芳基酞嗪化合物及其制备方法和用图

芳基酞嗪化合物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明属药物合成领域，涉及通式(Ⅰ)的芳基酞嗪化合物及其可药用盐，尤其涉及一种含哌嗪或吡咯烷或氮杂环丁烷的芳基酞嗪化合物，及其制备方法和在医学上的应用。本发明的化合物通过体外Hedgehog信号通路中的靶基因Gli抑制活性测试，结果显示，所述的化合物具有良好的Hedgehog信号通路抑制活性，可进一步制备新的抗肿瘤药物。
【专利说明】
芳基酞嗪化合物及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明属药物合成领域，涉及新型芳基酞嗪化合物，制备方法和应用。具体涉及一 种含哌嗪或吡咯烷或氮杂环丁烷的芳基酞嗪化合物，及其制备方法和在医学上的应用。
【背景技术】
[0002] 研究报道，恶性肿瘤已成为严重危害人民生命健康的常见病。据不完全统计，全世 界每年约有2000万的新发病例；我国每年的新发病例约为160-200万，死亡130万。由于 肿瘤早期具有转移的能力，临床诊断原发肿瘤中约50%的患者已产生远位转移，肿瘤细胞 増长快、易变异，从而产生多药耐药，导致化疗失败，据有关统计，其中90%以上与肿瘤细胞 的多药耐药相关，目前临床上应用的抗肿瘤药物远不能满足治疗的要求。
[0003] 分子靶向抗肿瘤药物的研究已成为当前抗肿瘤药物研究领域的主要潮流和趋势。 近年来，靶向Hedgeh 〇g(Hh)信号通路的抗肿瘤药物成为该领域的研究热点。研究显示， Hedgeh〇g(Hh)信号通路在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，与人类约1/3的肿瘤有着 密切的联系。异常激活Hh信号传导，将导致髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、 膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生。Hedgehog是在研究果蝇的发育过程中发现的一种分节 性基因，Hh信号主要是通过跨膜蛋白Ptch和Smo介导向胞内传递。无Hh信号时，Ptch与 Smo结合，抑制Smo的作用，导致其下游转录因子G1 i转录活性的抑制。当有Hh信号时，Hh 与Ptch结合，解除Ptch对Smo的抑制作用，恢复活性的Smo通过级次信号转递，激活Gli 转录活性，启动Hh靶基因的转录和表达。
[0004] 目前在靶向Hh信号通路的抗肿瘤药物研究中，已有多个药物上市或进入临床研 究，如美国Genentech公司的Vismodegid (⑶C-0449)于2012年已被FDA批准上市，用于皮 肤癌的治疗。另外，Erismodegid(LDE225,瑞士 Norvatis 公司）、LEQ_506(瑞士 Norvatis 公司）和LY-2940680 (美国Lilly公司）等正在进行临床II期及III期，临床研究显示对 皮肤癌、脑癌、髓母细胞瘤和其他实体瘤疗效显著。
[0005] 有研究报道了 Hedgehog信号通路抑制剂在治疗对酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼产 生耐药的非小细胞肺癌（CML)患者过程中，不仅能减少CML细胞的数量，还能减少耐伊马替 尼CML细胞的生长；然而目前已有抗肿瘤药物耐药性的问题仍是肿瘤临床治疗面临的重要 难题。鉴于此，本申请的发明人拟提供新的靶向Hh信号通路的抗肿瘤药物，其将对改善我 国肿瘤患者的经济负担，提高肿瘤临床治疗效果，具有重要的意义。

【发明内容】
：
[0006] 本发明的目的是提供具有良好Hedgehog信号通路抑制作用的新型芳基酞嗪化合 物，具体涉及一种含哌嗪或吡咯烷或氮杂环丁烷的芳基酞嗪化合物及其可药用盐。
[0007] 本发明的另一目的是提供上述芳基酞嗪化合物的制备方法，尤其涉及制备含哌嗪 或吡咯烷或氮杂环丁烷的芳基酞嗪化合物的方法。
[0008] 本发明的芳基酞嗪化合物具有下述通式（I )的结构及其可药用盐：
[0014] R2= H或甲基或甲氧基或氯或羟甲基或羟甲基酯或硝基或氰基或乙酰基
[0015] 本发明中，优选的化合物具有下述化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25 的结构及其可药用盐：
[0016]




[0022] 本发明所述的化合物进行了体外Hedgehog信号通路抑制活性测试试验，结果显 示，所述的化合物具有良好的Hedgehog信号通路抑制活性，可进一步制备新型的Hedgehog 信号通路抑制剂，以及制备用于诊断和治疗与Hedgehog通路有关的病变，包括但不限于肿 瘤形成、癌症、瘤形成和非恶性过度增殖性疾病的药物。
[0023] 本发明通过体外Hedgehog信号通路抑制活性测试试验，结果显示，本发明的化合 物显示出较好的Hedgehog信号通路抑制活性，其中化合物6、7、8、12、14、15、16、18、19、20、 23和25对于Hh信号通路中的靶基因Gli抑制活性IC 5。值小于15nM对于Hh信号通路中 的革巴基因Gli抑制活性IC5。值小于10nM。所述的化合物可以制备Hedgehog信号通路抑制 剂，以及制备用于诊断和治疗与Hedgehog通路有关的病变，包括但不限于肿瘤形成、癌症、 瘤形成和非恶性过度增殖性疾病的药物。
[0024] 本发明的化合物还用于制备包含治疗有效量的所述的化合物及其药用盐的药物 组合物。
[0025] 本发明中，所采用的药效学试验方法，是本领域技术人员所熟知的方法；
[0026] 本发明中，所采用的NIH3T3细胞和双荧光素酶报告检测试剂盒是本领域技术人 员可通过市购的途径所获得的。
[0027] 本发明的含哌嗪或吡咯烷或氮杂环丁烷的芳基酞嗪化合物及其可药用盐尤其可 制备Hedgehog信号通路抑制剂及用于诊断和治疗与Hedgehog通路有关的病变，包括但不 限于肿瘤形成、癌症、瘤形成和非恶性过度增殖性疾病。鉴于异常激活Hh信号传导，将导致 髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生；因此，本 发明所述的恶性肿瘤包括Hedgehog信号通路异常激活所致的相关肿瘤，包括髓母细胞瘤、 乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、皮肤癌。
【具体实施方式】：
[0028] 实施例1 :制备化合物1，N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）哌 啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0029] 1)合成N-(l_苄基-哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0030] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（546mg，2.63mmol)，超 干 THF(lOmL)，EDC'HCl (1. 0g, 5. 26mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP(65mg, 0? 53mmol)， 氩气置换反应体系的空气，滴加化合物N-苄基-3-胺基哌啶（500mg，2.63mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全， 加入饱和碳酸氢钠溶液（150mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl) 洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品9. 8g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1洗 脱，得纯化的产品：4. 3g (白色固体）产率：56. 0 %。虫NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) : 4 NMR(400MHz，CDCl3)S7.52(dd，J = 8.3,5.5Hz，lH)，7.41(dd，J = 8.9,2.5Hz，lH)，7.32- 7. 20 (m, 6H), 6. 50 (br, 1H), 4. 29 (s, 1H), 3. 55 - 3. 38 (m, 2H), 2. 64 (s, 2H), 2. 45 (s, 1H), 2. 15 (s, 1H), 1. 80 (s, 1H), 1. 79-1. 59 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :381. 2.
