甲哌佐酯光学活性体和以其作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂的制作方法

甲哌佐酯光学活性体和以其作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂的制作方法【专利摘要】本发明提供溴化甲哌佐酯的光学活性体，并提供含有该光学活性体作为有效成分的基于支气管扩张作用和抗炎作用的慢性阻塞性肺疾病改善剂，其是(3R)或(3S)?3?[(羟基)(二苯基)乙酰氧基]?1,1?二甲基哌啶鎓溴化物(以下称为“(R)或(S)?溴化甲哌佐酯”)，是含有该(R)或(S)?溴化甲哌佐酯作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂，另外，是给药方式为经气道给药或吸入给药的慢性阻塞性肺疾病改善剂。【专利说明】甲哌佐酯光学活性体和以其作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂
技术领域：
[0001]本发明涉及慢性阻塞性肺疾病改善剂，具体而言，涉及含有溴化甲哌佐酯（以下，有时也简称为"甲哌佐酯(mepenzolate)"）的光学活性体作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂。【
背景技术：
】[0002]慢性阻塞性肺疾病(COPD:ChronicObstructivePulmonaryDisease:以下有时也记为"C0PD"）是由于各种原因、特别是由于吸烟而使肺产生慢性炎症，并因此而引起肺胞的破坏、支气管粘液腺的肥大，结果造成气促、或者增加咳嗽或咳痰的疾病。[0003]以前，称为肺气肿(PE:pulmonaryemphysema)的疾病与称为慢性支气管炎（CB:chronicbronchitis)的疾病二者多以各种比例并发，因此目前将由二者引起的疾病统称为慢性阻塞性肺疾病(coro)。[0004]根据世界卫生组织(WHO)的估算，2005年全世界一年有300万人因⑶PD而丧命，占死亡原因的第4位，预测今后10年间将进一步增加30%。在日本根据厚生劳动省的统计，2005年日本人死亡总数的1.3%是因coro而死亡，占死亡原因的第10位，仅男性则占第7位。[0005]C0PD发病的最大原因是吸烟。coro患者的90%为吸烟者（非专利文献1)，与非吸烟者相比，吸烟者中C0PD发病的风险为6倍以上。吸烟者的约10~15%会出现C0PD发病，而仅高龄者则吸烟者的近50%为C0PD。作为其他原因，可列举出室内空气污染或大气污染、化学物质或粉尘的吸入、遗传所导致的coro、幼儿期肺炎/支气管炎等。[0006]作为其病状，是以气流受限、即呼气困难为特征的疾病，而病状的本质是气道的慢性炎症。由于吸烟、吸入物质，从中枢气道至细支气管(peripheralbronchus)，在肺的各种水平上引起炎症。其结果，认为由于蛋白酶-抗蛋白酶的不均等、氧化剂-抗氧化剂的不均等等，导致肺胞的破坏、支气管粘液腺的肥大。[0007]该coro会产生不可逆的气道破坏，因此是无法治愈的疾病。通过禁烟、由支气管扩张剂、祛痰剂、镇咳剂等的给药进行的药物疗法、或者氧疗法等仅使症状缓解，C0PD是极其麻烦的疾病。[0008]从上述观点出发，现状是迄今提出了各种coro改善剂、或者改善方法(例如专利文献1、2)，但期待更为优异的coro改善剂的出现。[0009]基于上述背景，本发明人等为了进行C0PD改善药的开发，从已上市药物中进行了探索研究，结果确认作为肠易激综合征（irritablebowel)的治疗药而被用于临床的溴化甲哌佐酯[商品名：Trancolon(注册商标）]显示出基于支气管扩张作用和抗炎作用的C0PD的治疗效果，完成了专利申请(专利文献3)。[0010]此次，本发明人等进行了进一步研究，着眼于溴化甲哌佐酯的化学结构，发现将其作为两种光学活性体制成的（R)型溴化甲哌佐酯、以及（S)型溴化甲哌佐酯也具有优异的coro改善作用，从而完成了本发明。[0011]已知溴化甲哌佐酯为具有下消化道的运动/收缩抑制作用的抗胆碱能药，从1967年起作为肠易激综合征的治疗药在临床上使用，但未知对于coro治疗有效，另外，迄今未知将该溴化甲哌佐酯作为光学活性体进行制备，各个光学活性体（即R型、s型）也有兼具支气管扩张作用和抗炎作用的coro治疗的改善效果。[0012]现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开2006-56890号公报专利文献2:日本特开2008-189667号公报专利文献3:PCT/JP2013/055476非专利文献非专利文献l:AnnualReviewofMedicine,V〇1.40，p411_429(1989)。【
