凋亡信号调节激酶的抑制剂的制作方法

凋亡信号调节激酶的抑制剂的制作方法
【专利摘要】本申请涉及对凋亡信号调节激酶(ASK1)具有抑制活性，从而可用于治疗ASK1?介导的病症的化合物，所述病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病、糖尿病、糖尿病肾病、心肾疾病，包括肾病、纤维变性疾病、呼吸道疾病、COPD、特发性肺纤维化、急性肺损伤、急性和慢性肝病和神经变性疾病。
【专利说明】
凋亡信号调节激酶的抑制剂
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2013年12月20日提交的美国临时申请序列号 61/918,784的优先权，其整体在此引入作为参考。
技术领域
[0003] 本发明涉及具有酶抑制活性的新化合物以及其在治疗ASK1介导的病症中的用途， 所述病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病，包括慢性肾病、心血管疾病以及神经变性疾病。 本发明同样涉及其制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。
【背景技术】
[0004] 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号级联将不同的细胞外和细胞内队列（queue)与适 当的细胞应激反应结合起来，所述细胞应激反应包括细胞生长、分化、炎症以及细胞凋亡 (Kumar,S.,Boehm,J.,and Lee.,J.C.(2003)Nat.Rev.Drug Dis.2:717-726；Pimienta,G., and PascualJ. (2007)Cell Cycle,6:2826-2632) JAPK以三个群组MAP3K、MAP2K以及MAPK 形式存在，其依次活化。MAPK3直接对环境信号和磷酸化MAP2K作出反应，继而特定地磷酸化 MAPKJAPK随后通过使包括调苄基因表达的转录因子的细胞底物磷酸化来介导适当的细胞 反应。
[0005] 细胞凋亡信号调节激酶1 (ASK1)是活化c-Jun N端蛋白激酶（"JNK"）和p38MAP激酶 (Ichijo，H.，Nishida，E.，Irie，K.，Dijke，Ρ·T.，Saitoh，M.，Moriguchi，T.，Matsumoto，Κ·， Miyazono，K·，and Gotoh，Y· (1997)Science，275，90-94)的丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 ("1^31("）家族成员。通过包括氧化应激、反应性氧物质(1^)、1^、了册-€^ &^1?应激以 及提高的细胞内钙浓度的多种刺激活化ASKl(Hattori，K.，Naguro，I.，Runchel，C.，and Ichijo,Η.(2009)Cell Comm.Signal·7:1-10;Takeda，K·，Noguchi，T·，Naguro，I·，and Ichijo,H.(2007)Annu. Rev. Pharmacol.Toxicol.48:1-8.27；Nagai,H., Noguchi ,T., Takeda，K.，and 1(*1_〇，1.(2007)了.8丨〇吐6111.]\1〇1.8丨〇1.40:1-6)。响应于这些信号451(1经 由Thr838处的自体磷酸化活化并且继而使MAP2K(如MKK3/6和MKK4/7)磷酸化，其随后分别 使P38和JNK MAPK磷酸化和活化。ASK2是与ASK1共有45%序列同源性的相关MAP3K(Wang， X. S·，Diener，K·，Tan，Τ_Η·，and Yao，Z·(1998)Biochem.Biophys·Res·Commun·253，33-37)。虽然ASK2组织分布受限制，但在一些细胞类型中，已报导ASK1和ASK2在蛋白质复合物 中相互作用并且一起起作用（Takeda，K.，Shimozono，R.，Noguchi，T ·，Umeda，T.，Morimoto， Y. ，Naguro，I.，Tobiume，K.，Saitoh，M.，Matsuzawa，A.，and Ichijo,H.(2007) J. Biol. Chem. 282:7522-7531 ;Iriyama，T.等人，（2009)Embo J. 28:843-853)。在非应激条 件中，ASK 1通过结合到其阻遏物硫氧还蛋白（Trx) (Saitoh，Μ·，Nishitoh，H.，Fuji，Μ·， Takeda，K·，Tobiume，K·，Sawada，Y·，Kawabata，Μ·，Miyazono，K·，and Ichijo，Η·(1998) Embo J. 17:2596-2606)并且通过与AKT缔合来保持非活性状态(Zhang，L.，Chen，J.and Fu， H.(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 96:8511-8515)。
[0006] ASK1蛋白质的磷酸化可能导致细胞凋亡或其它细胞反应，取决于细胞类型。已报 导，ASK1活化和信号传导在包括神经变性疾病、心血管疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病以 及代谢病症的宽范围的疾病中发挥重要作用。另外，ASK1牵涉在心脏、大脑以及肾脏局部缺 血和再灌注后介导器官损伤(Watanabe等人，（2005)BBRC 333，562-567; Zhang等人，（2003) Life Sci 74-37-43;Terada等人，（2007)BBRC 364:1043-49)。新出现的证据表明单独的 ASK2或与ASK1复合的ASK2同样可以在人类疾病中发挥重要作用。因此，充当ASK1和ASK2信 号传导复合物抑制剂的治疗剂有可能补救或改善患有此类病症的患者的生活。
[0007] 美国公开第2007/0276050号描述了鉴别适用于预防和/或治疗心血管疾病的ASK1 抑制剂的方法以及预防和/或治疗动物中的心血管疾病的方法。所述方法包含向动物给予 ASK1抑制剂并且任选地给予高血压化合物。美国公开第2007/0167386号报导了一种用于心 力衰竭的预防和治疗中的至少一者的药物，其含有抑制心肌细胞中的ASK1蛋白质的功能性 表达的化合物，以及用于筛选所述药物的方法。W02009027283公开了三唑并吡啶化合物、其 制备方法以及用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病以及神经变性疾病的方法。

【发明内容】

[0008] 本发明提供了作为ASK1抑制剂的新的化合物、组合物和使用所述新的化合物的方 法。在第一方面，本申请涉及式(I)的化合物：
[0010]其中：
[0011 ] R1为氢、d-C6烷基、c3-c6环烷基、c 2-c6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基 部分任选被1至4个独立选自以下的成员取代：卤素、氧代Xi-Cs烷基、C3-C6环烷基、c2-c6杂 环烷基、苯基、苯氧基、氰基、OR'CXOW'OCXO^'CXOWR'NU^CXOWR'WqcXO) r12、nr11r12、n(r11)c(o)n(r 11)(r12)、c(o)n(r11)(r12)、c 1-q^S-r11、c1-q^S-or11、c3-q^ 烷基-R11和C3_C6环烷基_0Rn;
[0012] R2为氢或C1-C6烷基，其中该烷基部分任选被1至4个卤素原子的成员取代；
[0013] R3为氢或d-C6烷基；
[0014] R4为氢或&-C6烷基；
[0015] R5为氢或d-C6烷基；
[0016] R6为氢、Q-C6烷基、C3_C6环烷基、C2_C 6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基 部分任选被1至4个独立选自以下的成员取代：卤素、氧代Xi-Cs烷基、C 3_C6环烷基、C2_C6杂 环烷基、苯基、苯氧基、氰基、or'nrUr'cXoW'ocXo^'cXo^rWr^cXoWr'n 环烷基_Rn和C3_C6环烷基_0Rn;
[0017] R7为氢或d-C6烷基;且
[0018] R^Rb独立地为氢、&-C6烷基或1^和妒与它们连接的氮原子结合形成3至12元杂环 基，其中该杂环基为单环、稠合或桥接的双环、或螺环基团，其任选在环中被氧或氮原子取 代，其中该心-以烷基或该杂环基进一步任选被1至4个独立选自以下的成员取代:心-以烷 基、羟基、氰基、氧代、卤素、苯基、苯氧基、d-C 6羰基、&-C適代烷基、&-C6烷氧基、C3-C6环烷 基、C 2-C6 杂环烷基、Ci-C6 烷基-R'OR'NRUR'CXf^NR'RHOR'RUNR'CXO^'OCXO)!?11、
[0019] 其中R11和R12独立地选自氢，d-C6烷基、CrC適代烷基、C 3_C6环烷基，其中R11和R12 进一步任选被1至3个独立选自以下的成员取代:Q-C3烷基、Q-C3烷氧基、Q-C3卤代烷基、 C3-C6环烷基、羟基或卤素原子;R11和R12可任选与它们连接的氮结合形成杂环基，
[0020]或其药学上可接受的盐、酯或立体异构体。
[0021 ]在第二方面，本申请涉及使用式(I)的化合物治疗患者疾病或病症的方法，该患者 接受ASK1抑制剂的治疗。该疾病包括自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病(包括糖尿病、 糖尿病肾病、和糖尿病的其他并发症）、心肾疾病，包括肾病、纤维变性疾病、呼吸道疾病(包 括C〇ro，特发性肺纤维化(IPF)和急性肺损伤），急性和慢性肝病和神经变性疾病。
[0022]在第三方面，本申请涉及包含治疗有效量的式（I)的化合物和至少一种药学上可 接受的赋形剂的药物组合物。
[0023]在第四方面，本申请提供了用于治疗慢性肾病、肾纤维化和肺纤维化的式(I)的化 合物。
[0024] 在第五方面，本申请提供了用治疗有效量的式（I)的化合物和治疗有效量的一种 或多种治疗剂治疗有需要的患者的方法。
[0025] 在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物，其用于治疗。
[0026] 在另一方面，本发明涉及式(I)的化合物在制备用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾 病、心血管疾病(包括糖尿病、糖尿病肾病、和糖尿病的其他并发症）、心肾疾病，包括肾病、 纤维变性疾病、呼吸道疾病(包括C0PD、特发性肺纤维化(IPF)和急性肺损伤）、急性和慢性 肝病和神经变性疾病的药物中的用途。
[0027]在其它方面，本发明涉及包含式(I)的化合物或其药物组合物的试剂盒。在其它方 面，该试剂盒包含标签或使用说明。
[0028] 发明详述 [0029]定义和通用参数
[0030] 如本说明书中所用，以下词语和短语一般意图具有如下文所阐述的含义，除非其 所在上下文另外指示。
[0031] 术语"烷基"指的是具有指定数目碳原子的单价的支链或非支链饱和烃链。举例说 明，这一术语是如甲基、乙基、正丙基、异丙基等的基团。
[0032] 术语"取代的烷基"指的是如上文所定义的烷基，具有选自指定基团的1、2、3或更 多个取代基。
