苄基酞嗪化合物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明属药物合成领域，涉及通式(Ⅰ)的苄基酞嗪化合物，尤其涉及一种含哌啶或吡咯烷或氮杂环丁烷的苄基酞嗪化合物，及其制备方法和在医学上的应用。本发明的化合物通过体外Hedgehog信号通路中的靶基因Gli抑制活性测试，结果显示，所述的化合物具有良好的Hedgehog信号通路抑制活性，可进一步制备Hedgehog信号通路抑制剂和抗肿瘤药物。
【专利说明】
苄基酞嗪化合物及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明属药物合成领域，涉及新型苄基酞嗪化合物，制备方法和应用。具体涉及一 种含哌啶或吡咯烷或氮杂环丁烷的苄基酞嗪化合物及其可药用盐，及其制备方法和在医学 上的应用。
【背景技术】
[0002] 报道公开了恶性肿瘤已成为严重危害人民生命健康的常见病。据不完全统计，全 世界每年约有2000万的新发病例；我国每年的新发病例约为160-200万，死亡130万。由于 肿瘤早期具有转移的能力，研究显示临床诊断原发肿瘤中约50%的患者已产生远位转移， 肿瘤细胞増长快、易变异，从而产生多药耐药，导致化疗失败，据有关统计，其中90%以上与 肿瘤细胞的多药耐药相关，目前临床上应用的抗肿瘤药物远不能满足治疗的要求。
[0003] 分子靶向抗肿瘤药物的研究是当前抗肿瘤药物研究领域的主要潮流和趋势。近年 来，革E向Hedgehog(Hh)信号通路的抗肿瘤药物成为这一领域新的研究热点。Hedgehog(Hh) 信号通路在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，与人类约1/3的肿瘤有着密切的联系。 异常激活Hh信号传导，将导致髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢 癌等多种肿瘤的发生。Hedgehog是在研究果蝇的发育过程中发现的一种分节性基因，Hh信 号主要是通过跨膜蛋白Ptch和Smo介导向胞内传递。无Hh信号时，Ptch与Smo结合，抑制 Smo的作用，导致其下游转录因子G1 i转录活性的抑制。当有Hh信号时，Hh与Ptch结合， 解除Ptch对Smo的抑制作用，恢复活性的Smo通过级次信号转递，激活Gli转录活性，启 动Hh靶基因的转录和表达。
[0004] 目前在靶向Hh信号通路的抗肿瘤药物研究中，已有多个药物上市或进入临床研 究，如美国Genentech公司的Vismodegid (⑶C-0449)于2012年已被FDA批准上市，用于皮 肤癌的治疗。另外，Erismodegid(LDE225,瑞士 Norvatis 公司）、LEQ_506(瑞士 Norvatis 公司）和LY-2940680 (美国Lilly公司）等正在进行临床II期及III期，临床研究显示对 皮肤癌、脑癌、髓母细胞瘤和其他实体瘤疗效显著。
[0005] 有研究显示，更为有意义的是，Hedgehog信号通路抑制剂在治疗对酪氨酸激酶抑 制剂伊马替尼产生耐药的非小细胞肺癌（CML)患者过程中，不仅能减少CML细胞的数量，还 能减少耐伊马替尼CML细胞的生长。针对目前已有抗肿瘤药物耐药性的问题是肿瘤临床治 疗面临的重要难题，本发明的
【申请人】拟提供具有我国自主知识产权的靶向Hh信号通路的 抗肿瘤药物，其将对改善我国肿瘤患者的经济负担，提高肿瘤临床治疗效果，具有重要的意 义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供具有良好Hedgehog信号通路抑制作用的新型苄基酞嗪化合 物，具体涉及一种含哌啶或吡咯烷或氮杂环丁烷的苄基酞嗪化合物及其可药用盐。
[0007] 本发明的另一目的是提供上述苄基酞嗪化合物的制备方法，尤其涉及制备含哌啶 或吡咯烷或氮杂环丁烷的苄基酞嗪化合物。
[0008] 本发明的苄基酞嗪化合物具有下述通式（I )的结构：
[0012] R = 2-羟基-2-异丙基或3-羟基-3-异戊基或乙酰基或酯基
[0013] 本发明中，优选的化合物具有下述化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 的结构：
[0014]
[0017] 本发明中，以化合物9为例，该化合物的制备过程如下：
[0019] 本发明所述的化合物通过体外Hedgehog信号通路抑制活性测试，结果显示，所述 的化合物具有良好的Hedgehog信号通路抑制活性，可进一步研制开发为新型的Hedgehog 信号通路抑制剂和抗肿瘤药物。
[0020] 本发明对体外Hedgehog信号通路抑制活性测试，结果显示，本发明中化合物显示 出较好的Hedgehog信号通路抑制活性，其中化合物3、4、5、7、8、9、11和12对于Hh信号通 路中的革G基因Gli抑制活性IC 5。值小于10nM。本发明的化合物可以进一步制备Hedgehog 信号通路抑制剂。
[0021] 本发明中，所采用的药效学试验方法，是本领域技术人员所熟知的方法；
[0022] 本发明中，所采用的NIH3T3细胞和双荧光素酶报告检测试剂盒是本领域技术人 员可通过市购的途径所获得的。
[0023] 本发明的苄基酞嗪化合物可制备治疗肿瘤的药物组合物，其中包含治疗有效量的 所述的化合物及其药用盐。
[0024] 本发明的含哌啶或吡咯烷或氮杂环丁烷的苄基酞嗪化合物尤其可制备Hedgehog 信号通路抑制剂和抗恶性肿瘤的药物。鉴于异常激活Hh信号传导，将导致髓母细胞瘤、乳 腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生。因此，本发明所述的恶性 肿瘤包括Hedgehog信号通路异常激活所致的相关肿瘤，包括髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺 癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、皮肤癌。
【具体实施方式】
[0025] 实施例1 :制备化合物1，2-(6-(4-(4_苄基酞嗪-1-基）_3_氮杂环丁醇-基）_吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0026] 1)合成6-(N-苄基-3-氮杂环丁醇-基）烟酸乙酯
[0027] 在THF (10ml)中加入氢化钠（0. 13g，5. 4mmol)，冰浴冷却，分批加入1-苄基 氮杂环丁烧-3-醇（0. 73g, 4. 4mmol)，转移至常温搅拌0. 5h，加入原料6-氯烟酸乙 酯（1.0g，5.4mm〇l)，室温搅拌3h，TLC(PE:EA = 4:1)监测反应完全，反应液加入至碎 冰（20g)中，加入乙酸乙酯（20ml)，分液，水层EA(20mlX2)萃取，合并有机层，饱和氯 化钠（20ml XI)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得产物1.2g(无色油状物），产率： 84. 0 %.4匪1?(4001抱，〇)(：13)5 8.78 - 8.74(111，111)，8.15((1，了 = 8.7抱，111)，7.35- 7. 21 (m, 5H) , 6. 75 (d, J = 8. 7Hz, 1H) , 5. 32 (t, J = 5. 8Hz, 1H) , 4. 35 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 3. 88 - 3. 74 (m, 2H), 3. 69 (s, 2H), 3. 24 - 3. 13 (m, 2H), L 37 (t, J = 7. 1Hz, 3H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :296. 2.
