氘代鹅去氧胆酸衍生物以及包含该化合物的药物组合物的制作方法

氘代鹅去氧胆酸衍生物以及包含该化合物的药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及氘代鹅去氧胆酸衍生物以及包含该化合物的药物组合物。具体地，本发明公开了式(I)所示的氘代鹅去氧胆酸衍生物以及含有该化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的药物组合物。本发明的上述化合物可用于治疗和/或预防非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、肝硬化等。
【专利说明】
氘代鹅去氧胆酸衍生物以及包含该化合物的药物组合物
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域。具体地，本发明涉及新型的氘代鹅去氧胆酸衍生物以及含 该化合物的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 法尼醇 X 受体（Farnesoid X Receptor，FXR)是核受体（Nuclear Receptor)家族 的一员，它主要表达在肝脏、小肠等肠道系统之中，参与胆汁酸代谢与胆固醇代谢等环节。 胆汁酸具有多种生理功能，在脂肪的吸收、转运、分配及胆固醇的动态平衡等过程中发挥重 要作用。法尼醇X受体作为鹅去氧胆酸等胆汁酸的受体，通过调控参与胆汁酸代谢的基因 表达来维持胆汁酸在体内的平衡。另外，法尼醇X受体在体内葡萄糖的动态平衡和胰岛素 抵抗等方面也发挥着重要功能。因此，法尼醇X受体激动剂有望开发成治疗非酒精性脂肪 肝炎、非酒精性脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、肝硬化、肝纤维化、糖尿病、高胆固 醇血症、动脉粥样硬化、肥胖、高甘油三酯血症等的药物。
[0003] 鹅去氧胆酸及衍生物是一类法尼醇X受体的激动剂。在专利W02010059859和 TO2005082925中公开了系列鹅去氧胆酸衍生物，其中，化合物奥贝胆酸（Obeticholic acid)是选择性的法尼醇X受体激动剂，化学名为3 α，7 α -二羟基-6 α -乙 基-5 β -胆 _24_ 酸（3 a，7 a -dihydroxy-6 a -ethyl-5 β -cholan-24-〇ic acid)，具有治疗 非酒精性脂肪肝炎以及非酒精性脂肪肝相关疾病中的用途。目前奥贝胆酸处于三期临床研 究中。
[0004] 虽然奥贝胆酸在改善肝脏炎症和纤维化水平等方面表现出较好的临床效果，并 有一定的减轻体重和增加胰岛素敏感等作用，但是，也发现瘙痒以及低密度脂蛋白升高等 副作用，因此，寻找具有选择性、高活性和安全性的法尼醇X受体激动剂还具有很大的挑战 性。
[0005] 因此，本领域仍需要开发具有对法尼醇X受体具有很好激活作用或更好药效学/ 药代动力学性能的化合物。

【发明内容】

[0006] 本发明的目的是提供一类新型的具有法尼醇X受体激活活性和更好药效学/药代 动力学性能的化合物及其用途。
[0007] 在本发明的第一方面中，提供了一种式（I)所示的氘代鹅去氧胆酸衍生物、或其 晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：
[0008]
[0009] 式中：
[0010] R1、R2、R3、R4、R5和R 6各自独立地为氢或氘；
[0011] 附加条件是R1、R2、R3、R 4、R5或R6中至少一个是氘。
[0012] 在另一优选例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量 (0. 015 % )，较佳地大于30 %，更佳地大于50 %，更佳地大于75 %，更佳地大于95 %，更佳地 大于99%。
[0013] 在另一优选例中，式（I)化合物至少含有1个氘原子，更佳地2个氘原子，更佳地 3个氖原子，更佳地5个氖原子，更佳地6个氖原子。
[0014] 在另一优选例中，R1为氢或氘。
[0015] 在另一优选例中，R2为氢或氘。
[0016] 在另一优选例中，R3为氢或氘。
[0017] 在另一优选例中，R4和R5独立地选自氢或氘。
[0018] 在另一优选例中，R6为氢或氘。
[0019] 在另一优选例中，R1是氘。
[0020] 在另一优选例中，R2是氘。
[0021] 在另一优选例中，R3是氘。
[0022] 在另一优选例中，R4为氘和/或R 5为氘。
[0023] 在另一优选例中，R2为氘和/或R 1为氘。
[0024] 在另一优选例中，所述化合物是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
[0025]
[0027] 在另一优选例中，所述化合物是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
[0028] 3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氖一5 β -胆 _24_ 酸；
[0029]
[0030] 3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-6, 7-二氘-5 β -胆-酸；
[0031]
[0032] 3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7, 23, 23-三氘-5 β -胆-酸；
[0033]
[0034] 3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5) -7-氖-5 β -胆-24-酸；
[0035]
[0036] 3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5) -5 β -胆-24-酸；
[0037]
[0038] 3 α，7 α -二羟基 _6 α -乙基-23, 23_ 二気 _5 β _ 月旦 _24_ 酉爱；
[0039]
[0040] 3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5) -23, 23-二氘-5 β -胆-酸；
[0041]
[0042] 3α，7α -二羟基-6α -(乙基-d5)-6, 23, 23-三氘-5β-胆-24-酸；
[0043]
[0044] 3α，7α -二羟基-6α -(乙基-d5)-7, 23, 23-三氘-5β-胆-24-酸；
[0045]
[0046] 3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-6, 7, 23, 23-四氘-5 β -胆-Μ-酸；
[0047]
[0048] 3α，7α -二羟基-6α -(乙基-d5)-6, 7, 23, 23-四氘-5β-胆-24-酸；
[0049]
[0050] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：421 ;MS 测量值：422 (M+H)+，444 (M+Na)+。