发明内容】[0013]发明要解决的问题因此，本发明鉴于上述现状，目的在于提供溴化甲哌佐酯的光学活性体，并提供含有该光学活性体作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂。[0014]用于解决问题的方案用来解决上述问题的本发明，作为本发明的一个基本方式，是具有下式表示的立体结构的（3R)-3-[(羟基）（二苯基）乙酰氧基]-1，1-二甲基哌啶鐵溴化物（（3R)-3-[(hydroxy)(diphenyl)acetoxy]_l，1-dimethylpiperidiniumbromide，以下称为"(R)_溴化甲哌佐酯"）。[0015]另外，作为本发明的另一基本方式，是具有下式表示的立体结构的（3S)-3_[(羟基）（二苯基）乙酰氧基]-1，1-二甲基哌啶鑰溴化物（以下称为"(S)-溴化甲哌佐酯"）。[0016]进而，作为本发明的又一方式，是特征在于以上述各式表示的(R)或(S)-溴化甲哌佐酯作为有效成分的慢性阻塞性肺疾病改善剂，更具体而言，是给药方式为经气道给药或吸入给药的慢性阻塞性肺疾病改善剂。[0017]另外，本发明是上述各式表示的（R)或（S)-溴化甲哌佐酯的制备方法，具体而言，是特征在于使二苯乙醇酸在缩合剂的存在下与(R)或(S)-3_羟基-1-甲基哌啶反应，接着将所得产物与甲基溴进行处理的(R)或(S)-溴化甲哌佐酯的制备方法。[0018]发明的效果根据本发明，对于已用作肠易激综合征的治疗药、安全性经确认的溴化甲哌佐酯，提供以其光学活性体即(R)或(s)-溴化甲哌佐酯作为有效成分的coro改善剂。[0019]本发明提供的C0PD改善剂的有效成分即（R)或(S)-溴化甲哌佐酯是已在临床上使用的溴化甲哌佐酯的光学活性体，具有优异的C0PD改善作用，特别在经气道给药和吸入给药中具有显著效果。[0020]其作用基于支气管扩张作用和抗炎作用，从迄今不存在兼具这两种作用的coro改善剂的观点考虑，本发明的coro改善剂是极其特异性的coro改善剂。[0021]另外，本发明提供的coro改善剂的有效成分即（R)或(s)-溴化甲哌佐酯特征在于，利用与毒蕈碱拮抗作用、抗胆碱能作用不同的作用机理而显示出效果。[0022]因此，在迄今不存在有效的⑶ro改善剂的状況下，通过给予特异性且安全的(R)或(S)-溴化甲哌佐酯，可进行其症状的改善，其医疗上的效果是极其特异性的。【附图说明】[0023]图1是表示试验例2.1中的受体结合能力(体外），即与[3H]NMS的结合结果的图；图2是对于试验例2.1中的受体结合能力(体外），以IC5Q值表示的图；图3是表示对于试验例2.2中的受体(M3受体)结合能力的结果的图；图4是表示对于试验例2.2中的受体(M2受体)结合能力的结果的图；图5是表示试验例3.1中的溴化甲哌佐酯(外消旋体、R型、S型)在3.75yg/kg给药量下的气道阻力(airwayresistance)的测定结果的图；图6是表示试验例3.2中的溴化甲哌佐酯(外消旋体、R型、S型)在38yg/kg给药量下的气道阻力(airwayresistance)的测定结果的图；图7是表示试验例3.2中的溴化甲哌佐酯(外消旋体、R型、S型)在3.8yg/kg给药量下的气道阻力(airwayresistance)的测定结果的图；图8是表示试验例4.1中的细胞总数和嗜中性粒细胞(neutrophil)数的测定结果的图；图9是表示试验例4.2中的细胞总数的测定结果的图；图10是表示试验例4.2中的嗜中性粒细胞数的测定结果的图；图11是表示试验例4.3中的TNF-α的测定结果的图；图12是表示试验例4.3中的MIP-2的测定结果的图；图13是表示试验例4.3中的NCP-1的测定结果的图；图14是表示试验例4.3中的KC的测定结果的图；图15是表示试验例5中的粪粒排出量的结果的图；图16是表示试验例6中的心率的结果的图。