[0028] 2)合成6-(N-H-3-氮杂环丁醇-基）烟酸乙酯
[0029] 在EtOH (50ml)中加入6-(N-苄基-3-氮杂环丁醇-基）烟酸乙酯 (6.0g, 19.2mmol)，置换入氩气，加入 Pd/C(10% Pd，0.6g)，置换入氢气，50°C 搅拌 12h， TLC (PE: EA = 4:1)监测反应完全，过滤滤除Pd/C，蒸去溶剂，得产物4. 2g (无色油状物），粗 品产率：98%，未经纯化直接用于下一步反应。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :223. 3.
[0030] 3)合成6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-3-氮杂环丁醇-基）烟酸乙酯
[0031] 在20ml微波管中依次加入6-(N-H-3-氮杂环丁醇-基）烟酸乙酯 (2. 0g，8. 92mmol)、5(1. 4g，7. 44mmol)、Et3N(l. 8g，17. 8mmol)，和 NMP(lOml)，密闭。微波 下（biotage microwave reacter, 180°C，High absorption)福射 lh，TLC(EA)监测反应 完全，将反应液倾至水（50ml)中，加入乙酸乙酯（50ml)，分液，水层EA(20mlX2)萃取， 合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得产物2. 2g (无 色油状物），产率：66 %。4 NMR(400MHz, CDC13) S 8. 82(d, J = 1. 9Hz, 1H), 8. 21(dd，J =8. 7Hz, 1. 9Hz, 1H) , 7. 93 - 7. 87 (m, 2H) , 7. 68 - 7. 65 (m, 2H) , 7. 33 (d, J = 7.5Hz，2H),7.18-7.25(m，2H)，7.17(q，J = 7.0Hz，lH)，6.84(d，J = 8.6Hz，lH)，5.61-5. 70 (m, 1H) , 3. 69 (s, 2H) , 4. 92 - 4. 96 (m, 2H) , 4. 58 - 4. 52 (m, 2H) , 4. 39 -4. 36 (m, 2H)，1. 38 (t, J = 7. 1Hz, 3H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 441. 2.
[0032] 4)合成2-(6-(4-(4-苄基酞嗪-1-基）-3-氮杂环丁醇-基）-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0033] THF(20ml)中加入6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-3_氮杂环丁醇-基）烟酸乙 酯（0.65g，1.5mm 〇l)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，3ml)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应5h〇 TLC(PE:EA= 1:3)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液20ml，EA(20ml X2)萃取，旋干。制 备TLC纯化，EA展开，DCM:MeOH= 10:1洗脱，得产物0. 21g(浅黄色固体）产率：32. 8%。 'H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 20 (d, J = 2. 4Hz, 1H), 8. 09 - 8. 02 (m, 1H), 7. 95 (dd, J =9. 4, 4. 6Hz, 2H) , 7. 80 - 7. 69 (m, 3H) , 7. 26 (d, J = 7. 4Hz, 2H), 7. 20 (t, J = 7. 5Hz, 2H), 7. 12 (d, J = 7. 3Hz, 1H), 6. 75 (d, J = 8. 6Hz, 1H), 5. 53 (m, 1H), 4. 97 (s, 1H ),4. 85 (m, 2H), 4. 49 (s, 2H), 4. 41 (m, 2H), 2. 73 (s, 1H), 1. 46 (s, 6H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :427. 3. 〇
[0034] 实施例2 :制备化合物2, 2-(6-(4-(4-苄基酞嗪-1-基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚 烷-2-基）-吡啶-3-基）-丙-2-醇
[0035] 1)合成化合物6-(6-叔丁氧羰基-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷-2-基）_烟酸乙酯
[0036] 10ml的微波管中，依次加入2-叔丁氧羰基_2,6_二氮杂-螺[3,3]庚烷 (282mg, 1. 4mmo 1)，6-氣-烟酸乙酯（220mg, 0? 76mmol)，三乙胺（464mg, 4. 6mmol)， 氮甲基吡咯烷酮（NMP，5ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180 °C，High absorption, lh，instrument purchased from biotage) 〇 TLC(PE:EA = 1:3)监测反应 完全，加入水（30ml)，EA(50mlX3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗NMP，无 水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 4:1)，得产物0. 21g(浅黄色固体） 产率：79. 5 %。虫 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 78(d, J = 1. 8Hz, 1H), 8. 01(dd, J = 8. 7, 2. 2Hz, 1H)，6. 22 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，4. 36 - 4. 30 (m, 2H)，4. 21 (s, 4H)，4. 12 (s, 4H)，1. 4 4 (s，9H)，1. 36 (t，J = 7. 1Hz，3H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 427. 3.