[0033]术语"亚烷基"指的是典型地具有1到6个碳原子(例如1、2、3、4、5或6个碳原子）的 支链或非支链饱和烃链的二价基团。举例说明，这一术语是如亚甲基（-CH2-)、亚乙基（-CH2CH2-)、亚丙基异构体(例如 _CH2CH2CH2_和_CH (CH3) CH2-)等的基团。
[0034] 术语"氨基"指的是基团-NH2。术语取代的氨基指的是NHRa、NRaR b或NR1 基团，其 中Ra、Rb、Rn和R12(其可以相同或不同）表示取代基。
[0035] 术语"环烷基"指的是具有3到6个碳原子、单环的环状烷基。此类环烷基包括例如 单环结构，如环丙基、环丁基、环戊基等。
[0036]术语"卤素"或"部'是指氟、溴、氯和碘。
[0037] 术语"卤代烷基"是指被1、2、3或4个卤素原子或化学上可容许数量的卤素原子取 代的1-4个(或所指示数)碳原子的烷基。当一个残基或成员被多于一个卤素取代时，其可通 过使用前缀表示，其对应于卤素部分连接的数字。例如，二卤代芳基，二卤代烷基和三卤代 芳基是指被2个（"二"）或3个（"三"）卤素基团取代的芳基和烷基，这些卤素可为(但不必须 为)相同卤素；因此，例如，3，5_二氣苯基、3-氯_5_氣苯基、4-氯_3_氣苯基和3，5-二氣_4_氯 苯基在二卤代芳基的范围内。其它卤代烷基的实例包括，但不限于，氟甲基、二氟甲基（_ CHF2)、三氟甲基(-CF3)、氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、全氟乙基、氟丙基、二氟丙基、三氟丙 基、全氟丙基、氟丁基和全氟丁基。如本文所述，术语"三氟丙基"包括在任何碳位置的氟-取 代，且包括，但不限于，1，1，1-三氟丙基和1，1，1-三氟异丙基。
[0038] 术语"酰基"表示基团-C (0) R，其中R为氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任 选取代的杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基。
[0039] 术语"酰基卤"是指基团-C(0)X，其中X为卤素原子优选氯。
[0040] 术语"杂环基"、"杂环的"和"杂环"是同义并且指的是具有单环或多环的饱和或部 分不饱和的环状基团，该多环为稠合环、桥接环或螺环。杂环基在环内具有1到12个碳原子 以及1到3个选自氮、硫和/或氧的杂原子。如本文所述，术语"7至10元杂环"是指如上定义的 杂环基，其中环成员总数为7至10个并且基于环中的杂原子数调整碳原子数。同样，术语"6 至10元杂环双环基团"是指杂环双环基团，其可如指示为稠合、桥接或螺环的，其中环成员 总数为6至10个并且基于环中的杂原子数调整碳原子数。作为实例，杂环基包括吗啉代、哌 啶基、哌嗪子基(piperazino)、二氢啦啶子基(pyridino)等。
[0041]术语"烷氧基"是指基团"烷基-0-"。烷氧基的实例可包括甲氧基、乙氧基、正丙氧 基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1，2-二甲基丁氧基。
[0042] 术语"芳基"是指具有单环(例如，苯基）、多环(例如，联苯基)或稠合多环(例如，萘 基、荷基和蒽基）的芳族碳环基团。芳基具有6至20个环碳原子（即，C6-2Q芳基），或6至12个碳 环原子(即，C 6-12芳基）。如果一个或多个芳基与杂芳基环稠合，所得环体系为杂芳基。
[0043] 术语"任选的"或"任选地"意指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并 且所述描述包括所述事件或情况发生以及所述事件或情况不发生二者。
[0044]术语"取代的"是指指定原子或基团上的任何一个或多个氢原子被除氢之外的部 分代替，条件是不超过指定原子的正常价。如本文所述，取代的成员或基团可位于指定原子 或基团的任何位置。例如，被氰基成员取代的杂环基(例如1，4_氧氮杂环庚烷基)是指该氰 基成员可位于杂环基的任何位置。
[0045] 不是在两个字母或符号之间的短线是用于指示取代基的连接点。例如，_ C0NH2通过碳原子连接。
[0046] 当涉及"约"，本文的值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的实施方案。例 如，涉及"约X"的描述包括"X"的描述。
[0047] 给定化学式的化合物（例如"式（I)的化合物"）预期包括本文公开的代表性化合 物，和该化合物的药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、水合物、多晶形和前药。
[0048] 本发明还包括式(I)的化合物，其中一或多个连接到碳原子上的氢原子经氘置换。 当向哺乳动物给予时，此类化合物展现增加的代谢抗性，并且因此适用于增加任何式I化合 物的半衰期。参见例如Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism"，Trends Pharmacol · Sci · 5( 12): 524-527( 1984)。通过所属领域中熟知的手 段，例如通过采用一或多个氢原子已经被氘置换的起始原料来合成此类化合物。
[0049] 本文给出的任何化学式或结构，包括式(I)的化合物，也预期表示该化合物未标记 的形式以及同位素标记的形式。
[0050] 术语"异构体"是指具有相同分子式的不同化合物。
[0051] 术语"立体异构体"是指只有原子空间排列方式不同的异构体。如本领域通常所指 的，立体异构体可为对映异构体或非对映异构体。术语"对映异构体"是指一对不可重叠互 为镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种"外消旋"混合物。术语"（±)"用 于在适当时指明外消旋混合物。术语"非对映异构体"是指具有至少两个不对称原子但彼此 不为镜像的立体异构体。
[0052] 术语"治疗有效量"或其变体指的是当向哺乳动物患者(例如需要此类治疗的人类 患者)给药时足以实现如下文所定义的治疗的量。治疗有效量将取决于待治疗的受试者(例 如人)和疾病病症、个体的重量和年龄、疾病病症严重程度、给药方式等而不同，其可以容易 地由本领域的普通技术人员判定。
[0053] 术语"治疗(treatment或treating)"意指出于以下目的的本发明化合物的任何给 药或本发明方法的实践：（i)抵抗疾病，即，使疾病的临床症状不出现；（ii)抑制疾病，即，遏 制临床症状的发展;和/或（iii)缓解疾病，即，使临床症状消退。
[0054] 在许多情况下，本发明化合物能够借助于氨基和/或羧基或其类似基团的存在形 成酸盐和/或碱盐。
[0055] 给定化合物的术语"药学上可接受的盐"是指保持给定化合物的生物有效性和性 质，且不是生物或其它方面不合需要的盐。药学上可接受的碱加成盐可由无机和有机碱制 备。衍生自无机碱的盐包括，仅作为实例，钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。衍生自有机碱的盐包括， 但不限于，伯胺、仲胺和叔胺的盐，如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代 的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺等。还包括的为 其中2个或3个取代基连同氨基氮一起形成杂环基或杂芳基的胺。
[0056] 药学上可接受的酸加成盐可由无机和有机酸制备。衍生自无机酸的盐包括盐酸、 氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等的盐。衍生自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、 苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、 乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等的盐。
[0057]术语"药学上可接受的载体"包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗 真菌剂、等张剂以及吸收延迟剂等。此类介质和试剂在药学上活性物质的使用是本领域中 熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗组合物中。也 可以将补充性活性成分并入组合物中。
[0058] "冠心病"或"心血管疾病"指的是由例如源于心力衰竭(包括充血性心力衰竭、舒 张性心力衰竭以及收缩性心力衰竭）、急性心力衰竭、局部缺血、复发性局部缺血、心肌梗 塞、心律不齐、心绞痛(包括运动诱发的心绞痛、变异型心绞痛、稳定型心绞痛、不稳定型心 绞痛）、急性冠状动脉综合征、糖尿病以及间歇性跛行中的任何一种或多于一种的心血管疾 病。
[0059] "间歇性跛行"意指与外周动脉疾病相关的疼痛。"外周动脉疾病"或PAD是一种类 型的闭塞性外周血管疾病(PVDhPAD影响心脏和大脑外部的动脉。PAD的最常见症状是步 行、爬楼梯或运动时髋部、大腿或小腿的疼痛性痉挛。疼痛称为间歇性跛行。当列举症状间 歇性跛行时，意图包括PAD和PVD两者。
[0060] "心律不齐"指的是任何异常的心率。"心动过缓"指的是异常缓慢的心率，而心动 过速指的是异常快速的心率。如本文所使用，心律不齐的治疗意图包括治疗室上性心动过 速，如心房纤颤、心房扑动、AV节折返性心动过速、房性心动过速；以及心室心动过速(VT)， 包括特发性心室心动过速、心室纤颤、预激综合征以及尖端扭转型室速(TdP)。
[0061] "药学上可接受的"意指适合用于医药制剂中，一般视为此类用途安全的，联邦或 州政府管理机构所官方核准的或列于美国药典(U.s. Pharmacopoeia)或其它公认用于动物 (并且更尤其用于人)的药典中列出的。
[0062] "前药"是指以化学方式经设计以在克服口腔递送的生物屏障后有效地释放母体 药物的化合物。
[0063] "多晶型物"指的是不同晶体形式的化合物，其源于固态形式的化合物分子的至少 两种不同的排列可能性。给定化合物的多晶型物在晶体结构上不同但在液体或蒸气状态时 相同。给定物质的不同多晶形式可以在一或多个物理特性，如溶解性和解离、真密度、晶体 形状、压实行为、流动性和/或固态稳定性方面彼此不同。本领域的技术人员了解用于产生 结晶化合物的多晶型物的方法。因此，式(I)的化合物的多晶形式在本发明的范围内。
[0064] 在一方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中：
[0065]妒为&-〇5烷基、C3_C6环烷基、C2_C 6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部分 任选被1至4个独立选自以下的成员取代：卤素、氧代、&-〇5烷基、C3-C6环烷基、c2-c6杂环烷 基、苯基、苯氧基、氰基、OR'CXOW'OCXOW'CXO^R'NU'CXOWR'NU'CXO^'N (Rn)C(0)N(Rn) (R12)、C(0)N(Rn) (R12) 'NRUR'Ci-Cs烷基-R'Ci-Cs烷基-〇Rn、C3-C6环烷 基-R 11和C3-C6环烷基-OR11;