[0031] 2)合成N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0032] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(l-苄基-哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺（360mg，0? 95mmol)，Et0H(20mL)，置换氩气三次，加入Pd/C(100mg)，置换氢气三次， 常温搅拌18h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，滤除Pd/C，直接减压蒸去溶剂，得产品 0. 24g(白色固体），产率：87%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0033] 3)合成N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0034] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（0? 24g, 0? 83mmol)，DMF(lOmL)，K2C03(573mg, 4. 15mmol)，1，4-二氯酞嗪 (200mg，0. 99mmol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各25mL，水层EA(20mLX3)萃取，合 并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品680mg， 硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1~1:1洗脱，得纯化的产品270mg(白色固体）产率： 72.0%〇1HMMR(400MHz，CDCl 3)S(ppm):8.21(dd，J = 6.3,3.1Hz，lH)，8.09(dd，J =6. 4, 3. 1Hz, 1H), 7. 96 - 7. 88 (m, 2H), 7. 59 (dd, J = 8. 4, 5. 4Hz, 1H), 7. 38 (dd, J =8. 9, 2. 5Hz, 1H) , 7. 29 (dd, J = 8. 0, 2. 4Hz, 1H) , 4. 45 (s, 1H) , 3. 83 (dd, J = 13. 0, 2. 8Hz, 1H), 3. 66 - 3. 50 (m, 3H), 2. 10 - 1. 94 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :453. 1.
[0035] 4)合成N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺
[0036] 将N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (lOOmg, 0. 22mmol)和1-甲基-P比挫-5-硼酸频哪醇酯（92mg, 0. 44mmol)溶于间二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（117mg,0.44mmol)，氟化钾（26mg,0.44mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（25mg，0. 022mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有机层，饱和 氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品260mg，制备薄层纯化，EA展开得 纯化的产品 32mg(淡黄色固体），产率 16% ? 4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) :8. 14(d，J = 8. 1Hz, 1H), 8. 03 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 89 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 82 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 68 -7. 56 (m, 2H), 7. 37 (dd, J = 8. 9, 2. 4Hz, 1H), 7. 30 - 7. 26 (m, 1H), 6. 56 (d, J = 1. 9Hz, 1H), 4. 80 (br, 2H), 4. 48 (s, 1H), 3. 96 (s, 3H), 3. 75 - 3. 56 (m, 3H), 2. 11 - 2. 00 (m, 2H) ,1.91-1. 78 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 499. 3.。
[0037] 实施例2 :制备化合物2, N-甲基-N- (1- (4- (1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基） 哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0038] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-哌啶-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0039] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 5g, 7. lmmol)，超干 THF(25mL)，EDC'HCl (1. 8g, 9. 3mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP (120mg, 0? 93mmol)，氩气 置换反应体系的空气，滴加化合物N-叔丁氧羰基-3-胺甲基哌啶（1.0g，4.7mm〇l)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，加 入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗 涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品4. 3g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1洗脱，得纯 化的产物 2. 6g(白色固体）产率：84. 2%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :405. 3.
[0040] 2)合成N-甲基-N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸盐
[0041] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N- (1-叔丁氧羰基-哌啶-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（l.〇g，2. 5mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（1.5g，12. 5mmol)，常温搅拌5h， TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，直接蒸干溶剂，得产物1. lg(白色固体）产率：99%。无 需纯化，直接用于下一步反应。
[0042] 3)合成N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0043] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺三氟甲磺酸盐（1. lg，2. 5mmol)，DMF (25mL)，K2C03 (1. 8g，12. 5mmol)，1，4-二氯 酞嗪（600mg，3. Ommol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA =1:1)检测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA(50mLX3)萃 取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品 1. 6g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 4:1~2:1洗脱，得纯化的产物0. 4g(白色固体）产 率：34.0 %。4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 8.21 (dd，J = 6.3,3. 1Hz，1H)，8.09 (dd，J =6. 4, 3. 1Hz, 1H), 7. 96 - 7. 88 (m, 2H), 7. 59 (dd, J = 8. 4, 5. 4Hz, 1H), 7. 38 (dd, J = 8. 9, 2. 5Hz, 1H), 7. 29 (dd, J = 8. 0, 2. 4Hz, 1H), 5. 03 (s, 1H), 3. 96-3. 89 (m, 2H), 3. 38 -3. 17 (m, 1H), 3. 09 (d, J = 14. 4Hz, 2H), 2. 76 (s, 3H), 2. 12-1. 90 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :467. 1.
