用于制备葡聚糖聚合物的葡糖基转移酶的制作方法【专利摘要】本文公开了组合物，其包含具有至少1000的重均聚合度(DPw)的聚α?1，3?1，6?葡聚糖。该葡聚糖聚合物包含至少30％α?1，3键和至少30％α?1，6键。也公开了合成聚α?1，3?1，6?葡聚糖的葡糖基转移酶。还公开了聚α?1，3?1，6?葡聚糖的醚衍生物以及使用此类衍生物作为粘度调节剂的方法。【专利说明】用于制备葡聚糖聚合物的葡糖基转移酶[00011本申请要求美国临时申请61/939,811(提交于2014年2月14日）的权益，其全文以引用方式并入本文。
技术领域：
[0002]本发明属于多糖及多糖衍生物领域。特别地，本发明涉及某些聚α-1，3_1，6-葡聚糖、合成这些葡聚糖的葡糖基转移酶、这些葡聚糖的醚以及这样的醚作为粘度调节剂的用途。【
背景技术：
】[0003]期望利用酶促合成或微生物的遗传工程来发现新结构多糖，研究人员已发现可生物降解并且可由可再生来源的原料经济地制备的多糖。一种这样的多糖是聚α-1，3_葡聚糖，一种以具有α-1，3-糖苷键为特征的葡聚糖聚合物。[0004]已通过使鹿糖的水性溶液与从唾液链球菌（Streptococcussalivarius)分离的葡糖基转移酶(gtf)接触分离到聚α-l，3-葡聚糖(Simpson等人，Microbiology141:1451-1460，1995)。美国专利7,000,000公开了使用唾液链球菌(3.8&1丨抑4118)8七打酶来制备多糖纤维。该纤维的聚合物中的至少50%己糖单元通过α-1，3_糖苷键连接。所公开的聚合物当将其以高于临界浓度溶解于溶剂或包含溶剂的混合物中时形成液晶溶液。由该溶液，纺制并使用高度适用于纺织物的连续的、结实的棉样纤维。[0005]鉴于新葡聚糖多糖及其衍生物在多种应用中的潜在实用性，它们的开发是期望的。还期望鉴定可合成新葡聚糖多糖，尤其是具有混合糖苷键和高分子量的那些的葡糖基转移酶。【
发明内容】[0006]在一个实施方案中，本发明涉及一种反应溶液，其包含水、蔗糖和合成聚α-1，3-1，6-葡聚糖的葡糖基转移酶。所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8或SEQIDNO:10至少90%相同的氨基酸序列。[0007]在第二实施方案中，（i)通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-1，3_1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，3键，（ii)通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键，并且（iii)通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6-葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。[0008]在第三实施方案中，通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-1，3-1，6-葡聚糖的至少60%糖苷键是α-l，6糖苷键。[0009]在第四实施方案中，通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-1，3-1，6-葡聚糖的DPwS至少10000。[0010]在第五实施方案中，所述葡糖基转移酶包含SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8或SEQIDNO:10的氨基酸序列。[0011]在第六实施方案中，本发明涉及一种用于制备聚α-1，3-1，6-葡聚糖的方法，该方法包括使至少水、蔗糖和合成聚α-l，3_1，6_葡聚糖的葡糖基转移酶接触的步骤。所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列。在该方法中制备的聚α-1，3_1，6-葡聚糖可任选地是分离的。[0012]在第七实施方案中，（i)在所述方法中通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-1，3_1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，3键，（ii)所述聚α-l，3-1，6_葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键，并且(iii)所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖具有至少1000的DPW。[0013]在第八实施方案中，在所述方法中通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-l，6-葡聚糖的至少60%糖苷键是α-l，6键。[0014]在第九实施方案中，在所述方法中通过所述葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6-葡聚糖的DPW为至少10000。[0015]序列简述[0016]表1.核酸和蛋白质序列号概述【具体实施方式】[0018]所引用的全部专利和非专利文献的公开内容全文以引用方式并入本文。[0019]如本文所用，术语"发明"或"所公开发明"并非旨在进行限制但一般性地适用于权利要求书中限定的或本文中所述的任何发明。这些术语在本文中可互换使用。[0020]本文中的术语"葡聚糖"是指D-葡萄糖单体通过糖苷键连接的多糖。[0021]术语"糖苷键(glycosidiclinkage)"和"糖苷键(glycosidicbond)"在本文中可互换使用并且是指将一个碳水化合物分子与另一个碳水化合物分子连接的共价键的类型。本文中使用的术语"α-1，3_糖苷键"是指将α-D-葡萄糖分子通过相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和3彼此连接的共价键的类型。本文中使用的术语"α-1，6_糖苷键"是指将α-D-葡萄糖分子通过相邻α-D-葡萄糖环上的碳1和6彼此连接的共价键的类型。在本文中，将"α-D-葡萄糖"称为"葡萄糖"。除非另外指出，否则本文中公开的所有糖苷键均是糖苷键。[0022]本文的聚a-l，3_l，6-葡聚糖的糖苷键分布可使用本领域中已知的任何方法来确定。例如，可使用利用核磁共振(NMR)光谱学(例如，13CNMR或1HNMR)的方法来确定键分布。可使用的这些以及其它方法在FoodCarbohydrates：Chemistry,PhysicalProperties，andApplications(S.W.Cui编辑，第3章，S.W.Cui，StructuralAnalysisofPolysaccharides，Taylor&FrancisGroupLLC，BocaRaton，FL，2005)中进行了公开，其以引用方式并入本文。[0023]术语"聚α_!，3_!，6_葡聚糖"、"聚α_!，3_!，6_葡聚糖聚合物"和"聚(α_!，3)(α-i，6)葡聚糖"在本文中可互换使用(注意:这些术语中键指示"1，3"和"1，6"的顺序不重要）。本文的聚a-l，3_l，6-葡聚糖是包含通过糖苷键连接在一起的葡萄糖单体单元的聚合物，其中至少约30%的糖苷键是€(-1，3-糖苷键，并且至少约30%的糖苷键是€[-1，6-糖苷键。聚€[-1，3-1，6_葡聚糖是一种类型的包含混合糖苷键成分的多糖。在某些实施方案中，术语聚a-1，3-1，6-葡聚糖的含义不包括"交替聚糖(&1丨從1^10"，其是包含连续地彼此交替的€[-1，3键和a-1，6键的葡聚糖（美国专利5702942、美国专利申请公开2006/0127328)。"连续地彼此交替"的a-1，3键和a-1，6键可直观地表示为例如...G-l，3-G-1，6-G-1，3-G-1，6-G-1，3-G-1，6-G-l，3-G'··，其中G表不匍甸糖。[0024]本文的聚a-l，3-l，6-葡聚糖例如可通过包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8或SEQIDNO:10至少90%相同的氨基酸序列的葡糖基转移酶产生。这样的产生可来自于本文的gtf反应。[0025]本文的术语"蔗糖"是指由通过a-1，2_糖苷键连接的a-D-葡萄糖分子和β-D-果糖分子构成的非还原性二糖。通常将鹿糖称为食糖(tablesugar)。[0026]本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖或聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物的"分子量"可表示为数均分子量(Μη)或重均分子量(Mw)。另选地，分子量可表示为道尔顿、克/摩尔、DPW(重均聚合度)或DPn(数均聚合度）。用于计算这些分子量量度的多种方式在本领域中是已知的，例如高压液相色谱(HPLC)、尺寸排阻色谱(SEC)或凝胶渗透色谱(GPC)。[0027]术语"葡糖基转移酶"、"gtf酶"、"gtf酶催化剂"、"gtf"和"葡聚糖蔗糖酶"在本文中可互换使用。本文的gtf酶的活性催化底物蔗糖反应产生产物聚α-1，3_1，6-葡聚糖和果糖。gtf反应的其它产物(副产物)可包括葡萄糖(其中葡萄糖由葡糖基-gtf酶中间体复合物水解而来）、多种可溶性寡糖和明串珠菌二糖(其中葡糖基-gtf酶中间体复合物的葡萄糖与果糖连接）。明串珠菌二糖是由通过α-l，5键连接的葡萄糖和果糖构成的二糖。葡糖基转移酶的野生型形式一般包含(在Ν末端至C末端方向上)信号肽、可变域、催化域和葡聚糖结合域。本文的gtf根据CAZy(Carbohydrate-ActiveEnZymes，碳水化合物活性酶)数据库而归类于糖苷水解酶家族70(GH70)之下（Cantarel等人，NucleicAcidsRes.37:D233-238，2009)〇[0028]术语"葡糖基转移酶催化域"和"催化域"在本文中可互换使用并且是指赋予葡糖基转移酶聚α-l，3_1，6_葡聚糖产生活性的葡糖基转移酶域。[0029]术语"gtf反应"和"酶促反应"在本文中可互换使用并且是指通过葡糖基转移酶进行的反应。本文中使用的"gtf反应溶液"一般性地指这样的溶液，其在含有蔗糖和水的溶液中包含至少一种活性葡糖基转移酶并且任选地包含其它组分。在gtf反应溶液中进行使水、蔗糖和葡糖基转移酶接触的步骤。本文中使用的术语"在合适的gtf反应条件下"是指支持鹿糖通过葡糖基转移酶活性转化为聚α-l，3_1，6_葡聚糖的gtf反应条件。本文的gtf反应不是天然存在的。[0030]术语"按体积计百分比"、"体积百分比"、"vol%"和"v/v%"在本文中可互换使用。溶剂中溶质的按体积计百分比可使用下式来确定：[(溶质的体积）八溶液的体积）]χ100%〇[0031]术语"按重量计百分比"、"重量百分比(wt%)"和"重量-重量百分比（％w/w)"在本文中可互换使用。按重量计百分比是指物质在其包含于组合物、混合物或溶液中时以质量计的百分比。[0032]术语"增加的"、"增强的"、和"提高的"在本文中可互换使用。这些术语是指更大的量或活性，例如大于原始量或活性的量或活性，或者与原始量或活性相比大大过量的量或活性，并且包括介于其之间的所有量或活性。另选地，这些术语可指例如这样的量或活性，其至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%大于正与增加的量或活性比较的量或活性。[0033]术语"多核苷酸"、"多核苷酸序列"和"核酸序列"在本文中可互换使用。这些术语涵盖核苷酸序列等。多核苷酸可以是RNA或DNA的聚合物，其可以是单链或双链的、任选地包含合成的、非天然的或经改变的核苷酸碱基。多核苷酸可由cDNA、基因组DNA、合成DNA或它们的混合物的一个或多个片段构成。[0034]本文中使用的术语"基因"是指表达蛋白质的多核苷酸序列，并且其可指单独的编码区或者可包含该编码区上游和/或下游的调控序列（例如，该编码区的转录起始位点上游的5'非翻译区）。"天然"或"内源"基因是指具有其自身调控序列的天然可见的基因；该基因以其天然位置位于生物体基因组中。"嵌合基因"是指不是天然基因的任何基因，其包含不同时天然可见的调控序列和编码序列。"外来"或"异源"基因是指通过基因转移到入到宿主生物体内的基因。外来基因可包括插入到非天然生物体内的天然基因、导入到天然宿主内的新位置的天然基因，或嵌合基因。本文公开的某些实施方案中的多核苷酸序列是异源的。"转基因"是已通过转化操作导入基因组中的基因。"经密码子优化的基因"是其密码子使用频率已设计成模拟特定宿主细胞之优选密码子使用的频率的基因。[0035]本文中使用的术语"重组的"或"异源的"是指例如通过化学合成或通过借助遗传工程技术操作分离的核酸片段的两个原本单独序列片段的人工组合。术语"重组的"、"转基因的"、"经转化的"、"工程化的"或"改造成用于外源基因表达的"在本文中可互换使用。[0036]本文中使用的术语"转化"指将核酸分子转移到宿主生物体内。核酸分子可以是自主复制的质粒，或者它可以整合到宿主生物体的基因组中。包含转化核酸片段的宿主生物体是"转基因的"、"重组的"或"经转化的"，并且可称为"转化体"。[0037]天然氨基酸序列或多核苷酸序列是天然存在的，而非天然氨基酸序列或核苷酸序列在自然界中不存在。[0038]本文中使用的"编码序列"是指编码特定氨基酸序列的DNA序列。本文中使用的"调控序列"是指位于编码序列的转录起始位点上游的核苷酸序列，即5'非翻译区和3'非编码区，并且其可影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性，或者翻译。调控序列可包括启动子、增强子、沉默子、5'非翻译前导序列、内含子、多腺苷酸化识别序列、RNA加工位点、效应子结合位点、茎-环结构以及参与基因表达调控的其它元件。[0039]本文中关于多核苷酸或多肽序列使用的术语"序列同一性"或"同一性"是指当在指定比较窗内比对最大对应性时两条序列中相同的核酸碱基或氨基酸残基。因此，"序列同一性百分比"或"同一性百分比"指通过在比较窗内比较两个最佳比对序列来确定的值，其中与参照序列(其不包含添加或缺失)相比，比较窗中多核苷酸或多肽序列的一部分可包含添加或缺失（即，空位）以实现两条序列的最佳比对。如下计算所述百分比：确定在两条序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数目以得到匹配的位置的数目，将匹配的位置的数目除以比较窗中的总位置数目，并将结果乘以1〇〇以得到序列同一性百分比。[0040]可使用可在NationalCenterforBiotechnologyInformation(NCBI)网站在线可用的基本局部比对检索工具(BLAST)算法例如来测量本文中公开的两条或更多条多核苷酸序列（BLASTN算法）或多肽序列（BLASTP算法）之间的百分比同一性。另选地，可使用Clustal算法（例如，ClustalW或ClustalV)来实现序列之间的百分比同一"性。对于使用Clustal比对方法的多重比对，默认值可对应于GAPPENALTY=10和GAPLENGTHPENALTY=10。用Clustal方法进行逐对比对和计算蛋白质序列的百分比同一性的默认参数可以是KTUPLE=1、GAPPENALTY=3、WIND0W=5和DIAGONALSSAVED=5。对于核酸，这些参数可以是KTUPLE=2、GAPPENALTY=5、WIND0W=4和DIAGONALSSAVED=4。仍另选地，可利用EMBOSS算法(例如，needle)使用BL0SUM矩阵(例如BL0SUM62)用以下参数来实现序列之间的百分比同一性：例如GAP0PEN=10、GAPEXTEND=0.5、ENDGAPPENALTY=错误、ENDGAP0PEN=10、ENDGAPEXTEND=0.5。[0041]本文中公开了多种多肽氨基酸序列和多核苷酸序列作为某些实施方案的特征。可使用与本文所公开序列至少约70-85%、85-90%或90%-95%相同的这些序列的变体。另选地，变体氨基酸序列或多核苷酸序列可与本文所公开的序列具有至少70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。变体氨基酸序列或多核苷酸序列可具有所公开序列的相同功能/活性，或者具有所公开序列的至少约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%功能/活性。[0042]在某些实施方案中使用的术语"分离的"是指已从其天然来源完全或部分纯化的任何细胞组分(例如，分离的多核苷酸或多肽分子）。在一些情况下，分离的多核苷酸或多肽分子是较大组合物、缓冲体系或试剂混合物的一部分。例如，分离的多核苷酸或多肽分子可以以异源方式包含在细胞或生物体内。