[0066] R2为氢或Ci_C6烷基，其中该烷基部分任选被1至4个卤素原子的成员取代；
[0067] R3为氢或d-C6烷基；
[0068] R4为氢或d-C6烷基；
[0069] R5为氢或d-C6烷基；
[0070] R6为氢、Q-C6烷基、C3_C6环烷基、C2_C 6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基 部分任选被1至4个独立选自以下的成员取代：卤素、氧代Xi-Cs烷基、C3-C6环烷基、c2-c6杂 环烷基、苯基、苯氧基、氰基、OR'CXOW'OCXO^'CXOWR'NU^CXOWR'WqcXO) 烷基-R11和C3_C6环烷基_0Rn;
[0071] R7为氢或CrC6烷基;且
[0072] R^Rb独立地为氢、&-C6烷基或1^和妒与它们连接的氮原子结合形成3至12元杂环 基，其中该杂环基为单环、稠合或桥接的双环、或螺环基团，其任选在环中被氧或氮原子取 代，其中该心-以烷基或该杂环基进一步任选在相同或不同原子/位置被1至4个独立选自以 下的成员取代:&-C6烷基、羟基、氰基、氧代、卤素、苯基、苯氧基、&-C6羰基、&-C6卤代烷基、 Cl-C6^(6?S^C3-C6?^^S,C2-C6??^^?,Cl-C6?fcS^Cl-C6^S-R11^0R 11^NR11R1^C(0)NR1^ r11or1\r11nr1\c(o)r 1\oc(o)r1\c(o)or1\n(r11)c(o)or 1\n(r11)c(o)r1\n(r11)c(o)n (Rn)(R12)和 C(0)N(Rn)(R12);
[0073] 其中R11和R12独立地选自氢，Ci-Cs烷基、&-C適代烷基、C3_C 6环烷基，其中R11和R12 进一步任选被1至3个独立选自以下的成员取代:Q-C3烷基、Q-C3烷氧基、Q-C3卤代烷基、 C3-C6环烷基、羟基或卤素原子;R11和R12可任选与它们连接的氮结合形成杂环基，
[0074] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0075] 在一些方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0076] #为&-(：6烷基、C3_C6环烷基或(： 2_〇5杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部 分任选被1至4个独立选自以下的成员取代:卤素、0R11和NR nR12;
[0077] R2为氢或d-C3烷基；
[0078] R3为氢或&-C3烷基；
[0079] R4为氢或d-C3烷基；
[0080] R5为氢或CrC3烷基；
[0081] 妒为&-〇5烷基、C3_C6环烷基或(：2_〇5杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部 分任选被1至4个独立选自以下的成员取代:卤素、0R 11和NRnR12;
[0082] R7为氢或CrC3烷基;且
[0083] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成4至10元杂环基，其为单环基团或稠合或桥接 的双环或螺环基团，在该杂环基中任选包含氧或氮原子，其中该杂环的进一步任选在相同 或不同原子/位置被1至4个独立选自以下的成员取代:心-以烷基、羟基、氰基、氧代、卤素、 &-C6羰基、&-C6卤代烷基、&-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C 2-C6杂环烷基、&-C6酰基、&-C6烷基-R11、OR 11、C (0) NR11，其中R11为氢、CrC6烷基或CrC適代烷基；
[0084] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0085] 在另一方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0086] #为&-(：6烷基、C3_C6环烷基或(： 2_〇5杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部 分任选被1至4个卤素原子取代；
[0087] R2为氢或CrC3烷基；
[0088] R3为氢或d-C3烷基；
[0089] R4为氢或&-C3烷基；
[0090] R5为氢或d-C3烷基；
[0091] 妒为&-〇5烷基、C3_C6环烷基或(：2_〇5杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部 分任选被1至4个卤素原子取代；
[0092] R7为氢或d-C3烷基;且
[0093] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成4至10元杂环单环基团，或6至12元稠合或桥 接的杂环双环或杂环螺环基团，其任选在该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团中包含氧 或氮原子，其中该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团进一步任选被1至4个独立选自以下 的成员取代:&-C6烷基、羟基、氰基、氧代、卤素、&-C6羰基、&-C6卤代烷基、&-C6烷氧基、C 3_ C6环烷基、c2-c6杂环烷基、&-C6酰基、&-C6烷基-R 11、OR11、C (0) NR11，其中R11为氢、&-C6烷基 或&-(：適代烷基；
[0094] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0095] 在一些其他方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0096] 妒为^-心烷基、C3_C6环烷基，其中该烷基或环烷基部分任选被1至3个卤素原子取 代；
[0097] R2 为氢；
[0098] R3 为氢；
[0099] R4 为氢；
[0100] R5 为氢；
[0101] 妒为^-心烷基、C3-C6环烷基，其中该烷基或环烷基部分任选被1至3个卤素原子取 代；
[0102] R7为氢或d-C3烷基;且
[0103] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成4至8元杂环单环基团，或6至10元稠合或桥接 的杂环双环或杂环螺环基团，其任选在该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团中包含氧或 氮原子，其中该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团进一步任选被1至3个独立选自以下的 成员取代:&-C6烷基、氰基、氧代、卤素 、Ci-Cs卤代烷基、&-C6烷氧基、C3_C6环烷基、C2_C 6杂 环烷基、OR11、C (0 )N-Rn，其中R11为氢、&-C6烷基或&-C適代烷基；
[0104] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0105] 在一些方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0106] #为&-(：適代烷基或C3_C6环烷基；
[0107] R2 为氢；
[0108] R3 为氢；
[0109] R4 为氢；
[0110] R5 为氢；
[0111] 妒为&-(：適代烷基或C3_C6环烷基；
[0112] R7为氢或CrC3烷基；
[0113] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成4至8元杂环单环基团，或6至10元稠合的杂环 双环或杂环螺环基团，其任选在该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团中包含氧或氮原子， 其中该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团进一步任选被1、2或3个独立选自以下的成员取 代:Q-C6烷基、羟基、氰基、氧基、卤素 、Q-C6羰基、Q-C適代烷基、Q-C6烷氧基、C3-C6环烷 基、C2-C 6杂环烷基、&-C6烷基-R'OR'CXO)·11其中R11为氢、&-C6烷基或&-C適代烷基；
[0114] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0115] 在其它方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0116] R1为甲基、乙基、丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、二氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、三 氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、环丙基、环丁基、氟环丙基和氟环丁基；
[0117] R2 为氢；
[0118] R3 为氢；
[0119] R4 为氢；
[0120] R5 为氢；
[0121] R6为甲基、乙基、丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、二氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二 氟丁基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、环丙基、环丁基、氟环丙基和氟环丁基；
[0122] R7为氢或甲基；
[0123] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成4至7元杂环单环基团，其中该杂环单环基团 进一步任选被1、2或3个独立选自以下的成员取代：甲基、乙基、丙基、氟甲基、二氟甲基、三 氟甲基、氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、丙基、二氟丙基、三氟丙基、氰基、氧代、甲氧基、乙氧 基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、氟、溴、C(0)NH 2、C(0)N(CH3)H、C(0)N (CH3)(CH3)、C(0)N(CH2CH3)H、C(0)N(CH3)(CH 2CH3)和 C(0)N(CH2CH3)2;
[0124] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0125] 在一些其他方面，本申请提供了式(I)的化合物，其中
[0126] R1为甲基、乙基、丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、二氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、三 氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、环丙基、环丁基、氟环丙基和氟环丁基；