[0044] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）哌 啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0045] 将N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺（300mg, 0? 64mmol)和1-甲基-吡唑_5_硼酸频哪醇酯（270mg, 1. 3mmol)溶于间二甲 苯（8mL)中，再加入磷酸钾三水合物（350mg, 1. 3mmol)，氟化钾（76mg, 1. 3mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（74mg，0. 064mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯 化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品460mg，制备薄层纯化，EA展开得纯 化的产物：12311^(淡黄色固体），产率37.5%.111匪1?(4001抱，0)(：13)5化口111) :8.05(^ = 7. 5Hz, 1H), 7. 92 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 82 (dd, J = 7. 8, 4. 8Hz, 2H), 7. 65 (d, J = 1. 6Hz, 1H) ,7. 41-7. 30 (m, 3H), 6. 59 (dd, J = 7. 7, 1. 7Hz, 1H), 5. 08 (s, 1H), 4. 13 - 3. 77 (m, 5H), 3. 44 -3. 24 (m, 1H), 3. 11 (d, J = 11. 8Hz, 1H), 2. 78 (s, 2H), 2. 15-2. 03 (m, 2H), L 93-1. 70 (m, 2H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :513. 3.。
[0046] 实施例3 :制备化合物3, 2-(4-(1-甲基吡唑-5-基）酞嗪-1-基）-6-(2-三氟甲 基_4_氣-苯甲酰基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烧
[0047] 1)合成2-叔丁氧羰基-6-(2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3] 庚烷
[0048] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 5g, 7. lmmol)，超干 THF(25mL)，EDC'HCl (1. 8g, 9. 3mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP (120mg, 0? 93mmol)，氩气 置换反应体系的空气，滴加化合物ll(1.0g，7.4mm〇l)的超干THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩 气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA= 1:3)检测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)， DCM(50mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去 溶剂，得粗品2. 3g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 1:1~1:3洗脱，得纯化的产物：1. 4g(白色 固体）产率：50.8%。HPLC-MS(ESI+):[M+H] + :389.2.
[0049] 2)合成2-(2_三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2,6_二氮杂螺[3,3]庚烷三氟甲磺 酸盐
[0050] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-叔丁氧羰基-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰 基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷（1. 0g，2. 6mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（1. 5g，12. 5mmol)， 常温搅拌5h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，直接蒸干溶剂，得产物1. lg(白色固体）产 率：99%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0051 ] 3)合成2- (4-氯酞嗪-1-基）-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮杂 螺[3, 3]庚烷
[0052] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-(2_三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮杂螺 [3, 3]庚烷三氟甲磺酸盐（1. lg，2. 6mmol)，DMF(25mL)，K2C03(1. 8g，12. 5mmol)，1，4-二氯酞 嗪（600mg，3. Ommol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 1:1) 检测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA (50mLX 3)萃取，合并有机层， 饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品1.6g，硅胶柱层析纯 化，PE:EA = 1:1~1:3洗脱，得纯化的产物0. 28g(白色固体）产率：23. 8%。HPLC-MS(ES 1+) : [M+H] + :451. 1.
[0053] 4)合成2-(4-(1-甲基吡唑-5-基）酞嗪-1-基）-6-(2-三氟甲基-4-氟-苯甲 酰基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷
[0054] 将2- (4-氯酞嗪-1-基）-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮杂螺 [3, 3]庚烷（200mg，0? 44mmol)和1-甲基-吡唑-5-硼酸频哪醇酯（270mg，1. 3mmol)溶 于间二甲苯（8mL)中，再加入磷酸钾三水合物（350mg, 1. 3mmol)，氟化钾（76mg, 1. 3mmol)， 用氩气置换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（74mg，0.064mmol)，微 波反应（biotage microwave reacter，l2〇 °C ，High absorption)福射 3h， TLC(EA) 检测反应，显示反应完全，后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯 (3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤， 得粗品460mg，制备薄层纯化，DCM:MeOH = 15:1展开得纯化的产物23mg(淡黄色固 体），产率 3. 5 % NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 99 (d，J = 8. 1Hz，1H)，7. 90 (d，J = 8. 0Hz, 1H), 7. 81 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 62 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 46 - 7. 40 (m, 2H), 7. 36 (dd, J =8. 9, 2. 4Hz, 1H), 7. 32 - 7. 28 (m, 1H), 6. 52 (d, J = 1. 9Hz, 1H), 4. 75 (s, 2H), 4. 68 (s, 2H), 4 .46 (s, 2H), 4. 13 (s, 2H), 3. 98 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 497. 3. 〇
[0055] 实施例4 :制备化合物4, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮杂环 丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0056] 1)合成N-(l_叔丁氧羰基-氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0057] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（900mg, 4. 4mmol)，超干 THF(lOmL)，EDC，HC1 (1. lg, 5. 8mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP(71mg, 0? 58mmol)，氩气置 换反应体系的空气，滴加化合物1-叔丁氧羰基-氮杂环丁 -3-胺（500mg，2. 9mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，加 入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗 涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品9. 8g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 1:1洗脱，得纯 化的产物 1. lg(白色固体）产率：69. 0%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :363. 2.
[0058] 2)合成N-(氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟醋酸盐
[0059] 50mL的茄形瓶中，依次加入N- (1-叔丁氧羰基-氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（1. 〇g，2. 76mmol)，DCM(20mL)，三氟醋酸（1. 6g，18. 8mmol)，常温搅拌5h， TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物1. lg(白色固体）产率：99%。 无需纯化，直接用于下一步反应。
[0060] 3)合成N-(l_ (4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺
[0061 ] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺三氟醋酸盐（〇? 76g，1. lmmol)，DMF (20mL)，K2C03 (760mg，5. 5mmol)，1，4-二氯酞嗪 (440mg，2. 2mmol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 2:1)检 测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA (20mLX 3)萃取，合并有机层，饱 和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品1.4g，硅胶柱层析纯化， PE:EA = 2:1~1:2洗脱，得纯化的产物：0? 27g(白色固体）产率：57.8%。[M+H] + :425. 1.
[0062] 4)合成N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮杂环丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0063] 将N-(l_ (4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (lOOmg, 0. 24mmol)和1_甲基-P比挫_5_棚酸频哪醇酯（92mg, 0. 44mmol)溶于间二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（117mg,0.44mmol)，氟化钾（26mg,0.44mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（25mg，0. 022mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC (EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯 化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品160mg，制备薄层纯化，EA展开三次得 纯化的产物：22mg(淡黄色固体），产率 10. 6% ? 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :7. 94(dt, J =8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 84 - 7. 65 (m, 2H), 7. 62 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 - 7. 39 (m, 1H), 7. 38 -7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m ,2H), 3. 21-3. 17(m, 2H)HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :471. 3.。
[0064] 实施例5 :制备化合物5, N-甲基-N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基） 氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0065] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0066] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 7g, 8. lmmol)，超干 THF(20mL)，EDC.HC1 (2. lg, 10. 8mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP(132mg, 1. 08mmol)， 氩气置换反应体系的空气，滴加化合物（1-叔丁氧羰基-氮杂环丁烷-3_基）_甲胺 (1.0g，5.4mm 〇l)的超干THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA =1:1)检测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有机层， 饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品2. 4g，硅胶柱层析纯 化，PE:EA = 1:1洗脱，得纯化的产物：1. lg(白色固体）产率：36. 1%。HPLC-MS(ESI+) : [M +H] + :377. 3.