[0051] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：423 ;MS 测量值：424 (M+H)+，446 (M+Na)+。
[0052] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：426 ;MS 测量值：427 (M+H)+，449 (M+Na)+。
[0053] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：425 ;MS 测量值：426 (M+H)+，448 (M+Na)+。
[0054] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：428 ;MS 测量值：429 (M+H)+，451 (M+Na)+。
[0055] 在另一优选例中，所述的化合物为
其具有如下 特征：MS 计算值：429 ;MS 测量值：430 (M+H)+，452 (M+Na)+。
[0056] 在另一优选例中，所述的化合物
其具有如下特 征：MS 计算值：422 ;MS 测量值：423 (M+H)+，445 (M+Na)+。
[0057] 在另一优选例中，所述的化合物
其具有如下 特征：MS 计算值：427 ;MS 测量值：428 (M+H)+，450 (M+Na)+。
[0058] 在另一优选例中，所述的化合物不包括非氘代的化合物。
[0059] 在另一优选例中，所述的非氘代的化合物为奥贝胆酸，即3α，7α_二羟 基-6 α -乙基-5 β -胆-24-酸。
[0060] 在另一优选例中，所述的化合物由实施例1-4所述的方法制备的。
[0061] 在本发明的第二方面中，提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上 可接受的载体与本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或 溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。
[0062] 在本发明的第三方面中，提供了一种药物组合物，它含有药学上可接受的载体和 本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
[0063] 在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。
[0064] 在另一优选例中，所述的药物组合物还含有另外的治疗药物，所述的另外治疗药 物为治疗癌症、心血管疾病、炎症、感染、免疫性疾病、代谢性疾病、或器官移植的药物。
[0065] 在另一优选例中，所述的癌症包括（但并不限于）：肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食道 癌、直肠癌、结肠癌、血癌（或恶性血液病）、骨癌、肾癌、胃癌、肝癌或大肠癌。
[0066] 在另一优选例中，所述的癌症为肝癌。
[0067] 更佳地，所述的另外的治疗药物包括（但并不限于）：索拉非尼、瑞格非尼、多纳非 尼、顺铂、阿霉素、吉西他滨、F0LF0X、地西他滨、卡培他滨、他汀类药物（洛伐他丁、辛伐他 汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、罗伐他汀等）、罗格列酮、吡格 列酮、二甲双胍、阿卡波糖、伏格列波糖、磺脲类降糖药物（格列吡嗪、格列齐特、格列美脲 等）、二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂降糖药物（如西格列汀、维格列汀、沙格列汀、阿格列汀、 利格列汀等）、钠依赖葡糖转运体（SGLT2)抑制剂降糖药物（如达格列净、卡格列净等）、 胰高血糖素样肽-l(GLP-l)受体激动剂（如艾塞那肽、利拉鲁肽、利司那肽等）、干扰素、聚 乙二醇干扰素、抗丙肝药物（如索非布韦、特拉匹维、Boceprevir、ACH-3102、Daclatasvir、 Deleobuvir、Ledipasvir等）、抗乙肝药物（如拉米夫定，阿德福韦酯，替比夫定，恩替卡韦， 替诺福韦酯，克拉夫定等）。
[0068] 在本发明的第四方面中，提供了本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学 上可接受的盐、水合物或溶剂合物本发明第三方面所述的药物组合物的用途，它们被用于 制备法尼醇X受体（FXR)激动剂和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动剂的药 物组合物。
[0069] 在另一优选例中，所述的药物组合物用于制备治疗和预防以下疾病的药物：非酒 精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、肝硬化、肝纤维化、糖尿 病、动脉粥样硬化、肥胖。
[0070] 在本发明的第五方面中，提供了一种疾病（如癌症、非酒精性脂肪肝炎、非酒精性 脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、肝硬化、肝纤维化、糖尿病、动脉粥样硬化、肥胖） 的治疗方法，它包括步骤：给需要治疗的对象施用本发明第一方面中所述的化合物，或其晶 型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或施用本发明第三方面中所述的药物组合物。
[0071] 在本发明的第六方面中，提供了一种法尼醇X受体（FXR)激动剂和/或G-蛋白偶 联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动剂的施用方法，它包括步骤：给需要治疗的对象施用所述 的法尼醇X受体（FXR)激动剂和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动剂，其中， 所述的法尼醇X受体（FXR)激动剂和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动剂为 本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或本 发明第三方面中所述的药物组合物。
[0072] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【具体实施方式】
[0073] 本发明人经过研究，意外地发现，本发明的氘代鹅去氧胆酸衍生物及其药学上可 接受的盐与未氘代的化合物相比，具有明显更优异的药物动力学和/或药效学性能，因此 更适合作为法尼醇X受体（FXR)激动剂和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动 剂的化合物，进而更适用制备治疗法尼醇X受体（FXR)和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR 或TGR5)相关疾病的药物。在此基础上完成了本发明。