另一示例是分离的葡糖基转移酶。[0043]术语"聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物"、"聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚"和"聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚衍生物"在本文中可互换使用。本文的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物是已醚化有一个或多个有机基团的聚α-1，3-1，6-葡聚糖，使得该化合物具有约0.05至约3.0的有机基团取代度(DoS)。这样的醚化发生在聚α-1，3-1，6-葡聚糖的至少30%葡萄糖单体单元的一个或多个羟基处。[0044]聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物由于含有亚结构CcOC而在本文中称为"醚"，其中"Cc"表示聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物的葡萄糖单体单元的碳原子(其中这样的碳原子与该醚的聚α-1，3_1，6-葡聚糖前体中的羟基[0Η]键合），并且其中"C"表示有机基团的碳原子。因此，例如，关于参与本文醚中的-1，3-G-1，3-的葡萄糖单体单元(G)，葡萄糖(G)的Cc原子2、4和/或6可独立地与0Η基团连接，或者与有机基团醚连接。类似地，例如，关于参与本文醚中的-1，3-G-1，6-的葡萄糖单体单元(G)，葡萄糖(G)的CG原子2、4和/或6可独立地与0Η基团连接，或者与有机基团醚连接。此外，例如，关于参与本文醚中的-1，6-G-1，6-的葡萄糖单体单元(G)，葡萄糖(G)的CG原子2、3和/或4可独立地与0H基团连接，或者与有机基团醚连接。类似地，例如，关于参与本文醚中的-1，6-G-1，3-的葡萄糖单体单元(G)，葡萄糖(G)的Cc原子2、3和/或4可独立地与0Η基团连接，或者与有机基团醚连接。[0045]应理解，本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物的"葡萄糖"单体单元通常具有一个或多个醚连接的有机基团。因此，还可将这样的葡萄糖单体单元称为醚化葡萄糖单体单元。[0046]本文公开的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物是合成的人造化合物。同样地，包含聚α-1，3-1，6-葡聚糖(例如，分离的聚α-1，3-1，6-葡聚糖）的组合物是合成的人造化合物。[0047]本文中使用的"有机基团"是指一个或跟更多个碳的链，其（i)具有式_CnH2n+1(即，完全饱和的烷基）或者（ii)大部分是饱和的但是一个或多个氢被另一原子或官能团取代(即，"被取代的烷基"）。这样的取代可以是一个或多个羟基、氧原子（从而形成醛或酮基团）、羧基或其它烷基。因此，作为示例，本文的有机基团可以是烷基、羧基烷基或羟基烷基。[0048]本文的"羧基烷基"基团是指其中烷基的一个或多个氢原子被羧基取代的被取代烷基。本文的"羟基烷基"基团是指其中烷基的一个或多个氢原子被羟基取代的被取代烷基。[0049]本文的"卤化物"是指包含一个或多个卤素原子(例如，氟、氯、溴、碘)的化合物。本文的卤化物可指包含一个或多个卤离子基团（例如，氟、氯、溴或碘）的化合物。卤离子基团可充当醚化剂的反应基团。[0050]术语"反应"、"反应组合物"和"醚化反应"在本文中可互换使用并且是指至少包含聚α-1，3-1，6_葡聚糖和醚化剂的反应。通常将这些组分混合(例如，得到浆料)和/或溶解于含有碱金属类氢氧化物的溶剂(有机溶剂和/或水性溶剂）中。将反应放置在适于醚化剂用有机基团醚化聚α-1，3-1，6_葡聚糖的葡萄糖单元的一个或多个羟基的条件(例如，时间、温度)下，从而产生聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物。[0051]本文的术语"碱性条件"是指pH为至少11或12的溶液或混合物。碱性条件可通过本领域中已知的任何方式，例如通过将碱金属类氢氧化物溶解于溶液或混合物中来制备。[0052]术语"醚化剂"和"烷基化剂"在本文中可互换使用。本文的醚化剂是指可用于用有机基团醚化聚α-1，3-1，6_葡聚糖的葡萄糖单元的一个或多个羟基的试剂。因此，醚化剂含有有机基团。[0053]本文的术语"聚α-1，3_1，6-葡聚糖浆料"是指包含葡糖基转移酶酶促反应的诸如以下组分的水性混合物:例如聚α-l，3-1，6-葡聚糖、蔗糖、一种或多种葡糖基转移酶、葡萄糖和果糖。[0054]本文的术语"聚α-1，3_1，6-葡聚糖湿滤饼"是指已与浆料分离并用水或水性溶液洗涤的聚α-l，3-1，6-葡聚糖。在制备湿滤饼时，不干燥聚α-l，3-1，6-葡聚糖。[0055]本文中使用的术语"取代度"（DoS)是指聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物的每个单体单元(葡萄糖）中被取代的羟基的平均数。由于本文的聚α-l，3_1，6_葡聚糖(据信其是直链或支链的）的葡萄糖单体单元中最多具有三个羟基，因此本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物的取代度可不高于3。[0056]本文中使用的术语"摩尔取代度"（M.S.)是指聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物中每个单体单元的有机基团的摩尔数。另选地，M.S.可指用于与聚α-l，3-1，6_葡聚糖中的单体单元反应的醚化剂的平均摩尔数（因此M.S.可描述用醚化剂衍生化的程度）。需注意，聚〇_1，3-1，6-葡聚糖的M.S.值可不具有上限。例如，当已将含有羟基的有机基团（例如，羟乙基或羟丙基)醚化至聚α-l，3-1，6_葡聚糖时，有机基团的羟基可经历进一步的反应，从而使更多的有机基团与聚α-l，3-1，6-葡聚糖偶联。[0057]本文的术语"交联"是指在一个或多个聚合物分子中使两个邻近原子连接的化学键、原子或原子基团。应当理解，在包含交联聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚的组合物中，交联可发生在至少两个聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚分子之间（即，分子间交联）；还可存在分子内交联。本文中使用的"交联剂"是可产生交联的原子或化合物。[0058]术语"水性胶体"和"水凝胶"在本文中可互换使用。水性胶体是指其中水是分散介质的胶体系统。本文的"胶体"是指在下显微镜下分散于整个另一物质的物质。因此，本文的水性胶体还可指聚α-l，3-1，6-葡聚糖和/或一种或多种聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物在水或水性溶液中的分散体、混合物或溶液。[0059]本文的术语"水性溶液"是指其中溶剂是水的溶液。本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖和/或一种或多种聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物可分散、混合和/或溶解于水性溶液中。水性溶液可充当本文的水性胶体的分散介质。[0060]本文中使用的术语"粘度"是指流体或水性组合物(例如水性胶体)抵抗趋于促使其流动之力的程度的量度。本文中可使用的多种粘度单位包括厘泊（cPs)和帕斯卡-秒(Pa·s)。厘泊是泊的百分之一;一泊等于0.100kg·nf1·s'因此，本文中使用的术语"粘度调节剂"和"粘度改性剂"是指可改变/调节流体或水性组合物的粘度的任何物质。[0061]本文中使用的术语"剪切致稀性能"是指水性胶体或水性溶液的粘度随剪切速率增加而减小。本文中使用的术语"剪切增稠性能"是指水性胶体或水性溶液的粘度随剪切速率增加而增大。本文的"剪切速率"是指将向水性胶体或水性溶液施加渐进式剪切变形时的速率。剪切变形可旋转地施加。[0062]本文中关于增加水性组合物粘度的方法使用的术语"接触"是指导致使水性组合物和聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物在一起的任何行为。例如，接触可通过本领域中已知的任何方式来进行，例如溶解、混合、摇动或均化。[0063]所公开发明的一些实施方案涉及一种反应溶液，其包含水、蔗糖和合成聚α-l，3_1，6_葡聚糖的葡糖基转移酶。所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列。显著地，这些酶可合成能够衍生成粘度调节质量提尚的酿的聚0-]^，3_1，6_匍聚糖。[0064]关于在本文的反应溶液中产生的聚α-l，3-1，6-葡聚糖：[0065](丨)所述聚€1-1，3-1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是€[-1，3键，[0066](ii)所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键，并且[0067](iii)所述聚α-1，3_1，6-葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。[0068]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-1，3_1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，3键，并且至少30%糖苷键是α-l，6键。另选地，α-l，3键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%或64%。仍另选地，〇-1，6键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%〇[0069]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-1，3_1，6-葡聚糖可具有前述任一个α-1，3键百分比和前述任一个α_1，6键百分比，只要百分比的总和不大于100%即可。例如，所述聚^1，3-1，6-葡聚糖可具有（1)30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%或40%(30%-40%)€[-1，3键中的任一个，和（^)60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%(60%-69%)0-1，6键中的任一个，只要百分比的总和不大于100%即可。非限制性示例包括具有31%α-1，3键和67%α-1，6键的聚α-l，3_1，6_葡聚糖。α-l，3键和α-1，6键分布的其它示例提供于表2中。在某些实施方案中，在本文的gtf反应溶液中产生的聚α-l，3_1，6_葡聚糖的至少60%糖苷键是α-l，6键。[0070]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可具有例如少于10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的除α-l，3和α-l，6之外的糖苷键。在另一个实施方案中，聚α-l，3_1，6_葡聚糖仅具有α-l，3键和α-l，6键。[0071]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6_葡聚糖的骨架可以是直链/非支链的。另选地，聚α_1，3-1，6_匍聚糖中可存在分支。因此，在某些实施方案中，聚α-l，3-1，6_匍聚糖可不具有分支点或者具有少于约30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%分支点作为该聚合物中糖苷键的一定百分比。[0072]在所公开发明的某些实施方案中，葡糖基转移酶可合成包含不连续地彼此交替的α_1，3键和α-l，6键的聚α-l，3-1，6-甸聚糖。对于下述讨论，认为...6-1，3-6-1，6-〇-1，3-6_1，6-G-1，3-G_...(其中G表示葡萄糖)表示六个葡萄糖单体单元通过连续地交替α-1，3键和α-l，6键而连接的延伸段。另选地，通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6-葡聚糖可包含例如少于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连续地用交替€(-1，3键和€[-1，6键连接的葡萄糖单体单元。[0073]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-l，3-1，6_葡聚糖的分子量可作为DPW(重均聚合度)或DPn(数均聚合度)来测量。另选地，可以以道尔顿或克/摩尔来测量分子量。提及聚α-1，3_1，6-葡聚糖的数均分子量(Mn)或重均分子量(Mw)也是可用的。[0074]通过本文的葡糖基转移酶合成的聚α-1，3-1，6_葡聚糖具有至少约1000的DPW。例如，所述聚α-1，3-1，6-葡聚糖的DPW可为至少约10000。另选地，所述DPW可为至少约1000至约15000。仍另选地，所述DPwSJ为例如至少约1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000或15000(或介于1000和15000之间的任意整数）。鉴于本文的聚α-1，3_1，6-葡聚糖具有至少约1000的DPW，这样的葡聚糖聚合物通常但不一定是水不溶性的。[0075]在所公开gtf反应溶液的某些实施方案中，聚α-1，3_1，6-葡聚糖可具有例如至少约50000、100000、200000、300000、400000、500000、600000、700000、800000、900000、1000000、1100000、1200000、1300000、1400000、1500000或1600000(或介于50000和1600000之间的任意整数)的Mw。[0076]本文的葡糖基转移酶可从任何微生物来源(例如细菌或真菌)获得。细菌葡糖基转移酶的示例是来源于链球菌属(Streptococcus)菌种、明串珠菌属(Leuconostoc)菌种或乳杆菌属（Lactobacillus)菌种的那些。链球菌属菌种的示例包括唾液链球菌(S.salivarius)、远缘链球菌(S.sobrinus)、離齿链球菌(S.dentirousetti)、汗毛链球菌(S.downei)、变异链球菌（S.mutans)、口腔链球菌（S.oralis)、解没食子酸链球菌(S.gallolyticus)和血链球菌(S.sanguinis)。明串珠菌属菌种的示例包括肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)、L·amelibiosum、阿根廷明串珠菌（L·argentinum)、肉色明串珠菌(L.carnosum)、梓檬明串珠菌(L.citreum)、乳脂明串珠菌(L.cremoris)、葡萄聚糖明串珠菌(L.dextranicum)和果糖明串珠菌(L.fructosum)。乳杆菌属菌种的示例包括嗜酸乳杆菌(1^.8(^(1(^]1；[1118)、德氏乳杆菌(1^.(161131'11601<：；[；0、瑞士乳杆菌(1^.]161￥61：；[(3118)、唾液乳杆菌(L.salivarius)、干酪乳酸杆菌（L.casei)、弯曲乳杆菌（L.curvatus)、胚芽乳杆菌(L.plantarum)、清酒乳杆菌(L.sakei)、短乳杆菌(L.brevis)、布氏乳杆菌(L.buchneri)、发酵乳杆菌(L.fermentum)和罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)0[0077]本文的葡糖基转移酶可包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列，或者由其组成，其中所述葡糖基转移酶具有活性。另选地，葡糖基转移酶可包含与SEQIDN0:4、SEQIDN0:20、SEQIDN0:28或SEQIDN0:30至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的氨基酸序列，或者由其组成，其中所述葡糖基转移酶具有活性。仍另选地，葡糖基转移酶可包含SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10，或者由其组成。