[0127] R2 为氢；
[0128] R3 为氢；
[0129] R4 为氢；
[0130] R5 为氢；
[0131] R6为甲基、乙基、丙基、氟甲基、氟乙基、氟丙基、二氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二 氟丁基、三氟甲基、三氟乙基、三氟丙基、三氟丁基、环丙基、环丁基、氟环丙基和氟环丁基；
[0132] R7为氢或甲基；
[0133] 1^和妒与它们连接的氮原子结合形成6至9元稠合或桥接的杂环双环或杂环螺环基 团，其中该杂环双环基团进一步任选被1、2或3个独立选自以下的成员取代：甲基、乙基、丙 基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、丙基、二氟丙基、三氟丙基、 氰基、氧代、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、氟、溴、C(0)NH 2、C(0)N(CH3)H、C(0)N (CH3)(CH3)、C(0)N(CH2CH3)H、C(0)N(CH3)(CH 2CH3)和 C(0)N(CH2CH3)2;
[0134] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0135] 在某一方面，本申请提供了式（I)的化合物，其中^为心-心卤代烷基或C3-C6环烷 基，其中该环烷基任选被1至4个卤素原子取代。在一方面，R 1选自三氟丙基、三氟异丙基、氟 环丙基和环丙基。
[0136] 在一些方面，本申请提供了式（I)的化合物，其中R2为氢;R3为氢;R4为氢;R 5为氢， 且R7为氢。
[0137] 在另一方面，本申请提供了式（I)的化合物，其中妒为心-心卤代烷基或C3-C6环烷 基，其中该环烷基任选被1至4个卤素原子取代。在一方面，R 6选自三氟丙基、三氟异丙基、氟 环丙基和环丙基。
[0138] 在其它方面，本申请提供了式（I)的化合物，其中RlPRb与它们连接的氮原子结合 形成杂环基，其中该杂环基选自：
[0140] 其中该杂环基进一步在不同原子或相同原子任选被独立选自以下的1个成员或2 个成员取代：甲基、乙基、丙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、 丙基、二氟丙基、三氟丙基、氰基、氧代、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、氟、溴、C (0)NH2、C(0)N(CH3)H、C(0)N(CH3)(CH3)、C(0)N(CH2CH 3)H、C(0)N(CH3)(CH2CH3WPC(0)N (CH2CH3)2；
[0141] 或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0142] 本申请的化合物包括，但不限于，表1所述的那些化合物。
[0143] 表1.代表性化合物




[0149]在一个方面中，本申请提供了化合物、方法以及组合物，其使用或包括外消旋混合 物、含有一种对映异构体过量(e.e.)的对映异构体的混合物或含有一种非对映异构体过量 (d.e.)的非对映异构体的混合物。式（I)的化合物可以包含至少1 %、至少10%、至少20%、 至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少 85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的一种具有所需ASK-1活性的立体异构体。 举例来说，用于式（I)的化合物(例如化合物23-45)的一般制备中的所有手性胺起始原料 (例如R aRbNH)以对映异构体的混合物使用。在另一个实例中，制备了式(I)的化合物的一般 制备中的中间体E并且以主要含有(S)-4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-氟-N-(2-(4-(l，l， 1-三氟丙-2-基)-4Η-1，2,4-三唑-3-基)噻唑-4-基)吡啶-2-甲酰胺的混合物使用。
[0150] 在另一方面中，本申请提供了使用或包括光学异构体、外消旋体或其其它混合物 的方法、组合物;式I化合物或其药学上可接受的盐、前药或溶剂合物。单一对映异构体或非 对映异构体（即，旋光形式)可以通过不对称合成或外消旋体的拆分获得。外消旋体的拆分 可以例如通过已知方法实现，如在拆分剂存在下的结晶或使用例如手性高压液相色谱 (HPLC)柱的色谱法。举例来说，具有碳-碳双键的化合物或其药学上可接受的盐、前药或溶 剂合物存在Z-和E-形式(或顺式和反式）。
[0151] 命名法
[0152] 使用ChemBioDraw Ultra或根据国际纯粹与应用化学联合会（International Union of Pure and Applied Chemistry，IUPAC)设定的Pipeline Pilot版本9.1.0的 Molecule to Chemical Name组件的命名系统提供本申请化合物的名称。此外，化合物也可 使用化学领域公认的其它命名系统和符号命名，例如，Chemical Abstract Service(CAS)。 其它化合物或基团可以用常见名称或系统性或非系统性名称命名。作为实例，具有以下结 构的化合物
[0154] 使用根据IUPAC名称类型设定的Pipeline Pilot版本9.1.0的Molecule to Chemical Name组件的命名系统可以被称为4-(4-环丙基咪唑-1-基)-5-[3-(甲氧基甲基） 氮杂环丁烷-1-基]-N-[2-[4-(l，1，1_三氟丙-2-基)-1，2,4_三唑-3-基]-1,3-噻唑-4-基] 吡啶-2-甲酰胺，或使用ChemBioDraw Ultra的命名系统可以被称为(S)-4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-(3-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基)-N-(2-(4-(l，1，1-三氟丙-2-基)-纽_ 1，2，4-三唑-3-基)噻唑-4-基)吡啶-2-甲酰胺。
[0155] 组合治疗
[0156] 通过给药ASK1抑制剂治疗急性心血管疾病事件的人类患者通常展现出疾病或病 症受益于组合使用其它治疗剂的治疗。这些疾病或病症可以具有心血管性质或可以与肺部 病症、代谢病症、胃肠病症等相关。另外，一些通过给药ASK1抑制剂治疗急性心血管疾病事 件的冠状动脉患者展现出病症可以受益于组合使用抗生素、镇痛剂和/或抗抑郁剂以及抗 焦虑剂的治疗剂的治疗。
[0157] 可以受益于ASK1抑制剂与一种或多种其它治疗剂的组合治疗的心血管相关疾病 或病症包括(但不限于）心绞痛，包括稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛(UA)、运动诱发的心绞 痛、变异型心绞痛;心律不齐;间歇性跛行;心肌梗塞，包括非STE心肌梗塞(NSTEMI);心力衰 竭，包括充血性(或慢性)心力衰竭、急性心力衰竭;或复发性局部缺血。
[0158] 适用于治疗心血管相关疾病或病症的治疗剂包括抗心绞痛剂、抗心力衰竭剂、抗 血栓形成剂、抗心律失常剂、抗高血压剂以及降脂剂。
[0159] ASK1抑制剂与适用于治疗心血管相关病症的治疗剂共同给药允许增强患者目前 正在接受的护理标准疗法。
[0160] 抗心绞痛剂包括β-阻断剂、钙通道阻断剂以及硝酸酯。β阻断剂通过减轻心脏的工 作负荷来减少心脏对氧的需求，使心率降低并且使剧烈的心脏收缩减少。阻断剂的实例 包括醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔/氢氯噻嗪、比索洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、 拉贝洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、普萘洛尔、索他洛尔(Betapace)以及噻吗洛尔（timolol)。
[0161] 硝酸酯使动脉和静脉扩张，从而提高冠状动脉血流并且降低血压。硝酸酯的实例 包括硝酸甘油、硝酸酯贴片、异山梨醇二硝酸酯以及异山梨醇-5-单硝酸酯。
[0162] 钙通道阻断剂阻止钙正常流动到心脏和血管的细胞中，使得血管舒张，从而增加 血液和氧向心脏的供应。钙通道阻断剂的实例包括氨氯地平、苄普地尔、地尔硫卓、非洛地 平、硝苯地平、尼莫地平(Nimotop)、尼索地平、维拉帕米以及尼卡地平。
[0163] 用于治疗心力衰竭的药剂包括利尿剂、ACE抑制剂、血管扩张剂以及强心苷。利尿 剂消除组织和循环中的过量流体，从而缓解心力衰竭的多种症状。利尿剂的实例包括氢氯 噻嗪、美托拉宗、呋塞米、布美他尼、螺内酯以及依普利酮。
[0164] 血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂通过扩张血管并且减小血流阻力来减轻心脏的工 作负荷。ACE抑制剂的实例包括贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫西普 利、培哚普利、喹那普利、雷米普利以及群多普利。
[0165] 血管扩张剂通过使血管舒张和扩张来减少血管上的压力。血管扩张剂的实例包括 肼屈嗪、二氮嗪、哌唑嗪、可乐定以及甲基多巴。ACE抑制剂、硝酸酯、钾通道活化剂以及钙通 道阻断剂同样充当血管扩张剂。
[0166] 强心苷是提高心脏收缩力的化合物。这些化合物增强心脏的栗送能力并且改善不 规律心跳活动。强心苷的实例包括洋地黄、地高辛以及洋地黄毒苷。
[0167] 抗血栓形成剂抑制血液的凝固能力。存在三种主要类型的抗血栓形成剂:血小板 抑制剂、抗凝血剂以及血栓溶解剂。
[0168] 血小板抑制剂抑制血小板的凝固活性，从而减少动脉凝固。血小板抑制剂的实例 包括乙酰水杨酸、噻氯匹啶、氯吡格雷、双嘧达莫、西洛他唑、潘生丁苯磺唑酮、双嘧达莫、吲 哚美辛以及糖蛋白llb/llla抑制剂(如阿昔单抗、替罗非班以及依替巴肽）。邱且断剂和钙通 道阻断剂同样具有血小板抑制作用。
[0169] 抗凝血剂防止血块生长变大并且防止形成新血块。抗凝血剂的实例包括比伐卢 定、华法林、未分级肝素 (unfractionated heparin)、低分子量肝素、达那肝素、来匹卢定以 及阿加曲班。
[0170] 血栓溶解剂起分解现有血块的作用。血栓溶解剂的实例包括链激酶、尿激酶以及 替奈普酶以及组织纤维蛋白溶酶原活化因子。
[0171] 抗心律失常剂用于治疗心率和心律的病症。抗心律失常剂的实例包括胺碘酮、普 鲁卡因胺、利多卡因以及普罗帕酮。强心苷和邱且断剂同样用作抗心律失常剂。
[0172] 抗高血压剂用于治疗高血压，其为血压始终高于正常血压的病症。高血压与包括 充血性心力衰竭、动脉粥样硬化以及血块形成的许多方面的心血管疾病相关。