[0037] 2)合成6-(2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷-2-基）_烟酸乙酯三氟醋酸盐
[0038] 50ml的茄形瓶中，依次加入6- (6-叔丁氧羰基-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚 烷-2-基）-烟酸乙酯（200mg，0.58mmol)，DCM(lOml)，三氟醋酸（193mg，1.7mmol)，搅拌 4h，TLC(PE:EA = 1:3)检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物0. 18g(白色固体）产率： 85. 8%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0039] 3)合成6-(6-(4-苄基酞嗪-1-基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷-2-基）烟酸乙酯
[0040] 10ml的微波管中，依次加入化合物6-(2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷-2-基）-烟 酸乙酯三氟醋酸盐（200mg, 0? 76mmol)，13 (195mg, 0? 76mmol)，，三乙胺（383mg, 3. 8mmol)， 氮甲基吡咯烷酮（NMP，5ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180 °C，High absorption, lh，instrument purchased from biotage)。TLC(DCM:Me0H = 20:1)监测反 应完全，加入水（30ml)，EA (50ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗NMP，无 水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（DCM:Me0H = 20:1~15:1)，得产品0. 16g (浅黄 色固体）产率：45.2%。111-匪1?(4001抱，〇0(：13-(1 1)5(口口111)8.83((1，了 = 2.3抱，111)，8.16-8. 07 (m, 2H), 8. 05 - 7. 95 (m, 1H) ,1.11 - 7. 69 (m, H), 7. 31 (d, J = 7. 2Hz, 2H), 7. 26 (dd, J = 8. 5, 6. 4Hz, 2H), 7. 18 (t, J = 7. 3Hz, 1H), 6. 70 (d, J = 9. 0Hz, 1H), 4. 63 (s, 2H), 4. 34 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 4. 75 (s, 2H), 4. 68 (s, 2H), 4. 46 (s, 2H), 4. 13 (s, 2H), 1. 38 (t, J = 7. 1Hz, 3H). HP LC-MS(ESI+) : [M+H]+ : 466. 3.
[0041] 4)合成2-(6-(4-(4-苄基酞嗪-1-基）-2, 6-二氮杂螺[3, 3]庚烷-2-基）-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0042] THF(lOml)中加入化合物6-(6-(4_苄基酞嗪-1-基）-2,6_二氮杂螺[3,3]庚 烧-2-基）烟酸乙酯（0. 15g, 0. 32mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移 碘甲烷格式试剂（CH3MgI，1. 4mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴 加完后，常温反应5h。TLC(DCM:MeOH = 8:l)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml， EA(10mlX2)萃取，饱和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制 备TLC纯化，（DCM:MeOH = 8:1)展开，得产物0. 070g(淡黄色固体）产率：48. 4 %。 'H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 26 (d, J = 2. 36Hz, 1H), 8. 22-8. 18 (m, 2H), 7. 93 (t, J = 5. 48Hz, 2H), 7. 67 (dd, Ji= 8. 8Hz, J 2= 2. 56Hz, 1H), 7. 33 (d, J = 7. 04Hz, 2H), 7. 27 (t, J =7.36Hz, 2H), 7.18 (d，J = 7. 2Hz，lH), 6.87 (d，J = 8. 8Hz，lH), 4.96 (s，lH), 4.60 (s, 2 H)，4. 75 (s，2H)，4. 68 (s，2H)，4. 46 (s，2H)，4. 13 (s，2H)，1. 43 (s，6H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :427. 3. 〇
[0043] 实施例3 :制备化合物3,6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基）烟酸 乙酯
[0044] 1)合成6-(N-叔丁氧羰基吡咯-3-基）胺基-烟酸乙酯
[0045] 在l〇ml微波管中依次加入1-叔丁氧羰基-3-胺基吡略（1. 0g, 5. 4mmol)、6-氯烟 酸乙酯（1. 〇g，5. 4mmol)、三乙胺（1. 63g，16mmol)，NMP(5ml)，氩气流吹3分钟，密闭。微波 下（biotage microwave reacter，18CTC，High absorption)福射 2h，TLC(PE:EA= 1:1) 监测反应完全，将反应液倾至水（50ml)中，加入乙酸乙酯（50ml)，分液，水层EA(20mlX2) 萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得粗品500mg， 柱层析纯化（PE:EA = 4:1~2:1)洗脱，得产物1.2g(无色油状物）产率：66. 2%。4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 8. 76 (s，1H)，8. 00 (dd，J = 8. 8, 2. 2Hz，1H)，6. 37 (d，J = 8. 8Hz ,1H), 5. 01 (s, 1H), 4. 43 (br, 1H), 4. 33 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 3. 73 (m, 1H), 3. 59 - 3. 39 (m, 2H), 3. 27 (m, 1H), 2. 24 (m, 1H), 1. 92 (s, 1H), 1. 46 (s, 9H), 1. 36 (t, J = 7. 1Hz, 3H). HPLC-MS (ESI+) :[M+H] + :336. 2.