[0067] 2)合成N-甲基-N-(氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟醋酸 盐
[0068] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-氮杂环丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（1. 0g，2. 66mmol)，DCM(20mL)，三氟醋酸 (1.68，18.8臟〇1)，常温搅拌511，11(：(?￡54=1 :1)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产 物1. lg(白色固体）产率：99%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0069] 3)合成N-甲基-N-(l-(4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲 基苯甲酰胺
[0070] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基 苯甲酰胺三氟醋酸盐（L 7g，4. 7mmol)，DMF(20mL)，K2C03(3. 3g，23. 5mmol)，1，4-二氯酞嗪 (1. 2g，5. 6mmol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)检 测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA (20mLX 3)萃取，合并有机层，饱 和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品1.4g，硅胶柱层析纯化， PE:EA = 2:1~1:2洗脱，得纯化的产物0? 27g(白色固体）产率：13. 1%。HPLC-MS(ESI+) :[M+H] + :439. 1.
[0071] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮杂环丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0072] 将N-甲基-N- (1- (4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺（160mg, 0. 36mmol)和1-甲基-P比唑-5-硼酸频哪醇酯（114mg, 0. 55mmol)溶于间二甲 苯（3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（200mg, 0. 73mmol)，氟化钾（48mg, 0. 73mmol)，用氩气 置换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（46mg, 0. 04mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯 化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品160mg，制备薄层纯化，DCM:Me0H展开 得纯化的产物：16mg(淡黄色固体），产率6. 0% ? 4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) :7. 96(dt，J =8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 74 - 7. 55 (m, 2H), 7. 52 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 37 - 7. 28 (m, 1H), 7. 26 - 7. 12 (m, 2H), 6. 44 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m ,2H), 3. 21-3. 17 (m, 2H), 2. 83 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :485. 3. 〇
[0073] 实施例6 :制备化合物6, N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0074] 1)合成N-(l_叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0075] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（2. 0g, 9. 6mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HC1(4. 4g, 19. 2mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP(235mg, 1. 92mmol)，氩气 置换反应体系的空气，滴加化合物1-叔丁氧羰基-3-胺基吡咯（1. 79g，9. 6mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，加 入饱和碳酸氢钠溶液（150mL)，DCM(100mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（lOOmLXl) 洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品3. 3g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1洗脱，得 纯化的产物 2. 3g(白色固体）产率：63. 6%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :377. 2.
[0076] 2)合成N-(吡咯-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸盐
[0077] 50mL的茄形瓶中，依次加入N- (1 -叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟 甲基苯甲酰胺（2. 2g，5. 84mmol)，DCM(50mL)，三氟醋酸（1.6g，18. 8mmol)，常温搅拌 5h， TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物2. 2g(白色固体）产率：99%。 无需纯化，直接用于下一步反应。
[0078] 3)合成N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0079] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺三氟甲磺酸盐（2. 2g，5. 9mmol)，DMF(20mL)，K2C03(4. 0g，29mmol)，1，4-二氯酞嗪 (1. 4g，7. 08mmol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)检 测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA (50mLX 3)萃取，合并有机层，饱 和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品3. 6g，硅胶柱层析纯化， PE:EA = 4:1~1:1~1:2洗脱，得纯化的产物2. 3g(白色固体）产率：88. 9%。HPLC-MS( ESI+) : [M+H] + :439. 9.
[0080] 4)合成N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺
[0081] 将N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg, 0. 46mmol)和I-甲基-P比挫-5_棚酸频哪醇酯（189mg, 0? 92mmol)溶于间二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（245mg，0.92mmol)，氟化钾（54mg，0.92mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（58mg，0. 05mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完 全，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯化 钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品260mg，制备薄层纯化，EA展开三次 得纯化的产物35mg(淡黄色固体），产率13.8%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.24- 8. 02 (m, 1H), 8. 01 - 7. 92 (m, 1H), 7. 86 - 7. 64 (m, 2H), 7. 55 - 7. 46 (m, 2H), 7. 41-7. 29 (m, 5 H), 5. 47 (br, 1H), 4. 20-3. 74 (m, 5H), 2. 45 (s, 3H), 2. 26 - 1. 91 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :485. 3. 〇
[0082] 实施例7 :制备化合物7，1，4_二氯酞嗪N-甲基-N-(l-(4_(4-甲基-苯基）_酞 嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0083] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0084] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 2g, 5. 8mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HCl (1. 9g, 9. 6mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP (140mg, 0? 96mmol)，氩气 置换反应体系的空气，滴加化合物1-叔丁氧羰基-3-胺甲基吡咯（1.0g，4.8mm〇l)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应完全，加 入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗 涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品2. lg，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1洗脱，得纯 化的产物 1. 〇g(白色固体）产率：44. 2%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :391. 2.
[0085] 2)合成N-甲基-N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸盐
[0086] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N- (1-叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（0. 9g，2. 3mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（0. 9g，9. 4mmol)，常温搅拌5h， TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物：1.0g(白色固体）产率： 99%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0087] 3)合成N-甲基-N_(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0088] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺三氟甲磺酸盐 a〇g，2.2mmol)，DMF(20mL)，K2C03(1.8g，12.8mmol)，l，4-二氯酞 嗪（0. 61g，3. lmmol)，氩气置换体系里的空气，氩气环境下80°C搅拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水层EA(50mLX3)萃取，合 并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品1.3g， 硅胶柱层析纯化，PE:EA= 1:1~1:2洗脱，得纯化的产物0. 78g(白色固体）产率： 78. 3 %。4匪1?(4001抱，〇)(：13)5&口111) :8.22 - 8.05(111，211)，7.91-7.78(111，211)，7.46- 7. 26 (m, 3H), 5. 43 (br, 1H), 4. 25 - 3. 63 (m, 5H), 2. 81 (s, 3H), 2. 43 - 2. 07 (m, 2H). HPLC-MS (E SI+) : [M+H] + :453. 1.