[0078]鉴于某些氨基酸彼此共有类似的结构和/或电荷特征（即，保守的），可如下用保守的氨基酸残基来取代所公开gtf酶序列的一个或多个氨基酸（"保守氨基酸取代"：[0079]1.下列小脂族非极性或轻微极性残基可相互取代:Ala(A)、Ser(S)、Thr(T)、Pro(P)、Gly(G);[0080]2.下列极性带负电荷残基及其酰胺可相互取代:Asp(D)、Asn(N)、GlU(E)、Gln(Q);[0081]3.下列极性带正电荷残基可相互取代:His(H)、Arg(R)、Lys(K);[0082]4.下列脂族非极性残基可相互取代:Ala(A)、Leu(L)、Ile(I)、Val(V)、Cys(C)、Met(M);以及[0083]5·下列大脂族残基可相互取代:Phe(F)、Tyr(Y)、Trp(W)。[0084]用于gtf反应溶液中的葡糖基转移酶的示例可以是本文所公开的任意氨基酸序列，并且还可在N末端和/或C末端包含1至300(或介于其之间的任意整数)个残基。例如，这样的另外残基可来自葡糖基转移酶所来源于的对应野生型序列，或者可以是其它序列，例如表位标签(在N末端或C末端)或异源信号肽(在N末端）。[0085]本文的葡糖基转移酶的氨基酸序列可由例如SEQIDN0:1、SEQIDN0:3、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7或SEQIDN0:9中提供的多核苷酸序列编码。另选地，这样的氨基酸序列可由与SEQIDN0:1、SEQIDN0:3、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7或SEQIDN0:9至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多核苷酸序列编码。[0086]可使用一种或多种不同的葡糖基转移酶来实施所公开的发明。例如，所述葡糖基转移酶不具有或者具有非常低(低于1%)的交替鹿糖酶(alternansucrase)活性。[0087]本文的葡糖基转移酶可以是引发剂独立性的或引发剂依赖性的。引发剂独立性葡糖基转移酶进行葡聚糖合成不需要引发剂的存在。引发剂依赖性葡糖基转移酶需要在反应溶液中存在在葡聚糖聚合物合成期间充当酶引发剂的引发分子。本文中使用的术语"引发剂"是指能够可用作葡糖基转移酶的引发物的任何分子。例如，寡糖和多糖可起引发剂的作用。例如，可用于某些实施方案的引发剂包括右旋糖酐以及其它基于碳水化合物的引发剂，例如水解葡聚糖。美国专利申请公开2013/0244287(其以引用方式并入本文)公开了使用聚α-l，3-葡聚糖作为起始材料来制备水解葡聚糖。用作引发剂的右旋糖酐可以是例如右旋糖酐Τ10(即，具有10kD的分子量的右旋糖酐）。另选地，右旋糖酐引发剂可具有例如约2、4、6、8、10、12、14、16、18、20或251^)的分子量。[0088]所公开发明的葡糖基转移酶可通过本领域中已知的任何方式来产生。例如，所述葡糖基转移酶可在异源表达系统(例如微生物异源表达系统）中重组产生。异源表达系统的示例包括细菌(例如，大肠杆菌，例如T0P10或MG1655;芽孢杆菌属)和真核生物(例如，酵母，例如毕赤酵母属(Pichiasp.)和酵母属(Saccharomycessp.)表达系统。[0089]本文所述的葡糖基转移酶可以以任意纯化状态(例如，纯或非纯)使用。例如，可在使用之前纯化和/或分离葡糖基转移酶。非纯葡糖基转移酶的示例包括细胞裂解物形式的那些。细胞裂解物或提取物可由用于异源表达该酶的细菌(例如，大肠杆菌）制备。例如，可使用French压碎器对细菌进行破裂。在一些另选实施方案中，可用均化器（例如，APV，Rannie，Gaulin)均化细菌。葡糖基转移酶通常在这些类型的制备物中通常是可溶解的。本文的细菌细胞裂解物、提取物或均浆可以以约0.15-0.3%(v/v)用于由蔗糖制备聚α-1，3_1，6-葡聚糖的反应溶液中。[0090]在某些实施方案中，异源基因表达系统可以是设计成用于蛋白质分泌的异源基因表达系统。在这样的实施方案中，所述葡糖基转移酶包含信号肽(信号序列）。所述信号肽可以是其天然信号肽或异源信号肽。[0091]本文的葡糖基转移酶的活性可使用本领域中已知的任何方法来确定。例如，可通过测量包含蔗糖（约50g/L)、右旋糖酐Τ10(约lmg/mL)和磷酸钾缓冲液(约pH6.5,50mM)的反应溶液中还原糖(例如，果糖和葡萄糖）的产生来确定葡糖基转移酶活性，其中将该溶液在约22-25°C下保持约24-30小时。还原糖可如下测量：向包含约INNaOH和约0.1%氯化三苯基四唑的混合物添加0.0lmL反应溶液，然后监测OD480?处吸光度的增加，持续5分钟。[0092]如有需要，可对本文的gtf反应溶液的温度加以控制。在某些实施方案中，所述温度为约5°C至约50°C。在某些其它实施方案中，所述温度为约20°C至约40°C。另选地，所述温度可为约20-(：、2Γ(：、22Γ、23Γ、24Γ、25Γ、26Γ、27Γ、28Γ、2%~、3(Τ(：、3Γ(：、32Γ、33。(：、34。(：、35。(：、36。(：、37。(：、38。(：、39。(：或40。(：。[0093]可使用本领域中已知的多种方式来维持本文的gtf反应溶液的温度。例如，可通过将容纳反应溶液的容器放置于设定在期望温度的空气或水浴培养箱中来维持温度。[0094]本文的gtf反应溶液中蔗糖的初始浓度可为例如约20g//L至约400g/L。另选地，蔗糖的初始浓度可为约75g/L至约175g/L，或约50g//L至约150g/L。仍另选地，蔗糖的初始浓度可为例如约40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150或16(^/1(或介于40和1608/1之间的任意整数）。"蔗糖的初始浓度"是指紧接已添加所有反应溶液组分(水、蔗糖、gtf酶）之后gtf反应溶液中的蔗糖浓度。[0095]任何等级的蔗糖都可用于本文所公开的反应溶液中。例如，蔗糖可以是高度纯的(多99.5%)、具有至少99.0%的纯度或者可以是试剂级蔗糖。用于本文中的蔗糖可来源于任何可再生糖源，例如甘蔗、糖用甜菜、木薯、甜高粱或谷物。蔗糖可以以任何形式例如结晶形式或非结晶形式(例如，糖浆或蔗汁)提供。[0096]在某些实施方案中，gtf反应溶液的pH可为约4.0至约8.0。另选地，所述pH可为约4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5或8.0。可以通过添加或掺入合适的缓冲液来调节或控制PH，所述缓冲液包括但不限于磷酸盐、tris、柠檬酸盐或它们的组合。gtf反应溶液中的缓冲液浓度可为例如OmM至约100mM，或者约10、20或50mM。[0097]所公开的发明还涉及用于制备聚α-1，3_1，6-葡聚糖的方法，该方法包括使至少水、蔗糖和合成聚α-l，3_1，6_葡聚糖的葡糖基转移酶接触的步骤。所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列。聚α-l，3-1，6-葡聚糖在接触步骤中产生。该聚α-l，3-1，6-葡聚糖可任选地是分离的。[0098]本文方法中产生聚α-l，3-1，6-葡聚糖的接触步骤可包括提供包含水、蔗糖和本文所公开的任意葡糖基转移酶的gtf反应溶液。应理解，随着葡糖基转移酶合成聚α-l，3-1，6_葡聚糖，反应溶液通常变成反应混合物，因为反应变浑浊指示不溶性聚α-l，3-1，6-葡聚糖从溶液中析出。所公开方法的接触步骤可以以任意数量的方式来进行。例如，可首先将期望量的蔗糖溶解于水(任选地，还可在该制备阶段添加其它组分）中，之后添加葡糖基转移酶。例如，可使溶液保持静止，或者通过搅拌或轨道摇动进行搅动。所述反应可以是并且通常是不含细胞的。[0099]在某些实施方案中，gtf反应的完成可在视觉上（例如，沉淀聚α-l，3-1，6_葡聚糖不再聚集)和/或通过测量溶液中剩余的蔗糖的量来确定，其中超过约90%的百分比蔗糖消耗可指示反应完成。通常来说，所公开方法的反应的完成可花费约12、18、24、30、36、48、60、72、84或96小时。反应时间可取决于例如某些参数，例如反应中使用的蔗糖和葡糖基转移酶的量。[0100]基于反应溶液中使用的蔗糖的重量，在本文某些实施方案中的gtf反应中产生的聚α-l，3-1，6_葡聚糖的收率可为至少约4%、5%、6%、7%或8%。[0101]在所公开方法中制备的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可任选地是分离的。例如，可通过离心或过滤来分离不溶性聚α-l，3-1，6-葡聚糖。这样，使聚α-l，3-1，6-葡聚糖与反应溶液的其余部分分离，所述其余部分可包含水、果糖和某些副产物(例如，明串珠菌二糖、可溶性寡糖）。该溶液还可包含葡萄糖单体和残余的蔗糖。[0102]在本文gtf反应中产生的聚α-1，3-1，6-葡聚糖的键分布和/或分子量可为上文所公开那些中的任一种。例如，（i)至少30%糖苷键是α-1，3键，（ii)至少30%糖苷键是α-1，6键，并且（iii)聚α-1，3-1，6-葡聚糖具有至少1000的DPW。在gtf反应中产生的聚α-1，3-1，6-葡聚糖可具有至少60%α-l，6键和/或具有至少约10000的DPW。[0103]所公开发明的一些实施方案涉及包含聚α-1，3_1，6-葡聚糖的组合物，其中：[0104](丨)所述聚€1-1，3-1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是€[-1，3键，[0105](ii)所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键，[0106](iii)所述聚α-l，3-1，6_葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW);并且[0107](iv)所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替。[0108]显著地，本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可衍生成粘度调节质量提高的醚。[0109]本文所公开的聚α-l，3_1，6_葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，3键并且所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键。另选地，本文的聚α-l，3-1，6-葡聚糖中α-l，3键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%或64%。仍另选地，本文的聚〇-1，3-1，6-葡聚糖中α-l，6键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%。[0110]本发明的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可具有前述任一个α-l，3键百分比和前述任一个α-1，6键百分比，只要百分比的总和不大于100%即可。例如，本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可具有（1)30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%或40%(30%-40%)〇-1，3键中的任一个，和（ii)60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%(60%-69%)α-l，6键中的任一个，只要百分比的总和不大于100%即可。非限制性示例包括具有31%α-1，3键和67%α-1，6键的聚α-l，3_1，6_葡聚糖。α-l，3键和α-l，6键分布的其它示例提供于表2中。在某些实施方案中，所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖的至少60%糖苷键是α-l，6键。[0111]本发明的聚α-1，3_1，6-葡聚糖可具有例如少于10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的除α-l，3和α-l，6之外的糖苷键。在另一个实施方案中，聚α-l，3_1，6_葡聚糖只具有α-l，3键和α-l，6键。[0112]本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖的骨架可以是直链的/非支链的。另选地，聚α-l，3-1，6_葡聚糖中可存在分支。因此，在某些实施方案中，聚α-l，3-1，6_葡聚糖可不具有分支点或者具有少于约30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%分支点作为该聚合物中糖苷键的一定百分比。[0113]所公开组合物中的聚α-l，3-1，6-葡聚糖的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替。对于下述讨论，认为···G-1，3-G-l，6?，3?，6?，3-G-···(其中G表不匍甸糖)表不六个葡萄糖单体单元通过连续地交替α-l，3键和α-l，6键而连接的延伸段。在本文的某些实施方案中，聚a-l，3-l，6-葡聚糖可包含少于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连续地用交替α-l，3键和α-l，6键连接的葡萄糖单体单元。[0114]本文公开的聚α-1，3-1，6-葡聚糖的分子量可作为DPW(重均聚合度)或DPn(数均聚合度)来测量。另选地，可以以道尔顿或克/摩尔来测量分子量。提及聚α-1，3_1，6-葡聚糖的数均分子量(Μη)或重均分子量(Mw)也是可用的。[0115]本文的聚α-l，3_1，6_葡聚糖具有至少约1000的DPW。例如，所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖的DPW可为至少约10000。另选地，所述DPW可为至少约1000至约15000。仍另选地，所述DPW可为例如至少约1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000或15000(或介于1000和15000之间的任意整数）。鉴于本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖具有至少约1000的DPw，这样的葡聚糖聚合物通常但不一定是水不溶性的。[0116]本文的聚α-1，3_1，6-葡聚糖可具有例如至少约50000、100000、200000、300000、400000、500000、600000、700000、800000、900000、1000000、1100000、1200000、1300000、1400000、1500000或1600000(或介于50000和1600000之间的任意整数）的]^。在某些实施方案中，所述^为至少约1000000。[0117]本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖可包含例如至少6个葡萄糖单体单元。另选地，葡萄糖单体单元的数目可为例如至少约10、50、100、500、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、〇或9000(或介于10和9000之间的任意整数）。[0118]本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖可例如使用包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列的葡糖基转移酶来产生。另选地，所述葡糖基转移酶可包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同或者100%相同的氨基酸序列。所公开发明的聚α-l，3-l，6-葡聚糖的产生可用例如本文公开的gtf反应来实现。[0119]本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖例如在干燥时可以以粉末的形式提供或者在湿润时可以以糊剂、胶体或其它分散体的形式提供。在某些实施方案中，包含聚α-l，3-1，6-葡聚糖的组合物是其中组成聚α-l，3_1，6_葡聚糖用作增稠剂的组合物。据信，本文的聚α-l，3_1，6-葡聚糖适合作为增稠剂，增稠剂是吸收液体(例如水)并且在这样的吸收之后溶胀的物质。聚α-l，3_1，6_葡聚糖在液体中的溶胀可产生例如浆料或胶体。