【具体实施方式】[0024]本发明提供的coro改善剂中使用的(R)或(s)-溴化甲哌佐酯是临床上使用的溴化甲哌佐酯的光学活性体。[0025]应予说明，临床上使用的溴化甲哌佐酯在第十六次改正日本药局方中收载为具有以下结构式。[0026]即，按照外消旋体(对映体的等量混合物）的记载规则，立体记载一方的光学活性体的结构，用加上了"以及对映异构体"的表述的记载来表示。[0027]具体而言，本发明的(R)或(S)_溴化甲哌佐酯可以通过以下制备方法来制备。[0028]即，若表示(R)_溴化甲哌佐酯的制备方法，则可按照以下化学式进行制备。[0029]即，使二苯乙醇酸（II)在适当的有机溶剂中、缩合剂的存在下与(R)-3_羟基-1-甲基哌啶（III)反应，接着将所得的产物（IV)[以下记为"(R)-t-甲哌佐酯"]与甲基溴进行处理，由此制备(R)-溴化甲哌佐酯（I)。[0030]作为所用的有机溶剂，只要是不对反应产生影响的有机溶剂则没有特别限制，优选为二甲基甲酰胺(DMF)、二乙基甲酰胺(DEF)等溶剂。[0031]作为用于反应中的缩合剂，可优选使用CDI(羰二咪唑）。[0032]反应通过将式（II)和（III)的两个化合物、以及作为缩合剂的⑶I溶解于例如DMF中，在30~100°C左右的温度下搅拌1~24小时而进行。反应结束后，通过本身公知的常规后处理(提取、蒸馏除去溶剂、色谱等），可获得作为目标的式(IV)表示的(R)-t-甲哌佐酯。[0033]所得的（R)-t-甲哌佐酯（IV)不进行纯化，通过在例如醇、乙腈等有机溶剂中与甲基溴在室温至温和的加热下进行搅拌，可以作为结晶得到本发明的目标化合物即式（I)表示的(R)_溴化甲哌佐酯。[0034]应予说明，上述说明为针对(R)-溴化甲哌佐酯的制备方法，在获得(S)-溴化甲哌佐酯的情况下，可以在上述化学反应式中，使用（S)-3_羟基-1-甲基哌啶代替式（III)的(R)-3-羟基-1-甲基哌啶，采用同样的方法得到作为目标的(S)-溴化甲哌佐酯。[0035]本发明提供的coro改善剂以具有上述立体结构的化学式表示的(R)或(S)-溴化甲哌佐酯作为有效成分，可优选以经气道给药、吸入给药的方式给药。[0036]上述经气道给药用的经气道剂、吸入给药用的吸入剂是指用于到达气管、支气管、肺等各组织的药物组合物，优选为适合于滴鼻剂或者经鼻或经肺给药的组合物，这些组合物若以雾化吸入器(nebulizer)、雾化器(atomizer)、滴管(dropper)、移液管(pipette)、插管(cannula)等进行给药则有效。[0037]此时的经气道剂、吸入剂可以将(R)或（S)-溴化甲哌佐酯以粉末制剂、溶液制剂、或者悬浮液制剂的形态进行制备。[0038]以粉末制剂制备经气道剂和吸入剂的情况下，可以通过将有效成分即（R)或（S)-溴化甲哌佐酯直接微细化进行制备，或者加入适当的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、矫味剂等添加剂再微细化进彳T制备。[0039]另外，以溶液制剂或悬浮制剂制备经气道剂和吸入剂的情况下，例如可以将(R)或(S)_溴化甲哌佐酯溶解或悬浮于水中进行制备，或者溶解或悬浮于水与辅助溶剂例如乙醇、丙二醇、聚乙二醇之类的醇系辅助溶剂所成的混合溶剂的混合物中进行制备。[0040]这种溶液或悬浮液中可以进一步含有防腐剂、增溶剂、缓冲剂、等渗剂、吸收促进剂、增桐剂等。[0041]如上所述制成的经气道剂和吸入剂采用吸入剂领域中的常规手段，例如滴管、移液管、插管或雾化器、雾化吸入器等喷雾器，以雾状对鼻腔内或口腔内、或者气管、支气管、肺等组织直接给药。[0042]使用喷雾器的情况下，可以作为与适当的喷雾剂（例如二氯氟甲烷、三氯氟甲烷、或二氯四氟甲烷之类的含氯氟烃、或者二氧化碳等气体等)一起形成加压包装形式的气溶胶(aerosol)进行喷雾，或者使用雾化吸入器进行给药。[0043]本发明的coro改善剂中的有效成分即（R)或(S)-溴化甲哌佐酯的给药量根据制剂制备的方法、剂型、疾病的症状、患者的年龄、体重等而不同，不能一概限定，例如作为临床量，经气道剂、吸入剂给药的情况下成人每天0.5~200mg，对于给药次数也不能一概限定，也可以一天一次至多次进行给药。