[0173] 抗高血压剂的实例包括α-1-肾上腺素拮抗剂，如哌唑嗪(Minipress)、甲磺酸多沙 P坐嗪(Cardura)、盐酸哌唑嗪(Minipress)、哌唑嗪、多噻嗪(Minizide)以及盐酸特拉唑嗪 (Hytrin) ;β-肾上腺素诘抗剂，如普萘洛尔（Inderal)、纳多洛尔（Corgard)、地莫洛尔 (Blocadren)、美托洛尔(Lopressor)以及品多洛尔(Visken);中心α-肾上腺素受体激动剂， 如盐酸可乐定（Catapres)、盐酸可乐定以及氯噻酮（Clorpres，Combipres)、乙酸胍那节 (Wytensin)、盐酸胍法新(Tenex)、甲基多巴(Aldomet)、甲基多巴和氯噻嗪(Aldoclor)、甲 基多巴和氢氯噻嗪（Aldoril);组合的α/β-肾上腺素诘抗剂，如拉贝洛尔（Normodyne， Trandate)、卡维地洛(Coreg);肾上腺素能神经元阻断剂，如胍乙啶（Ismelin)、蛇根素碱 (Serpasil);中枢神经系统作用抗高血压剂，如可乐定(Catapres)、甲基多巴(Aldomet)、胍 那苄（Wytensin);抗血管紧张素 II药剂；ACE抑制剂，如培哚普利（Aceon)、卡托普利 (Capoten)、依那普利(Vasotec)、赖诺普利(Prinivil，Zestril);血管紧张素-II受体诘抗 剂，如坎地沙坦(Atacand)、依普罗沙坦(Teveten)、依贝沙坦(Avapro)、氯沙坦(Cozaar)、替 米沙坦(Micardis)、维沙坦(Diovan) ;|丐通道阻断剂，如维拉帕米(Calan, Isoptin)、地尔硫 卓（Cardizem)、硝苯地平（Adalat，Procardia);利尿剂；直接血管扩张剂，如硝普钠 (Nipride)、二氮嗪(Hyperstat IV)、肼酞嗪(Apresoline)、米诺地尔(Loniten)、维拉帕米； 以及钾通道活化剂，如阿普卡林、比卡林、色满卡林(cromakalim)、依马卡林、尼可地尔以及 吡那地尔。
[0174] 降脂剂用于较低血液中存在的胆固醇或脂肪糖的量。降脂剂的实例包括苯扎贝特 (1^2&11口）；环丙贝特(1〇(^1；[111)以及他汀类(8七31：；[118)，如阿托伐他汀(1^口；[1：01')、氟伐他汀 (Lescol)、洛伐他汀(Mevacor，Altocor)、美伐他汀、匹伐他汀(Livalo，Pitava)、普伐他汀 (Lipostat)、罗苏伐他汀(Crestor)以及辛伐他汀(Zocor)。
[0175] 需要ASK1抑制剂的患者通常罹患继发性医学病症，如代谢病症、肺部病症、外周血 管病症或胃肠病症中的一或多者。此类患者可以受益于包含向患者给药与至少一种治疗剂 组合的本发明化合物的组合疗法的治疗。
[0176] 肺部病症指的是与肺脏相关的任何疾病或病症。肺部病症的实例包括(但不限于） 哮喘、慢性阻塞性肺病(coro)、支气管炎以及肺气肿。
[0177] 用于治疗肺部病症的治疗剂的实例包括支气管扩张剂，包括β2激动剂和抗胆碱能 药、皮质类固醇以及电解质补充剂。用于治疗肺部病症的治疗剂的具体实例包括肾上腺素、 特布他林、沙丁胺醇、沙美特罗、施立稳(Serevent)、茶碱、异丙托溴铵、噻托铵、甲基泼尼松 龙、镁以及钾。
[0178] 代谢病症的实例包括(但不限于)糖尿病，包括I型和II型糖尿病；代谢综合症;血 脂异常;肥胖症;葡萄糖不耐受;高血压;高血清胆固醇；以及高甘油三酯。
[0179] 用于治疗代谢病症的治疗剂的实例包括抗高血压剂和降脂剂，如上文"心血管药 剂组合疗法"部分中所描述。用于治疗代谢病症的其它治疗剂包括胰岛素、磺酰脲、双胍、α-葡糖苷酶抑制剂以及肠促胰岛素模拟物。
[0180] 外周血管病症是与位于心脏和大脑外部的血管(动脉和静脉)相关的病症，包括例 如外周动脉疾病(PAD)，其为当向内脏、手臂以及腿供血的动脉由于动脉粥样硬化而变得完 全或部分堵塞时产生的病症。
[0181] 胃肠病症指的是与胃肠道相关的疾病和病症。胃肠病症的实例包括胃食道逆流病 (GERD)、炎性肠病（IBD)、肠胃炎、胃炎和消化性溃疡疾病以及胰腺炎。
[0182]用于治疗胃肠病症的治疗剂的实例包括质子栗抑制剂，如泮托拉唑（Protonix)、 兰索拉唑(Prevacid)、埃索美拉唑(Nexium)、奥美拉唑(Prilosec)、雷贝拉唑;H2阻断剂，如 西咪替丁(Tagamet)、雷尼替丁(Zantac)、法莫替丁(Pepcid)、尼沙替丁(Axid);前列腺素， 如迷索前列醇(Cytotec);硫糖铝；以及抗酸药。
[0183 ]镇痛剂是用于减轻疼痛的治疗剂。镇痛剂的实例包括阿片制剂(op i ate s)和吗啡 模拟剂(111〇印11；[110111；[11161:;[08)，如芬太尼和吗啡;扑热息痛;吧410以及(1^-2抑制剂。
[0184] 在其它方面，本申请的化合物(例如，式（I)的化合物，或其药学上可接受的盐、立 体异构体、前药或溶剂化物)可与一种或多种正被使用和/或开发以治疗疾病的其它治疗剂 组合使用。该一种或多种其它治疗剂可为对以下的抑制剂:PI3K如ΡΙ3Κγ、ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κδ和/ 或PI3Ka，Janus激酶(JAK)如JAK1、JAK2和/或JAK3,脾酪氨酸激酶(SYK)，Bruton酪氨酸激酶 (BTK)，含溴结构域蛋白抑制剂(BRD)如BRD4,赖氨酰氧化酶蛋白（L0X)，赖氨酰氧化酶-样蛋 白（L0XL)如L0XL1-5,基质金属蛋白酶(MMP)如MMP 1-10,腺苷A2B受体(A2B)，异柠檬酸脱氢 酶（IDH)如IDH1，丝氨酸/苏氨酸激酶TPL2，盘状结构域受体(DDR)如DDR1和DDR2，组蛋白脱 乙酰基酶(HDAC)，蛋白激酶C(PKC)，或其任意组合。
[0185] 药物组合物和给药
[0186] 根据本发明提供的化合物通常以药物组合物形式给药。本发明因此提供了含有以 下作为活性成分的药物组合物:所描述的化合物中的一或多者或其药学上可接受的盐、立 体异构体或酯以及一或多种药学上可接受的赋形剂、载剂（包括惰性固体稀释剂和填充 剂）、稀释剂(包括无菌水溶液和各种有机溶剂）、穿透增强剂、增溶剂以及佐剂。药物组合物 可以单独或与其它治疗剂组合给药。此类组合物以医药领域中熟知的方式制备(参见例如 Remington's Pharmaceutical Sciences,Mace Publishing Co·,Philadelphia,PA,第17 版（1985);和Modern Pharmaceut i cs，Marcel Dekker,Inc.第3版（G.S.Banker& C.T.Rhodes，Eds.)。
[0187] 药物组合物可以通过具有类似效用的可接受的药剂给药模式中的任一者，以单剂 量或多剂量给药，所述药剂给药模式例如，如以引用的方式并入的那些专利和专利申请中 所描述，包括经直肠、经颊、鼻内以及经皮途径，通过动脉内注射、静脉内、腹膜内、肠胃外、 肌内、皮下、口服、局部给药，作为吸入剂，或例如经由浸渍或涂布的装置(如支架），或动脉 插入圆柱形聚合物给药。
[0188] -种给药模式是不经肠的，尤其是通过注射给药。本发明的新组合物可以并入用 于注射给药的形式，包括水或油悬浮液或乳液，其具有芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油，以 及酏剂、甘露糖醇、右旋糖或无菌水溶液，以及类似医药媒剂。盐水溶液也通常用于注射，但 在本发明的上下文中不优选采用。还可以采用乙醇、甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等（以及其 适合的混合物）、环糊精衍生物以及植物油。可以例如通过使用包衣(如卵磷脂）、在分散液 情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂来维持适当流动性。微生物作用的预防可 以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)来 实现。
[0189] 通过在具有如上文所列举的各种其它成分的适当溶剂中并入所需量的本发明化 合物(视需要继而进行过滤灭菌)来制备无菌可注射溶液。一般来说，通过将各种灭菌活性 成分并入含有碱性分散介质和来自上文所列举的那些成分的所需其它成分的无菌媒剂中 来制备分散液。在无菌散剂用于制备无菌可注射溶液的情况下，优选制备方法是真空干燥 和冷冻干燥技术，其由先前的无菌过滤溶液得到活性成分加上任何其它所需成分的散剂。
[0190] 口服给药是本发明化合物的另一种给药途径。给药可以经由胶囊或肠溶衣片剂或 类似物。在制备包括至少一种本文所述化合物的药物组合物过程中，通常通过赋形剂来稀 释活性成分，和/或包封在可以呈胶囊、药囊、纸或其它容器形式的所述载剂内。当赋形剂用 作稀释剂时，其可以呈固体、半固体或液体材料(如上所述)形式，其充当活性成分的媒剂、 载剂或介质。因此，组合物可以呈以下形式:片剂、丸剂、散剂、口含剂、药囊、扁胶剂、酏剂、 悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中）、含有例如高达10重量％的 活性化合物的软膏、软及硬明胶胶囊、无菌可注射溶液以及无菌封装散剂。
[0191 ]适合的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿 拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、 无菌水、糖浆以及甲基纤维素。制剂可以另外包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁以及矿物油； 湿润剂;乳化剂和悬浮剂;防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以及调味 剂。
[0192] 本发明组合物可以经配制，以便在通过采用所属领域中已知的方式向患者给药之 后，提供活性成分的快速、持续或延迟释放。用于口服给药的控制释放药物递送系统包括含 有聚合物涂布的贮囊或药物-聚合物基质制剂的渗透栗系统和溶解系统。控制释放系统的 实例在美国专利第3,845,770号、第4,326,525号、第4,902,514号以及第5,616,345号中给 出。供用于本发明方法中的另一种制剂采用经皮递送装置（"贴片"）。此类经皮贴片可以用 于提供本发明化合物以控制量连续或非连续输注。用于递送药剂的经皮贴片的建构和使用 是所属领域中所熟知。参见例如美国专利第5，023，252号、第4，992，445号以及第5，001，139 号。可以建构此类贴片以持续、脉冲式或按需求递送药剂。
[0193] 该组合物优选配制为单位剂型。术语"单位剂型"是指物理分散的单元，其适合作 为人受试者和其它哺乳动物的单位剂量，各单元包含计算产生所需治疗效果的预定量的活 性物质，并包含合适的药物赋形剂(例如，片剂、胶囊和安瓿）。该化合物通常以药物有效量 给药。在一些实施方案中，该组合物用于口服给药，各剂量单元包含lmg至2g、lmg至lg、l至 900mg、10至900mg、25至900mg、50至900mg、75至900mg、100至900mg、150至900mg、200至 90011^、250至90011^、300至90011^、400至90011^、500至90011^、600至90011^、700至90011^、800至 900mg的本文所述的化合物。在一个实施方案中，该组合物用于肠胃外给药，各剂量单元包 含0·1至lOOOmg、1至900mg、1至800mg、1至700mg、1至600mg、1至500mg、10至500mg、25至 500mg、50 至 500mg、100 至 500mg、200 至 500mg、300 至 500mg、400 至 500mg 的本文所述的化合 物。然而，应理解，化合物的实际给药量通常将由医生鉴于相关情形而决定，所述情形包括 待治疗的病症;所选择的给药途径;给药的实际化合物和其相对活性;个体患者的年龄、重 量以及反应;患者症状严重程度等。