[0120]包含聚α-l，3-1，6_葡聚糖的组合物可以是以下形式:个体护理产品、药物产品、食物产品、家用产品或工业产品，例如下文所公开之用于应用聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚衍生物的那些产品中的任一种。所述组合物中聚α-1，3_1，6-葡聚糖的量可为例如约0.1-10wt%、0·l_5wt%、0·l_4wt%、0·l_3wt%、0·l_2wt%或0·l_lwt%，或者向所述组合物提供期望增稠程度的量。[0121]所公开发明的一些实施方案涉及包含聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的组合物，其中：[0122](i)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-l，3键，[0123](ii)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-l，6键，[0124](iii)所述聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物具有至少1000的重均聚合度(DPW);[0125](iv)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替，并且[0126](v)所述聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物具有约0.05至约3.0的有机基团取代度(DoS)〇[0127]显著地，本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物具有提高的粘度调节质量，例如在低浓度下增粘水性组合物的能力。此外，本文的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可具有相对低的DoS但仍然是有效的粘度调节剂。[0128]本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-1，3键并且所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-l，6键。另选地，本文的聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物中α-1，3键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%或64%。仍另选地，本文的聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物中α-l，6键的百分比可为至少31%、32%、33%、34%、35%、36%,37%,38%,39%Α0%Α1%Α2%Α3%Α4：%Α5%Α6%Α7%Α8%Α9%,50%,51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%。[0129]本发明的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物可具有前述任一个α-1，3键百分比和前述任一个α-1，6键百分比，只要百分比的总和不大于100%即可。例如，所述聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可具有（〇30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%或40%(30%-40%)€[-1，3键中的任一个，和（^)60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%或69%(60%-69%)α-1，6键中的任一个，只要百分比的总和不大于100%即可。非限制性示例包括具有31%α-1，3键和67%α-1，6键的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物。本文的某些聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物的α-l，3键和α-l，6键分布的其它示例提供于表2中，表2公开了可用于制备所公开醚的分离聚α-l，3_1，6_葡聚糖的键分布。在某些实施方案中，所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少60%糖苷键是α-l，6键。[0130]本发明的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可具有例如少于10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的除α-l，3和α-l，6之外的糖苷键。在另一个实施方案中，聚α-l，3_1，6-葡聚糖醚化合物仅具有α-l，3键和α-l，6键。[0131]本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物的骨架可以是直链的/非支链的。另选地，所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物中可存在分支。因此，在某些实施方案中，聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物可不具有分支点或者具有少于约30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%分支点作为该聚合物中糖苷键的一定百分比。[0132]本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替。对于下述讨论，认为…·G-1，3-G-l，6-G-l，3-G-l，6?，3-G-···(其中G表不酿化匍甸糖)表示六个葡萄糖单体单元通过连续地交替α-l，3键和α-l，6键而连接的延伸段。在本文的某些实施方案中，聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物可包含少于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连续地用交替α-l，3键和α-l，6键连接的葡萄糖单体单元。[0133]本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物的分子量可作为DPW(重均聚合度)或DPn(数均聚合度)来测量。另选地，可以以道尔顿或克/摩尔来测量分子量。提及聚α-l，3-l，6-葡聚糖醚化合物的数均分子量(Mn)或重均分子量(Mw)也是可用的。[0134]本文的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物具有至少约1000的DPW。例如，所述聚α-l，3_1，6-葡聚糖醚化合物的DPW可为至少约10000。另选地，所述DPW可为至少约1000至约15000。仍另选地，所述DPwSJ为例如至少约1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000或15000(或介于1000和15000之间的任意整数）。[0135]本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物可具有例如至少约50000、100000、200000、300000、400000、500000、600000、700000、800000、900000、1000000、1100000、1200000、1300000、1400000、1500000或1600000(或介于50000和1600000之间的任意整数）的]^。在某些实施方案中，所述Mw为至少约1000000。[0136]本文的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可包含至少6个葡萄糖单体单元(这些单元中的大多数通常含有醚连接的有机基团）。另选地，葡萄糖单体单元的数目可为例如至少约10、50、100、500、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、〇或9000(或介于10和9000之间的任意整数）。[0137]本发明的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物具有约0.05至约3.0的有机基团取代度(DoS)。在某些实施方案中，聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物的DoS可为约0.3至1.0。所述DoS可另选地为至少约0·1、0·2、0·3、0·4、0·5、0·6、0·7、0·8、0·9、1·0、1·1、1·2、1·3、1·4、1·5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.喊3.0〇[0138]本文的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物中与有机基团醚连接之葡萄糖单体单元(即，其中葡萄糖单体单元的一个或多个羟基已用有机基团醚化)的百分比可根据聚α-1，3_1，6-葡聚糖在醚化反应中与有机基团醚化的程度而不同。该百分比可为例如至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%(或介于30%和100%之间的任意整数值）。[0139]应理解，基于与醚化合物之葡萄糖单体单元相关的糖苷键(例如，-1，6-G_1，3-)，该葡萄糖单体单元的某些碳原子可独立地与0H基团连接，或者与有机基团醚连接。[0140]本文的有机基团可以是例如烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基或癸基。[0141]另选地，有机基团可以是其中烷基的一个或多个碳上具有取代的被取代烷基。所述取代可以是一个或多个羟基、醛、酮和/或羧基基团。例如，被取代的烷基可以是羟基烷基、二羟基烷基或羧基烷基。[0142]合适羟基烷基的示例是羟甲基（CH20H)、羟乙基（例如，-CH2CH2OH、CH(OH)CH3)、羟丙基（例如，〇120120120!1、-〇1201(0!〇013、01(0!〇012013)、羟丁基和羟戊基。其它示例包括二羟基烷基(二醇），例如二羟基甲基、二羟基乙基(例如，-CH(OH)CH20H)、二羟基丙基（例如，CH2CH(OH)CH20H、-CH(OH)CH(OH)CH3)、二羟基丁基和二羟基戊基。[0143]合适羧基烷基的示例是羧甲基（CH2⑶0H)、羧乙基（例如，-CH2CH2⑶0H、CH(⑶0H)CH3)、羧丙基(例如，CH2CH2CH2COOH、-CH2CH(C00H)CH3、CH(C00H)CH2CH3)、羧丁基和羧戊基。[0144]仍另选地，烷基的一个或多个碳可被另一烷基取代。这样的取代基烷基的示例是甲基、乙基和丙基。作为举例说明，有机基团可以是-ch(ch3)ch2ch3或CH2CH(CH3)CH3,其二者均是具有甲基取代的丙基。[0145]由多种被取代烷基的上述示例应清楚可知，在某些实施方案中，烷基上的取代(例如，羟基或羧基)可与该烷基的末端碳原子键合，其中该末端碳原子与醚连接至聚α_1，3-1，6-葡聚糖醚化合物中的葡萄糖单体单元的末端相对。这种末端取代的一个示例是CH2CH2CH2OH的羟丙基。另选地，取代可以在烷基的内部碳原子上。内部取代的一个示例是CH2CH(OH)CH3的羟丙基。烷基可具有一个或多个可相同（例如，两个羟基[二羟基])或不同(例如，羟基和羧基)的取代。[0146]在本文公开的某些实施方案中，聚α-1，3_1，6-葡聚糖可包含一种类型的有机基团。这样的化合物的示例包含羧基烷基作为有机基团（一般来说，羧基烷基聚α-1，3_1，6-葡聚糖）。这样的化合物的一个具体非限制性示例是羧甲基聚α-l，3_1，6_葡聚糖。[0147]另选地，本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可包含两种或更多种不同类型的有机基团。这样的化合物的示例包含（i)两种不同的烷基作为有机基团、（ii)烷基和羟基烷基作为有机基团（一般来说，烷基羟基烷基聚α-l，3-1，6-葡聚糖）、（iii)烷基和羧基烷基作为有机基团（一般来说，烷基羧基烷基聚α-1，3_1，6-葡聚糖）、（iv)羟基烷基和羧基烷基作为有机基团（一般来说，烷基烷基羧基烷基聚α-1，3_1，6-葡聚糖）、（v)两种不同的羟基烷基作为有机基团，或者(vi)两种不同的羧基烷基作为有机基团。这样的化合物的具体非限制性示例包括乙基羟乙基聚α-l，3-1，6-葡聚糖、羟基烷基甲基聚α-l，3-1，6-葡聚糖、羧甲基轻乙基聚α_1，3-1，6-匍聚糖和駿甲基轻丙基聚α-l，3-1，6-匍聚糖。[0148]聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物可由本文公开的任意聚α-l，3-1，6-葡聚糖衍生而来。例如，本发明的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物可如本文所公开的通过使用醚化反应对聚α-l，3-1，6-葡聚糖进行醚-衍生化来产生。[0149]在所公开发明的一些实施方案中，聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物所衍生自的聚α-1，3-1，6_葡聚糖是葡糖基转移酶的产物，所述葡糖基转移酶包含与SEQIDNO:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列。另选地，所述葡糖基转移酶可包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQID吣：10至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同或者100%相同的氨基酸序列。[0150]在所公开发明的某些实施方案中，包含聚α-l，3-l，6-葡聚糖醚化合物的组合物可以是具有至少约l〇cPs的粘度的水性胶体或水性溶液。另选地，这样的水性胶体或水性溶液具有例如至少约100、250、500、750、1000、1250、1500、1750、2000、2250、2500、3000、3500或4000cPs(或介于100和4000cPs之间的任意整数)的粘度。[0151]粘度可用水性胶体或水性溶液在约3°C至约110°C(或介于3°C和110°C之间的任意整数)的任何温度下进行测量。另选地，可在约4°C至30°C，或约20°C至25°C的温度下测量粘度。可在大气压(约760托)或者任意其它更高或更低的压力下测量粘度。[0152]本文公开的水性胶体或水性溶液的粘度可使用粘度计或流变仪或者使用本领域中已知的任何其它方式来测量。本领域技术人员应理解，可使用粘度计或流变仪来测量本发明中表现出剪切致稀性能或剪切增稠性能的那些水性胶体或水性溶液（即，粘度随流动条件变化的液体）的粘度。可在例如约10至1OOOrpm(每分钟转数）（或介于10和1OOOrpm之间的任意整数）的旋转剪切速率下测量这样的实施方案的粘度。另选地，可在约10、60、150、250或600rpm的旋转剪切速率下测量粘度。[0153]本文公开的水性胶体或水性溶液的pH可为约2.0至约12.0。另选地，pH可为约2.0、3·0、4·0、5·0、6·0、7·0、8·0、9·0、10·0、11·0、12·0;约4.0至8.0;或者约5.0至8.0。[0154]本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物可以以例如以下重量百分比（wt%)存在于水性胶体或水性溶液中：至少约0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0·6%、0·7%、0·8%、0·9%、1·0%、1·2%、1·4%、1·6%、1·8%、2·0%、2·5%、3·0%、3·5%、4·0%、4·5%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%。[0155]本文的水性胶体或水性溶液可包含除聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物之外的其它组分。例如，所述水性胶体或水性溶液可包含一种或多种盐，例如钠盐(例如，NaCl、Na2S〇4)。