[0089] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(4-甲基-苯基）-酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0090] 将N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（200mg,0.44mmol)和4-甲基苯硼酸频哪醇酯（120mg,0.88mmol)溶于间二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（235mg，0.88mmol)，氟化钾（52mg，0.88mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（51mg，0. 044mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有机层，饱和 氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品250mg，制备薄层纯化，EA展开三 次得纯化的产物33mg(淡黄色固体），产率14.7%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.28- 8. 06 (m, 1H), 8. 05 - 7. 94 (m, 1H), 7. 85 - 7. 68 (m, 2H), 7. 65 - 7. 49 (m, 2H), 7. 43-7. 33 (m, 5H) ,5. 47 (br, 1H), 4. 20-3. 74 (m, 5H), 2. 83 (s, 3H), 2. 45 (s, 3H), 2. 26 - 1. 91 (m, 2H). HPLC-MS (E SI+) : [M+H] + :509. 3.。
[0091] 实施例8 :制备化合物8，1，4-二氯酞嗪N-甲基-N- (1- (4- (4-羟甲基-苯基）-酞 嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0092] 将N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（200mg，0.44mmol)和4-轻甲基苯硼酸频哪醇酯（208mg，1.37mmol)溶于间二氧 六环（3mL)中，再加入碳酸铯（446mg，1.37mmol)，氟化钾（80mg，1.37mmol)，用氩气置换 反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（51mg，0. 044mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完全， 后处理，将溶剂二氧六环旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有机层，饱和 氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品320mg，制备薄层纯化，EA展开三次 得纯化的产物：27mg(淡黄色固体），产率11.7%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.28-8. 08 (m, 1H), 7. 96 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 84 - 7. 69 (m, 2H), 7. 69 - 7. 57 (m, 2H) ,7.52-7. 28 (m, 5H), 5. 45 (br, 1H), 4. 77 (s, 2H), 4. 30 - 3. 68 (m, 5H), 2. 83 (s, 2H), 2. 21 - 1. 87 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 525. 3.。
[0093] 实施例9 :制备化合物9,3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨 基-1-(4-氟-2-三氟甲基-苯甲酰基）-吡咯
[0094] 1)合成3- (N- (4-氯-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡咯
[0095] 10mL微波管中，将1，4-二氯酞嗪（800mg, 4. 5mmol)和1-叔丁氧羰基-3-氨基P比 略（800mg,4.0mmol)溶于间氮甲基吡略烧酮（5mL)中，再加入三乙胺（1.8mL，12.9mmol)， 用氩气置换反应瓶中的空气，微波反应（biotage microwave reacter, 180 °C, High absorption)福射2h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应，显示反应完全，后处理，反应液加入到 50mL7jC，用乙酸乙酯（3X50mL)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（3X30mL)洗涤，无水硫酸钠 干燥。过滤，得粗品1. 9g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1~1:1洗脱，得纯化的产物27mg(淡 黄色固体），产率 11. 7%. 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 16(d, J = 7. 5Hz, 1H), 7. 93(d，J =7. 5Hz, 1H), 7. 90 - 7. 81 (m, 2H), 5. 59 (s, 1H), 4. 90-4. 86 (m, 1H), 3. 83 (br, 1H), 3. 55 -3. 38 (m, 3H), 2. 33 (br, 1H), 2. 09 (br, 1H), L 43 (s, 9H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 525. 1.
[0096] 2)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡 咯
[0097] 将3-(N-(4-氯-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡略（900mg, 2. 3mmol) 和1-甲基-吡唑-5-硼酸频哪醇酯（973mg, 4. 7mmol)溶于二甲苯（3mL)中，再加入磷 酸钾三水合物（1.25g，4. 7mmol)，氟化钾（273mg，4. 7mmol)，用氩气置换反应瓶中的空 气，再加入催化量的四三苯基磷钯（266mg，0.23mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射2h，TLC(EA)检测反应，显示反应完全，后处理， 将溶剂二氧六环旋干，加入50mL水，用乙酸乙酯（2X50mL)萃取，合并有机层，饱和氯化钠 (lX50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品1. 7g，硅胶柱层析纯化，PE:EA = 2:1~ 1:1~1:3洗脱得纯化的产物700mg(淡黄色固体），产率77. 2% NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 8. 04 (s, 1H), 7. 94 (d, J = 7. 0Hz, 1H), 7. 86 - 7. 72 (m, 2H), 7. 60 (s, 1H), 6. 51 (s, 1H ),5. 94 (br, 1H), 5. 07 - 4. 93 (m, 1H), 3. 97 (s, 3H), 3. 93 - 3. 74 (m, 1H), 3. 66 - 3. 35 (m, 3H), 2 .38 (br, 1H) ,2.11 (br, 1H), L 43 (s, 9H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 395. 3.
[0098] 3)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯三氟甲磺酸 盐
[0099] 50mL的茄形瓶中，依次加入3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨 基-1-叔丁氧羰基-吡咯（70011^，1.77臟〇1)，0011(501^)，三氟醋酸（1.68，18.8臟〇1)，常温 搅拌5h，TLC(PE:EA = 1:1)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物：800mg(白色固体） 产率：99%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0100] 4)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯
[0101] 化合物3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯三氟甲磺酸 盐（800mg，1. 7mmol)，溶解于碳酸钠的饱和溶液（100mL)，40%氢氧化钠水溶液调pH至10 左右，正丁醇萃取（4X 50mL)，蒸干的粗品900mg，直接用于下一步反应。
[0102] 5)合成3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-1-(4-氟-2-三 氟甲基-苯甲酰基）-吡咯