[0194] 为了制备固体组合物(如片剂），将主要活性成分与医药赋形剂混合以形成含有本 发明化合物的均匀混合物的固体预配制组合物。当提及这些预配制组合物是均匀的时，意 味着活性成分通常均匀分散在整个组合物中，以便组合物可以容易地再分成同等有效的单 位剂型，如片剂、丸剂以及胶囊。
[0195] 本发明的片剂或丸剂可以经包衣或以其它方式复方以提供剂型，其具有作用时间 长或保护免受胃的酸性条件的作用的优势。举例来说，片剂或丸剂可以包含内部剂量和外 部剂量组分，后者为前者上的包膜形式。两个组分可以由用以在胃中抵抗崩解并且允许内 部组分完好传递到十二指肠中或延迟释放的肠溶性层间隔开。各种材料可以用于此类肠溶 性层或包衣，此类材料包括多种聚合酸和聚合酸与此类材料(如虫胶、鲸蜡醇以及乙酸纤维 素)的混合物。
[0196] 用于吸入或吹入的组合物包括药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的 溶液和悬浮液，以及散剂。液体或固体组合物可以含有如上文所描述的适合的药学上可接 受的赋形剂。优选地，组合物通过用于局部或全身作用的口服或经鼻呼吸道途径给药。优选 药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过使用惰性气体来雾化。雾化溶液可以直接从雾化 装置吸入或所述雾化装置可以连接到面罩托上或间歇性正压呼吸机上。可以优选地以适当 的方式口服或经鼻从递送制剂的装置给药溶液、悬浮液或散剂组合物。
[0197] 式I的化合物的合成
[0198] 本申请化合物可以使用本文所公开的方法和其常规修改制备，所述修改鉴于本文 中的本发明和所属领域中熟知的方法将是显而易见的。除本文中的教导外，还可以使用常 规并且熟知的合成方法。本文所描述的典型化合物(例如具有式(I)中的一或多者所描述的 结构的化合物)的合成可以如以下方案A中所描述和或以下实施例中所提供来实现。如果是 可获得的，那么试剂可以商购自例如Sigma Aldrich或其它化学供应商。
[0199] 方案 A
[0201] 其中 R1，R2，R3，R4，R5，R 6，R7，RlPRb 如上定义。
[0202] 如下将4-溴噻唑甲酸（1)转化为甲酰肼:首先通过使用如亚硫酰氯或草酰氯的酰 基卤形成剂转化为酰基氯，随后用肼处理酰基卤形成甲酰肼(2)。在二甲基甲酰胺二甲基缩 醛和适当取代的伯胺存在下，使甲酰肼环化获得具有所需R 1取代基的三唑（3)。或者，酰基 卤通过与适当取代的胺()的反应形成化合物（1)的对应酰胺而转化为胺。酰胺通过使 用已知条件或如本文所描述与劳氏试剂(Lawesson's reagent)的反应转化为硫代酰胺。硫 代酰胺随后与肼反应获得三唑（3)。三唑（3)经由与乙酸铜和氢氧化铵在DMF或本领域的普 通技术人员已知的其它溶剂中的反应转化为氨基类似物（中间体A'）。
[0203] 通过将化合物(4)与具有所需R6取代基的适当取代的咪唑偶合来开始制备中间体 C'。使用如Pd(dppf)Cl2的钯试剂，在一氧化碳存在下在质子溶剂（如丁醇）中使所得产物 (5)羰基化。将所得酸(6)分离为中间体C'。随后使中间体C'与中间体A'反应以形成酰胺中 间体D'。使中间体D'进行SNAr反应并且转化为所需式(I)的胺化合物。本领域的普通技术人 员遵循以上一般流程、本文所提供的特定操作或此类从业者已知的其它文献来源能够进行 本文中的反应。
[0204] -般合成：
[0205] 本发明化合物的典型实施方案可以使用下文所描述的一般反应方案合成。鉴于本 文中的描述将显而易见的是，可以通过用具有类似结构的其它材料取代起始原料来改变一 般方案以产生相应不同的产物。合成描述之后，提供了如何改变起始原料来提供相应产物 的数个实施例。鉴于取代基得以限定的所需产物，必需起始原料一般可以通过检测来确定。 起始原料典型地获自商业来源或使用公开方法合成。为了合成本发明的实施方案的化合 物，检测待合成化合物结构将提供各取代基的特性。鉴于本文中的实施例，通过简单的检测 方法，最终产物的特性通常使必需起始原料的特性显而易见。
[0206] 合成反应参数
[0207]术语"溶剂"、"惰性有机溶剂"或"惰性溶剂"指的是在所描述的反应条件下是惰性 的溶剂(包括例如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃（"^^、二甲基甲酰胺^補广^三氯甲烷二氯 甲烷、乙醚、甲醇、吡啶等）。除非有相反说明，否则本发明反应中所使用的溶剂是惰性有机 溶剂，并且反应在惰性气体(优选氮气)下进行。
[0208] 2-(4-环丙基-4H-1，2，4_三唑-3-基）噻唑-4-胺（中间体A)的制备
[0210] 步骤1:4_溴噻唑-2-甲酰肼的制备
[0211] 向 4-溴噻唑-2-甲酸(2.(^，9.8_〇1)在]^0!1(101^)中的溶液中添加50(：12(71(^1^， 9.8mmol)，且将反应回流3小时。将反应浓缩，将残余物悬浮于EtOH(lOmL)，添加水合肼 (2.4mL，49mmo 1)且将反应加热至回流保持90分钟。将反应浓缩，悬浮于CH3CN，过滤，且将固 体用CH3CN、Et 20洗涤，且干燥以得到4-溴噻唑-2-甲酰肼，作为黄色固体。M+l = 222.1
[0212] 步骤2:4-溴-2-(4-环丙基-4H-1，2,4-三唑-3-基)噻唑的制备
[0213] 将4-溴噻唑-2-甲酰肼(620mg，2.8mmol)和甲苯(9mL)添加至可密封的瓶中，添加 DMF · DMA(920yL，6 · 9mmo 1)且将反应搅拌5分钟。添加环丙胺（770yL，1 lmmo 1)和AcOH( 160μ L，2.8mmol)且将反应在微波反应器中在150°C加热30分钟。将反应浓缩且通过快速色谱法 纯化（l-7%Me0H在CH 2C12中的溶液）以得到4-溴-2-(4-环丙基-4H-1，2,4-三唑-3-基)噻唑 (被DMF · DMA污染，用于下一步）。
[0214] 步骤3:2-(4-环丙基-4H-1，2，4-三唑-3-基）噻唑-4-胺的制备
[0215] 向微波瓶添加如上合成的溴噻唑（1 .〇g，3 · 7mmol)、Cu(acac)2(97mg，0 · 37mmol)和 Cs2⑶3(2 · 4g，7 · 4mmo 1)且将烧瓶填充N2。添加戊二酮（150yL，1 · 5mmol)、DMF(8mL)和氢氧化 铵（1.11111，30(^17111111〇1)且将反应加热至90°(：。当反应通过冊^：判断完成时(41^8)，将混合 物通过硅藻土过滤，硅藻土用CH2C12洗涤，将滤液浓缩，且残余物通过快速色谱法纯化(6- 13%MeOH在CH 2C12中的溶液）以提供2-(4-环丙基-4H-1，2，4_三唑-3-基)噻唑-4-胺，其为油 状物。Μ+1 = 208·2
[0216] 2-(4-环丙基-4Η-1，2,4-三唑-3-基)噻唑-4-胺（中间体Β)的制备
[0218] 步骤1:4_溴噻挫-2-甲酸的制备
[0219] 在-78°C 向 2,4_ 二溴噻唑（50g，207mmol，1.0当量)在Et20(1000mL)中的溶液中滴 加11-8111^(9〇1^，2.51，1.1当量)且将其搅拌1小时。在-78°(：将反应溶液倒入干冰且将反应 混合物温热至室温。TLC和LCMS显示反应完成。将其用水（100ml)淬灭。Et 20相去除。将水相 调节至pH为2-3且用乙酸乙酯萃取。将有机相干燥，过滤且浓缩以得到4-溴噻唑-2-甲酸。 ^NMRC 400MHz,DMSO)：δ8.23(1H,s)〇
[0220] 步骤2-3: (S)-4-溴-N-(l，1，1-三氟丙-2-基)噻唑-2-甲酰胺的制备
[0221] 向4-溴噻唑-2-甲酸（80g，1.0当量）在S0Cl2(300mL)中的混合物中添加 DMF(10 滴）。将其回流5小时且浓缩。将残余物溶于DCM(300mL)且在0°C添加至具有Et3N(117g，3.0 当量）的（S)-l，l，l-三氟丙-2-胺盐酸盐(60.5g，1.05当量）的溶液。将其搅拌过夜。TLC和 LCMS显示反应完成。将其用水淬灭且用DCM萃取。将有机相干燥，过滤且浓缩。将残余物通过 柱纯化以得到(S)-4-溴-N-(l，l，l-三氟丙-2-基)噻唑-2-甲酰胺。lHNMR(400MHz，CDC13)J 7.47(lH，s)，7.17(lH，br s)，4.74-4.76(lH，m)，1.39(3H，d，J=6.8Hz)。
[0222] 步骤4: (S)-4_溴-N-(l，1，1-三氟丙-2-基)噻唑-2-硫代甲酰胺的制备
[0223] 向（S)-4_溴-N-(l，l，l-三氟丙-2-基）噻唑-2-甲酰胺（50g，1.0当量）在甲苯 (1000mL)中的溶液中添加劳氏试剂（100g，1.5当量）。将其回流过夜。TLC和LCMS显示反应完 成。将其浓缩且残余物通过柱纯化以得到(S)-4-溴-N-(l，1，1-三氟丙-2-基)噻唑-2-硫代 甲酰胺。
[0224] 步骤5 : ( S ) - 4 -溴-Ν - ( 1，1，1 -三氟丙-2 -基）噻唑-2 -甲腙酰胺 (carbohydrazonamide)的制备
[0225] 向（S)-4_溴-N-(l，1，1-三氟丙-2-基）噻唑-2-硫代甲酰胺(46g，1.0当量）的溶液 中添加肼水合物（15g，2.0当量）。将其回流过夜。TLC和LCMS显示反应完成。将其浓缩且残余 物通过快速柱纯化以得到(S)-4-溴-N-(l，l，l-三氟丙-2-基)噻唑-2-甲腙酰胺。
[0226] 步骤6: (S)-4-溴-2-(4-(1，1，1-三氟丙-2-基)-4Η-1，2,4_三唑-3-基）噻唑的制备
[0227] 将在三乙氧基甲烷(500ml)中的（S)-4_溴-N-(l，l，l-三氟丙-2-基）噻唑-2-甲腙 酰胺(55g)在90 °C搅拌3小时，然后在130 °C过夜且将反应浓缩。将残余物通过柱纯化以得到 (S) -4-溴-2-(4-(1，1，1 -三氟丙-2-基）-4H-1，2，4-三唑-3-基）噻唑。hNMR(400MHz，CDC13): S8.46(lH，s)，7.43(lH，s)，6.48-6.52(lH，m)，1.83(3H，d，J=7.2Hz)。
[0228] 步骤7: (S)-2-(4-(l，1，1-三氟丙-2-基)-4Η-1，2，4-三唑-3-基）噻唑-4-胺（中间 体B)的制备
[0229] 向（3)-4-溴-2-(4-(1，1，1-三氟丙-2-基）-4!1-1，2,4-三唑-3-基）噻唑（508， 120mmol，1.0当量)在DMF(500mL)中的溶液中添加 Cu(acac)2(3.2g，12mmol，0.1当量）、乙酰 基丙酮（1.2g，0.1当量)和NH4〇H(50ml，浓）。将其在90°C搅拌过夜且将其浓缩。将残余物溶 于Me0H(500mL)且将其过滤。将滤液浓缩且残余物通过柱纯化以得到中间体BJiWMR (400MHz，CDC13)j8.38(lH，s)，6.58-6.65(lH，m)，6.14(lH，s)，4.20(2H，br s)，1.77(3H， dJ = 7.2Hz)；ESI MS:264([M+l]).