盐的其它非限制性示例包括具有以下的那些：（i)铝、铵、钡、钙、铬（Π或III)、铜（I或II)、铁(II或III)、氢、铅（II)、锂、镁、锰（II或III)、汞（I或II)、钾、银、钠锶、锡（II或IV)或锌的阳离子；以及(ii)乙酸盐、硼酸盐、溴酸盐、溴化物、碳酸盐、氯酸盐、氯化物、亚氯酸盐、铬酸盐、氰胺、氰化物、重铬酸盐、磷酸二氢盐、氰铁酸盐、氰亚铁酸盐、氟化物、碳酸氢盐、磷酸氢盐、硫酸氢盐、硫化氢、亚硫酸氢盐、氢化物、氢氧化物、次氯酸盐、碘酸盐、碘化物、硝酸盐、氮化物、亚硝酸盐、草酸盐、氧化物、高氯酸盐、高锰酸盐、过氧化物、磷酸盐、亚磷酸盐、磷化物、亚磷酸盐、硅酸盐、锡酸盐、亚锡酸盐、硫酸盐、硫化物、亚硫酸盐、酒石酸盐或硫氰酸盐的阴离子。因此，例如具有来自上述(i)的阳离子和来自上述(ii)的阴离子的任何盐均可存在于水性胶体或水性溶液中。盐可以以约.01%至约10.〇〇%(或介于.01和10.00之间的任意百分之一增量)的wt%存在于水性胶体或水性溶液中。[0156]本领域技术人员应理解，在本发明的某些实施方案中，聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物可以以阴离子形式存在于水性胶体或水性溶液中。示例可包括具有含有经羧基取代的烷基的有机基团的那些聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物。羧基烷基聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物中的羧基(C00H)在水性条件下可转化为羧酸(C0(T)基团。这样的阴离子基团可与盐阳离子(例如上文（i)中所列举的那些中的任一种）（例如，钾、钠或锂的阳离子)相互作用。因此，聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物可以是例如羧基烷基聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚钠(例如，羧甲基聚α-l，3_1，6_葡聚糖钠）、羧基烷基聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚钾(例如，羧甲基聚α-l，3_1，6-葡聚糖钾）或羧基烷基聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚锂(例如，羧甲基聚α-l，3-1，6-葡聚糖锂)。[0157]本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物可使用本领域中已知的任何方式进行交联。这样的交联可以是硼酸酯交联，其中硼酸酯来自于任何含硼化合物(例如，硼酸、二硼酸盐、四硼酸盐、五硼酸盐、诸如Polybor?的聚合物化合物、硼酸的聚合物化合物、碱硼酸盐）。另选地，可用多价金属(例如钛或锆)来实现交联。钛交联可使用诸如乳酸钛铵、三乙醇胺钛、乙酰丙酮酸钛和钛多羟基络合物的含钛IV化合物来实现。锆交联可使用诸如以下的含锆IV化合物来实现:乳酸锆、碳酸锆、乙酰丙酮酸锆、三乙醇胺锆、二异丙胺乳酸锆和锆的多羟基络合物。仍另选地，可用美国专利4,462,917、4,464,270、4,477,360和4,799,550中所述的任何交联剂来实现交联，所述专利全部以引用方式并入本文。交联剂(例如，硼酸酯）可以以例如约0·2wt%至20wt%，或者约0.1wt%、0·2wt%、0·3wt%、0·4wt%、0·5wt%、lwt%、2wt%、3wt%、4wt%、5wt%、6wt%、7wt%、8wt%、9wt%、10wt%、15wt%或20wt%的浓度存在于水性胶体或水性溶液中。[0158]据信，交联的本文所公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物与其非交联对应物相比在水性溶液中通常具有更高的粘度。另外，据信交联的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物与其非交联对应物相比可具有提高的剪切增稠性能。[0159]在本发明的某些实施方案中，据信水性胶体和水性溶液具有剪切致稀性能或者具有剪切增稠性能。剪切致稀性能观察为随着剪切速率增加水性胶体或水性溶液的粘度降低，而剪切增稠性能表现为随着剪切速率增加水性胶体或水性溶液的粘度增加。本文水性溶液的剪切致稀性能或剪切增稠性能的调节归因于将聚α-1，3-1，6-葡聚糖混合成水性组合物。因此，可将本发明的一种或多种聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物添加至水性液体、溶液或混合物以调节其流变特性（即，水性液体、溶液或混合物的流变特性得到调节）。此外，可将本发明的一种或多种聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物添加至水性液体、溶液或混合物以调节其粘度。[0160]本发明的水性胶体和水性溶液的流变特性可通过在递增的旋转剪切速率(例如，约1Orpm至约250rpm)下测量粘度来观察。例如，本文公开的水性胶体或水性溶液的剪切致稀性能可观察为：当旋转剪切速率从约lOrpm提高至60rpm、从lOrpm提高至150rpm、从lOrpm提高至250rpm、从60rpm提高至150rpm、从60rpm提高至250rpm或从150rpm提高至250rpm，粘度(cPs)减小至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%(或介于5%和95%之间的任意整数）。作为另一个示例，本文所公开水性胶体或水性溶液的剪切增稠性能可观察为：当旋转剪切速率从约1Orpm提高至60rpm、从1Orpm提高至150rpm、从1Orpm提高至250rpm、从60rpm提高至150rpm、从60rpm提高至250rpm或从150rpm提高至250rpm，粘度（cps)增大至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、125%、150%、175%或200%(或介于5%和200%之间的任意整数）。[0161]本文公开的水性胶体或水性溶液可以是个人护理产品、药物产品、食物产品、家用产品或工业产品的形式，和/或包含在其中。本文公开的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物在这些产品的每一种中均可用作增稠剂。如果需要，可将这样的增稠剂可与一种或多种其它类型的增稠剂联合使用，例如美国专利8541041中公开的那些，该专利的公开内容全文以引用方式并入本文。[0162]本文的个人护理产品不受特别限制并且包括例如皮肤护理组合物、化妆品组合物、抗真菌组合物和抗细菌组合物。本文的个人护理产品可以是例如以下形式:洗剂、乳膏、糊剂、香膏、软膏剂、发膏剂、凝胶、液体、这些的组合等。本文公开的个人护理产品可包含至少一种活性成分。活性成分公认为引起期望药理效果的成分。[0163]在某些实施方案中，可将皮肤护理产品施用于皮肤以解决与缺乏水分相关的皮肤损伤。皮肤护理产品还可用于解决皮肤的视觉外观(例如，降低片状皮肤、有裂纹皮肤和/或红皮肤的出现)和/或皮肤的触感(例如，降低皮肤的粗糙度和/或干燥度，同时提高皮肤的柔软度和精细度）。皮肤护理产品通常可包含至少一种用于治疗或预防皮肤疾病、提供化妆品效果或者向皮肤提供增湿益处的活性成分，例如氧化锌、凡士林、白凡士林、矿物油、鱼肝油、羊毛脂、二甲聚硅氧烷、硬质脂肪、维生素A、尿囊素、炉甘石、高岭土、甘油或胶态燕麦片以及这些的组合。例如，皮肤护理产品可包含一种或多种天然的增湿因子，例如神经酰胺、透明质酸、甘油、角鲨烷、氨基酸、胆固醇、脂肪酸、甘油三酯、磷脂、糖鞘脂、脲、亚油酸、糖胺聚糖、黏多糖、乳酸钠或吡咯烷酮羧酸钠。可包含在皮肤护理产品中的其它成分包括但不限于甘油酯、杏仁油、芥花籽油、角鲨烷、角鲨烯、椰油、玉米油、霍霍巴油、霍霍巴蜡、卵磷脂、橄榄油、红花油、芝麻油、牛油树脂、豆油、甜杏仁油、向日葵油、茶树油、牛油树脂、棕榈油、胆固醇、胆固醇酯、蜡酯、脂肪酸和橙油。[0164]本文的个人皮肤护理产品还可以是化妆品或其它产品的形式，包括但不限于例如唇膏、睫毛膏、胭脂、粉底、腮红。眼线膏、唇线笔、唇彩、其它化妆品、防晒霜、防晒剂（sunblock)、指甲油、摩丝、喷发剂、定型凝胶、指甲调理剂、洗浴凝胶、淋浴凝胶、身体洗涤剂、洗脸剂、洗发剂、皮肤调理剂(免洗型或清洗型）、营养发水、染发剂、染发产品、亮发产品、护发精华素、头发防卷曲产品、头发分叉端修复产品、唇膏、皮肤调理剂、冷霜、保湿剂、身体喷剂、肥皂、身体擦洗剂、去死皮剂、收敛剂、紧肤洗剂、脱毛剂、烫发液、去肩制剂、止汗剂组合物、除臭剂、剃须产品、剃须前产品、剃须后产品、清洁剂、皮肤凝胶、漂洗剂、牙膏或漱口剂。[0165]本文的药物产品可以是例如乳剂、液体、酏剂、凝胶、混悬剂、溶液、乳膏或软膏剂的形式。此外，本文的药物产品可以是本文所公开的任意个人护理产品的形式。药物产品还可包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂和/或药学上可接受的盐。本文公开的聚〇_1，3_1，6_葡聚糖醚化合物还可用于胶囊、包封剂、片剂包衣中，以及用作药剂和药物的赋形剂。[0166]本文的食物产品的非限制性示例包括蔬菜、肉和豆饼;经改造海产品;经改造的奶酪棒;奶油汤；肉汁和沙司；色拉调味品；蛋黄酱;洋葱环;果酱、果冻和糖浆;饼馅;马铃薯制品，例如炸薯条和膨化薯条;用于油炸食品、烙饼/华夫饼和蛋糕的面糊;宠物食品;饮料;冷冻甜点;冰淇淋;培养的乳制品，例如松软乳酪;酸乳、乳酪和酸奶油;蛋糕糖衣和浆汁;搅打浇头;经发酵或未经发酵的焙烤食品等。[0167]本文公开的聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物、水性胶体和水性组合物可用于赋予食物产品（或任意的个人护理产品、药物产品或工业产品）以下一种或多种物理特性;例如增稠性、冷冻/解冻稳定性、润滑性、保湿性和排水性、成膜性、质感、一致性、形状保持性、乳化性、粘合性、混悬性和胶凝化性。本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物通常可以以例如约O.Olwt%至约5wt%的水平用于食物产品中。[0168]本文公开的聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物可以以提供期望增稠程度的量包含于食品或任何其它可摄取的材料(例如，肠内药物制剂）中。例如，以重量计，产品中聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚化合物的浓度或量可为约0·l_3wt%、0·l_4wt%、0·l_5wt%或0·l-10wt%。[0169]本文的家用和/或工业产品可以是以下形式:例如干墙带-填缝混合料;砂浆;水泥浆;水泥灰泥;喷雾灰泥;水泥粉饰灰泥;黏合剂;糊剂;墙/天花板质地成构剂；用于带式铸造、挤压成型和注射模塑的粘合剂和加工助剂，以及陶瓷；用于杀虫剂、除草剂和肥料的喷雾粘附剂和/或分散助剂;衣物洗涤剂;硬质表面清洁剂;空气清新剂;聚合物乳剂;诸如水基凝胶的凝胶;表面活性剂溶液;诸如水基涂料的涂料;保护性涂层;黏合剂;密封剂和填缝剂;诸如水基墨水的墨水;金属加工流体；用于电镀、磷化、镀锌和/或一般性金属清洁操作的乳剂基金属清洁流体;液压流体(例如，在井下作业中用于压裂的那些）；以及水性矿物浆料。[0170]所公开的发明还涉及用于增加水性组合物的粘度的方法。该方法包括使一种或多种聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物与所述水性组合物接触，其中：[0171](i)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-l，3键，[0172](ii)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的至少30%糖苷键是α-l，6键，[0173](iii)所述聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物具有至少1000的重均聚合度(DPW);并且[0174](iv)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替。[0175]该方法中的接触步骤导致水性组合物的粘度增加。本文公开的任何水性胶体和水性溶液均可使用该方法来产生。[0176]本文的水性组合物可以是例如水（例如，去离子水）、水性溶液或水性胶体。在约20-25°(：下测量的水性组合物在接触步骤之前的粘度可为约0-1000(^?8(或介于0-lOOOOcPs之间的任意整数）。由于所述水性组合物在某些实施方案中可以是水性胶体等，因为应显而易见的是，所述方法可用于增加已具有粘性的水性组合物的粘度。[0177]使本文公开的聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物与水性组合物接触增加该水性组合物的粘度。与水性组合物在混合或溶解步骤之前的粘度相比，粘度增加可为增加至少约1%、10%、100%、1000%、100000%或1000000%(或介于1%和1000000%之间的任意整数）。应显而易见的是，当水性组合物在接触步骤之前具有很低至不具有粘度时，可使用所公开的方法来获得粘度的极大百分比增加。[0178]用于增加水性组合物粘度的方法中的接触步骤可通过借助本领域中已知的任何方式将本文所公开的任何聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物混合或溶解在水性组合物中来进行。例如，混合或溶解可人工进行或者用机器(例如，工业混合器或搅拌器、定轨振荡器、搅拌板、均化器、超声波破碎仪、砂磨机)进行。在某些实施方案中，混合或溶解可包括均化步骤。根据将聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物与水性组合物混合的需要，可进行均化（以及任何其它类型的混合)约5至60、5至30、10至60、10至30、5至15或10至15秒(或基于5和60秒之间的任意整数）或者更长时间。均化器可以以至5000至30000rpm、10000至30000rpm、15000至30000rpm、15000至25000rpm、或20000rpm(或介于5000和30000rpm之间的任意整数）使用。将本文公开的使用均化步骤制备的水性胶体和水性溶液称为均化水性胶体和水性溶液。[0179]在将聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物与水性组合物组合或者溶解在其中之后，可过滤或者可不过滤所得水性组合物。例如，可或者可不过滤用均化步骤制备的水性组合物。[0180]所公开发明还涉及用于制备聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物的方法。该方法包括：在碱性条件下使聚α-l，3-1，6_葡聚糖与至少一种含有有机基团的醚化剂在反应中接触，其中所述有机基团被醚化至聚α-l，3-1，6-葡聚糖从而产生聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物。关于该方法的更多信息：[0181](i)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，3键，[0182](ii)所述聚α-l，3-1，6_葡聚糖的至少30%糖苷键是α-l，6键，[0183](iii)所述聚α-l，3_1，6_葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)，[0184](iv)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖的α-l，3键和α-l，6键不连续地彼此交替，并且[0185](v)所述聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物具有约0.05至约3.0的有机基团取代度(DoS)〇[0186]通过该方法制备的聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物可任选地是分离的。[0187]在碱性条件下使聚α-l，3-1，6_葡聚糖与至少一种含有有机基团的醚化剂在反应中接触。该步骤可通过首先如下制备碱性条件来进行:使聚α-l，3-1，6_葡聚糖与溶剂和一种或多种碱金属类氢氧化物接触以提供混合物(例如，浆料)或溶液。因此，醚化反应的碱性条件可包含碱金属类氢氧化物溶液。碱性条件的pH可为至少约11.0、11.2、11.4、11.6、11.8、12.0、12.2、12.4、12.6、12.8或13.0。[0188]多种碱金属类氢氧化物均可使用，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化|丐、氢氧化锂和/或四乙基氢氧化铵。