[0103] 50mL的前形瓶中，依次加入4-氟-2-三氟甲基苯硼酸（400mg, 1. 92mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HCl (600mg, 3. 13mmol)，常温下搅拌 0? 5h，加入 DMAP(140mg, 0? 33mmol)， 氩气置换反应体系的空气，滴加化合物3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）） 氨基-吡咯（300mg，1. Ommol)的超干THF (5mL)溶液。滴加完毕，氩气环境下常温搅 拌16h，TLC(EA)检测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取， 合并有机层，饱和食盐水（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，得粗品 560mg，制备薄层纯化，EA展开三次，得纯化的产物27mg(淡黄色固体），产率5. 6% . 4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 94 (dt，J = 8. 9, 5. 9Hz，2H)，7. 84 - 7. 65 (m，2H)，7. 62 (t，J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 - 7. 39 (m, 1H), 7. 38 - 7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 19 -4. 96 (m, 1H), 4. 09 - 4. 01 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 86 - 3. 72 (m, 1H), 3. 40 - 3. 30 (m, 1H), 2-? 54-2. 47(m, 1H), 2. 31 - 2. 13(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :485. 3.。
[0104] 实施例l〇 :制备化合物10, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基）氮杂 环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0105] 将N-(l_(4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg, 0. 47mmo1)和I-甲基-P比唑-5_棚酸频哪醇酯（148mg, 0? 55mmol)溶于间二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（200mg, 0? 73mmol)，氟化钾（48mg, 0? 73mmol)，用氩气置 换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（46mg，0. 04mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反应，显不反应完 全，后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱 和氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品160mg，制备薄层纯化，DCM:Me0H =20:1展开得纯化的产物：22mg(淡黄色固体），产率9. 95% NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 7. 94 (dt, J = 8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 84 - 7. 65 (m, 2H), 7. 62 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 -7. 39 (m, 1H), 7. 38 - 7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 ( s, 3H), 3. 84-3. 79(m, 2H), 3. 21-3. 17(m, 2H)HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :471. 3.。
[0106] 实施例11 :制备化合物11，N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基） 氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0107] 将原料N-甲基-N-(l-(4-氯酞嗪-1-基）氮杂环丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲 基苯甲酰胺（160mg, 0. 36mmol)和1-甲基-吡唑-5-硼酸频哪醇酯（114mg, 0. 55mmol)溶于 间二甲苯（3mL)中，再加入磷酸钾三水合物（200mg, 0? 73mmol)，氟化钾（48mg, 0? 73mmol)， 用氩气置换反应瓶中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（46mg，0.04mmol)，微波反 应（biotage microwave reacter, 120 °C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)检测反 应，显示反应完全，后处理，将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃 取，合并有机层，饱和氯化钠（2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品160mg，制 备薄层纯化，DCM:MeOH = 15:1展开得纯化的产物18mg(淡黄色固体），产率10. 2% . 4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 96 (dt，J = 8. 9, 5. 9Hz，2H)，7. 74 - 7. 55 (m，2H)，7. 52 (t，J = 2. 1Hz, 1H), 7. 37 - 7. 28 (m, 1H), 7. 26 - 7. 12 (m, 2H), 6. 44 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m, 2H), 3. 21-3. 17 (m, 2H), 2. 83 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+ ):[M+H] + :485. 3. 〇
[0108] 实施例12 :制备化合物12, N-(l-(4-(2-氯-苯基）-酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0109] 将N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg，0.46mmol)和2-氯-苯硼酸频哪醇酯（146mg，0.91mmol)溶于间二甲苯（3mL)中， 再加入磷酸钾三水合物（245mg，0. 92mmol)，氟化钾（54mg，0. 92mmol)，用氩气置换反应瓶 中的空气，再加入催化量的四三苯基磷钯（58mg, 0. 05mmol)，微波反应（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射3h，TLC(EA)检测反应，显示反应完全，后处理， 将溶剂二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有机层，饱和氯化钠 (2X10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，得粗品260mg，制备薄层纯化，EA展开三次得纯 化的产物：36mg (淡黄色固体），产率 15. 2 % 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) : 8. 09 (d, J =7. 9Hz, 1H), 7. 92 (d, J = 6. 7Hz, 1H), 7. 70 - 7. 59 (m, 2H), 7. 58 - 7. 49 (m, 1H), 7. 49 - 7. 39 (m, 2H), 7. 39 - 7. 15 (m, 3H), 7. 05 (t, J = 7. 0Hz, 1H), 4. 81 (s, 1H), 4. 32 - 4. 09 (m, 2H), 3. 87-3. 77(m, 1H), 2. 30-2. 12(m, 2H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :515. 1.。
[0110] 实施例13 :制备化合物13, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0111] 同化合物14的合成，加入1-甲基-吡挫-4-硼酸频哪醇酯（189mg, 0. 92mmol)。
[0112] 产品：33mg(淡黄色固体）产率：15. 1 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 88 (d, J = 6. 5Hz, 1H) , 8. 30 - 8. 26 (m, 1H) , 8. 22 (s, 1H) , 8. 19 - 8. 14 (m, 1H),7.91 - 7.84(m,3H),7.69(dd,J = 9.2,2.1Hz,lH),7.63-7. 55 (m, 2H), 4. 55 (d, J = 6. 4Hz, 1H) , 4. 16 (dd, J = 11. 0, 5. 9Hz, 1H) , 4. 05-3. 92 (m, 4H), 3. 85 (dd, J = 13. 4, 9. 2Hz, 1H), 3. 74 (dd, J = 11.0,3. 5Hz, 1H), 2. 24 (dd, J = 12. 7, 5. 5Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :485. 3.。
[0113] 实施例14 :制备化合物14, N-(l-(4-(4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0114] 同化合物12的合成，加入4-甲基-苯硼酸频哪醇酯（200mg, 0. 92mmol)。