[0074] 定义
[0075] 如本文所用，"卤素"指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤原子选自F、C1和Br。
[0076] 如本文所用，"更优异的药物动力学和/或药效学性能"是指更长的药物半衰期 (t1/2)，或者更高的药物暴露量（AUC)，或者更高的最大药物浓度（Cmax)，或者更低的药物清 除率。
[0077] 如本文所用，"氘代"指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代。
[0078] 如本文所用，"非氘代的化合物"是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量 (0.015% )的化合物。
[0079] 在另一优选例中，氖在氖取代位置的氖同位素含量是大于天然氖同位素含量 (0. 015 % )，更佳地大于50 %，更佳地大于75 %，更佳地大于95 %，更佳地大于97 %，更佳地 大于99 %，更佳地大于99. 5 %。
[0080] 在另一优选例中，式（I)化合物至少含有1个氘原子，更佳地2个氘原子、3个氘 原子，更佳地4个氘原子，更佳地6个氘原子。
[0081] 优选地，式（I)化合物中，0为16〇。
[0082] 在另一优选例中，所述化合物中，160在氧原子所在位置的同位素含量多95 %，更 佳地彡99%。
[0083] 活性成分
[0084] 如本文所用，术语"本发明化合物"指式（I)所示的化合物。该术语还包括及式（I) 化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
[0085] 其中，术语"药学上可接受的盐"指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物 的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的 盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一 类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐（例如钠盐或钾盐）、碱土金属盐 (例如镁盐或钙盐）、铵盐（如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐），例如甲胺 盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二 胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
[0086] 术语"溶剂合物"指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。"水合 物"是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
[0087] 此外，本发明化合物还包括式（I)所示的鹅去氧胆酸衍生物的手性对映异构体、 或消旋体。
[0088] 此外，本发明化合物还包括式（I)所示的鹅去氧胆酸衍生物的葡萄糖苷酸结合物 (glucuronides)、牛横酸（taurine)结合物。
[0089] 此外，本发明化合物还包括式（I)所示的鹅去氧胆酸衍生物的前药。术语"前药" 包括其本身可以是具有生物学活性的或非活性的，当用适当的方法服用后，其在人体内进 行代谢或化学反应而转变成式（I)的一类化合物，或式（I)的一个化合物所组成的盐或溶 液。所述的前药包括（但不局限于）所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、 砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙缩醛等形式。
[0090] 制备方法
[0091] 下面更具体地描述本发明式（I)结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本 发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各 种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进 行。
[0092] 本发明使用的未氘代的鹅去氧胆酸衍生物及其生理上相容的盐的制备方法是已 知的。对应氘代的鹅去氧胆酸衍生物的制备可以用相应的氘代起始化合物为原料，用同样 的路线合成。例如，本发明式（I)化合物可按W002072598中所述的制备方法制备，不同点 在于在反应中用氘代的原料代替非氘代的原料。
[0093] 通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度（如0°C~ 200°C，优选0°C~100°C )下进行。反应时间通常为0. 1小时-60小时，较佳地为0. 5-48 小时。
[0094] 下面的通用制备路线可以用于合成本发明式（I)结构的化合物。
[0096] 其中：R1、R2、R3、R 4、R5、R6的定义同前，X是卤素。
[0097] 如合成路线一所示，化合物II经THP保护羟基得到化合物III ;111经碱作用下 和化合物V发生取代反应得到化合物IV ;化合物IV在酸和甲醇中发生脱保护和酯化反应 得到化合物VI ;化合物VI经还原得到化合物VII，最后经水解反应可得到本发明化合物 I。上述反应在惰性溶剂，如二氯甲烧、乙腈、正己烧、甲苯、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、 N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、乙酸、丁醇、丙醇等中，温度0~200°C下进行。
[0098] 药物组合物和施用方法
[0099] 由于本发明化合物具有优异的对法尼醇X受体（FXR)和/或G-蛋白偶联胆酸受体 (GPBAR或TGR5)激活活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机 盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、 预防以及缓解由对法尼醇X受体（FXR)和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)介导 的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病：癌症、非酒精性脂肪肝炎、非酒 精性脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、肝硬化、肝纤维化、糖尿病、动脉粥样硬化、肥 胖等。