[0046] 2)合成6-(吡咯-3-基）胺基-烟酸乙酯三氟醋酸盐
[0047] 25ml的茄形瓶中，依次加入6-(N_叔丁氧羰基吡咯-3-基）胺基-烟酸乙酯 (900mg, 2. 68mmol)，DCM(lOml)，三氟醋酸（1527mg, 15. 4mmol)，搅拌 2h，TLC(PE:EA = 1:1) 检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产品920mg(白色固体）产率：97. 2%。无需纯化，直 接用于下一步反应。
[0048] 3)合成6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基）烟酸乙酯
[0049] 20ml的微波管中，依次加入6_(吡咯-3-基）胺基-烟酸乙酯三氟醋酸盐 (920mg, 2. 63mmol)，5 (820mg, 3. 22mmol)，，三乙胺（1328mg, 13. 2mmol)，氮甲基吡咯烷 酮（NMP, 10ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180°C，High absorption, lh， instrument purchased from biotage)。TLC(PE:EA = 1:1)监测反应完全，加入水 (50ml)，EA(50mlX3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗NMP，无水硫酸钠干 燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE: EA = 2:1~1:1~0:1)，得纯化的产物，乙醇重 结晶得淡黄色固体 〇? 16g，产率：45. 2 % 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) 8. 76 (d, J = 2. 1Hz, 1H), 8. 13 (dd, J = 6. 6, 2. 9Hz, 1H), 7. 97 (dd, J = 8. 8, 2. 2Hz, 1H), 7. 89 (dd, J = 6. 6, 2. 9Hz, 1H), 7. 73 - 7. 60 (m, 2H), 7. 24 (m, 5H), 6. 43 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 5. 48 (d, J = 6. 7Hz, 1H), 4. 64 (s, 1H), 4. 54 (s, 2H), 4. 37 - 4. 22 (m, 3H), 4. 16 - 4. 07 (m, 1H), 4. 00 - 3. 85 (m，2H)，2. 37-2. 42 (m，1H)，2. 24 - 2. 11 (m，1H)，1. 35 (t，J = 7. 1Hz，3H)。HPLC-MS (ESI+ ):[M+H] + :454. 3. 〇
[0050] 实施例4 :制备化合物4, 2- (6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0051] THF(lOml)中加入6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基）烟酸乙 酯（0. 15g，0.33mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应5h〇 TLC(DCM:MeOH= 10:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2)萃取，饱 和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，（DCM:MeOH =10:1)展开，得纯化的产物0. 070g(淡黄色固体），产率：48. 3%。虫NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) 8. 19 (s, 1H) , 8. 18 - 8. 09 (m, 1H) , 7. 94 - 7. 85 (m, 1H) , 7. 6 5 (dd, J = 5. 9, 3. 3Hz, 2H), 7. 58 (d, J = 6. 6Hz, 1H), 7. 23 (m, 5H), 6. 43 (d, J = 8. 6Hz, 1H), 4. 91 (s ,1H), 4. 56 (s, 3H), 4. 33 - 4. 22 (m, 1H), 4. 19 - 4. 04 (m, 1H), 4. 02 - 3. 88 (m, 1H) ,3.87- 3. 79 (m, 1H)，2. 46 - 2. 31 (m, 1H)，2. 17 - 2. 06 (m, 2H), 1. 55 (s, 6H)。HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :440. 3. 〇
[0052] 实施例5 :制备化合物5, 3- (6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基-吡 啶-3-基）_戊-3-醇
[0053] THF (10ml)中加入6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-吡咯-3-基）-胺基）烟酸 乙酯（0. 15g，0.33mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试 剂（C2H5MgI，3.0mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反 应5h。TLC(DCM:MeOH= 10:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2) 萃取，饱和氯化钠（20ml X 1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯 化，（DCM:MeOH= 10:1)展开，得纯化的产物0. 040g(淡黄色固体），产率：25. 9%。4 MMR(400MHz，DMS0)S(ppm)8.25(s，lH)，8.01(s，lH)，7.94(s，lH)，7.77(s，2H)，7.34-7. 09 (m, 5H), 6. 64 (s, 1H), 6. 42 (d, J = 9. 0Hz, 1H), 4. 42 (m, 4H), 4. 14 (s, 1H), 3. 99 (s, 1H), 3 .86 (s, 1H), 3. 68 (s, 1H), 2. 23 (s, 1H), 1. 96 (s, 1H), 1. 60 (s, 4H), 0. 62 (s, 6H) 〇HPLC-MS (ESI+) :[M+H] + :468. 3. 〇
[0054] 实施例6 :制备化合物6,6-(3-(4-苄基酞嗪-1-基）-胺基-吡咯-1-基）烟酸 乙酯
[0055] 1)合成1-苄基-4- (N-叔丁氧羰基吡咯-3-基）-胺基酞嗪
[0056] 20ml的微波管中，依次加入1-叔丁氧羰基-3-胺基吡略（1. 0g, 4. Ommol)， 卜苄基-4-氯酞嗪（1. 0g, 5. 4mmol)，三乙胺（1. 2mg, 12mmol)，氮甲基吡略烧酮 (NMP，10ml)，氩气流吹微波管 2min，密闭。微波反应（180°C，High absorption，2h， instrument purchased from biotage)。TLC (PE:EA = 1:1)监测反应完全，加入水 (50ml)，EA(50mlX3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗NMP，无水硫酸钠干 燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 4:1~2:1~1:1)，得纯化的产物0. 9g(浅黄 色固体），产率：55.6%。111-匪1?(4001抱，〇)(：13)5&口111) :7.92((1，了 = 7.4抱，111)，7.84- 7. 76 (m, 1H) , 7. 70 (m, 2H), 7. 42 - 7. 07 (m, 5H) , 5. 20 (d, J = 5. 9Hz, 1H) ,5.07- 4. 86 (m, 1H), 4. 55 (s, 2H), 3. 98 - 3. 79 (m, 1H), 3. 62 - 3. 34 (m, 3H), 2. 35 (m, 1H), 2. 12 (m, 1H) ,L 47 (s, 9H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 405. 3.