[0115] 产品：27mg(淡黄色固体）产率：12. 1 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 30 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 90 - 7. 78 (m, 3H), 7. 69 (dd, J =9. 3, 2. 2Hz, 1H) , 7. 65 - 7. 58 (m, 2H) , 7. 49 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 34 (d, J = 8. OHz, 2H), 4. 55 (s, 1H), 4. 19 (dd, J = 11.0,5. 9Hz, 1H), 4. 08 - 3. 98 (m, 1H), 3. 88 (dd, J =13. 3, 9. 4Hz, 1H), 3. 78 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 39 (s, 3H), 2. 25 (dd, J = 12. 7, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :495. 3.。
[0116] 实施例15 :制备化合物15, N-(l-(4-(4-氯苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0117] 同化合物12的合成，加入4-氯-苯硼酸频哪醇酯（220mg，0? 92mmol)。
[0118] 产品：31mg(淡黄色固体）产率：13. 4 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 4Hz, 1H), 8. 34 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 90-7. 78 (m, 3H), 7. 73 -7. 56 (m, 7H), 4. 56 (s, 1H), 4. 22 (dd, J = 11. 0, 5. 9Hz, 1H), 4. 08 - 3. 98 (m, 1H), 3. 91 (dd, J =13. 3, 9. 4Hz, 1H) ,3.81 (dd, J = 11.1,3. 4Hz, 1H) , 2 . 25 (dd, J = 12. 7, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :515. 1.。
[0119] 实施例16 :制备化合物16, N-(l-(4-(4-羟甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0120] 同化合物12的合成，加入4-氯-苯硼酸频哪醇酯（220mg，0. 92mmol)。
[0121] 产品：37mg(淡黄色固体）产率：16. 1 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 31 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 89-7. 80 (m, 3H), 7. 6 9 (dd, J = 9. 4, 2. 0Hz, 1H), 7. 64 - 7. 53 (m, 4H), 7. 48 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 5. 30 (t, J =5. 7Hz, 1H), 4. 62 - 4. 53 (m, 3H), 4. 19 (dd, J = 11. 1, 5. 9Hz, 1H), 4. 04 (dd, J = 18. 1, 7. 5Hz, 1H), 3. 89 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 79 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =12. 9, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :511. 3.。
[0122] 实施例17 :制备化合物17, N-(l_ (4-苯基酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟一2-三氟甲基苯甲酰胺
[0123] 同化合物12的合成，加入苯硼酸频哪醇酯（188mg, 0. 92mmol)。
[0124] 产品：31mg(淡黄色固体）产率：14. 3 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 89 (d, J = 6. 3Hz, 1H), 8. 33 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 90-7. 79 (m, 3H), 7.69(dd,J = 9. 4, 2. 0Hz, 1H) , 7. 64 - 7. 47 (m, 7H), 4. 56 (s, 1H), 4. 21 (dd, J = 11. 0, 6. 0Hz, 1H), 4. 05 (dd, J = 18. 0, 7. 8Hz, 1H), 3. 90 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 80 (dd, J =11. 1,3.4Hz, 1H), 2.26 (dd，J = 13. 4,5.6Hz, 1H), 2. 10-2. 01 (m，lH).HPLC-MS(ESI+):[M +H] + :481. 3.。
[0125] 实施例18 :制备化合物18, N-(l-(4_(4-硝基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0126] 同化合物12的合成，加入对硝基苯硼酸频哪醇酯（229mg，0? 92mmol)。
[0127] 产品：17mg(淡黄色固体）产率：7. 2 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 90 (d, J = 6. 3Hz, 1H), 8. 39-8. 34 (m, 2H), 7. 96 - 7. 82 (m, 4H), 7. 69 (d, J = 9. 2Hz, 1H), 7. 62-7. 51 (m, 4H), 4. 56 (s, 1H), 4. 23 (dd, J = 10. 9, 5. 8Hz, 1H), 4. 07 (dd, J = 18. 0, 7. 8Hz, 1H), 3. 93 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 83 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =13. 4, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :526. 3.。
[0128] 实施例19 :制备化合物19, N-(l-(4_(4-氰基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0129] 同化合物12的合成，加入对硝基苯硼酸频哪醇酯（210mg, 0. 92mmol)。
[0130] 产品：22mg(淡黄色固体）产率：9. 7 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 34 (d, J = 8. 6Hz, 1H), 8. 01 (d, J = 8. 3Hz, 2H), 7. 92 -7. 76 (m, 5H), 7. 69 (dd, J = 9. 3, 2. 2Hz, 1H), 7. 64 - 7. 54 (m, 2H), 4. 56 (s, 1H), 4. 22 (dd, J =11. 2, 5. 9Hz, 1H), 4. 06 (dd, J = 18. 5, 7. 4Hz, 1H), 3. 96 - 3. 89 (m, 1H), 3. 82 (dd, J = 11. 2, 3. 4Hz, 1H), 2. 26 (dd, J = 13. 0, 5. 3Hz, 1H), 2. 13 - 2. 07 (m, 1H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :506. 3. 〇
[0131] 实施例20 :制备化合物20, N-(l-(4-(吡啶-4-基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（24)
[0132] 同化合物12的合成，加入R比啶-3-硼酸频哪醇酯（189mg, 0. 92mmol)。
[0133] 产品：28mg(淡黄色固体）产率：12. 9 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 1Hz, 1H), 8. 74 (d, J = 4. 6Hz, 2H), 8. 34 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 91-7. 82 (m, 3H), 7. 70-7. 55 (m, 5H), 4. 56 (s, 1H), 4. 23 (dd, J = 10. 8, 5. 8Hz, 1H), 4. 06 (dd, J = 18. 5, 7. 4Hz, 1H), 3. 92 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 82 (dd, J = 11. 2, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =13. 0, 5. 3Hz, 1H), 2. 13 - 2. 07(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :482. 3.。
[0134] 实施例21 :制备化合物21，R-N-(l-(4-(4-乙酰氧基代甲基苯基）酞嗪-1-基） 吡咯烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0135] 50mL三颈瓶中加入R-N-(l-(4-(4-羟甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（500mg，0. 98mmol)，加入超干THF(lOmL)溶解，加 入K2C03(40 5mg，2. 93mmol)，氩气置换反应体系的空气，注射器加入醋酐（0. 3g，2. 93mmol)， 回流搅拌4h，TLC(EA)监测反应完全，减压下蒸干溶剂，残余物加入乙酸乙酯、水各20mL， 分液，水层EA(20mLX2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mLXl)洗涤，无水硫酸钠干燥， 旋干溶剂，得粗品540mg，制备薄层层析纯化，EA展开，得纯化的产物410mg (淡黄色固体） 产率：75.7 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) S (ppm):8.90(d，J = 6.5Hz，lH)，8.34(d，J = 7. 9Hz, 1H), 7. 92 - 7. 81 (m, 3H), 7. 71 (dd, J = 9. 4, 2. 3Hz, 1H), 7. 65-7. 62 (m, 3H), 7. 56 (d, J =8. 2Hz, 2H), 5. 20 (s, 2H), 4. 58 (br, 1H), 4. 27-4. 20 (m, 1H), 4. 11 - 4. 03 (m, 1H), 3. 93-3. 89 (m, 1H), 3. 83-3. 80 (m, 1H), 2. 29-2. 26 (m, 1H), 2. 13 (s, 3H), 2. 10-2. 07 (m, 1H). HPLC-MS (ESI +) : [M+H] + :552. 8. 〇
