苷有番泻苷六、8、(：、04、？。大黄一直是常用大宗中药 材，通过对近年来国内外文献的查阅可见，其成分研究已从传统的蒽醌类、蒽酮类扩大到 二苯乙烯类、苯丁酮类及多糖类等，但少有新化合物被发现。
[0004] 现代药理学研究表明，大黄药理作用主要有调节胃肠功能、抗病原微生物、抗肿 瘤、保护心脑血管、抗炎、保肝及抗衰老等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从大黄的干燥根及根茎中分离得到的一种具有内皮细 胞保护作用的二苯乙烯类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将大黄的干燥根及根茎粉 碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱体 积，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次 用体积比为80 :1、55:1、35:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（(1)步骤 (c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的 化合物(I)。
[0008] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0009] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0010] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0011] 所述的化合物(I)在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0012] 所述的药物组合物在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0013] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0014] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0015] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0017] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证 药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰 化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0018] 经鉴定该大黄为寥科植物药用大黄油et? o/ficioaie Baill.的干燥根及根莖。
[0019] 制备方法：（a)大黄的干燥根及根茎（10kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（25LX 3 次），合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱 和的正丁醇(6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(355g)和正丁醇萃取 物；（b)步骤(a冲乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用15%乙醇(8L)和75%(12L) 乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（154g);(c)步骤(b)中75% 乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、55:1 (8个柱体积）、35:1 (6个柱体积）、10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组 分；（d)步骤(c)中组分4(46g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1(8个柱体积）、 10:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d) 中组分2(27g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液 等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(35mg)。
[0020] 结构确证：111^31]\^显示[]\?1]+为111/2 361.2128，结合核磁特征可得分子式为 (：25112802，不饱和度为12。核磁共振氢谱数据5[1化口 111，00300,50(^取）：11-2(6.68,8)，11-7 (7.33，dJ=16.2Hz)，H-8(6.91，dJ=16.2Hz)，H-10(7.49，dJ=7.5Hz)，H-ll(7.35，tJ= 7.5Hz)，H-12(7.26，tJ=7.5Hz)，H-13(7.35，tJ=7.5Hz)，H-14(7.49，dJ=7.5Hz)，H-r (6.64，dJ=10.2Hz)，H-2'（5.60，dJ=10.2Hz)，H-4'（1.41，s)，H-5'（1.41，s)，H-l' '（3.37， overlap，2H)，H-2'，（5.06，tJ=7.8Hz)，H-4'，（1.83，s)，H-5' '（1.66，s)，3-0Me(3.84，s); 核磁共振碳谱数据Sc(ppm，CD30D，125MHz ) : 138 ? 2(C，1 -C)，101 ? 8(CH，2-C)，150 ? 