[0057] 2)合成1-苄基-4-(吡咯-3-基）-胺基酞嗪三氟醋酸盐
[0058] 25ml的茄形瓶中，依次加入1-苄基-4-(N-叔丁氧羰基吡咯-3-基）-胺基酞嗪 (800mg，1.98mmol)，DCM(lOml)，三氟醋酸（1527mg，9.9mmol)，搅拌 5h，TLC(PE:EA= 1:1) 检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产品720mg (白色固体），产率：99. 0%。无需纯化，直 接用于下一步反应。
[0059] 3)合成6-(3-(4-苄基酞嗪-1-基）_胺基-吡咯-1-基）烟酸乙酯
[0060] 20ml的微波管中，依次加入1-苄基_4_(吡咯-3-基）-胺基酞嗪三氟醋酸盐 (700mg, 1. 73mmol)，6_ 氯烟酸乙酯（390mg, 2. lmmol)，三乙胺（1. lg, 10. 5mmol)，氮甲基P比 咯烷酮（NMP，l〇ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180°C，High absorption，2h， instrument purchased from biotage)。TLC(PE:EA = 2:1)监测反应完全，加入水 (50ml)，EA(50mlX3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗NMP，无水硫酸钠干 燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 2:1~0:1)，得纯化的产物0.9g(浅黄色固 体），产率：55.6 %。4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm)8.79(d，J = 1.8Hz，lH)，7.97(dd，J =8. 9, 2. 2Hz, 1H), 7. 94 - 7. 89 (m, 1H), 7. 87 - 7. 77 (m, 1H), 7. 74 - 7. 63 (m, 2H), 7. 33-7. 22 (m, 5H), 6. 33 (d, J = 8. 9Hz, 1H), 5. 34 (s, 1H), 5. 10 (s, 1H), 4. 56 (s, 2H), 4. 32 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 4. 06-4. 02 (m, 1H), 3. 84 - 3. 60 (m, 3H), 2. 56-2. 51 (m, 1H), 2. 32-2. 24 (m, 1H), 1. 36 (t, J = 7. 1Hz, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+ : 454. 3. 〇
[0061 ] 实施例7 :制备化合物7, 2- (6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-胺基-吡咯-1-基）-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0062] THF (10ml)中加入6- (3- (4-苄基酞嗪-1-基）-胺基-吡咯-1-基）烟酸乙 酯（0. 15g，0.33mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，lml)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应 5h。TLC监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，乙酸乙酯（10ml X 2)萃取，饱和氯化钠 (20ml X 1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，（EA)展开3次，得纯化 的产物 〇.〇45g(淡黄色固体）产率：31.0%。虫 NMR(400MHz，DMS0) S (ppm)8.36(s，lH)，8 .13 (s, 1H), 7. 97 (s, 1H), 7. 78 (s, 2H), 7. 54 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 28-7. 18 (m, 5H), 6. 39 (d, J =8. 4Hz, 1H), 4. 88-4. 84 (m, 2H), 4. 45 (s, 2H), 4. 07-3. 98 (m, 1H), 3. 86-3. 86 (m, 1H), 3. 59 (s ，1H), 3. 46 (s, 2H), 2. 37 (s, 1H), 2. 19 (s, 1H), 1. 37 (s, 6H)。HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 440. 3.。
[0063] 实施例8 :制备化合物8, 3- (6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-胺基-吡咯-1-基）-吡 啶-3-基）_戊-3-醇
[0064] THF (10ml)中加入6- (3- (4-苄基酞嗪-1-基）-胺基-吡咯-1-基）烟酸乙 酯（0. 15g，0.33mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (C2H5MgI，3. 0mm〇l/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反 应5h。TLC(EA)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，乙酸乙酯（10mlX2)萃取， 饱和氯化钠（20ml X 1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，乙酸乙 酯展开3次，得纯化的产物0. 025g(淡黄色固体），产率：16. 2%。虫NMR(400MHz，DMS0) 8 (ppm) : 8. 37 (d, J = 9. 3Hz, 1H), 8. 04 (d, J = 2. 2Hz, 1H) ,8.02 - 7. 94 (m, 1H), 7. 78 (p, J =6. 9Hz, 2H), 7. 42 (dd, J = 8. 7, 2. 3Hz, 1H), 7. 36 (d, J = 5. 9Hz, 1H), 7. 28-7. 11 (m, 5H), 6 .39 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 4. 88-4. 81 (m, 1H), 4. 45 (s, 2H), 4. 42 (s, 1H), 4. 00-3. 83 (m, 1H), 3. 63-3. 51 (m, 1H), 3. 53 - 3. 43 (m, 2H), 2. . 47-2. 33 (m, 1H), 2. 25 - 2. 13 (m, 1H), 1. 63 (q, J = 7. 2Hz, 4H), 0. 63 (t, J = 7. 3Hz, 6H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 468. 3. 〇
[0065] 实施例9 :制备化合物9, 2- (6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0066] 1)合成6-(N-叔丁氧羰基哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯
[0067] 在20ml微波管中依次加入1-苄基-1-胺基哌啶（1. 0g, 5. Ommol)、6-氯烟酸乙酯 (0.928,5.0臟〇1)、三乙胺（1.528，15.0臟〇1)，匪？（101111)，氩气流吹3分钟，密闭。微波下 (biotage microwave reacter, 18CTC，High absorption)福射 2h，TLC(PE:EA = 1:1)监 测反应完全，将反应液倾至水（50ml)中，加入乙酸乙酯（50ml)，分液，水层EA (20ml X 2)萃 取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得粗品500mg，柱 层析纯化（PE:EA = 2:1~1:1)洗脱，得纯化的产物1.2g(无色油状物），产率：70. 7%。4 NMR(400MHz，CDCl3)S(ppm):8.73(d，J = 2.1Hz，lH)，7.96(dd，J = 8.8,2.2Hz，lH)，7.37-7. 20 (m, 5H), 6. 32 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 4. 88 (d, J = 7. 1Hz, 1H), 4. 32 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 3 .69 (s, 1H), 3. 52 (s, 2H), 2. 84 (d, J = 11. 7Hz, 2H), 2. 19 (t, J = 10. 7Hz, 2H), 2. 03 (d, J = 10. 7Hz, 2H)，1. 50-1. 50 (m, 2H)，1. 35 (t, J = 7. 1Hz, 3H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 340. 2.
[0068] 2)合成6-(哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯
[0069] 100ml的茄形瓶中，依次加入6-(N_叔丁氧羰基哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯 (1. 0g，2. 68mmol)，Pd/C(100mg)，乙醇（50ml)，兑入氢气，回流搅拌 12h，TLC(PE:EA = 1:1) 检测反应完全，滤除Pd/C，直接减压蒸去溶剂得产品：910mg(淡黄色油状物），粗品产率： 87. 6%。无需纯化，直接用于下一步反应。
[0070] 3)合成6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸乙酯
[0071] 20ml的微波管中，依次加入6-(哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯（910mg，2.50mmol)， 1-苄基-4-氯酞嗪（820mg，3. 22mmol)，，三乙胺（1328mg，13. 2mmol)，氮甲基吡咯烷 酮（NMP, 10ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180°C，High absorption, lh， instrument purchased from biotagehTLC(PE:EA= 1:1)监测反应完全，加入水（50ml)， 乙酸乙酯（50ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗NMP，无水硫酸钠干燥， 减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 2:1~1:1)，得纯化的0. 36g(浅黄色固体），产率： 53. 9%。4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) :8. 77(s，1H)，8. 03-7. 97(m，3H)，7. 81 - 7. 64(m，2H) ,7. 33-7. 16 (m, 5H), 6. 40 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 5. 13 (d, J = 7. 5Hz, 1H), 4. 61 (s, 2H), 4. 32 (q, J =7. 0Hz, 2H), 4. 03 (s, 1H), 3. 89 (d, J = 13. 0Hz, 2H), 3. 29 (t, J = 11. 9Hz, 2H), 2. 26 (d, J = 11. 7Hz, 2H)，1. 88-1. 80 (m, 2H)，1. 36 (t, J = 7. 1Hz, 3H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 468. 3.