[0136] 实施例22 :制备化合物22, S-N- (1- (4- (4-羟甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0137] 化合物16手性HPLC拆分得到S构型的化合物22, [ a ]D= 55. 7(25°C，C = lg/lOOmL)，ee = 95 %。
[0138] 4匪1?(4001抱，0150-(16)5&口111):9.56(8，111)，7.99-7.93(111，211)，7.84(8，111)，7. 77-7. 51 (m, 6H), 7. 44 - 7. 24 (m, 2H), 4. 63 (s, 1H), 4. 31 (s, 1H), 4. 17 - 3. 85 (m, 3H), 3. 61-3. 44 (m, 2H), 2. 41 (s, 2H), 2. 30 (br, 1H), 2. 16 (br, 1H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :511. 3. 〇
[0139] 实施例23 :制备化合物23, R-N- (1- (4- (4-羟甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0140] 化合物16手性HPLC拆分得到R构型的化合物23, [ a ]D= -54. 8(25°C，C = lg/lOOmL)，ee = 94%。
[0141] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.57(s, lH),7.84(s, 1H),7.81- 7. 71 (m, 1H), 7. 59 (s, 3H), 7. 34 - 7. 24 (m, 1H) ,7.13- 6. 92 (m, 3H) , 6. 58 (d, J = 7. 3Hz, 2H), 4. 76 (s, 1H), 4. 48 - 4. 29 (m, 1H), 4. 08 (dd, J = 10. 7, 5. 3Hz, 1H) ,3.76- 3. 64 (m, 1H)，3. 59-3. 57 (m, 1H)，2. 40 (s, 4H)，2. 30-2. 22 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :511. 3. 〇
[0142] 实施例24 :制备化合物24, S-N- (1- (4- (4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0143] 化合物14手性柱拆分得到S构型的化合物24, [ a ]D= 57. 6 (25 °C，C = lg/100mL)，ee = 95 %。
[0144] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.28(s,lH),7.86(s,lH),7.74- 7. 53 (m, 4H) , 7. 27 (d, J = 7. 1Hz, 3H) , 6. 98 (t, J = 7. 3Hz, 1H) , 6. 77 (d, J = 7. 2Hz, 2H) , 4. 69 (d, J = 11. 6Hz, 3H) , 4. 34 (d, J = 7. 1Hz, 1H) , 4. 07 (d, J = 5. 3Hz, 1H), 3. 76 - 3. 49 (m, 2H), 2. 81 - 2. 64 (m, 1H), 2. 31-2. 25 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :495. 3. 〇
[0145] 实施例25 :制备化合物25, R-N- (1- (4- (4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0146] 化合物14手性柱拆分得到R构型的化合物25, [ a ]D= -58. 4 (25 °C，C = lg/100mL)，ee = 95 %。
[0147] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.27(s, lH),7.85(s, 1H),7.76-7. 66 (m, 1H), 7. 59 (s, 3H), 7. 27 (d, J = 6. 8Hz, 3H), 6. 99 (t, J = 7. 4Hz, 1H), 6. 76 (d, J =7. 3Hz, 2H), 4. 70 (s, 3H) ,4.42 - 4. 29 (m, 1H), 4. 09-4. 05 (m, 1H), 3. 68 (d, J = 10. 0Hz, 1H), 3. 59 (d, J = 10. 8Hz, 1H), 2. 56-2. 50 (m, 1H), 2. 38 - 2. 23 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+ ):[M+H] + :495. 3. 〇
[0148] 实施例26 :体外Hedgehog信号通路抑制活性测试试验
[0149] 转录因子Gli的双荧光素酶报告基因实验：NIH3T3细胞接种至48孔板，24h后以 lipo2000 转染试剂转染 Gli-firefly luciferase reporter 和 TK-Renilla luciferase r印orter载体至NIH3T3细胞。转染36h后，将鼠源重组的SHH及待测药物加至48孔板（每 组设3复孔；n = 3)。常规培养36h后，细胞用PBS洗1次，以双荧光素酶报告检测试剂盒 (Promega公司）测定Gli-luciferase活性，作为判断Hh通路活性指标。
[0150] 结果表明（如表1所示），所述的化合物显示出较好的Hedgehog信号通路抑制活 性，其中化合物6、7、8、12、14、15、16、18、19、20、23和25对于Hh信号通路中的靶基因Gli 抑制活性IC 5。值小于15nM。所述的化合物可以进一步研制开发Hedgehog信号通路抑制剂， 作为新型抗肿瘤药物。
[0151] 表1是本发明化合物的Hedgehog信号通路的体外抑制活性结果。
[0152] 表 1
[0153]
b.
【主权项】
1. 芳基献嗦化合物，其特征在于，所述的化合物为含赃嗦或化咯烧或氮杂环下烧的芳 基献嗦化合物，具有通式（I)的结构及其可药用盐，一 Rz= H或甲基或甲氧基或氯或径甲基或径甲基醋或硝基或氯基或乙酷基。2. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物1，JL O3. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物2， 么〇.4. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物3，5. 根据权利要求 化合物为具有下述结构的化合物4，6. 根据权利要求 化合物为具有下述结构 的化合物5，7. 根据权利要求 化合物为具有下述结构 的化合物6，8. 根据权利要求 化合物为具有下述结构 的化合物7，9. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物8，10. 根据权利I t合物为具有下述结构14. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物13， 的化合物9，11. 根据权利I t合物为具有下述结构 的化合物10，12. 根据权利I t合物为具有下述结构 的化合物11，13. 根据权利I t合物为具有下述结构 的化合物12，15. 根据权利要^ i合物为具有下述结构19. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物18， 的化合物14，16. 根据权利要^ i合物为具有下述结构 的化合物15，17. 根据权利要^ i合物为具有下述结构 的化合物16，18. 根据权利要^ i合物为具有下述结构 的化合物17，20. 根据权利要 含物为具有下述结构的化合物19，21. 根据权利要 含物为具有下述结构 的化合物20，22. 根据权利要 含物为具有下述结构 的化合物21，23. 根据权利要 含物为具有下述结构 的化合物22，24. 根据权利要求1所述的芳基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物23，25. 根据权利要5 h合物为具有下述结构 的化合物24，26. 根据权利要5 h合物为具有下述结构 的化合物25， O27. 权利要求1的芳基献嗦化合物及其可药用盐在制备化dgehog信号通路抑制剂中的 用途。28. 权利要求1的芳基献嗦化合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的用途。29. 按权利要求28的用途，其特征在于，所述的恶性肿瘤是化dgehog信号通路异常激 活所致的相关肿瘤，包括髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀脫癌、卵巢癌、皮 肤癌。30. 包含治疗有效量的权利要求1所述的化合物及其药用盐的药物组合物。
【文档编号】A61K31/502GK105985319SQ201510070469
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月11日
【发明人】董肖椿, 陆秀宏, 王娟, 谭文福, 赵伟利, 鲍小龙, 彭元求, 杨君, 刘原
【申请人】复旦大学