[0044]另外，本发明的C0PD改善剂中的有效成分即（R)或（S)-溴化甲哌佐酯通过与具有抗胆碱能作用的药物例如异丙阿托品（ipratropium)、东莨菪碱、哌仑西平、噻托溴铵(tiotropium)、氧托溴铵(oxitropium)等联合给药，可以更有效地使用。实施例[0045]以下通过具体的试验例、实施例等对本发明进行更详细的说明，但本发明并不限于这些记载。[0046]应予说明，各图中记载的"Mep"或[(±)_Mep]是指外消旋体的溴化甲哌佐酯，"R-Mep"或[(R)-Mep]是指(R)-溴化甲哌佐酯(R型），"S-Mep"或[(S)-Mep]是指(S)-溴化甲哌佐酯(S型）。另外，"PPE"是指猪胰弹性蛋白酶(porcinepancreaticelastase)。[0047]另外，图中的*为ρ〈〇·〇5,**为ρ〈0·01。[0048]以下实施例中，各种仪器分析按照以下测定方法进行。[0049]〈测定方法〉IR:JeolFT-IRSPX60光谱仪，薄膜法hNMR:Agi1ent400-MR光谱仪，DMS0中/400MHz13CNMR:Agilent400-MR光谱仪，DMS0中/100MHz高分辨质谱(HRMS):JeolJMS-700MStation旋光度:JascoP-1010旋光计（polarimeter)〇[0050]实施例1:(R)_溴化甲哌佐酯(R型）的合成向将羰二咪唑（CDI)883mg(5.4mmo1)溶解于DMF8mL而成的溶液中加入二苯乙醇酸830mg(3.6mmo1)，室温下搅拌15分钟。在80°C下向该溶液中滴加将(R)-3-羟基-1-甲基哌啶500yL(4.3mmo1)溶解于DMF4mL而成的溶液。然后，在80°C下搅拌18小时。反应通过在室温下加入水而停止。将有机物用乙酸乙酯进行提取。收集提取液用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，将溶剂减压浓缩。将所得残渣加到短硅胶柱色谱上，用乙酸乙酯洗脱，接着再溶解于二氯甲烷。将所得溶液用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，将溶液真空浓缩，由此以黄色油状物得到(R)-t-甲哌佐酯860mg(72%)。[0051]该产物不进行纯化而用于下一步骤。[0052]将上述所得的（R)-t-甲哌佐酯500mg(1.5mmo1)溶解于乙腈6mL，向该溶液中加入甲基溴3.6mL(7.0mmol)，室温下搅拌5小时。将沉淀物滤出，用乙醚洗涤，由此以无色固体得到(R)-溴化甲哌佐酯(R型）570mg(77%)。[0053]IR?ax:3432，3315，1735，1216，1093，1068，923，705cm-110H),6.82(s，1H)，5.28(m，1H)，3.63(dd，J=13.5,3.5Hz,1H),3.49(dd,J=13.5,4.7Hz,1H),3.37(m,1H),3.33(m,1H),3.10(s,3H),2.82(s,3H),1.63-1.85(m,4H)13C匪R(CDC13)S:171.9，143.0，142.7，128.0，127.9，127.7，127.6，127.0，80.7，66.8，61.6，60.8，25.2，16.2、[a]D25：-8.12(c1.00,MeOH)熔点：224.2~224.9°HRMS(FAB):以C12H19O5计算：[M+l]+:340·1913，实测值:m/z=340·1905。[0054]实施例2:(S)_溴化甲哌佐酯(S型）的合成除了使用（S)-3-羟基-1-甲基哌啶代替(R)-3-羟基-1-甲基哌啶以外，通过与实施例1同样的方法以无色固体得到(S)-溴化甲哌佐酯。收率为72%。[0055]IR?ax:3436，3299，1733，1214，1097，1066，929cm-110H),6.81(s，1H)，5.27(m，1H)，3.65(dd，J=13.4,3.4Hz,1H),3.51(dd,J=13.4,4.6Hz,1H),3.36(m,1H),3.32(m,1H),3.09(s,3H),2.81(s,3H),1.63-1.85(m,4H)13C匪R(CDC13)S:171.9，143.0，142.7，128.0，127.9，127.7，127.6，127.0，80.7,66.8,61.6,60.8,25.2,16.2[a]D25：+8.33(c1.00,MeOH)熔点:223.1~223.8°HRMS(FAB):以C12H19O5计算：[M+l]+:340·1913，实测值:m/z=340·1928。