[0072] 4)合成2-(6-(N_(4-苄基酞嗪-1-基）_哌啶-4-基）_胺基-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0073] THF (10ml)中加入6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸乙 酯（0. 15g，0.32mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应5h〇 TLC(DCM:MeOH= 10:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2)萃取，饱 和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，（DCM:Me0H =10:1)展开，得纯化的产物0. 036g(淡黄色固体），产率：24. 8%。虫NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 8. 14 (d, J = 5. 7Hz, 1H), 8. 02 (s, 2H), 7. 86 (s, 2H) ,7.57 - 7. 06 (m, 5H), 6. 47 (d, J =7. 8Hz, 2H), 4. 86 (s, 1H), 4. 54 (s, 2H), 3. 95 (s, 1H), 3. 75 (d, J = 10. 3Hz, 2H), 3. 12 (s, 2H) ,2. 06-1. 95 (m, 2H)，1. 88-1. 72 (m, 2H)，1. 35 (s, 6H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 454. 3.。
[0074] 实施例10 :制备化合物10,3-(6-(N_(4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）_胺 基-吡啶-3-基）_戊-3-醇
[0075] THF (10ml)中加入6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸 乙酯（0. 15g，0.32mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式 试剂（C2H5MgI，3.0mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后， 常温反应5h。TLC(DCM:MeOH = 10:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，乙 酸乙酯（10mlX2)萃取，饱和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋 干。制备TLC纯化，（DCM:MeOH = 15:1)展开，得纯化的产物0. 025g(淡黄色固体）， 产率：16.2 %。4 MMR(400MHz，DMS0)S(ppm):8.14(d，J = 7.7Hz，lH)，8.03(d，J =7. 8Hz, 1H), 7. 94 (s, 1H), 7. 91 - 7. 77 (m, 2H), 7. 33-7. 13 (m, 5H), 6. 44 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 6. 36 (d, J = 7. 5Hz, 1H), 4. 55 (s, 2H), 4. 38 (s, 1H), 4. 00-3. 93 (br, 1H), 3. 75 (d ,J = 12. 6Hz, 2H), 3. 11 (t, J = 11. 4Hz, 2H), 2. 08 (d, J = 10. 9Hz, 2H), L 88 (s, 1H), L 79 -1. 68 (m, 2H)，1. 63 (q, 7. 1Hz, 4H)，0? 64 (t, J = 7. 1Hz, 6H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 482. 3.。
[0076] 实施例11 :制备化合物11，1-苄基-4- (4- (N- (5-乙酰基吡啶-2-基）-胺基）哌 啶-2-基）酞嗪
[0077] THF (10ml)中加入6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸乙 酯（0. 45g，0. 96_〇1)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，0. 68ml)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反 应5h。TLC(DCM:MeOH = 20:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2)萃 取，饱和氯化钠（20ml X 1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，乙酸 乙酯展开三次，得纯化的产物〇. 〇26g(淡黄色固体），产率：6. 2%。4 NMR(400MHz，⑶Cl3) 8 (ppm) :8. 72 (d, J = 2. 2Hz, 1H), 8. 09 - 7. 94 (m, 3H), 7. 78-7, 69 (m, 2H) ,7.37-7. 15(m, 5H), 6. 44(d, J = 8. 8Hz, 1H), 5. 14 (d, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 62 (s, 2H), 4. 07 (s ，lH)，3.90(d，J = 13.4Hz, 2H), 3.31 (t，J = 11.3Hz, 2H), 2.51 (s，3H), 2.27 (d，J = 10. 9Hz，2H)，1. 92 - 1. 84 (m，2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 438. 3.。
[0078] 实施例12 :制备化合物12, 2-(6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-N-甲 基-胺基-吡啶-3-基）_丙-2-醇
[0079] 1)合成6-(N_叔丁氧羰基哌啶-4-基-N-甲基）胺基-烟酸乙酯
[0080] 在20ml微波管中依次加入1-叔丁氧羰基-4-胺甲基哌啶（1. 0g, 4. 7mmol)、 6_ 氯烟酸乙酯（0. 92g，5. Ommol)、三乙胺（1.52g，15. Ommol)，NMP(lOml)，氩气流吹 3 分 钟，密闭。微波下（biotage microwave reacter, 180 °C, High absorption)福射 2h， TLC(PE:EA = 2:1)监测反应完全，将反应液倾至水（50ml)中，加入乙酸乙酯（50ml)，分液， 水层EA(20mlX2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干 溶剂，得粗品500mg，柱层析纯化（PE:EA = 4:1~3:1)洗脱，得纯化的产物1. 2g(无色油 状物），产率：70. 2%。虫 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 79(d, J = 2. 3Hz, 1H), 8. 01(dd，J =9. 0, 2. 4Hz, 1H), 6. 45 (d, J = 9. 0Hz, 1H), 4. 87 (s, 1H), 4. 32 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 4. 26 (d, J =21. 3Hz, 2H), 2. 89 (s, 3H), 2. 86 (s, 2H), 1. 70 - 1. 64 (m, 4H), 1. 47 (s, 9H), L 35 (t, J = 7. 1Hz, 3H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 364. 2.
[0081] 2)合成6-(哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯三氟醋酸盐
[0082] 25ml的茄形瓶中，依次加入6-(N-叔丁氧羰基哌啶-4-基-N-甲基）胺基-烟酸乙 酯（1.0 8,2.75111111〇1)，0〇1(101111)，三氟醋酸（152711^，15.4111111〇1)，搅拌211，11(：(?￡:￡八=1:1) 检测反应完全，直接减压蒸去溶剂，得产物910mg(白色固体），产率：87. 7%。无需纯化， 直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 79(d, J = 2. 0Hz，1H), 7. 99(dd, J =9. 0, 2. 4Hz, 1H), 6. 44 (d, J = 9. 0Hz, 1H), 4. 77 (s, 1H), 4. 31 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 3. 22 (d, J =12.1Hz, 2H), 2.94 (s，3H), 2.81 (td，J = 12. 1,3.1Hz, 2H), 2.59 (s，2H), 1.76 (tt，J = 13. 2, 7. 1Hz, 4H), 1. 35 (t, J = 7. 1Hz, 3H).