具有聚α-1，3-1，6-葡聚糖和溶剂的制备物中碱金属类氢氧化物的浓度可为约约l_70wt%、5_50wt%、5_10wt%、10_50wt%、10_40wt%或10_30wt%(或介于lwt%和70wt%之间的任意整数）。另选地，碱金属类氢氧化物(例如氢氧化钠）的浓度可为至少约lwt%、2wt%、3wt%、4wt%、5wt%、6wt%、7wt%、8wt%、9wt%、10wt%、llwt%、12wt%、13wt%、14wt%、15wt%、16wt%、17wt%、18wt%、19wt%、20wt%、21wt%、22wt%、23wt%、24wt%、25wt%、26wt%、27wt%、28wt%、29wt%或30wt%。用于制备喊性条件的喊金属类氢氧化物可在完全水性溶液或者包含一种或多种水溶性有机溶剂(例如乙醇或异丙醇）的水性溶液中。另选地，碱金属类氢氧化物可作为固体添加以提供碱性条件。[0189]在制备醚化反应时可任选地包含在内或用作主要溶剂的多种有机溶剂包括例如醇、丙酮、二氧杂环己烷、异丙醇和甲苯;这些溶剂均不能使聚α-1，3_1，6-葡聚糖溶解。在某些实施方案中，可使用甲苯或异丙醇。有机溶剂可在添加碱金属类氢氧化物之前或之后添加。包含聚α-l，3-1，6-葡聚糖和碱金属类氢氧化物的制备物中有机溶剂(例如，异丙醇或甲苯）的浓度可为至少约l〇wt%、15wt%、20wt%、25wt%、30wt%、35wt%、40wt%、45wt%、50wt%、55wt%、60wt%、65wt%、70wt%、75wt%、80wt%、85wt%或90wt%(或介于10wt%和90wt%的任意整数）。[0190]另选地，在制备醚化反应时可使用能够使聚α-1，3_1，6-葡聚糖溶解的溶剂。这些溶剂包括但不限于氯化锂(LiCl)/N，N-二甲基-乙酰胺(DMAc)，S02/二乙胺(DEA)/二甲基亚砜(DMS0)，LiCl/1，3_二甲基_2_咪唑啉酮（DMI)，N，N-二甲基甲酰胺（DMF)/N2〇4、DMS0/四丁基-氟化铵三水合物（了84?)，^甲基吗啉4-氧化物0丽〇)，附（杜611)(〇!1)2[杜6111/4三（2-氨基乙基）胺]水性溶液以及LiCKk·3H20、NaOH/脲水性溶液、水性氢氧化钠、水性氢氧化钾、甲酸和离子性液体的熔融物。[0191]可通过混合来使聚α-1，3-1，6-葡聚糖与溶剂和一种或多种碱金属类氢氧化物接触。这样的混合可在彼此添加这些组分期间或之后进行。混合可通过例如人工混合、使用顶置式混合器的混合、使用磁力搅拌棒的混合或摇动来进行。在某些实施方案中，可先将聚〇_1，3_1，6_葡聚糖混合在水或水性溶液中，之后将其与溶剂和/或碱金属类氢氧化物混合。[0192]在使聚α-l，3-1，6-葡聚糖、溶剂和一种或多种碱金属类氢氧化物彼此接触之后，可任选地将所得组合物维持在环境温度下，持续长达14天。本文中使用的术语"环境温度"是指约15-30°C或20-25°C(或介于15°C和30°C之间的任意整数）的温度。另选地，可将所述组合物在约30°C至约150°C(或介于30°C和150°C之间的任意整数）的温度下在或不在回流下加热长达约48小时。在某些实施方案中，可将所述组合物在约55°C下加热约30分钟或约60分钟。因此，可将由将聚α-1，3-1，6-葡聚糖、溶剂和一种或多种碱金属类氢氧化物彼此混合获得的组合物在约50°C、51°C、52°C、53°C、54°C、55°C、56°C、57°C、58°C、59°C或60°C下加热约30-90分钟。[0193]在使聚α-1，3-1，6-葡聚糖、溶剂和一种或多种碱金属类氢氧化物彼此接触之后，可任选地过滤所得组合物(施加或不施加温度处理步骤）。这样的过滤可使用漏斗、离心机、压力过滤器或本领域中已知的允许从固体中去除液体的任何其它方法和/或设备来进行。尽管过滤可除去很多碱金属类氢氧化物，但是经过滤的聚α-l，3-1，6-葡聚糖仍然呈碱性(即，经碱化处理的聚α-l，3_1，6_葡聚糖），从而提供碱性条件。[0194]在本文的制备聚α-l，3-1，6_葡聚糖醚化合物的方法中，在碱性条件下使包含有机基团的醚化剂与聚α-1，3-1，6-葡聚糖在反应中接触。例如，可向通过如上述所述使聚α-1，3-1，6_葡聚糖、溶剂和一种或多种碱金属类氧化物彼此接触制备的组合物添加醚化剂。另选地，可在制备碱性条件时将醚化剂包含在内（例如，可将醚化剂与聚α-1，3-1，6-葡聚糖和溶剂混合，之后与碱金属类氢氧化物混合）。[0195]如本文所公开的，本文的醚化剂是指可用于用有机基团醚化聚α-1，3-1，6_葡聚糖的葡萄糖单元的一个或多个羟基的试剂。这样的有机基团的示例包括烷基、羟基烷基和羧基烷基。可在反应中使用一种或多种醚化剂。[0196]适于制备烷基聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚化合物的醚化剂包括例如二烷基硫酸酯、二烷基碳酸酯、烷基卤（例如，烷基氯）、碘代烷、烷基三氟甲磺酸酯（烷基三氟甲烷磺酸酯）和烷基氟磺酸酯。因此，用于制备甲基聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚的醚化剂的示例包括硫酸二甲酯、碳酸二甲酯、甲基氯、碘代甲烷、三氟甲磺酸甲酯和氟磺酸甲酯。用于制备乙基聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚的醚化剂的示例包括硫酸二乙酯、碳酸二乙酯、乙基氯、碘代乙烷、三氟甲磺酸乙酯和氟磺酸乙酯。用于制备丙基聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚的醚化剂的示例包括硫酸二丙酯、碳酸二丙酯、丙基氯、碘代丙烷、三氟甲磺酸丙酯和氟磺酸丙酯。用于制备丁基聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚的醚化剂的示例包括硫酸二丁酯、碳酸二丁酯、丁基氯、碘代丁烷和三氟甲磺酉支丙醋。[0197]适于制备羟基烷基聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚化合物的醚化剂包括例如环氧烷烃，例如环氧乙烷、环氧丙烷(例如，1，2_环氧丙烷）、环氧丁烷(例如，1，2_环氧丁烷、2,3_环氧丁烷、1，4_环氧丁烷)或它们的组合。作为示例，环氧丙烷可用作用于制备羟丙基聚α-1，3_1，6_葡聚糖的醚化剂，环氧乙烷可用作用于制备羟乙基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的醚化剂。另选地，可使用羟基烷基卤（例如，羟基烷基氯)作为用于制备羟基烷基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的醚化剂。羟基烷基卤的示例包括羟乙基卤、羟丙基卤（例如，2-羟丙基氯、3-羟丙基氯)和羟丁基卤。另选地，可使用亚烷基氯醇作为用于制备羟基烷基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的醚化剂。可使用的亚烷基氯醇包括但不限于氯乙醇、氯丙醇、氯丁醇或这些的组合。[0198]用于制备二羟基烷基聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚化合物的醚化剂包括例如二羟基烷基卤（例如，二羟基烷基氯），例如二羟基乙基卤、二羟基丙基卤（例如，2，3-二羟基丙基氯[即，3-氯-1，2-丙二醇])或二羟基丁基卤。例如，2,3_二羟基丙基氯可用于制备二羟基丙基聚α-1，3-1，6-葡聚糖。[0199]适于制备羧基烷基聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物的醚化剂可包括卤代烷基化物(例如，氯烷基化物）。卤代烷基化物的示例包括卤代乙酸盐(例如，氯乙酸盐）、3_卤代丙酸盐(例如，3-氯丙酸盐)和4-卤代丁酸盐(例如，4-氯丁酸盐）。流入，可使用氯乙酸盐(例如单氯乙酸盐）（例如，氯乙酸钠)作为制备羧甲基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的醚化剂。[0200]当制备具有两种或更多种不同有机基团的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚化合物时，可相应地使用两种或更多种不同的醚化剂。例如，可使用环氧烷烃和烷基氯二者作为制备烷基羟基烷基聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚的醚化剂。因此，可组合本文公开的任何醚化剂以制备具有两种或更多种不同有机基团的聚α-1，3_1，6_葡聚糖醚化合物。这样的两种或更多种醚化剂可同时用于反应中，或者可顺序用于反应中。当顺序使用时，可任选地在每次添加之间使用下文所公开的任意温度处理(例如，加热）步骤。可选择顺序引入醚化剂以控制每种有机基团的期望DoS。一般来说，如果期望某一特定醚化剂形成在醚产物中的有机基团与所需添加之另一有机基团的DoS相比具有更高的DoS，则首先使用该特定醚化剂。[0201]在碱性条件下与聚α-1，3_1，6-葡聚糖在反应中接触的醚化剂的量可基于所产生聚α-1，3_1，6_匍聚糖酿化合物中所需的DoS来确定。本文广生的聚α-1，3_1，6_匍聚糖酿化合物中每个葡萄糖单体单元上醚取代基团的量可使用核磁共振(NMR)光谱学来确定。聚〇_1，3_1，6_葡聚糖的摩尔取代度(MS)值没有上限。一般来说，醚化剂可以以每摩尔聚α-1，3_1，6_葡聚糖至少约0.05摩尔的量使用。可使用的醚化剂的量不存在上限。[0202]用于产生本文的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物的反应可任选地在压力容器中进行，所述压力容器例如Parr反应器、高压釜、振荡管或本领域中公知的任何其它压力容器。[0203]在碱性条件下使聚α-1，3-1，6-葡聚糖与醚化剂接触的步骤之后，可任选地加热本文的反应。反应温度以及施加这样的温度的时间可在宽界限内变化。例如，任选地可将反应维持在环境温度下持续长达14天。另选地，可在约25°C至约200°C(或介于25°C至和200°C之间的任意整数）下在或不在回流下加热反应。反应时间可相应地变化:温度越低时间越长，温度越高时间越短。[0204]在制备羧甲基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的某些实施方案中，可将反应加热至约55°C持续约3小时。因此，例如，可将用于制备本文的羧基烷基聚α-1，3-1，6_葡聚糖的反应加热至约50°C至约60°C(或介于50°C和60°C之间的任意整数），持续约2小时至约5小时。例如，在这些实施方案中可使用诸如卤代乙酸盐(例如，单氯乙酸盐)的醚化剂。[0205]任选地，可在加热或不加热下将本文的醚化反应维持在惰性气体下。如本文所用，术语"惰性气体"是指在一组给定反应条件(例如所公开的用于制备本文的反应的那些）下不发生化学反应的气体。[0206]可同时将本文所公开反应的所有组分混合在一起并升至期望的反应温度，随之在搅拌或不搅拌下维持温度，直至形成期望的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物。另选地，可如上所述将混合组分放置在环境温度下。[0207]在醚化之后，可中和反应的pH。反应的中和可使用一种或多种酸来进行。本文中使用的术语"中性pH"是指不呈显著酸性或碱性的pH(例如，约6-8，或者约6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0的pH)。可用于此目的的多种酸包括但不限于硫酸、乙酸(例如，冰乙酸）、盐酸、硝酸、任何矿物酸(无机酸）、任何有机酸或这些酸的任意组合。[0208]任选地可将在本文的反应中产生的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚化合物用不容易使该化合物溶解的液体洗涤一次或多次。例如，通常可用醇、丙酮、芳族化合物或这些的任意组合来洗涤聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚，这取决于其中醚化合物的溶解度(其中缺乏溶解度对洗涤而言是期望的）。一般来说，包含有机溶剂(例如醇)的溶剂优选用于洗涤聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚。例如，可将聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚产物用包含甲醇或乙醇的水性溶液洗涤一次或多次。例如，可使用70_95wt%乙醇来洗涤产物。在另一实施方案中，可用甲醇:丙酮(例如，60:40)溶液来洗涤聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚产物。[0209]在所公开反应中产生的聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚产物可以是分离的。该步骤可在中和和/或洗涤步骤之前或之后使用漏斗、离心机、压力过滤器或者本领域中已知的允许从固体中去除液体的任何其它方法和/或设备来进行。可使用本领域中已知的任何方法来干燥分离的聚α-1，3-1，6-葡聚糖醚产物，例如真空干燥、空气干燥或冷冻干燥。[0210]可使用聚α-1，3-1，6_葡聚糖醚产物作为起始材料来重复上述任意醚化反应以进行进一步修饰。该方法可适于增加有机基团的DoS和/或向醚产物添加一种或多种不同的有机基团。[0211]聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚产物的结构、分子量和DoS可使用本领域中已知的多种物理化学分析(例如NMR光谱学和尺寸排阻色谱(SEC))来确认。[0212]上述聚α-1，3_1，6-葡聚糖的任何实施方案均可用于本文的醚化反应。例如，本文中用于醚化反应的聚α-1，3-1，6-葡聚糖可以是包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同之氨基酸序列的葡糖基转移酶的产物。另选地，所述葡糖基转移酶可包含与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8或SEQIDN0:10至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同或者100%相同的氨基酸序列。[0213]本文中用于制备聚α-1，3_1，6-葡聚糖醚化合物的聚α-1，3_1，6-葡聚糖可使用一种或多种葡糖基转移酶(gtf)由蔗糖酶促产生。在将该酶促反应的聚α-1，3-1，6_葡聚糖产物用于制备醚之前可对其进行纯化。另选地，可将gtf反应的聚α-1，3_1，6-葡聚糖产物经稍微加工或不经加工而用于制备聚α-l，3-1，6-葡聚糖醚化合物。[0214]可将聚α-1，3-1，6_葡聚糖衆料直接用于本文所公开的用于制备聚α-l，3_1，6_葡聚糖醚化合物的上述任何过程。如本文所用，"聚α-l，3-1，6-葡聚糖浆料"是指包含gtf酶促反应的组分的混合物。除聚α-1，3_1，6-葡聚糖自身之外，gtf酶促反应还可包含诸如以下多种组分:蔗糖、一种或多种gtf酶、葡萄糖、果糖、明串珠菌二糖、缓冲液、:FennaSure?、可溶性寡糖、寡糖引发剂、细菌酶提取物组分、硼酸盐、氢氧化钠、盐酸、细胞裂解液、蛋白质和/或核酸。最低限度地，除聚α-1，3_1，6-葡聚糖自身之外，gtf酶促反应的组分还可包括例如蔗糖、一种或多种gtf酶、葡萄糖和果糖。在另一个示例中，除聚α-1，3-1，6-葡聚糖自身之外，gtf酶促反应的组分还可包括例如蔗糖、一种或多种gtf酶、葡萄糖、果糖、明串珠菌二糖和可溶性寡糖(并且任选地包括细菌酶提取物组分）。应显而易见的是，聚α-1，3_1，6-葡聚糖在如本文所公开的在浆料中时尚未进行纯化或洗涤。还应显而易见的是，浆料表示完成的或已产生可观察量聚α-l，3-1，6-葡聚糖的gtf酶促反应，聚α-l，3-1，6-葡聚糖由于其不溶于水性反应环境(例如，5-7的pH)而形成固体。聚α-1，3_1，6-葡聚糖浆料可通过如本文中所公开的设置gtf反应来制备。[0215]另选地，可将聚α-1，3_1，6-葡聚糖的湿滤饼直接用于本文所公开的用于制备聚^1，3-1，6-葡聚糖醚化合物的上述任何方法。本文中的术语"聚〇-1，3-1，6-葡聚糖的湿滤饼"是指已与浆料分离(例如，过滤)并且用水或水性溶液洗涤的聚α-1，3_1，6-葡聚糖。例如，可将湿滤饼洗涤至少1、2、3、4、5或更多次。在制备湿滤饼时，不干燥聚€1-1，3-1，6-葡聚糖。鉴于经洗涤的聚α-l，3_1，6_葡聚糖保留有水，将湿滤饼称为"湿的"。