[0100] 本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受 的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中"安全有效量"指的是：化合物的量足以明显 改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有〇. 5-2000mg本发明化合物 /剂，更佳地，含有l_500mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的"一剂"为一个胶囊或药片。
[0101] "药学上可以接受的载体"指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物 质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。"相容性"在此指的是组合 物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药 学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、 纤维素乙酸酯等）、明胶、滑石、固体润滑剂（如硬脂酸、硬脂酸镁）、硫酸钙、植物油（如 豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等）、多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等）、乳化剂 (如吐丨显?)、润湿剂（如十二烷基硫酸钠）、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无 热原水等。
[0102] 本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括 (但并不限于）：口服、十二指肠、直肠、肠胃外（静脉内、肌肉内或皮下）、和局部给药。
[0103] 用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂 型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂（或载体）混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或 与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b) 粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；（c)保湿 剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅 酸盐、和碳酸钠；（e)缓溶剂，例如石蜡；（f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例 如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和（i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸 钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也 可包含缓冲剂。
[0104] 固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和 其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的 释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质 和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0105] 用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。 除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增 溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰 胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物 等。
[0106] 除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味 剂、矫味剂和香料。
[0107] 除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯 山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0108] 用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、 悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和 非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0109] 用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。 活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要 的推进剂一起混合。
[0110] 本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0111] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物 (如人），其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药 剂量通常为〇. 5~2000mg，优选1~500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康 状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0112] 本发明的化合物与现有技术中已知的非氘代化合物相比，具有一系列优点。本发 明的主要优点包括：
[0113] (1)本发明化合物对法尼醇X受体（FXR)和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或 TGR5)具有优异的激活活性。
[0114] (2)通过氘化这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代 动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性。
[0115] ⑶用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，能够提高化合物在动物体 内的药物浓度，以提高药物疗效。
[0116] (4)用氘取代化合物中的氢原子，由于某些代谢产物被抑制，可能提高化合物的 安全性。