[0230] 4-(4-环丙基-1H-咪唑-丨-基)-5-氟吡啶-2-甲酸（中间体 C)的制备
[0232] 步骤丨：2-氯-4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-氟吡啶的制备
[0233] 将2-氯_5_氣_4_鹏吡啶（1 ·8g，1 ·OOmmol)、4_环丙基咪唑（982mg，9 · lOmmol)、Cu2〇 (100mg，0 ·700mmol)、8_羟基卩奎琳（152mg，1 ·05mmol)、碳酸艳（4.60g，14.Ommol)和PEG-3350 (1.4g)在丁腈(50mL)中的悬浮液在65 °C加热16小时。通过娃藻土过滤反应混合物，浓缩且 残余物分配于二氯甲烷和水。分离层且水层用二氯甲烷洗涤两次。干燥合并的有机层 (MgS〇4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法纯化（15-60%Et0A C在己烷中的溶液）以得 到2-氯-4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-氟吡啶。
[0234] 步骤2:4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5_氟吡啶-2-甲酸丁酯的制备
[0235] 将 2-氯-4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基）-5-氟吡啶（730mg，3.07mmol)和 Pd(dppf) Cl2(112mg，0.159mmo 1)悬浮于脱气BuOH中，且反应容器用一氧化碳吹洗且将C0气囊固定于 反应容器。将混合物加热至70°C保持90分钟，通过硅藻土过滤，且浓缩。将残余物通过短的 硅胶填料以得到4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-氟吡啶-2-甲酸丁酯。
[0236] 步骤3:4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5-氟吡啶-2-甲酸的制备
[0237] 将 4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-5_ 氟吡啶-2-甲酸酯（64〇11^，2.11111111〇1)溶于1~ HCl(5mL)，且将反应加热至100°C过夜。去除溶剂，添加 CH3CN且去除溶剂以得到4-(4-环丙 基-1H-咪唑-1-基)-5-氟吡啶-2-甲酸，将其用于随后的反应。
[0238] 酰胺偶联反应的代表性步骤
[0239] 4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-N-(2-(4-环丙基-4H-1，2,4-三唑-3-基）噻唑-4-基)-5_氟吡啶-2-甲酰胺（中间体D)的制备
[0241 ]向中间体C · HC1 (340mg，1 · 2mmol)、中间体A( 261mg，1 · 26mmol)、HATU(638mg， 1.68mmo 1)和N-甲基吗啉(3 30yL，3. OOmmo 1)的混合物中添加 DMF (5mL)且将反应搅拌2小时。 将混合物浓缩，再溶于最少量的CH3CN，且滴加水直到形成稠的浆液。过滤分离固体且用 CH3CN 洗涤以得到 320π^Μ+1 = 437 · 2
[0242]根据相同操作制备中间体Ε:
[0244] 制备式(I)的化合物的另外的操作
[0245]
[0246] 其中^、妒和!?1在式（I)中定义。
[0247] 在2mL反应瓶中放置合适的胺亲核试剂(4.1当量)和1(20)3(6.1当量）。向其添加中 间体D或E(1.0当量)在NMP中的溶液(0.15M)。混合物在80°C加热16小时。将其冷却至室温， 且向其添加 EtOAc。所得上清液转移至单独的收集管。通过Genevac去除溶剂，且所得固体用 水洗涤且干燥以得到所需产物。产物特征通过LCMS分析验证。
[0248] 化合物1的代表性制备
[0250] 在2mL反应瓶中放置3-(二氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(27.3mg，0.19mmol)和K 2C03 (38mg，0 · 28mmo 1)。向其添加中间体D(20mg，0 · 046mmo 1)在NMP(0 · 3mL)中的溶液。混合物在 80°C加热16小时。将其冷却至室温，且向其添加 EtOAc(lmL)。通过Genevac去除溶剂，且所得 固体用水洗涤且干燥以得到4-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-N-(2-(4-环丙基-4H-1，2,4-三 唑-3-基）噻唑-4-基)-5-(3-(二氟甲基)氮杂环丁烷-1-基）吡啶-2-甲酰胺LRMS(ESI + )m/z [M+H] +，C24H23F2N90S 的计算值:524 · 2，实测值:524 · 1。
[0251] 以类似方式制备使用中间体D化合物1-22,且以类似一般制备过程使用中间体E制 备化合物23-45。代表性化合物的表征不于表2。
[0252] 表2.代表性化合物的表征




[0258] 一般用途
[0259] 式I化合物被认为在治疗响应于给药ASK1抑制剂的病症方面有效。具体来说，式I 化合物适用于治疗宽范围的疾病，例如自身免疫性疾病;炎性疾病；心血管疾病(包括糖尿 病、糖尿病性肾病以及其它糖尿病并发症）；心-肾疾病，包括肾脏疾病;纤维化疾病;呼吸道 疾病(包括C0PD、特发性肺纤维化（IPF)以及急性肺损伤）；急性肝脏疾病和慢性肝脏疾病； 以及神经变性疾病。
[0260] 测试
[0261] 如以下实施例中所描述并且通过所属领域的技术人员显而易见的方法进行活性 测试。
[0262] 包括以下实施例以展示本申请的不同方面或实施方案。所属领域的技术人员应了 解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现在本发明的实践中运行良好的技术，并 且因此可以视为构成其实践的优选模式。然而，根据本发明，所属领域的技术人员应了解， 在不背离本发明的精神和范围的情况下可以对所公开的具体实施方案作出许多改变并且 仍获得相同或类似结果。
[0263] 生物测试
[0264] I. TR-FRET ASK1 (凋亡信号调节激酶1)激酶测试
[0265] 为了评估本发明化合物对ASK1(凋亡信号调节激酶1)激酶的抑制活性，使用测定 从ATP转移到肽底物的磷酸酯量的TR-FRET ASK1激酶分析来检测其活性。
[0266] 去磷酸化重组人类ASK1激酶来自吉利德科学公司。小分子激酶抑制剂星形孢菌素 (目录号 S6942)和二硫苏糖醇（DTT，目录号 43815-5G)获自 Sigma Chemicals(St.Louis， 目录号7724)来自Affymetrix(Santa Clara，CA)并且测试化合物来自吉利德科学 公司。HTRF KinEASE?-STK S3试剂盒获自Cisbio(Bedford，Mass)。所有其它试剂都是可商 购的最尚级别。
[0267] 该测试使用HTRF检测来测量通过ASK1激酶的生物素标记肽底物的磷酸化水平。这 是基于来自Cisbio的HTRF?KinEASE?-STK手册的竞争性时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET)免疫分析。用 1 OmM MOP缓冲液(pH7·Ο，含有lOmM乙酸镁、0.025%NP-40、ImM DTT、 0.05 % BSA以及1.5 %甘油）培育测试化合物、1 μΜ STK3肽底物、4nM ASK 1激酶30分钟，随后 添加 100μΜ ATP开始激酶反应并且培育3小时。添加用IX Eu3+穴状化合物缓冲液标记的肽抗 体(含有10mM EDTA和125nM链亲和素 XL665)以终止反应并且使用PerkinElmer的Envision 2103多标记读取器检测磷酸化的肽底物。在615nm(穴状化合物）和665nm(XL665)下测量荧 光并且计算各孔的665nm/615nm比值。所得TR-FRET水平（665nm/615nm比值）与磷酸化水平 成比例。在这些分析条件下，肽底物的磷酸化程度随时间和酶浓度呈线性。关于1和酶的比 活性，分析系统产生一致的结果。对于抑制实验（IC 5Q值），用恒定浓度ATP、肽以及数种固定 浓度抑制剂测量活性。星形孢菌素(非选择性激酶抑制剂）用作阳性对照。所有酶活性数据 都报导为四次测定的平均值。
[0268] IC5Q值按照以下方程计算：
[0269] y =范围/{l+(x/IC5〇)s}+背景
[0270] 其中1和7分别表示抑制剂浓度和酶活性。酶活性表示为从ATP并入底物肽中的磷 酸酯量。范围是最大y范围（无抑制剂，DMS0对照)并且s是斜率因子。如表3所总结，该结果证 实了式(I)的化合物为ASK-1受体的有效抑制剂。
[0271] 表3.式（I)的化合物对ASK1的活性.
[0273] II.ASK1基于细胞的测试
[0274] 在稳定表达AP-1:荧光素酶报告子构建体（293/APl-Luc细胞-Panomics Inc.， 6519Dumbarton Circle，Fremont，CA)的细胞中测定化合物的细胞功效（即EC5Q)。细胞感染 有表达激酶活性的ASK1 (大鼠 ASK1 cDNA的631-1381)的腺病毒，其将激活AP-1转录因子并 且增加荧光素酶表达。ASK1抑制剂将降低ASK1酶活性并且因此降低AP-1转录因子的活性并 且减少荧光素酶表达。该结果将用于测定ASK1的体内有效抑制剂。
【主权项】
1. 式(I)的化合物：其中： Rl为C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C2-C6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部分任选 被1至4个独立选自W下的成员取代:面素、ORi哺NRi V2; R2为氨或C广C3烷基； R3为氨或C广C3烷基； R4为氨或C广C3烷基； R5为氨或C广C3烷基； R6为C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C2-C6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部分任选 被1至4个独立选自W下的成员取代:面素、ORi哺NRi V2; 护为氨或&-C3烷基;且 R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成4至10元杂环基，其为单环基团或稠合或桥接的双 环或螺环基团，在该杂环基中任选包含氧或氮原子，其中该杂环基进一步任选在相同原子 或不同原子被独立选自W下的1至4个成员取代:C1-C6烷基、径基、氯基、氧代、面素、C1-C6幾 基、打-C6面代烷基、扣-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C2-C6杂环烷基、打-C6酷基、打-C6烷基-Rll、 ORii、C (0) NRii;其中Rl哺护独立地选自氨、C广C6烷基或。-C6面代烷基； 或其药学上可接受的盐或立体异构体。2. 权利要求1所述的化合物，其中 Rl为C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C2-C6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部分任选 被1至4个面素原子取代； R2为氨或C广C3烷基； R3为氨或C广C3烷基； R4为氨或C广C3烷基； R5为氨或C广C3烷基； R6为C1-C6烷基、C3-C6环烷基或C2-C6杂环烷基，其中该烷基、环烷基或杂环烷基部分任选 被1至4个面素原子取代； 护为氨或&-C3烷基;且 R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成4至8元杂环单环基团，或6至10元稠合或桥接的杂 环双环或杂环螺环基团，其中任选在该单环、双环或螺环基团中包含氧或氮原子，其中该单 环、双环或螺环基团进一步任选被1至4个独立选自W下的成员取代:Ci-C6烷基、径基、氯基、 氧代、面素、扣-C6幾基、扣-C6面代烷基、&-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C2-C6杂环烷基、扣-C6酷 基、C广C6烷基-Rii、ORii、C (0) NRii，其中Rii为氨、CrCs烷基或。-C6面代烷基； 或其药学上可接受的盐或立体异构体。3. 权利要求1或2所述的化合物，其中 R1为C广C3面代烷基或C3-C跡烷基； R2为氨； R3为氨； R4为氨； R5为氨； R6为C广C3面代烷基或C3-C跡烷基； 护为氨或&-C3烷基;且 R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成4至7元杂环单环基团，或6至9元稠合的杂环双环 或杂环螺环基团，其中任选在该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团中包含氧或氮原子，其 中该杂环单环、杂环双环或杂环螺环基团进一步任选被1、2或3个独立选自W下的成员取 代：Ci-Cs烷基、径基、氛基、氧基、面素、Ci-Cs幾基、Ci-Cs面代烷基、Ci-Cs烷氧基、C3-C6环烧 基、C2-C6杂环烷基、C广C6烷基-护、0护、(：(0)麻1，其中护为氨、&-〔6烷基或打-〔6面代烷基； 或其药学上可接受的盐或立体异构体。4. 权利要求1或2所述的化合物，其中Ri为C1-C3面代烷基或C3-C跡烷基，其中该环烷基 任选被1至4个面素原子取代。5. 权利要求域2所述的化合物，其中Ri为甲基、乙基、丙基、氣甲基、氣乙基、氣丙基、二 氣甲基、二氣乙基、二氣丙基、Ξ氣甲基、Ξ氣乙基、Ξ氣丙基、Ξ氣下基、环丙基、环下基、氣 环丙基和氣环下基。6. 权利要求1或2所述的化合物，其中R6为C1-C3面代烷基或C3-C跡烷基，其中该环烷基 任选被1至4个面素原子取代。7. 权利要求域2所述的化合物，其中R6为甲基、乙基、丙基、氣甲基、氣乙基、氣丙基、二 氣甲基、二氣乙基、二氣丙基、二氣下基、Ξ氣甲基、Ξ氣乙基、Ξ氣丙基、Ξ氣下基、环丙基、 环下基、氣环丙基和氣环下基。