[0056]试验例1:利用溴化甲哌佐酯(R型和S型）的气道给药的肺组织浓度的测定〈方法〉对4~6周龄的ICR小鼠以20mg/kg的用量将溴化甲哌佐酯的R型和S型进行经气道给药，测定给药后5分钟、15分钟和30分钟之后肺组织中各溴化甲哌佐酯的量(肺组织浓度）。[0057]即，溴化甲哌佐酯给药后，在各测定时间将小鼠的全肺取出，用含50U/mL肝素的磷酸缓冲生理盐水(PBS)进行匀浆，通过离心分离得到试验样品。将试验样品分为各300yL，使用八111；[00111111：抑-0.5离心过滤器进行超滤，将所得样品通过使用03；[06101；^310611八(0.46X25cm)的高效液相色谱(HPLC)，测定细胞组织中溴化甲哌佐酯量。[0058]HPLC的条件如下所示，检测器：Waters2695Allianceseparationmodule、以及Waters2996photodiodearraydetector(Waters公司制）洗脱剂:溶剂A(含0.1M六氟磷酸盐的水)/溶剂B(乙腈）流速:1.0mL/分钟流动相:70%溶剂A/30%溶剂B测定波长：220nm〇[0059]〈结果〉其结果示于下表1，[表1]n.d.:未检出。[0060]从表中结果可确认，经气道给药的溴化甲哌佐酯的R型和S型以维持其光学活性的状态残留在肺组织中。[0061]另外，从组织浓度随着给药后时间的推移而减少可知，经气道给药的药物向全身移动。[0062]试验例2.1:受体结合能力(体外）（其一)〈方法〉受体结合能力通过以下方式进行:使用人M3毒蕈碱受体超表达CH0-K1细胞的膜部分(membranefraction)，测定与1-[N_甲基-3H]甲溴东莨菪碱（[3H]NMS，82Cimmol的特异性活性）的竞争性抑制。细胞膜的蛋白质浓度为5.Oyg/well，[3H]WS浓度为2.OnM。[0063]抑制剂浓度（甲哌佐酯）的范围（10-14~10-5Μ)通过制作比较曲线而进行试验。非特异性结合在ΙμΜ阿托品的存在下进行测定。[0064]试剂用结合缓冲液(磷酸缓冲液/盐水)使总量达到200yL。室温下培育2小时达到平衡后，反应混合液使用经含有1.0%聚乙烯亚胺的洗涤缓冲液预处理1小时的GF/C滤板进行过滤。[0065]将结合的[3H]匪S和遊离的[3H]匪S通过快速真空过滤进行分离，用清洗缓冲液(50mM三羟甲基氨基甲烷(Tris)，100mM盐水，pH7.4)洗涤3次。将所得的过滤器干燥后，使固态闪烁体MeltiLexA(PerkinElmer公司制）融合，使用β-计数器（MicroBetamicroplatescintillationcounter(微板闪烁计数器）（Trilux:PerkinElmer公司制)进行测定、定量。[0066]〈结果〉其结果示于图1。[0067]从图1所示的结果可明确，溴化甲哌佐酯的外消旋体(·）和R型（)与M3受体的结合相同程度地强，S型（▼)结合能力弱。[0068]另外，对于受体结合能力，以其50%抑制浓度(IC5Q)表示的结果示于图2。[0069]从图中所示的结果可明确，与溴化甲哌佐酯的外消旋体（IC5Q=32.1nM)(·)相比，R型（IC5Q=25·3nM)()具有与M3受体的结合能力更强的趋势，S型（ID5Q=299·7nM)(▼)的结合能力更弱。[0070]试验例2.2:受体结合能力(体外）（其二)〈方法〉受体结合能力通过以下方式进行:使用人毒蕈碱M3受体(hM3R)超表达CH0-K1细胞、或者人毒蕈碱M2受体(hM2R)超表达CH0-K1细胞的膜部分，测定与1-[N-甲基-3H]甲溴东莨菪碱([3H]NMS、85.5Cimmol的特异性活性）的竞争性抑制。细胞膜的蛋白质浓度为10.0yg/well，[3!1]匪5浓度为2.〇11]\1。[0071]抑制剂浓度（甲哌佐酯）的范围~3Χ10-5Μ)通过制作比较曲线进行试验。非特异性结合在2.5μΜ阿托品的存在下进行测定。[0072]试剂用结合缓冲液(磷酸缓冲液/盐水)使总量达到200yL。