[0216]聚α-l，3-1，6-葡聚糖的湿滤饼可使用本领域中已知的用于使固体与液体分离的任何装置(例如过滤器或离心机)来制备。例如，可将在浆料中的聚α-1，3_1，6-葡聚糖固体经滤纸收集使用网筛的漏斗上。可将经过滤的湿滤饼重悬于水(例如，去离子水）中并过滤一次或多次以除去浆料的可溶性组分，例如蔗糖、果糖和明串珠菌二糖。作为用于制备湿滤饼的另一个示例，可通过离心作为沉淀物从浆料收集聚α-l，3-1，6-葡聚糖，将其重悬于水(例如，去离子水)中，并且额外再沉淀和重悬一次或多次。[0217]本文公开的组合物和方法的非限制性示例包括：[0218]1.-种反应溶液，包含水、蔗糖和合成聚α-1，3-1，6-葡聚糖的葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDΝ0:8或SEQIDNO:10至少90%相同的氨基酸序列。[0219]2.根据实施方案1所述的反应溶液，其中[0220](i)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，3键，[0221](ii)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，6键，并且[0222](iii)所述葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。[0223]3.根据实施方案1或2所述的反应溶液，其中所述葡聚糖的至少60%糖苷键是α-1，6键。[0224]4.根据实施方案1、2或3所述的反应溶液，其中所述葡聚糖的DPW为至少10000。[0225]5.根据实施方案1、2、3或4所述的反应溶液，其中所述葡糖基转移酶包含SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10的氨基酸序列。[0226]6.-种用于制备聚α-1，3-1，6-葡聚糖的方法，包括：[0227]a)使至少水、蔗糖和合成聚α-1，3-1，6_葡聚糖的葡糖基转移酶接触，其中所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDΝ0:8或SEQIDΝ0:10至少90%相同的氨基酸序列，由此产生聚α-1，3-1，6-葡聚糖；以及[0228]b)任选地，分离步骤(a)中产生的聚α-1，3_1，6-葡聚糖。[0229]7.根据实施方案6所述的方法，其中[0230](i)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，3键，[0231](ii)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，6键，并且[0232](iii)所述葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。[0233]8.根据实施方案6或7所述的方法，其中所述葡聚糖的至少60%糖苷键是α-1，6键。[0234]9.根据实施方案6、7或8所述的方法，其中所述葡聚糖的DPW为至少10000。[0235]实施例[0236]在下文提供的实施例1-8中对所公开发明进行进一步限定。应该理解，尽管这些实施例说明了本发明的某些优选方面，但仅是以举例说明的方式给出。通过上述讨论和这些实施例，本领域技术人员可确定本发明的必要特征，并且在不脱离本发明的实质和范围的情况下，可对本发明进行各种变化和修改以使其适应多种用途和条件。[0237]盤曼[0238]中使用的一些缩写的含义如下："g"意指克，"h"意指小时，"mL"意指毫升，"psi"意指镑每平方英寸，"wt%"意指重量百分比，"μπΓ意指微米，"°C"意指摄氏度，"mg"意指毫克，"mm"意指毫米，"此"意指微升，"mmol"意指毫摩尔，"min"意指分钟，"mol%"意指摩尔百分比，"M"意指摩尔，"mM"意指毫摩尔，"N"意指正常，"rpm"意指每分钟转数，"w/v"意指重量体积，"MPa"意指兆帕斯卡"LB"意指肉汤，"nm"意指纳米，"0D"意指光密度，"IPTG"意指异丙基硫代-半乳糖苷，"xg"意指重力，"SDS-PAGE"意指十二烷基硫酸钠聚丙稀酰胺电泳，"DTT"意指二硫苏糖醇，"BCA"意指二喹啉甲酸，"DMAc"意指N，N'-二甲基乙酰胺，"DMS0"意指二甲基亚砜，"NMR"意指核磁共振，"SEC"意指尺寸排阻色谱，"DI7K"意指去离子水。[0239]gg[0240]T10右旋糖酐（D9260)、IPTG(cat#I6758)、氯化三苯基四唑和BCA蛋白质测定试剂盒/试剂从SigmaCo.(St.Louis，M0)获得。BELLC0旋转瓶来自于BellcoCo.(Vineland，NJ)〇LB培养基来自于Beeton，DickinsonandCompany(FranklinLakes,NJ)〇Suppressor7153消泡剂从CognisCorporation(Cincinnati，OH)获得。所有的其它化学制品均从此类化学制品的常用供应商获得。[0241]种子培养基[0242]用于培养发酵罐的起始培养物的种子培养基包含:酵母提取物(Amberx695,5.0克/升（g/L))、K2HP〇4(10·Og/L)、KH2P〇4(7·Og/L)、二水合柠檬酸钠（1·Og/L)、（NH4)2S〇4(4·Og/L)、MgS〇4七水合物（1·Og/L)和柠檬酸铁铵(0·1Og/L)。使用5NNaOH或H2S〇4来将培养基的pH调节至6.8,并且在烧瓶中对培养基进行灭菌。灭菌后的添加物包括葡萄糖（20mL/L的50%w/w溶液)和氨苄青霉素(4mL/L的25mg/mL原液）。[0243]发酵罐培养基[0244]在发酵罐中使用的生长培养基包含:KH2P〇4(3.50g/L)、FeS〇4七水合物(0.05g/L)、MgS〇4七水合物(2·0g/L)、二水合柠檬酸钠（1·90g/L)、酵母提取物(AMBEREX695，5·0g/L)、Suppressor7153消泡剂（0.25mL/L)、NaCl(1.0g/L)、CaCl2二水合物（10g/L)和NIT痕量元素溶液（lOmL/LhNIT痕量元素溶液包含一水合柠檬酸（10g/L)、MnS〇4水合物（2g/L)、NaCl(28/1)、？6304七水合物（0.58/1)、21^04七水合物（0.28/1)、〇1304五水合物(0.028/1)和NaMo〇4二水合物(0.02g/L)。灭菌后的添加物包括葡萄糖（12.5g/L的50%w/w溶液)和氨苄青霉素(4mL/L的25mg/mL原液）。[0245]一般性方法[0246]在发酵中产生重组葡糖基转移酶(gtf)[0247]通过制备表达gtf酶之大肠杆菌菌株的种前培养物来起始在发酵罐中产生重组gtf酶。将种子培养基的10mL等分试样加入125-ml的一次性带挡板烧瓶中并接种大肠杆菌菌株在20%甘油中的1.0-mL等分试样。在于300rpm下摇动的同时将培养物在37°C下培养3小时。[0248]用于起始gtf发酵培养的种子培养物通过向2-L摇瓶添加0.5L种子培养基来制备。将l.OmL种前培养物无菌转移到烧瓶中的0.5L种子培养基中，并在37°C和300rpm下培养5小时。在37°C下，在光密度550nm(0D55Q)>2时将种子培养物转移到含有8L发酵罐培养的14-L发酵罐(Braun，PerthAmboy，NJ)中。[0249]允许大肠杆菌在发酵罐培养基中生长。当该培养物的蔗糖浓度降低至0.5g/L，向其进料葡萄糖(含有l%w/wMgS〇4·7H20的50%w/w葡萄糖溶液）。以每分钟0.36克进料(g进料/分钟）开始葡萄糖进料并且分别每小时渐进式增加至0.42、0.49、0.57、0.66、0.77、0.90、1.04、1.21、1.41、1.63、1.92和2.2g进料/分钟。在此之后，使进料速率保持不变。使用YSI葡萄糖分析仪(YSI，YellowSprings，0H)来监测培养基中的葡萄糖浓度。。当葡萄糖浓度超过0.lg/L时，降低或暂时停止进料速率。当细胞达到70的OD55Q时通过添加9mL的0.5MIPTG来进行gtf酶表达的诱导。将溶解氧(D0)浓度控制在25%的空气饱和度。首先通过叶轮搅拌速率(400至1200rpm)，随后通过通风速率(2至10标准升/分钟，slpm)来控制D0。使用NH4〇H(14.5%w/v)和H2SO4(20%w/v)来将培养物pH控制在6.8。将回压维持在0.5巴。在不同的间隔（20、25和30小时），将向发酵罐中添加5mlSuppressor7153消泡剂以抑制发泡。在加入IPTG后8小时通过离心收获细胞并将其作为细胞糊储存在-80°C。[0250]将由发酵获得的每种gtf酶的细胞糊以150g/L悬浮于pH7.2的50mM磷酸钾缓冲液中以制备浆料。将浆料在12,00(^1(1^111116型机4?￥-1000或4?￥16.56)下匀化并将均浆冷却至4°C。在中等剧烈的搅拌下，每升细胞均浆添加50g絮凝剂溶液(Aldrichno.409138，在pH7.0的50mM磷酸钠缓冲液中为5%)。将搅动降低至轻度搅拌，持续15分钟。随后，通过在5-10°C下以4500rpm离心3小时使细胞匀浆澄清。将含有gtf酶的上清液用30千道尔顿(kDa)截留膜浓缩(大约5X)以提供gtf提取物。[0251]Gtf酶活性的测定[0252]通过测量gtf反应溶液中还原糖(果糖和蔗糖）的产生来确定Gtf酶活性。通过向包含蔗糖(50g/L)、磷酸钾缓冲液(pH6.5,50mM)和右旋糖酐T10(lmg/mL)的混合物添加gtf提取物（如上制备）来制备反应溶液;将gtf提取物添加至按体积计5%。然后，将反应溶液在22-25°C下温育24-30小时，在此之后对其进行离心。将上清液(0.01mL)添加至含有INNaOH和0.1%氯化三苯基四唑（Sigma-Aldrich)的混合物。将混合物温育5分钟，在此之后使用ULTR0SPEC分光光度计(PharmaciaLKB，NewYork，NY)测定其OD48〇r?以测量还原糖果糖和葡萄糖的存在。[0253]糖苷键的确定[0254]通过13C匪R(核磁共振）或1Η匪R来确定通过gtf酶合成的葡聚糖产物中的糖苷键。[0255]对于13CNMR，在50°C下于搅拌下将干葡聚糖聚合物(25-30mg)溶解于lmL包含按重量计3%LiCl的氘化DMS0中。使用玻璃移液管，将该溶液中的0.8mL转移到5-mmNMR管中。利用装备有CPDUL冷冻探针的BrukerAvance500-MHzNMR光谱仪（Billerica，MA)使用26041.7Hz的光谱窗口以125.76MHz的光谱频率采集定量13CWR谱。利用使用waltz去偶的反门控去偶脉冲序列，其中采集时间为0.629秒，脉冲间延迟为5秒，6000个脉冲。使用2.0Hz的指数乘法转换时间域数据。[0256]对于1HNMR，将大约20mg葡聚糖聚合物样品称重到分析天平上的小瓶中。将小瓶从天平上移走并向小瓶添加0.8mL包含按重量计3%LiCl的氘化DMS0(DMS0-d6)。将混合物用磁力搅拌棒搅拌并温热至90°C，直至葡聚糖样品溶解。使混合物冷却至室温。在于室温下搅拌的同时，向聚合物溶液添加〇.2mL的三氟乙酸(TFA)在DMS0-d6中的按体积计20%溶液。添加TFA是为了将所有的羟基质子信号移出出现碳水化合物环质子信号的光谱区。使用玻璃移液管将最终溶液中的一部分(〇.8mL)转移到5-mmNMR管中。使用NMR光谱仪以500MHz或更大的质子频率采集定量1HNMR谱。使用11.Oppm的光谱窗口和5.5ppm的传送器偏移来采集光谱。以10秒的脉冲间延迟和1.5秒的采集时间施加90°脉冲，施加32个脉冲。使用0.15Hz的指数乘法转换时间域数据。[0257]重均聚合度(DPff)的确定[0258]通过SEC来确定经gtf酶合成的葡聚糖产物的DPW。将干葡聚糖聚合物溶解于DMAc和5%LiCl(0.5mg/mL)中并在100°C下摇动过夜。所使用的SEC系统为偶联有以下三个在线检测器的来自于WatersCorporation(MiIford，MA)的Al1iance?2695分离模块：来自Waters的差示折光计2410、来自WyattTechnologies(SantaBarbara，CA)的多角度光散射光度计Heleos?8+和来自Wyatt的差示毛细管粘度计ViscoStar?。用于SEC的柱为来自Shodex(Japan)的四个苯乙烯-二乙烯基苯柱以及两个线性KD-806M、KD-802和KD-801柱以提高在聚合物分布的低分子量区的分辨率。流动相为具有0.11%LiCl的DMAc。所使用的色谱条件为:在柱和检测器隔室中为50°C，在样品和注射器隔室中为40°C，流量为0.5mL/分钟并且注射体积为l〇〇yL。用于数据简化的软件包是来自Waters的Empower?第3版(具有宽葡聚糖聚合物标准的校准)和来自Wyatt的Astra第6版(使用柱校准的三重检测方法）。[0259]实施例1[0260]6七谓每4297(5￡〇10从)：2)的制备[0261]该实施例描述了制备以GI号7684297标识于GENBANK中的口腔链球菌gtf酶的N末端截短形式（SEQIDN0:2,由SEQIDN0:1编码，在本文中称为"4297"）。[0262]使用经优化以在大肠杆菌中进行蛋白质表达的密码子来合成编码gtf4297的核苷酸序列（DNA2·0，Inc·，MenloPark，CA)。将编码gtf4297(SEQIDN0:2)的核酸产物（SEQIDNO:1)亚克隆到pJexpress404u(DNA2·0，Inc·)中以产生标识为PMP70的质粒构建体。使用该质粒构建体来转化大肠杆菌MG1655(ATCC?47076)细胞以产生标识为MG1655/pMP52的菌株。[0263]依照一般性方法部分中公开的操作来进行gtf4297通过细菌表达的产生及其酶活性的测定。通过4297产生的葡聚糖的键分布和DPW示于表2中（参见下文的实施例6)。[0264]实施例2[0265]Gtf酶3298(SEQIDN0:4)的制备[0266]该实施例描述了制备以GI号322373298标识于GENBANK中的链球菌C150gtf酶的N末端截短形式(SEQIDN0:4,由SEQIDNO:3编码，在本文中称为"3298"）。[0267]使用经优化以与大肠杆菌中进行蛋白质表达的密码子来合成编码gtf3298的核苷酸序列（DNA2.0，Inc·)。将编码gtf3298(SEQIDN0:4)的核酸产物（SEQIDN0:3)亚克隆至1JpJexpress404"中以产生标识为PMP98的质粒构建体。使用该质粒构建体来转化大肠杆菌MG1655(ATCC?47076)细胞以产生标识为MG1655/pMP98的菌株。[0268]依照一般性方法部分中公开的操作来进行gtf3298通过细菌表达的产生及其酶活性的测定。通过3298产生的葡聚糖的键分布和DPW示于表2中（参见下文的实施例6)。[0269]实施例3[0270]Gtf酶0544(SEQIDN0:6)的制备[0271]该实施例描述了制备以GI号290580544标识于GENBANK中的变异链球菌gtf酶的N末端截短形式(SEQIDN0:6,由SEQIDNO:5编码，在本文中称为"0544"）。[0272]使用经优化以与在大肠杆菌中进行蛋白质表达的密码子来合成编码gtf0544的核苷酸序列（DNA2.0，Inc.)。将编码gtf0544(SEQIDN0:6)的核酸产物（SEQIDN0:5)亚克隆到pJexpress404g)中以产生标识为PMP67的质粒构建体。使用该质粒构建体来转化大肠杆菌MG1655(ATCC?47076)细胞以产生标识为MG1655/pMP67的菌株。[0273]依照一般性方法部分中公开的操作来进行gtf0544通过细菌表达的产生及其酶活性的测定。通过0544产生的葡聚糖的键分布和DPW示于表2中（参见下文的实施例6)。[0274]实施例4[0275]Gtf酶5618(SEQIDN0:8)的制备[0276]该实施例描述了制备以GI号328945618标识于GENBANK中的血链球菌gtf酶的N末端截短形式（SEQIDN0:8,由SEQIDN0:7编码，在本文中称为"5618"）。[0277]使用经优化以与在大肠杆菌中进行蛋白质表达的密码子来合成编码gtf5618的核苷酸序列（DNA2·0，Inc·)。将编码gtf5618(SEQIDN0:8)的核酸产物（SEQIDN0:7)亚克隆到pJexpress404'中以产生标识为PMP72的质粒构建体。使用该质粒构建体来转化大肠杆菌MG1655(ATCC?47076)细胞以产生标识为MG1655/pMP72的菌株。[0278]依照一般性方法部分中公开的操作来进行gtf5618通过细菌表达的产生及其酶活性的测定。通过5618产生的葡聚糖的键分布和DPW示于表2中（参见下文的实施例6)。[0279]实施例5[0280]6七谓每2379(5￡〇10恥：10)的制备[0281]该实施例描述了制备以GI号662379标识于GENBANK中的唾液链球菌gtf酶的N末端截短形式(SEQIDN0:10，由SEQIDN0:9编码，在本文中称为"2379"）。