5(C，3-C)， 109.7(C，4-C)，152.6(C，5-C)，119.9(C，6-C)，127.2(CH，7-C)，130.7(CH，8-C)，139.2(C，9-C)，127.4(CH，10-C)，128.9(CH，n-C)，128.1(CH，12-C)，128.9(CH，13-C)，127.4(CH，14-C)，117.8(CH，r-C)，129.2(CH，2'-C)，76.4(C，3'-C)，27.2(CH 3,4'-C)，27.2(CH3,5'-C)， 24.3(CH2，r'-C)，125.5(CH，2''-C)，129.6(C，3''-C)，17.5(CH 3,4''-C)，25.4(CH3,5''-C)，56 ? 8(CH3，3-0Me)。红外波谱表明该化合物含有芳香环（1625cm-1，1585m- 1，1460cm-b基 团。1H-NMR谱存在一组无取代苯环质子信号(g 7.49 (2H，d，J=7.5Hz )、7.35 (2H，t，J=7.5Hz ) 与7.26(111，丨，/=7.5抱），一组反式烯烃质子信号（8 7.33(111，(1，/=16.2抱）与6.91(111，(1，/= 16.2Hz)，这表明该化合物含有反式二苯乙烯片段；一组二甲基烯丙基质子信号<8 3.37 (211，(^643?)、5.06(111，扒/=7.8他），1.83(111，8)，1.66(111，8)，一组顺式双键质子信号（8 6.64(111，(1，/=10.2抱）与5.60(111，(1，/=10.2泡），一组等价甲基质子信号（8 1.41(611，8)，一 个芳烃质子信号6.68(lH，s)，一个甲氧基质子信号(g S.SeUHdhUC-NMI^DEPI^raSQC 谱中显示有25个碳信号，包括五个甲基（一个甲氧基），一个亚甲基，十一个次甲基（五个烯 烃碳，六个芳烃碳），以及八个季碳(六个芳烃碳，一个烯烃碳）；以上功能结构再结合不饱和 数表明该化合物为三环结构。HMBC谱中，H-2与C-3，C-4和C-7、H-8与C-1、H-1'与C-4、H-2'与 C-4、H 2-1''与C-1和C-5以及H-2''与C-5的相关信号确认了化合物连接方式。由13C-NMR谱中 03与05的化学位移<?-3 150.5与(?-5 152.6可知(：-3、(：-5皆为连氧碳。腿8(：谱中，3-(116的11 与C-3的相关信号证明了 C-3位连有甲氧基，而11-1'、11-2'、113-4'、113-5'与(：-3'存在相关信 号，C-3'的化学位移为<?- 3, 75.4也提示C-3'为连氧碳，通过以上波谱分析推断A环通过氧 连接与顺式烯烃结构环化形成二甲基苯并吡喃结构。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以 及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试 验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022]实施例2:化合物（I)药理作用试验 一、材料和仪器 人脐静脉内皮细胞珠(HUVEC)由上海午立生物技术有限公司细胞库提供。化合物(I)自 制，HPLC归一化纯度大于98%。1^]\〇-1640培养基、MTT、二甲基亚砜均购于Sigma公司。胎牛血 清购于HyCLone公司。FITC标记羊抗兔IgG、兔抗人第八因子相关抗原购于北京博奥森生物 技术有限公司。MDA含量检测试剂盒购于南京建成生物研究所。AnnexinV-FITC凋亡检测试 剂盒购于Centrebio公司。乙二胺四乙酸(EDTA)购于广州威佳科技有限公司。
[0023] DK-8AD型电热恒温水槽(上海一恒科学仪器有限公司），ER-120A型电子分析天平 (岛津公司），6219型电子pH计（上海任氏电子有限公司），高速低温离心机（Sigma公司）， L420台式低速自动平衡离心机(湘仪离心机仪器有限公司），SYC-2101水平摇床(其林贝尔 仪器制造有限公司），1〇〇〇此微量加样枪X 1支、20-100yL微量加样枪X 1支、1-20此微量加 样枪X 1支(法国吉而森公司），⑶2(培养箱Heraeus公司），超净台（苏净集团安泰公司），倒 置相差显微镜(德国莱卡公司），酶标仪(Sigma)，FACS CaLibur(流式细胞仪）。
[0024]二、试验方法 1、脐静脉内皮细胞的培养 1.1培养条件 将新购入的HUVEC细胞株接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基。置于37°C，5%C02 培养箱中，每2天更换1次培养基。
[0025] 1.2细胞传代 取一瓶HUVEC在倒置相差显微镜下观察细胞，如长成致密的单层，即可进行传代;将培 养瓶轻轻摇动数次，悬浮起浮在细胞表面的碎片，然后连培养液一起倒出，吸取2~3mL PBS 液加入培养瓶中，轻轻振荡后倾去，重复3次;加入lmL 0.25%胰酶，以能覆盖瓶底为限，转动 培养瓶，使湿润整个细胞层，置37 °C孵育箱内消化2~3min，待确认细胞己收缩变圆时为止； 加lmL培养液于培养瓶中终止消化，用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁 脱离形成细胞悬液，注入离心管离心(800r/min，5min)后弃去上清液;加入3mL培养液于离 心管中，用吸管吸取培养液轻轻吹打数次，使细胞悬重，然后按1:3或1:4分配传代培养;置 于孵育箱内37°C、5%C(Vg温箱中培养，24h后换液，通常3-4天可形成单层，此时便可换维持 液供实验用。
[0026] 1.3 HUVEC的计数 首先取待测的细胞悬液50yL滴入细胞计数板内，按白细胞计数法，于低倍镜下计数4角 的4个大方格内的细胞总数，然后用以下公式计算细胞浓度:4个大方格内的活细胞数/4 X 104=细胞数/mL 2、脐静脉内皮细胞的鉴定 在6孔培养板内放置无菌盖玻片lcm X lcm，将内皮细胞悬液接种于盖玻片上，待内皮细 胞长至汇合状态时，取出盖玻片，用冲洗盖玻片，放入100%丙酮中固定15min，用PBS冲洗 3次，每次2min，滴加3%的H 2〇2室温孵育8min，PBS冲洗3次，每次2min，滴加兔抗人硼因子单克 隆抗体（1:100)，另一盖玻片上不加一抗作阴性对照4°C过夜。次日，用PBS冲洗3次，每次 2min，滴加FITC标一记的羊抗兔IgG，37 °C孵育60min，用PBS冲洗3次，每次2min，荧光显微镜 下观察并拍照。