[0117] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分 比。
[0118] 实施例1制备3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氘-5 β -胆-24-酸（化合物1)
[0120] 1、制备3 α -四氢啦喃氧基-7-酮-5 β -胆-24-酸（化合物3)
[0121] 向烧瓶中加入3 α -羟基-7-酮-5 β -胆-24-酸（10. 0g, 25. 6mmol)和二氧六 环（150mL)，搅拌溶解。向其依次加入对甲苯磺酸一水合物（0. 49g, 2. 56mmol)和3,4_二 氢-2H-吡喃（4. 31g，51. 2mmol)。室温搅拌1小时后，向其滴加氨气甲醇溶液调节pH值为 8~9。浓缩除去挥发性有机物后，乙酸乙酯萃取。依次用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和饱和 食盐水洗涤。硫酸钠干燥，过滤。滤液经旋转蒸发仪真空下除去溶剂得到粗品。粗品经硅 胶柱层析（洗脱液：乙酸乙酯/石油醚=1/3)分离纯化得到类白色固体目标产物（9. 72g， 80% ) 〇
[0122] 2、制备3 α -四氢吡喃氧基-6 α -乙基-7-酮-5 β -胆-24-酸（化合物4)
[0123] 向烧瓶中二异丙基胺（5. 8g，57. 6mmol)和无水四氢呋喃（400mL)，冷却到-78°C。 保持温度低于_60°C，向其依次滴加正丁基锂（23. lmL，2. 5M正己烷溶液）和六甲基磷酰三 胺（HMPA，10. 3g，57. 6mmol)。加完后，保持温度-70°C搅拌1小时。向其滴加已预冷到_78°C 的3 α -四氢吡喃氧基-7-酮-5 β -胆-24-酸（9. lg，19. 2mmol)的无水四氢呋喃（200mL) 溶液，搅拌30分钟。向其慢慢滴加碘乙烷（29.9g，192mmol)的无水四氢呋喃（1000mL)溶 液，室温搅拌过夜。真空下除去有机挥发物，10%盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合 并有机相，依次用5%硫代硫酸钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥， 浓缩得目标化合物，不经纯化直接用于下一步反应。
[0124] 3、制备3 α -羟基-6 α -乙基-7-酮-5 β -胆-24-酸甲酯（化合物5)
[0125] 将上一步制备得到的3 α -四氢吡喃氧基-6 α -乙基-7-酮-5 β -胆-24-酸粗品 溶解在氯化氢甲醇溶液（2N，120mL)中，回流搅拌16小时。真空浓缩蒸除有机挥发物，乙酸 乙酯萃取，合并有机物，依次用纯水、饱和碳酸氢钠水溶液及食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥， 浓缩得残余物。残余物经硅胶柱层析（20%~40%乙酸乙酯/正己烷）分离纯化得到固体 (1.8g，两步收率 2L7% )。·
[0126] 4、制备3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氘-5 β -胆-24-酸甲酯（化合物6)
[0127] 向烧瓶中依次加入3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆-24-酸甲酯（1.5g， 3. 5mmol)和甲醇（6mL)，搅拌，加入氖代硼氢化钠（NaBD4,0. 3g，7mmol，Sigma-Aldrich)。室 温下搅拌3小时。水淬灭反应，高真空浓缩。乙酸乙酯萃取。合并有机相依次用纯水及食 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体目标产物（1. 3g，85% )。
[0128] 5、制备3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氘-5 β -胆-24-酸（化合物1)
[0129] 向反应瓶中依次加入3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氖-5 β -胆-24-酸甲酯 (1. 2g，2. 8mmol)、氢氧化钠水溶液（10%，2. 24g，5. 6mmol)和四氢呋喃/甲醇/水（1/3/2， 20mL)。混合物在40°C下搅拌6小时。3N盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合并有机相 依次用纯水及食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到固体粗品，经硅胶柱层析（5% 甲醇/二氯甲烷）分离纯化得到固体产物（〇.87g，75%)。iHNMRGOOMHz^DClfCDWD) δ3 ? 46 (m，1Η)，2· 35-0. 74 (m，27Η)，0· 95 (d，3Η)，0· 89-0. 92 (m，6Η)，0· 68 (s，3Η)。ESI-MS (m/z): 422(M+H)+,444 (M+Na)+〇
[0130] 实施例2制备3 a，7 a -二羟基-6 a -(乙基-d5)-7-氘-5 β -胆-24-酸（化合 物10)
[0132] 1、制备3 a -四氢吡喃氧基-6 a -(乙基-d5)-7-酮-5 β -胆-酸（化合物7)
[0133] 向烧瓶中二异丙基胺（2. 3g，23mmol)和无水四氢呋喃（200mL)，冷却到-78°C。保 持温度低于-60°C，向其依次滴加正丁基锂（9. 2mL，2. 5M正己烷溶液）和六甲基磷酰三胺 (HMPA，4. 2g，23mmol)。加完后，保持温度-70°C搅拌1小时。向其滴加已预冷到-78°C的 3α-四氢吡喃氧基-7-酮-5β-胆-24-酸（3. 6g，7. 6mmol)的无水四氢呋喃（lOOmL)溶 液，搅拌30分钟。向其慢慢滴加五氘代碘乙烷（6. 2g，38mmol)的无水四氢呋喃（200mL)溶 液，室温搅拌过夜。真空下除去有机挥发物，10%盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合 并有机相，依次用5%硫代硫酸钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥， 浓缩得目标化合物，不经纯化直接用于下一步反应。
[0134] 2、制备3 α -羟基-6 α -(乙基-d5) -7-酮-5 β -胆-24-酸甲酯（化合物8)
[0135] 将上一步制备得到的3 α -四氢吡喃氧基-6 α -(乙基-d5)-7-酮-5β-胆-24-酸 粗品溶解在氯化氢甲醇溶液（2N，30mL)中，回流搅拌16小时。真空浓缩蒸除有机挥发物， 乙酸乙酯萃取，合并有机物，依次用纯水、饱和碳酸氢钠水溶液及食盐水洗涤，无水硫酸钠 干燥，浓缩得残余物。残余物经硅胶柱层析（20%~40%乙酸乙酯/正己烷）分离纯化得 到固体（〇. 6g，两步收率18% )。.