[0282]使用经优化以与在大肠杆菌中进行蛋白质表达的密码子来合成编码gtf2379的核苷酸序列(DNA2.0，Inc·)。将编码gtf2379(SEQIDN0:10)的核酸产物（SEQIDN0:9)亚克隆到pJejipress404?中以产生标识为PMP65的质粒构建体。使用该质粒构建体来转化大肠杆菌MG1655(ATCC?47076)细胞以产生标识为MG1655/pMP65的菌株。[0283]依照一般性方法部分中公开的操作来进行gtf2379通过细菌表达的产生及其酶活性的测定。通过2379产生的葡聚糖的键分布和DPW示于表2中（参见下文的实施例6)。[0284]实施例6[0285]使用Gtf酶的不溶性葡聚糖聚合物的产生[0286]该实施例描述了使用上述实施例中制备的gtf酶来合成葡聚糖聚合物。[0287]依照一般性方法部分中公开的操作用上述各种gtf酶来进行反应。简言之，制备包含蔗糖（50g/L)、磷酸钾缓冲液(pH6.5，50mM)和gtf酶(按体积计剂2.5%提取物）的gtf反应溶液。在22-25°C下24-30小时之后，通过离心收获不溶性葡聚糖聚合物产物，用水洗涤三次，用乙醇洗涤一次并在50°C下干燥24-30小时。[0288]依照一般性方法部分中公开的操作，通过13CNMR来确定来自每个反应的不溶性葡聚糖聚合物产物中的糖苷键，并通过SEC确定每种产物的DPW。这些分析的结果示于表2中。[0289]^2[0290]通过多种Gtf酶产生的葡聚糖的键和DPff[0292]因此，鉴定能够产生具有异质糖苷键分布(α-1，3和1，6键)和至少约1000的DPW的不溶性葡聚糖聚合物的gtf酶。这些酶可用于产生适于衍生成下游产物例如葡聚糖醚的不溶性聚α-l，3-1，6-葡聚糖，如下文实施例7中证明的。[0293]实施例7[0294]羧甲基聚α-1，3-1，6-葡聚糖的制备[0295]该实施例描述了制备葡聚糖醚衍生物，羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖。[0296]首先如实施例6中但稍作修改来制备聚α-l，3-1，6-葡聚糖。具体地，在3L蒸馏水中制备包含蔗糖(300g)、磷酸钾缓冲液(pH5.5;8.178)#丨酶4297提取物(9〇1^)的葡聚糖聚合反应溶液。在22-25°C下24-30小时之后，通过离心收获不溶性葡聚糖聚合物产物，过滤，用水洗涤三次，用乙醇洗涤两次并在50°C下干燥24-30小时。获得约12g聚α-1，3_1，6-葡聚糖。[0297]如一般性方法中所述来确定不溶性葡聚糖聚合物的DP0P糖苷键。该聚合物具有10,540的0??以及31%€[-1，3和67%€[-1，6的键分布。其具有1100000的重均分子量(]\〇。使用该固体葡聚糖如下制备羧甲基聚α-l，3-1，6-葡聚糖。[0298]将lg聚α-1，3_1，6-葡聚糖添加至在50-mL容量圆底烧瓶中的20mL异丙醇中，所述圆底烧瓶安装有用于监测温度的热电偶和与循环浴连接的冷凝器以及磁力搅拌棒。向制备物逐滴添加氢氧化钠(40mL的15%溶液），然后在热板上将其加热至25°C。将制备物搅拌1小时，之后使温度升高至55°C。然后，添加单氯乙酸钠(0.3g)以提供反应，将反应在55°C下保持3小时，之后用冰乙酸中和。然后，通过真空过滤收集固体材料并用乙醇(70%)洗涤四次，在20-25°C下这空干燥并通过NMR分析以确定该固体的取代度(DoS)。经鉴定该固体为DoS为0.464的羧甲基聚€(-1，3-1，6-葡聚糖钠(表3中的样品10)。[0299]表3提供了另外的羧甲基聚α-l，3-1，6_葡聚糖样品的DoS测量结果的列表，所述羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖使用与上述方法类似的方法但如该表中所示经一定修改来制备。表3中所列的每个反应均使用1为1100000的聚α-1，3_1，6-葡聚糖作为底物。表3中的结果表明，通过改变醚化反应的试剂量和时间，可改变产物DoS。[0300]整[0301]由聚α-l，3-1，6-葡聚糖制备的羧甲基聚α-l，3-1.6-葡聚糖钠的样品[0303]3试剂是指单氯乙酸钠。[0304]b作为每摩尔聚α-l，3-1，6_葡聚糖的试剂摩尔数(第二列）或每摩尔聚a-Ι，3_1，6_葡聚糖的NaOH摩尔数计算的摩尔比(第三列）。[0305]由此，得以制备并分离羧甲基聚α-l，3-1，6_葡聚糖的葡聚糖醚衍生物。[0306]实施例8[0307]使用羧甲基聚α-l，3-1，6-葡聚糖的粘度调节[0308]该实施例描述了羧甲基聚α-l，3-1，6_葡聚糖对水性组合物的粘度的作用。[0309]如实施例72中所述制备多种駿甲基聚α-l，3_1，6_匍聚糖纳样品（1A-1D)。为了制备这些样品各自的〇.6wt%溶液，向DI水（17g)添加0.102g羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖钠。然后，使用台式涡旋仪在l〇〇〇rpm下混合每种制备物，直至固体完全溶解。[0310]为了确定羧甲基聚α-1，3-1，6-葡聚糖的粘度，使用装备有控温（20°C)循环浴的BrookfieldIII+粘度计来使溶解葡聚糖醚样品的每种溶液经受多种剪切速率。使用从0.lrpm增加至232.5rpm的梯度程序来增加剪切速率，并且每20秒使剪切速率增加4.55(1/s)。该实验在14.72(l/s)下的结果列于表4中。[0311]產|[0312]羧甲基聚α-l，3-1，6-葡聚糖溶液在不同剪切速率下的粘度[0314]3在14.72印111下的粘度。[0315]^17.04rpm下的粘度。[0316]总结于表4中的结果表明，低浓度(0.6wt%)的羧甲基聚α-l，3-1，6_葡聚糖当溶解在DI水中时可增加DI水的粘度。此外，表4中的结果表明，相对低的DoS(例如，低至0.464，参照表3和4中的样品1D)足以使羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖成为水性组合物的有效粘度调节剂。[0317]值得注意的是，用羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖获得的粘度水平显著高于使用羧甲基右旋糖酐(参照比较例10)和羧甲基α-1，3-葡聚糖(参照比较例12)观察到的粘度水平(将表4与表6和8进行比较）。这不管是具有与上述羧甲基聚α-l，3_1，6_葡聚糖样品之DoS水平类似的DoS水平的这些其它试剂(将表3与表5和7进行比较)还是使用相同浓度(0.6wt%)的这些其它试剂。[0318]实施例9(比较)[0319]由固体右旋糖酐制备羧甲基右旋糖酐[0320]该实施例描述了制备用于实施例10的羧甲基右旋糖酐。[0321]将0.5g固体右旋糖酐(Mw=750000)添加至在50-mL容量圆底烧瓶中的10mL异丙醇中，所述圆底烧瓶安装有用于监测温度的热电偶和与循环浴连接的冷凝器以及磁力搅拌棒。向制备物逐滴添加氢氧化钠(〇.9mL的15%溶液），然后在热板上将其加热至25°C。将制备物搅拌1小时，之后使温度升高至55°C。然后，添加单氯乙酸钠(0.15g)以提供反应，将反应在55°C下保持3小时，之后用冰乙酸中和。然后，通过真空过滤收集固体材料并用乙醇(70%)洗涤四次，在20-25°C下这空干燥并通过NMR分析以确定该固体的取代度(DoS)。经鉴定该固体为羧甲基右旋糖酐钠。[0322]使用Mw不同的右旋糖酐来制备另外的羧甲基右旋糖酐钠。该实施例中制备的羧甲基右旋糖酐钠的DoS值提供于表5中。[0323]^5[0324]由固体右旋糖酐制备的羧甲基右旋糖酐钠的样品[0326]3试剂是指单氯乙酸钠。[0327]b作为每摩尔右旋糖酐的试剂摩尔数(第三列）或每摩尔右旋糖酐的NaOH摩尔数计算的摩尔比(第四列）。[0328]在实施例10中测试这些羧甲基右旋糖酐样品的粘度调节作用。[0329]实施例10(比较)[0330]剪切速率对羧甲基右旋糖酐粘度的影响[0331]该实施例描述了包含实施例9中制备之羧甲基右旋糖酐样品的溶液的粘度以及剪切速率对其粘度的影响。[0332]如实施例9中所述制备多种羧甲基右旋糖酐钠样品（2A和2B)。为了制备这些样品各自的0.6wt%溶液，向DI水（17g)添加0.102g羧甲基右旋糖酐钠。然后，使用台式涡旋仪在lOOOrpm下混合每种制备物，直至固体完全溶解。[0333]为了确定羧甲基右旋糖酐的粘度，使用装备有控温（20°C)循环浴的BrookfieldIII+粘度计来使溶解右旋糖酐醚样品的每种溶液经受多种剪切速率。使用从O.lrpm增加至232.5rpm的梯度程序来增加剪切速率，并且每20秒使剪切速率增加4.55(Ι/s)。该实验在14.72(l/s)下的结果列于表6中。[0334]^6[0335]羧甲基右旋糖酐溶液在不同剪切速率下的粘度[0337]总结于表6中的结果显示，羧甲基右旋糖酐的0.6wt%溶液具有约2.5_7cPs的粘度。这些粘度水平显著低于在水中使用相同低浓度(〇.6wt%)的羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖样品所观察到的粘度水平。特别地，表4显示羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖溶液具有约48-2010cPs的粘度。更值得注意的是羧甲基右旋糖酐样品2Β在粘度调节方面的这一差异，其可能具有比羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖的分子量更高的分子量。尽管具有更高的分子量，但是羧甲基右旋糖酐样品2Β显示出比羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖显著更低的粘度调节效果。[0338]因此，据信聚α-1，3_1，6-葡聚糖比羧甲基右旋糖酐具有更大的粘度调节效果。[0339]实施例11(比较)[0340]羧甲基聚α-l，3-葡聚糖的制备[0341]该实施例描述了制备用于实施例12的羧甲基聚α-1，3_葡聚糖。[0342]如美国专利申请公开2013/0244288中所述使用gtfj酶制备来制备聚α-1，3_葡聚糖，所述专利申请公开全文以引用方式并入本文。[0343]将150g聚α-1，3_葡聚糖(Mw=192000)添加至在500-mL容量圆底烧瓶中的3000mL异丙醇中，所述圆底烧瓶安装有用于监测温度的热电偶和与循环浴连接的冷凝器以及磁力搅拌棒。向制备物逐滴添加氢氧化钠(600mL的15%溶液），然后在热板上将其加热至25°C。将制备物搅拌1小时，之后使温度升高至55°C。然后，添加单氯乙酸钠（以提供反应，将反应在55°C下保持3小时，之后用90%冰乙酸中和。然后，通过真空过滤收集固体材料并用乙醇(70%)洗涤四次，在20-25°C下这空干燥并通过NMR分析以确定该固体的取代度(DoS)。经鉴定该固体为羧甲基聚α-l，3-葡聚糖钠。[0344]使用与上述方法类似的方法但如表7中所示经一定修改来制备另外的羧甲基聚α_1，3-葡聚糖钠。表7中所列的每个反应均使用^为192000的聚α-1，3_葡聚糖作为底物。[0345]^7[0346]羧甲基聚α-l，3-葡聚糖的样品[0348]3试剂是指单氯乙酸钠。[0349]b作为每摩尔聚α-l，3-葡聚糖的试剂摩尔数(第二列)或每摩尔聚α-l，3-葡聚糖的NaOH摩尔数计算的摩尔比（第三列）。[0350]在实施例12中测试这些羧甲基聚α-1，3_葡聚糖样品的粘度调节作用。[0351]实施例12(比较)[0352]使用羧甲基聚α-l，3-葡聚糖的粘度调节[0353]该实施例描述了羧甲基聚α-1，3_葡聚糖对水性组合物的粘度的作用。[0354]如实施例11中所述制备不同的羧甲基聚α-1，3_葡聚糖钠样品（C1A和C1B)。为了制备这些样品各自的〇.6wt%溶液，向DI水（17g)添加0.102g羧甲基聚α-1，3-葡聚糖钠。然后，使用台式涡旋仪在l〇〇〇rpm下混合每种制备物，直至固体完全溶解。[0355]为了确定羧甲基聚α-1，3_葡聚糖在不同剪切速率下的粘度，使用装备有控温(20°C)之循环浴的BrookfieldΙΙΙ+粘度计来使溶解葡聚糖醚样品的每种溶液经受不同的剪切速率。使用从O.lrpm增加至232.5rpm的梯度程序来增加剪切速率，并且每20秒使剪切速率增加4.55(l/s)。该实验在14.72(l/s)下的结果列于表8中。[0356]塾[0357]羧甲基聚α-l，3-葡聚糖溶液的粘度[0359]总结于表8中的结果显示，羧甲基聚α-1，3_葡聚糖的0.6wt%溶液具有约6_22cPs的粘度。这些粘度水平低于在水中使用相同低浓度(〇.6wt%)的羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖样品所观察到的粘度水平。特别地，表4显示羧甲基聚α-1，3_1，6-葡聚糖溶液具有约48-2010cPs的粘度。[0360]因此，据信聚α-1，3_1，6-葡聚糖比羧甲基聚α-1，3_葡聚糖具有更大的粘度调节作用。[0361]实施例13(比较)[0362]使用羧甲基纤维素的粘度调节[0363]该实施例描述了羧甲基纤维素(CMC)对水性组合物的粘度的作用。[0364]将从〇11?〇]^他1：1'；[1:;[011&116&11:11(0&11丨8(30)获得的0\^样品（034和0313，表9)溶解于DI水中以制备每种样品的0.6wt%溶液。[0365]为了确定CMC在不同剪切速率下的粘度，使用装备有控温（20°C)循环浴的BrookfieIdII1+粘度计来使溶解CMC样品的每种溶液经受不同的剪切速率。使用从0.lrpm增加至232.5rpm的梯度程序来增加剪切速率，并且每20秒使剪切速率增加4.55(1/s)。该实验在14.72(l/s)下的结果列于表9中。[0366]塾[0367]CMC溶液的粘度[0369]因此，CMC(0.6wt%)可增加水性溶液的粘度。然而，据信该增加粘度的能力低于羧甲基聚α-l，3_1，6_匍聚糖增加粘度的能力。[0370]因此，据信聚α-1，3_1，6-葡聚糖可比CMC具有更大的粘度调节作用。【主权项】1.一种反应溶液，包含水、蔗糖和合成聚α-1，3-1，6-葡聚糖的葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDΝ0:8或SEQIDNO:10至少90%相同的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的反应溶液，其中：(i)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，3键，(ii)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，6键，并且(iii)所述葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。3.根据权利要求2所述的反应溶液，其中所述葡聚糖的至少60%糖苷键是α_1，6键。4.根据权利要求2所述的反应溶液，其中所述葡聚糖的DPW为至少10000。5.根据权利要求1所述的反应溶液，其中所述葡糖基转移酶包含SEQIDNO:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10的氨基酸序列。6.-种用于制备聚α-1，3-1，6-葡聚糖的方法，包括：a)使至少水、蔗糖和合成聚α-1，3-1，6_葡聚糖的葡糖基转移酶接触，其中所述葡糖基转移酶包含与SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8或SEQIDN0:10至少90%相同的氨基酸序列，由此产生聚α-1，3-1，6_葡聚糖；以及b)任选地，分离步骤(a)中产生的所述聚α-1，3-1，6-葡聚糖。7.根据权利要求6所述的方法，其中：(i)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，3键，(ii)所述葡聚糖的至少30%糖苷键是α-1，6键，并且(iii)所述葡聚糖具有至少1000的重均聚合度(DPW)。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述葡聚糖的至少60%糖苷键是α-1，6键。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述葡聚糖的DPW为至少10000。【文档编号】C12P19/04GK105980413SQ201580008474【公开日】2016年9月28日【申请日】2015年2月11日【发明人】J.L.保林,M.S.佩恩,T.J.丹尼斯,Y.布伦,R.纳姆比亚,T.肖尔斯【申请人】纳幕尔杜邦公司