[0083] 3)合成6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸乙酯
[0084] 20ml的微波管中，依次加入6_(哌啶-4-基）胺基-烟酸乙酯三氟醋酸盐 (910mg, 2. 41 mmol)，1-苄基 _4_ 氣酿嘆（820mg, 3. 22mmol)，三乙胺（1328mg, 13. 2mmol)， 氮甲基吡咯烷酮（NMP，l〇ml)，氩气流吹微波管2min，密闭。微波反应（180 °C，High absorption, lh，instrument purchased from biotage) 〇 TLC(PE:EA = 1:1)监测反应完 全，加入水（50ml)，EA (50ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗NMP，无水硫 酸钠干燥，减压蒸去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 4:1~1:1)，得产物0. 46g(浅黄色固体）， 产率：39. 6%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :482. 3.
[0085] 4)合成2-(6-(N_(4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-N-甲基-胺基-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0086] THF (10ml)中加入6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基）烟酸乙 酯（0. 15g，0.31mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应5h〇 TLC(DCM:MeOH = 20:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2)萃取，饱 和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，（DCM:Me0H =10:1)展开，得纯化的产物0. 036g(淡黄色固体），产率：24. 8%。虫NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 8. 31 (d, J = 2. 3Hz, 1H), 8. 07 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 98 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 79 -7. 64 (m, 3H), 7. 35 (d, J = 7. 4Hz, 2H), 7. 30 - 7. 25 (m, 2H), 7. 18 (t, J = 7. 3Hz, 1H), 6. 55 (d, J =8. 9Hz, 1H), 4. 89 - 4. 76 (m, 1H), 4. 62 (s, 2H), 4. 02 (d, J = 13. 1Hz, 2H), 3. 28 (t, J =11. 9Hz, 2H) , 2. 98 (s, 3H) , 2. 14 (dt, J = 1 2. 1, 8. 5Hz, 2H) , 1. 87 (d, J = 9. 9Hz, 2H)，1. 58 (s, 6H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 468. 3.。
[0087] 实施例13 :制备化合物13,1-苄基-4-(4-(N-(5-乙酰基吡啶-2-基）-N-甲基-胺 基）哌啶-2-基）酞嗪
[0088] 干燥THF (10ml)中加入化合物6- (N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-4-基）-胺基） 烟酸乙酯（0. 25g，0. 52mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试 剂（CH3MgI，1. 4mmol/ml，0. 37ml)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温 反应5h。TLC(DCM:MeOH = 20:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2) 萃取，饱和氯化钠（20ml X 1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化， 乙酸乙酯展开三次，得产物〇.〇16g(淡黄色固体）产率：6.8%。4 NMR(400MHz，⑶Cl3) 8 (ppm) :8. 72 (d, J = 2. 2Hz, 1H), 8. 09 - 7. 94 (m, 3H), 7. 78-7, 69 (m, 2H), 7. 37 - 7. 15 (m, 5H), 6. 44 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 5. 14 (d, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 62 (s, 2H), 4. 07 (s, 1H), 3 ? 90(d，J = 13.4Hz, 2H), 3.31 (t，J = 11.3Hz, 2H), 2.98 (s，3H), 2.51 (s，3H), 2.27 (d，J = 10. 9Hz，2H)，1. 92 - 1. 84 (m，2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 452. 3.。
[0089] 实施例14 :制备化合物14,2-(6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-3-基）-胺 基-吡啶-3-基）_丙-2-醇
[0090] 1)合成6- ((N-苄基哌啶-3-基）胺基）-烟酸乙酯
[0091] 在10ml微波管中依次加入1-苄基-3-胺基哌啶（0. 75g，4. 0mmol)、6-氯烟 酸乙酯（0.73g，4.0mmol)、三乙胺（0.80g，8.0mmol)，NMP(5ml)，氩气流吹 3 分钟，密闭。 微波下（biotage microwave reacter, 18〇 °C，High absorption)福射 2h，TLC(PE:EA =1:1)监测反应完全，将反应液倾至水（50ml)中，加入乙酸乙酯（50ml)，分液，水层 EA(20mlX2)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50mlX3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶 剂，得粗品1.2g，柱层析纯化（PE:EA = 2:1~1:2)洗脱，得产物0. 9g(无色油状物）， 产率：66. 3 %。虫 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 72(d, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 95(dd, J = 8. 8, 2. 1Hz, 1H), 7. 38 - 7. 21 (m, 5H), 6. 33 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 5. 56 (s, 1H), 4. 31 (q, J = 7. 1Hz, 2H), 3. 96 (s, 1H), 3. 51 (d, J = 4. 5Hz, 2H), 2. 57 (br, 3H), 2. 29 (br, 1H), 1. 74-1. 57 (m ,4H), L 35 (t, J = 7. 1Hz, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 354. 2.
[0092] 2)合成6-(哌啶-3-基）胺基-烟酸乙酯
[0093] 25ml的茄形瓶中，依次加入6-((N-苄基哌啶-3-基）胺基）-烟酸乙酯 (425mg，L2mmol)，甲醇（10ml)，兑入氩气三次，加入Pd/C(100mg)，置换氢气三次，常温搅 拌20h，TLC(EA)检测反应完全，滤除钯碳，直接减压蒸去溶剂，得产物300mg(白色固体）， 产率：99. 0%。无需纯化，直接用于下一步反应。HPLC-MS(ESI+):[M+H] + :250. 2.