室温下培育2小时达到平衡后，反应混合液使用经含有1.0%聚乙烯亚胺的清洗缓冲液（50mM三羟甲基氨基甲烷，100mM盐水，pH7.4)预处理1小时的GF/C滤板进行过滤，用冰冷的清洗缓冲液洗涤4次。[0073]将所得的过滤器干燥30分钟后，固定于固态闪烁体Me11iLexA(me1t-〇nscintillationsheet，PerkinElmer公司制）。使用MicroBetaTriluxmicroplatescintillationcounter(微板闪烁计数器）（PerkinElmer公司制）对残留在过滤器上的放射活性进行测定。[0074]由对于hM3R或hM2R的[3H]匪S的实验所得常数(Kd)和浓度求出实验性IC5Q，将平衡时的亲和性(affinity)定为平衡诘抗解离常数(ici)值。应予说明，Ki值由3次各自的曲线求出，使用Prism(GraphPadSoftware公司制）进行修正。[0075]〈结果〉外消旋体的溴化甲哌佐酯、（R)_溴化甲哌佐酯、和（S)-溴化甲哌佐酯的对于hM2RShM3R的Ki值示于下表2。[0076][表2][0077]另外，各浓度的结合能力的推移结果示于图3和图4。[0078]图3是对于hM3R(M3受体)的结果，图4是对于hM2R(M2受体)的结果。[0079]从表2所示的结果、以及图3所示的结果可明确，关于对hM3R(M3受体）的亲和性，(s)-溴化甲哌佐酯（Λ)比(R)-溴化甲哌佐酯（)和外消旋体的溴化甲哌佐酯（〇)低。[0080]试验例3.1:对乙酉先甲胆碱（methacholine)诱发的气道收缩（airwayconstriction)的效果(其一)〈方法〉进行由乙酰甲胆碱诱发的气道阻力(airwayresistance)的升高测定。[0081]对4~6周龄的ICR小鼠进行5次lmg/mL乙酰甲胆碱的20秒喷雾给药。乙酰甲胆碱的各给药结束后，利用快照法（snapshottechnique)测定气道阻力。所有数据采用FlexiVent软件解析。[0082]将溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型各3.75yg/kg进行经气道给药，给药1小时后采用上述方法使小鼠暴露于喷雾化的乙酰甲胆碱中5次，测定此时的各给药时的气道阻力。[0083]〈结果〉其结果示于图5。[0084]从图5所示的结果可明确，溴化甲哌佐酯的S型（▼)几乎未表现出效果，外消旋体()和R型（·)表现出显著的气道阻力抑制效果，而R型更优异一些。[0085]试验例3.2:对乙酉先甲胆碱诱发的气道收缩(airwayconstriction)的效果(其二)〈方法〉进行由乙酰甲胆碱诱发的气道阻力(airwayresistance)的升高测定。[0086]用水合氯醛(500mg/kg)麻醉4~6周龄的ICR小鼠，实施气管切开手术，将8mm直径的金属管插入支气管。[0087]以1次排气量8.7mL/kg和呼气末正压通气（positiveend-expiratorypressure)2~3cmH20使小鼠机械地按150呼吸/分钟进行呼吸。[0088]为了由乙酰甲胆碱诱发的气道阻力(airwayresistance)，隔开40秒的间隔，以20秒/4次暴露于喷雾状乙酰甲胆碱(5mg/kg)中，利用快照法(snapshottechnique)测定气道阻力。[0089]将溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型各38yg/kg和3.8yg/kg进行经气道给药，给药1小时后采用上述方法使小鼠暴露于喷雾化的乙酰甲胆碱中5次，测定此时的各给药时的气道阻力。[0090]各数据采用FlexiVent软件解析。[0091]〈结果〉其结果示于图6(38yg/kg给药)和图7(3.8yg/kg给药）。[0092]可明确，给药用量低的情况下（图7:3.8yg/kg给药），溴化甲哌佐酯的S型（Λ)几乎未表现出效果，外消旋体(〇）和R型（)表现出显著的气道阻力抑制效果，而用量多的情况下（图6:38yg/kg给药），溴化甲哌佐酯的S型（Λ)表现出与外消旋体（〇）和R型（)相同程度的气道阻力抑制效果。