8. 权利要求7所述的化合物，其中R7为氨、甲基、乙基或丙基。9. 权利要求8所述的化合物，其中R2为氨，R3为氨，R4为氨，且R 5为氨。10. 权利要求1所述的化合物，其中R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成任选包含氧或 氮原子的4至8元杂环单环基团，其中该杂环单环基团进一步任选被1、2或3个独立选自W下 的成员取代：甲基、乙基、丙基、氣甲基、二氣甲基、Ξ氣甲基、氣乙基、二氣乙基、Ξ氣乙基、 丙基，二氣丙基、Ξ氣丙基、氯基、氧代、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、氣、漠 、C (0)畑2、C(0)N(C 出）H、C(0)N(C 出）（CH3)、C(0)N(C 出 CH3)H、C(0)N(CH3)(Ol2CH3WPC(0)N 畑2C出)2; 或其药学上可接受的盐或立体异构体。11. 权利要求1所述的化合物，其中R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成任选包含氧或 氮原子的6至10元稠合或桥接的杂环双环或杂环螺环基团，其中该杂环单环基团进一步任 选被1、2或3个独立选自W下的成员取代：甲基、乙基、丙基、氣甲基、二氣甲基、S氣甲基、氣 乙基、二氣乙基、二氣乙基、丙基、二氣丙基、二氣丙基、氛基、氧代、甲氧基、乙氧基、甲氧基 甲基、甲氧基乙基、氣、漠、C(0)N出、C(0)N(C出化、C(0)N(C出）（C曲）、C(0)N(C此C曲）H、C(0)N (咖）（师咖)和C (ο) N(师咖)2; 或其药学上可接受的盐或立体异构体。12. 权利要求1所述的化合物，其中R3和Rb与它们连接的氮原子结合形成杂环基，其中该 杂环基选自：其中该杂环基进一步在不同原子或相同原子任选被独立选自W下的1个成员或2个成 员取代：甲基、乙基、丙基、氣甲基、二氣甲基、Ξ氣甲基、氣乙基、二氣乙基、Ξ氣乙基、丙基， 二氣丙基、Ξ氣丙基、氯基、氧代、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、氣、漠、C(0) NH2、C(0)N(CH3)H、C(0)N(CH3)(畑3)、C(0)N(CH2畑3)H、C(0)N(畑3)(CH2畑3)和C(0)N 畑2C也)2; 或其药学上可接受的盐或立体异构体。13. 化合物，其选自： 4- (4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- [3-(二氣甲基)氮杂环下烧-1-基]化晚-2-甲酯胺； 5- (3-氯基氮杂环下烧-1-基）-4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ 挫-3-基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 5-(3-氯基-3-甲基氮杂环下烧-1-基)-4-(4-环丙基咪挫-1-基)-Ν-[2-(4-环丙基-1， 2，4-=挫-3-基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? η-甲氧基-3-甲基氮杂环下烧-1-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- ( 3,3-二氣氮杂环下烧-1-基 川比晚-2-甲 酷胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? η-甲氧基化咯烧-1-基) 邮晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- [4-(立氣甲基)赃晚-1-基]邮晚-2-甲酯胺； 4- (4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- (4-氣赃晚-1 -基川比晚-2-甲酯胺； 5- (4-氯基赃晚-1-基）-4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3- 基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- (4-甲氧基赃晚-1-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- [4-(甲基氨基甲酯基)赃晚-1-基]邮晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- (4-甲氧基-4-甲基赃晚-1-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- [4-(2,2,2-Ξ氣乙基)赃嗦-1-基]化晚-2-甲酯胺； 4- (4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? α ， 4-氧氮杂环庚烧-4-基 川比晚-2-甲 酷胺； 5- (3,4,6,7,8,8a-六氨-1Η-化咯并[1，2-a]化嗦-2-基）-4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν- [2-(4-环丙基-1，2，4-Ξ挫-3-基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4- (4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-5- ( 3-氧代-5 ， 6 ， 8 ， 8a-四氨-lH-[ 1 ， 引 嗯挫并 [ 3 ， 4-a] 邮嗦-7-基) 邮晚-2-甲 酷胺； 5- (3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-4-(4-环丙基咪挫-1-基)-N-[2-(4-环丙基-l，2,4- S挫-3-基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-N-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? η-吗嘟-4-基氮杂环下烧-1-基 川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基)-5-(4-环丙基赃嗦-1-基)-Ν-[2-(4-环丙基-1,2，4-^挫-3- 基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基)-5-[4-(环丙基甲基)赃嗦-1-基]-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ 挫-3-基)-1，3-嚷挫-4-基]化晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? η-氧杂-7-氮杂螺 [3.5 巧-7-基) 邮晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基咪挫-1-基）-Ν-[2-(4-环丙基-1，2,4-Ξ挫-3-基）-1,3-嚷挫-4-基]-δ? α-氧杂-2-氮杂螺 [3.5 巧-2-基) 邮晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1Η-咪挫-1-基)-5-(3-(甲氧基甲基）氮杂环下烧-1-基)-N-(2-(4- (1，1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-5-(3-氯基-3-甲基氮杂环下烧-1-基）-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基）-N-(2-(4- (1，1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(3-甲氧基-3-甲基氮杂环下烧-1-基)-N-(2-(4- (1，1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(3-(二氣甲基)氮杂环下烧-1-基)-N-(2-(4-(l， 1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-IH-咪挫-1-基)-5-(3,3-二氣化咯烧-1-基)-Ν-(2-(4-(1，1，1-Ξ 氣 丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基-1Η-咪挫-1-基)-5-(3-甲氧基化咯烧-1-基)-Ν-(2-(4-( (S)-l，1，1-Ξ氣 丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-5-(4-氯基赃晚-1-基)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-N-(2-(4-(l，1，1-Ξ氣丙- 2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基）-5-(4-甲氧基赃晚-1-基）-N-(2-(4-(l，1，1-Ξ氣 丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(4-(Ξ 氣甲基）赃晚-1-基)-N-(2-(4-( 1，1，1-Ξ 氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基）-5-(4-(2，2,2-Ξ 氣乙基）赃嗦-1-基）-N-(2-(4-(l, 1,1-Ξ氣丙-2-基)-4H-l ,2 (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(4-(甲基氨基甲酯基)赃晚-1-基)-N-(2-(4-(l， 1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(4-氣赃晚-1-基)-N-(2-(4-(l，1，1-Ξ氣丙-2- 基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(4-甲氧基-4-甲基赃晚-1-基)-Ν-(2-(4-α，1, 1-Ξ氣丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1Η-咪挫-1-基)-5-(1,4-氧氮杂环庚烧-4-基)-Ν-(2-(4-( 1，1，1-Ξ 氣丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基-1Η-咪挫-1-基）-5-(六氨化咯并[l，2-a]化嗦-2(1Η)-基）-N-(2-(4- ((S)-1，1，1-Ξ氣丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 4-(4-环丙基-1Η-咪挫-1-基)-5-(5-甲基六氨化咯并[3,4-c]化咯-2(1Η)-基)-N-(2- (4-( (S) -1，1，1氣丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 4- (4-环丙基-1Η-咪挫-1-基)-5-(3-氧代四氨-1Η-嗯挫并[3,4-a]化嗦-7(3Η)-基)-N- (2-( 4-( (S) -1，1，1氣丙-2-基)-4Η-1，2，4-Ξ 挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 5- (3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基）-4-(4-环丙基-lH-咪挫-1-基）-N-(2-(4-((S)-l，l， 1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(3-吗嘟代氮杂环下烧-1-基)-N-(2-(4-(l，1，1- Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基）-5-(4-环丙基赃嗦-1-基）-N-(2-(4-(l，1，1-Ξ氣 丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(4-(环丙基甲基）赃嗦-1-基)-N-(2-(4-(l，l，l- Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-N-(2-(4-(l， 1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； (S)-4-(4-环丙基-1H-咪挫-1-基)-5-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-N-(2-(4-(l， 1，1-Ξ氣丙-2-基)-4H-1，2，4-Ξ挫-3-基)嚷挫-4-基川比晚-2-甲酯胺； 或其药学上可接受的盐或立体异构体。14. 药物组合物，其包含选自权利要求1-13的化合物和至少一种药学上可接受的赋形 剂。15. 试剂盒，其包含权利要求14的药物组合物。16. 化合物在制备用于治疗人患者的疾病的药物中的用途，其包括给药治疗量的根据 权利要求1-13的化合物，其中所述疾病如自身免疫性疾病，炎性疾病，屯、血管疾病(包括糖 尿病、糖尿病肾病、和糖尿病的其他并发症），屯、肾疾病，包括肾病(包括慢性肾病），纤维变 性疾病（包括肺和肾纤维化），呼吸道疾病（包括COPD、特发性肺纤维化（IPF)和急性肺损 伤），急性和慢性肝病，和神经变性疾病。17. 权利要求16的用途，其中所述疾病为慢性肾病、肺纤维化或肾纤维化。18. 权利要求16的用途，还包含治疗有效量的一种或多种治疗剂。19. 根据权利要求1-13的化合物，其用于治疗。
【文档编号】C07D417/14GK105980382SQ201480069141
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2014年12月15日
【发明人】G.诺特
【申请人】吉利德科学公司