[0136] 3、制备3α，7α-二羟基-6α-(乙基-d5)-7-氘-5β-胆-24-酸甲酯（化合物 9)
[0137] 向烧瓶中依次加入3 α -羟基-6 α -(乙基-d5)-7-酮-5β-胆-24-酸甲酯（0. 3g， 0. 68mmol)和甲醇（3mL)，搅拌，加入氖代硼氢化钠（NaBD4,60mg，1.4mmol)。室温下搅拌3 小时。水淬灭反应，高真空浓缩。乙酸乙酯萃取。合并有机相依次用纯水及食盐水洗涤，无 水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体目标产物（〇. 25g，82% )。
[0138] 4、制备 3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5)-7-氘-5 β -胆-24-酸（化合物 10)
[0139] 向反应瓶中依次加入3 α，7α-二羟基-6 α-(乙基-d5)-7-氘-5β-胆-24-酸 甲酯（0. 24g, 0. 54mmol)、氢氧化钠水溶液（10%，0. 44g，1. lmmol)和四氢咲喃/甲醇/水 (1/3/2, 5mL)。混合物在40°C下搅拌6小时。3N盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合并有 机相依次用纯水及食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到固体粗品，经硅胶柱层析 (5%甲醇/二氯甲烷）分离纯化得到固体产物（0· 18g，78%) ZH NMR(400MHz，CDC13+CD30D) δ 3· 47 (m，1H)，2· 36-0. 74 (m，25H)，0· 95 (d，3H)，0· 91 (s，3H)，0· 66 (s，3H)。ESI-MS (m/z): 427(M+H)+,449 (M+Na)+〇
[0140] 实施例3制备3 a，7 a -二羟基-6 a -(乙基-d5) -5 β -胆-24-酸（化合物12)
[0142] 1、制备3a，7a-二羟基-6a-(乙基-d5)-5f3-胆-24-酸甲酯（化合物11)
[0143] 向烧瓶中依次加入3 a -羟基-6 a -(乙基-d5)-7-酮-5β-胆-24-酸甲酯（0. 3g， 0. 68mmol)和甲醇（3mL)，搅拌，加入硼氢化钠（NaBH4,60mg，1. 4mmol)。室温下搅拌3小时。 水淬灭反应，高真空浓缩。乙酸乙酯萃取。合并有机相依次用纯水及食盐水洗涤，无水硫酸 钠干燥，浓缩得到白色固体目标产物（〇. 24g，81 % )。
[0144] 2、制备 3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5)-5 β -胆-24-酸（化合物 12)
[0145] 向反应瓶中依次加入3 α，7 α -二羟基-6 α -(乙基-d5) -5 β -胆-24-酸甲 酯（0. 24g, 0. 54mmol)、氢氧化钠水溶液（10 %，0. 44g，1. lmmol)和四氢咲喃/甲醇/水 (1/3/2, 5mL)。混合物在40°C下搅拌6小时。3N盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合并 有机相依次用纯水及食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到固体粗品，经硅胶柱层 析（5%甲醇/二氯甲烷）分离纯化得到固体产物（0· 16g，72% ) dSI-MSOn/z) :426(M+H)+， 448(M+Na)+。
[0146] 实施例4制备3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7, 23, 23-三氘-5 β -胆-24-酸（化 合物13)
[0147]
[0148] 将3 α，7 α -二羟基-6 α -乙基-7-氘-5 β -胆-酸（0· 2g)溶解在氘氧化纳 的氘水溶液中，室温搅拌24小时。高真空旋干蒸除溶剂，将残留物溶解在氘氧化纳的氘水 溶液中，室温下继续搅拌24小时。3N盐酸调节pH值2~3,乙酸乙酯萃取。合并有机相依 次用纯水及食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到固体粗品，经硅胶柱层析（5%甲 醇/二氯甲烷）分离纯化得到固体目标产物。ESI-MS (m/z) :424 (M+H)+，446 (M+Na)+。
[0149] 实施例5 :大鼠中的药代动力学评价
[0150] 雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周龄，体重约210g，每组6只，十二指肠给药 1 μπιο?/min/kg剂量的（a)对照组：奥贝胆酸或（b)试验组：实施例1~4制备的化合物.给 药1小时，给药流速2. 5mL/h。比较其血浆药代动力学和胆汁排泄动力学差异。