[0093]试验例4.1:对猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱发的炎症的效果(其一)〈方法〉对4~6周龄的ICR小鼠，将外消旋体、R型、S型的各溴化甲哌佐酯以38yg/kg的给药量进行1次经气道给药。[0094]溴化甲哌佐酯给药1小时后，以100yg/小鼠给予猪胰弹性蛋白酶(PPE)。接着，猪胰弹性蛋白酶给药24小时后，从肺采集支气管肺胞灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF)，测定细胞总数和嗜中性粒细胞数。[0095]〈结果〉其结果示于图8。[0096]从图8所示的结果可明确，在细胞总数和嗜中性粒细胞数的任一者中，溴化甲哌佐酯的R型具有较为优异的减少效果，而外消旋体和S型为相同程度的效果。_7]试验例4.2:对猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱发的炎症的效果(其二)〈方法〉作为给药用量的比较，对4~6周龄的ICR小鼠，将外消旋体、R型、S型的各溴化甲哌佐酯以7.5yg/kg和38yg/kg的给药量进行1次经气道给药，由此进行研究。[0098]溴化甲哌佐酯给药1小时后，以20U/kg给予猪胰弹性蛋白酶(PPE)。接着，猪胰弹性蛋白酶给药6小时后，从肺采集支气管肺胞灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid、BALF)。应予说明，BALF通过由气管插管将肺用含有肝素（50U/mL)的生理盐水洗涤（2次)进行米集。[00"]对于采集的BALF，使用血细胞计数板(hemocytometer)测定细胞总数。将细胞用Cytospin4(ThermoElectron公司制、注册商标)离心分离后，用Diff-Quik试剂进行固定，作为嗜中性粒细胞数相对于细胞总数的比率来测定嗜中性粒细胞数。[0100]〈结果〉其结果示于图9(细胞总数)和图10(嗜中性粒细胞数)中。[0101]从图中所示的结果可知，通过溴化甲哌佐酯的给药，在细胞总数和嗜中性粒细胞数的任一者中均出现减少效果，外消旋体、R型、S型的各溴化甲哌佐酯之间该减少效果没有太大差异。[0102]另外，未出现因给药用量的差异造成的显著的效果差异。[0103]试验例4.3:对猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱发的炎症的效果(其三)作为对PPE诱发的炎症的效果，测定支气管肺胞灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid，BALF)中细胞因子和趋化因子的水平。[0104]B卩，作为炎性因子即细胞因子，测定促炎细胞因子（pro-inflammatorycytokaines)即TNF-α(肿瘤因子-α)，作为炎症性趋化因子，测定巨·细胞炎性蛋白(macrophageinflammatoryprotein:MIP_2)、单核细胞趋化蛋白（monocytechemotactic卩1'0七6；[11:]\03-1)、以及角质细胞衍生趋化因子（1^瓜1：；[11005^6-(161'；[￥6(1(31161]1〇1<1116:1(〇)0[0105]〈方法〉与上述"试验例4.2"记载的方法同样，以38yg/kg作为外消旋体、R型、S型的各溴化甲哌佐酯的给药量进行试验。[0106]BALF中这些细胞因子和趋化因子的测定采用ELISA法进行。[0107]〈结果〉其结果示于图11~图14。[0108]图11示出TNF-α的结果，图12示出MIP-2的结果，图13示出MCP-1的结果，图14示出KC的结果。[0109]从各图中的结果可确认，外消旋体、R型、S型的各溴化甲哌佐酯有效地使炎性因子减少。[0110]如上所述，已知溴化甲哌佐酯为具有下部消化道的运动/收缩抑制作用的抗胆碱能药，在临床上作为肠易激综合征的治疗药使用。[0111]所以，作为基于抗胆碱能作用的消化系统的副作用之一可列举出便秘。另外，溴化甲哌佐酯对于患有心律失常的患者存在促进心脏的运动、使症状恶化的可能性，要求慎重给药。[0112]因此，对于由溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型的差异所引起的这些副作用的程度进行研究。