[0094] 3)和喝彩6- ((N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-3-基）-胺基）烟酸乙酯
[0095] 10ml的微波管中，依次加入6-(哌啶-3-基）胺基-烟酸乙酯（300mg, 1. 20mmol)， 卜苄基-4-氯酞嗪（370mg, 1. 4mmol)，，三乙胺（364mg, 3. 6mmol)，氮甲基吡略烧酮 (NMP, 5ml)，氩气流吹微波管 2min，密闭。微波反应（180 °C，High absorption, lh， instrument purchased from biotagehTLC(PE:EA= 1:3)监测反应完全，加入水（50ml)， EA (50ml X 3)萃取，合并有机层，饱和氯化钠（50ml X 3)洗NMP，无水硫酸钠干燥，减压蒸 去溶剂，柱层析纯化（PE:EA = 4:1~1:1~1:2)，得产物0. 36g(浅黄色固体），产率： 64. 2 %。Mffi(400MHz，CDCl3)S(ppm):8.75(s，lH)，8.14(d，J = 7.7Hz，lH)，8.02- 7. 95 (m, 2H) ,1.11 - 7. 68 (m, 2H), 7. 33 (d, J = 7. 4Hz, 2H), 7. 27 (d, J = 6. 6Hz, 2H), 7. 21 -7. 15 (m, 1H), 6. 46 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 5. 86 (s, 1H), 4. 62 (s, 2H), 4. 32 (m, 3H), 3. 89 (m, 1H), 3 .51 (br, 3H), 2. 95 (s, 1H), 2. 88 (s, 1H), 1. 84 (s, 2H), 1. 35 (t, J = 7. 6Hz, 3H). HPLC-MS (ESI+) :[M+H]+ : 468. 3.
[0096] 4)合成2-(6-(N-(4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-3-基）-胺基-吡 啶-3-基）_丙-2-醇
[0097] THF (10ml)中加入6- ((N- (4-苄基酞嗪-1-基）-哌啶-3-基）-胺基）烟酸 乙酯（0. 15g，0.32mmol)，恒压滴液漏斗装置密闭体系，氩气保护下转移碘甲烷格式试剂 (CH3MgI，1. 4mmol/ml，1M1)至恒压滴液漏斗，冰浴下滴入格氏试剂，滴加完后，常温反应5h〇 TLC(DCM:MeOH= 10:1)监测反应完全，加入饱和氯化铵溶液10ml，EA(10mlX2)萃取，饱 和氯化钠（20mlXl)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干。制备TLC纯化，（DCM:MeOH =10:1)展开，得产物 0? 025g(淡黄色固体），产率：17. 2 %。iH-NMRGOOMHzJMSO-cU 8 (ppm) : 8. 14 (d, J = 5. 7Hz, 1H), 8. 02 (s, 2H), 7. 86 (s, 2H) ,7.57 - 7. 06 (m, 5H), 6. 47 (d, J =7. 8Hz, 2H), 4. 86 (s, 1H), 4. 54 (s, 2H), 3. 95 (s, 1H), 3. 75 (d, J = 10. 3Hz, 2H), 3. 12 (s, 2H) ,2. 06-1. 95 (m, 2H)，1. 88-1. 72 (m, 2H)，1. 35 (s, 6H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 454. 3.。
[0098] 实施例15 :体外Hedgehog信号通路抑制活性测试试验
[0099] 转录因子Gli的双荧光素酶报告基因实验：NIH3T3细胞接种至48孔板，24h后以 lipo2000 转染试剂转染 Gli-firefly luciferase reporter 和 TK-Renilla luciferase r印orter载体至NIH3T3细胞。转染36h后，将鼠源重组的SHH及待测药物加至48孔板（每 组设3复孔；n = 3)。常规培养36h后，细胞用PBS洗1次，以双荧光素酶报告检测试剂盒 (Promega公司）测定Gli-luciferase活性，作为判断Hh通路活性指标。
[0100] 具体结果如表1所不。结果表明，本发明中化合物显不出较好的Hedgehog信号通 路抑制活性，其中化合物3、4、5、7、8、9、11和12对于Hh信号通路中的靶基因G1 i抑制活性 IC5。值小于10nM。本发明的化合物可以进一步制备Hedgehog信号通路抑制剂，用于制备新 型抗肿瘤药物。
[0101] 表1是本发明化合物的Hedgehog信号通路的体外抑制活性结果。
[0102] 表 1
[0103]
[0104]
【主权项】
1. 苄基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为含赃晚或化咯烧或氮杂环下烧的苄基 献嗦化合物及其可药用盐，具有通式（I)的结构，R = 2-径基-2-异丙基或3-径基-3-异戊基或乙酷基或醋基。2. 根据权利要求1所述的苄基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物1，3. 根据权利要求1所述的苄基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物2，4. 根据权利要求1所述的苄基歐嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物3，5. 根据权利要5 化合物为具有下述结构的化合物4，6. 根据权利要5 化合物为具有下述结构 的化合物5，7. 根据权利要5 化合物为具有下述结构 的化合物6，8. 根据权利要5 化合物为具有下述结构 的化合物7， / :D9. 根据权利要求1所述的苄基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物8，10. 根据权利要求1 i合物为具有下述结构的化合物9，11. 根据权利要求1 i合物为具有下述结构 的化合物10，12. 根据权利要求1 i合物为具有下述结构 的化合物11，13. 根据权利要求1所述的苄基献嗦化合物，其特征是，所述的化合物为具有下述结构 的化合物12，14. 根据权利要， 巧化合物为具有下述结构 的化合物13，15. 根据权利要， 巧化合物为具有下述结构 的化合物14，16. 权利要求1的苄基献嗦化合物在制备化dgehog信号通路抑制剂中的用途。17. 权利要求1的苄基献嗦化合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的用途。18. 按权利要求17的用途，其特征在于，所述的恶性肿瘤是化dgehog信号通路异常激 活所致的相关肿瘤，包括髓母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、膀脫癌、卵巢癌、皮 肤癌。19. 包含治疗有效量的权利要求1所述的化合物及其药用盐的药物组合物。
【文档编号】A61P35/00GK105985320SQ201510072259
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月11日
【发明人】谭文福, 陆秀宏, 彭元求, 赵伟利, 董肖椿, 鲍小龙, 杨君, 王娟, 刘原
【申请人】复旦大学