[0151] 大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前16小时开始禁食。药物用生理盐水溶解。 左股静脉采血，采血的时间点为给药前0. 5小时、给药后0. 5小时、1小时、1. 5小时、2小时、 2. 5小时、3小时和3. 5小时。给药期间和给药后2. 5小时内间隔15min分别收集胆汁。
[0152] 血浆和胆汁在进行分析前保存在_70°C。用LC-MS/MS测定血浆和胆汁中本发明化 合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度和胆汁中药物浓度进 行计算。
[0153] 从结果看出，相对于对照化合物奥贝胆酸，本发明化合物在动物体内具有更高的 血衆暴露量和药物胆汁排泄量（Biliary Secretion)，因而具有更好的药效学和治疗效果。
[0154] 实施例6 :本发明化合物对法尼醇X受体（FXR)的体外药效学评价
[0155] 本发明化合物的法尼醇X受体（FXR)激活是通过Recruitment Coactivator Assay，即AlphaScreen技术测定，具体的体外药效学评价试验方案参照文献JPharmacol Exp Ther 350:56 - 68，July 2014。
[0156] 实验结果如表1所示。可见，本发明所述的化合物对法尼醇X受体（FXR)具有优 异的激活活性。
[0157] 表 1
[0158]
[0159] 实施例7药物组合物
[0160] 化合物（实施例1~4) 10g
[0161] 羧甲基淀粉钠 12g
[0162] 微晶纤维素 180g
[0163] 按常规方法，将上述物质混合均匀后，装入普通明胶胶囊，得到1000颗胶囊。
[0164] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 弓丨用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对 本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1. 一种式（I)所示的気代碟去氧胆酸衍生物、或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或 溶剂合物：其中： Ri、R2、R3、R4、R嘴R 6各自独立地为氨或気； 附加条件是31、32、1?3、护、1?5或1?6中至少一个是気。2. 如权利要求1中任一所述的化合物，其特征在于，R 2为気和/或R 1为気。3. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物是选自下组的化合物或其药 学上可接受的盐：4. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物不包括非気代的化合物。5. 如权利要求4所述的化合物，其特征在于，所述的非気代的化合物是3 a，7 a -二径 基-6 a -乙基-50-胆-24-酸。6. -种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和权利要求1-5任一项 所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。7. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，它还含有另外的治疗药物，所述的另 外的治疗药物为治疗癌症、屯、血管疾病、炎症、感染、免疫性疾病、或代谢性疾病的药物。8. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为注射剂、囊剂、 片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。9. 一种权利要求1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物或 如权利要求6所述的药物组合物的用途，其特征在于，用于制备法尼醇X受体（FXR)激动剂 和/或G-蛋白偶联胆酸受体（GPBAR或TGR5)激动剂的药物组合物。10. 如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物用于制备用于治疗和预 防W下疾病的药物：非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、胆结石、原发性胆汁性肝硬化、 肝硬化、肝纤维化、糖尿病、动脉粥样硬化、肥胖。
【文档编号】A61P37/02GK105985396SQ201510084738
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月16日
【发明人】吕彬华, 盛泽林
【申请人】苏州泽璟生物制药有限公司