[0113]试验例5:由压力(stress)负荷导致的粪粒排出量(便秘发生的程度)的研究〈方法〉将4~6周龄的ICR小鼠置于可保证自由呼吸但自由活动受束缚的50mL管中1小时，施加压力负荷，测定此时的粪粒排出量(便秘发生的程度）。[0114]将溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型分别以4.7mg/kg的用量进行气管内给药，给药1小时后，暴露于上述束缚压力中1小时施加压力负荷，测定此期间的粪粒排出量，从而观察便秘发生的程度。[0115]〈结果〉其结果示于图15。[0116]从图中的结果也可明确，溴化甲哌佐酯的S型的便秘发生率低，R型的便秘发生率最尚。[0117]试验例6:对心率的影响的研究〈方法〉用水合氯醛（500mg/kg)麻醉4~6周龄的ICR小鼠，在大腿部安装传感器，使用MouseOxsystem(STARRLifeSciences公司制）测定心率。[0118]将溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型分别以940yg/kg和4700yg/kg的用量进行气管内给药，测定心率，并测定超过正常心率基线的由溴化甲哌佐酯给药所引起的心率。[0119]〈结果〉其结果示于图16。结果以将赋形剂(vehicle)给药(无给药)时的正常心率作为100%时的比率表示。[0120]从图中的结果也可明确，溴化甲哌佐酯的外消旋体、R型、S型均剂量依赖性地加快心率，其程度也为相同程度。[0121]由以上的试验例判断，从气道阻力抑制作用方面出发，在溴化甲哌佐酯的R型和S型的情况下，虽然用量低时溴化甲哌佐酯的R型与S型相比有较强的趋势(试验例3.1)，但高用量时二者均表现出相同程度的作用(试验例3.2)。[0122]另一方面，从抗炎作用方面出发，溴化甲哌佐酯的R型和S型均未出现太大差异(试验例4.1、4.2和4.3)。[0123]进而，若从副作用的观点出发对溴化甲哌佐酯的R型和S型进行比较，则S型与R型相比抑制了便秘的发生。[0124]本发明提供的⑶PD改善剂通过溴化甲哌佐酯的光学活性体(R型和S型）的支气管扩张作用和抗炎作用而改善慢性阻塞性肺疾病的症状。[0125]因此，考虑到两种作用(支气管扩张作用和抗炎作用）的强度的程度的平衡，只要以任意光学活性体作为有效成分即可，是显示出能够成为极其有效的coro改善剂的物质。[0126]以下示出本发明的coro改善剂的具体制剂例。[0127]制剂例1:吸入剂使用(R)-溴化甲哌佐酯l%(w/w)、苯扎氯铵0.05%(w/w)、聚乙二醇10%(w/w)、丙二醇20%(w/w)、余量纯水来制备吸入用液体制剂。[0128]制剂例2:吸入剂使用（S)-溴化甲哌佐酯l%(w/w)、苯扎氯铵0.05%(w/w)、聚乙二醇10%(w/w)、丙二醇20%(w/w)、余量纯水来制备吸入用液体制剂。[0129]产业适用性综上所述，本发明提供的coro改善剂以已在临床上使用的溴化甲哌佐酯的光学活性体作为有效成分，在经气道给药、吸入给药中显著表现出coro的改善效果，另外，在经口给药和直肠内给药中也表现出改善效果。因此，其在医疗上的贡献度巨大。【主权项】1.(3R)-3-[(^基）（二苯基）乙酷氧基]-1，1-二甲基赃晚鐵漠化物，W下称为"(R)-漠化甲赃佐醋"，其具有下式表示的立体结构：2.(35)-3-[(径基）（二苯基）乙酷氧基]-1,1-二甲基赃晚鐵漠化物，W下称为"(S)-漠化甲赃佐醋"，其具有下式表示的立体结构：3.慢性阻塞性肺疾病改善剂，其特征在于，W权利要求1所述的(R)-漠化甲赃佐醋作为有效成分。4.慢性阻塞性肺疾病改善剂，其特征在于，W权利要求2所述的（S)-漠化甲赃佐醋作为有效成分。5.根据权利要求3或4所述的慢性阻塞性肺疾病改善剂，其中，给药方式为经气道给药或吸入给药。6.权利要求1或2所述的(R)或(S)-漠化甲赃佐醋的制备方法，其特征在于，使二苯乙醇酸在缩合剂的存在下与(R)或(5)-3-?基-1-甲基赃晚反应，接着将所得的产物与甲基漠进行处理。【文档编号】A61P11/08GK105980358SQ201480075608【公开日】2016年9月28日【申请日】2014年6月16日【发明人】水岛彻【申请人】日本株式会社Ltt生物医药