[0027] 3、利用MTT比色法测定HUVEC的细胞活性 3.1利用MTT比色法观察不同浓化合物（I)对脐静脉内皮细胞活性的影响 3.1.1传代培养 将HUVEC按2X104/mL的密度用含10%FBS的RPMI-1640培养基接种于96孔板，每孔种植 200此。
[0028] 3.1.2分组加药 传代细胞培养24h后，用含10%FBS的RPMI-1640培养基配制药物，将细胞随机分为6组： 对照组（contro 1)，化合物（I)5yg/mL组，化合物（I) 1 Oyg/mL组，化合物（I)20iig/mL组，化合 物（I )40yg/mL组，化合物（I )80yg/mL组，每孔6孔。继续培养48小时后，MTT法检测细胞活性。
[0029] 3.1.3 MIT法检测 直接向每孔加入20yL己配制好的MTT溶液，37°C孵育4h，吸净上清，然后加入150yL DMS0。待结晶充分溶解后，利用酶标仪在波长490nm处测定0D值。
[0030] 3.2利用MTT比色法观察不同浓度ox-LDL对脐静脉内皮细胞活性的影响 3.2.1传代培养：同上。
[0031] 3.2.2分组加药 细胞培养24h后，用含10%FBS的RPMI-1640培养基配制药物，将细胞随机分为6组:对照 组（(3〇111：1'〇1)，(《-〇)1(为自制）10辟/1111组，(《-〇)]^20邱/1111组，(《-〇)]^40邱/1111组，(《-〇)1^ 80yg/mL组，ox-LDL 160yg/mL组，每孔6孔。继续培养24小时，MTT法检测细胞活性。
[0032] 3.3利用MTT比色法观察化合物（I)对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤的干预作用 3.3.1传代培养：同上。
[0033] 3.3.2分组加药 细胞培养24h后，用10%FBS的RPMI-1640培养基配制药物，将细胞随机分为6组:对照组 (control)，ox-LDL 50iig/mL组，ox-LDL 50iig/mL+化合物（I)5iig/mL组，ox-LDL 50iig/mL+化 合物（I) 1 Oyg/mL组，ox-LDL 50yg/mL+化合物（I) 20yg/mL每孔6孔。继续培养24小时后，MTT 法检测细胞活性。
[0034] 4、利用流式细胞技术观察化合物(I)对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞凋亡的干预作 4.1用传代培养 将HUVEC按2X105/mL的密度用含10%FBS的RPMI-1640培养基接种于6孔板，每孔种植 1500此。
[0035] 4.2分组加药 细胞培养24h后，以RPMI-1640无血清培养基血清剥夺24h，使细胞进入静止状态。用含 RPML-1640血清培养基配制药物，将细胞随机分为5组：对照组（control)，ox-LDL 50yg/mL 组，ox-LDL 50iig/mL+化合物（I)5yg/mL组，。x-LDL 50iig/mL+化合物（I) lOyg/mL组，。x-LDL 50iig/mL+化合物(I) 20iig/mL每孔加lmL含药培养基。
[0036] 4.3操作步骤 加药后12h取材，把细胞培养液吸出至离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，用胰酶细胞消 化液消化细胞。细胞消化下来后，转移到离心管内，PBS洗三次（1000g离心10分钟）。加入200 此结合缓冲液，重悬细胞。加入10yL Annexinv-FITC、10yL PI染色液轻轻混匀。室温避光孵 育15分钟，30分钟内上机检测细胞凋亡。
[0037] 5、统计学分析 采用SPSS13.0统计一软件进行分析，结果表示为：均数士标准差(x土S)。方差齐时，两 组比较采用LSD，如多组与对照组比较使用Dunnett检验，当方差不齐时，采用WeLch稳健估 计，再采用T3方法两两比较。P〈0.05表示有统计学意义。
[0038]三、结果及结论 1、不同浓度化合物（I)对HUVEC细胞活力的影响 化合物（I)药物在一定的浓度范围才能发挥其药理作用，而且不同的细胞体系对药物 的敏感性也会有所不同。为此，首先用MTT法确定实验用的药物浓度范围。结果如表1( KS对 照组#P〈0.01)显示，不同浓度的化合物（I)对内皮细胞的作用效应不同，低剂量的药物浓 度(5~20yg/mL)细胞活性与对照组比较，没有统计学差异。40yg/mL作用48小时后细胞活力 下降了约50%，80yg/mL作用48小时后细胞活力下降了 70%，与对照组比较有统计学差异(P〈 0.01)，产生了一定的毒副作用。因此本实验所用的化合物（1)浓度为5、10、201^/!^，以排除 药物自身对细胞的毒性作用。
[0039] 2、不同浓度ox-LDL对脐静脉内皮细胞活力的影响 由于氧化低密度脂蛋白氧化程度的差异，氧化低密度脂蛋白的细胞毒性范围会有所不 同。因此我们先采用MTT确定ox-LDL细胞毒的范围。结果如表2(K对照组*P〈0.05 #P〈 0.01)所示，不同浓度ox-LDL对HUVEC细胞活性影响不同。与对照组相比，10yg/mL组有促进 HUVEC细胞活性增加的趋势，但与对照组比较没有统计学差异(P>0.05) ; 20~100yg/mL各组 内皮细胞活性随浓度增加而减少，与对照组比较有统计学差异(P〈〇. 05或P〈0.01)。
[0040] 3、化合物(I)对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤的干预作用 结果如表3( KS.ox-LDL group #P〈0.01)所示，ox_LDL(50iig/mL)组的细胞活性下降，与 对照组比较有统计学差异(P〈〇.〇l)，说明ox-LDL组细胞活性显著降低，ox-LDL(50yg/mL)对 正常HUVEC具有损伤作用。化合物（I)不同剂量组的细胞活性均高于ox-LDL组，与ox-LDL组 比较差异有统计学意义(P〈〇.01)，说明此三个剂量组的细胞活性显著高于ox-LDL组，提示 化合物（I)可抑制ox-LDL诱导的HUVEC损伤。化合物（I) 10yg/mL和化合物（I )20yg/mL组的细 胞活性高于化合物（I)5yg/mL组，与化合物（I)5yg/mL比较有统计学差异（P=0.01SP〈 0.01)。化合物（I )20yg/mL细胞活性较化合物（I) 10yg/mL组有升高趋势，但没有统计学差异 (P=0.185)。提示化合物(I)的内皮保护作用在一定范围内具有量效关系。
[0041 ] 4、化合物(I)对ox-LDL诱导损伤的脐静脉内皮细胞凋亡的影响 各组流式细胞结果显示:各组细胞的凋亡率差异有统计学意义(P〈〇. 01)，〇x-LDL组的 增殖指数明显升高，与对照组比较有统计学差异（P〈〇.〇l)说明〇x-LDL(50iig/mL)对正常 HUVEC具有损伤作用。化合物（I)不同剂量组的凋亡率均低于ox-LDL组，与ox-LDL组比较差 异有统计学意义(P〈〇. 01)，说明此三个剂量组的凋亡率显著低于ox-LDL组，提示化合物（I) 可抑制ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。化合物（I)不同剂量组的凋亡率随着剂量升高逐渐降低， 各组之间差异有统计学意义(P〈〇.01)。结果见表4(KS ox-LDL group #P〈0.01)。提示化合 物(I)的内皮保护效应在一定范围内具有量效关系。
[0042]结论，本研究采用MTT法检测发现化合物（I)能明显提高ox-LDL损伤的人脐静脉内 皮细胞的细胞活力，说明其具有抑制0 X - L D L诱导的H U V E C损伤的作用。进一步采用 AnnexinV-FITC、PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡，研究发现各浓度组化合物（I)均能显 著减少ox-LDL诱导的HUVEC凋亡，并且效果呈剂量依赖性。提示化合物（I)能通过抑制ox-LDL诱导的HUVEC凋亡来实现内皮保护作用。
[0043] 表1不同浓度化合物（I)对HUVEC细胞活力的影响(x土s，n=6)
表2 ox-LDL对HUVEC细胞活力的影响（x土s n=6 )
表3不同剂化合物（I)对ox-LDL诱导HUVEC损伤的干预作用(x 土 s，n=6 )
表4不同剂量化合物（I)对ox-LDL诱导HUVEC凋亡的作用(x土s，n=3)
实施例3 片剂的制备:按实施例1方法先制得化合物(I )，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或 甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:9的比例 加入赋形剂，制粒压片。
[0044] 实施例4 口服液制备:按实施例1方法先制得化合物(I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或 甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。
[0045] 实施例5 胶囊剂或颗粒剂的制备:按实施例1方法先制得化合物(I)，以及利用有机酸如酒石酸、 或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比 为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。
[0046] 实施例6 注射液的制备:按实施例1方法先制得化合物(I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸 或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封 灭菌制成注射液。
[0047] 实施例7 无菌粉针的制备:按实施例1方法先制得化合物(I)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬 酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅 拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉 针剂。
[0048]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 具有下述结构式的化合物（I)，2. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于包含W下操作步骤：（a)将大黄 的干燥根及根茎粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱12个柱体积，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏 用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、55:1、35:1、10:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱 得到5个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和5: 1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱 液减压浓缩得到纯的化合物(I)。3. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。4. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述用乙醇热回流提取 采用的乙醇浓度为80%。5. -种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I)和药学上可接 受的载体。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备内皮细胞保护的药物中的应用。7. 权利要求5所述的药物组合物在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
【文档编号】A61P9/00GK105968079SQ201610321333
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】徐珍
【申请人】苏州毕诺佳医药技术有限公司