一株阿氏芽孢杆菌j5及其应用
【专利摘要】本发明属于微生物资源领域，具体公开了一株阿氏芽孢杆菌J5及其在玉米促生方面的应用。阿氏芽孢杆菌J5于2015年10月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No.11508。本发明的阿氏芽孢杆菌J5具有产生长素，产铁载体，产氨，产蛋白酶，耐盐，拮抗及解磷等功能；该菌株在含盐量11%的培养基条件下正常生长，显示了较好的消除土壤盐渍化潜力；产铁载体含量达到53.7%，具有高效的防病特性。该菌株能提高玉米种子发芽率12.5%，具有较好的促生效果。利用菌株制备的菌剂施用后，玉米产量提高37.1%，百粒重提高35%。该菌株可望开发为生物菌剂，在改善土壤养分、消除盐渍化、促进植物生长和防治病害等方面应用前景广阔。CGMCC No.1150820151015
【专利说明】
一株阿氏芽孢杆菌J5及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及微生物资源领域，更具体地，涉及一株阿氏芽孢杆菌J5及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物根际促生菌(Plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR)指生存于植物 根际、根表，并能直接或间接地促进或调节植物生长的微生物。植物根际促生菌一般具有产 生长素，产氨，产铁载体，拮抗，解磷，耐盐等能力或至少具有其中之一的能力。接种植物根 际促生菌，可以使土壤养分有效化，促进植物根系吸收土壤中水分和养分，以提高植物生 长。芽孢杆菌产生对热、电离辐射和某些化学药品等都有很强抗逆性的芽孢。因此，具有根 际促生作用的芽孢杆菌菌剂，生产工艺简单，货架期长，易于在土壤环境中存活定殖，从而 提高田间作物生长，在微生物肥料产业中显示了巨大的应用前景。
[0003] 阿氏芽抱杆菌aiyaMaiiai )于2009年Shivaji等首次从海拔为27~ 41km的空气中筛选分离，作为一种新型菌种资源，具有显著的根际促生作用。譬如，左山等 筛选的阿氏芽孢杆菌B8W22T，具有产生长素特征，能显著提高黄栌生长。刘之文筛选的阿氏 芽孢杆菌具有溶磷效果，对植物发芽和生长具有促进作用。段佳丽报道阿氏芽孢杆菌B5对 甜瓜种子胚轴和胚根生长具有促进作用。Aketi等在印度中部筛选的阿氏芽孢杆菌MASR14 具有产生长素、产铁载体及产氨三种有益特性，对作物生长具有促进作用。李组红等利用阿 氏芽孢杆菌的拮抗效果作用防治烟草黑胫病，具有显著的效果。Sol等在韩国贫瘠的湖边 筛选到四株具有产IAA和溶磷两种功能的阿氏芽孢杆菌，促进了湖边意大利苍耳的生长。这 些研究进展展示了阿氏芽孢杆菌巨大的根际促生潜力，但这些结果多局限于阿氏芽孢杆菌 单一或两三种功能的解析，难以满足现代微生物肥料功能多样化的市场要求。
[0004]另外，土壤盐渍化是严重制约作物生长的重要原因。据目前联合国教科文组织和 粮农组织的不完全统计，世界盐渍化面积为109hm2,我国的第二次全国土壤普查结果显示， 盐渍化地总面积为3.6X 107 hm2,占全国可利用面积的4.88%。耕地面积盐渍化达到9.21 X 106 hm2，占全国耕地面积的6.62%。前人研究，阿氏芽孢杆菌具有较好的耐盐特征，譬如吕昭 辉等从四川泸州白酒生产厂的中层窖泥样本中分离筛选的阿氏芽孢杆菌，在含盐量(NaCl) 为0.5%条件下，显著促进甜高梁植株生长。Aketi等筛选的阿氏芽孢杆菌MDSR 7，MDSR 11， MDSR 14的耐盐性在4~10%之间。杜传英在我国的东北地区筛选的一株具有6%耐盐性的阿 氏芽孢杆菌。刘欣林利用不同浓度NaCl研究了阿氏芽孢杆菌A4的生长情况，菌株的生长量 先随NaCl浓度的增加而增加，在NaCl浓度为6%的左右时，生长量达到最大。这些进展显示了 阿氏芽孢杆菌在土壤盐渍化治理方面的巨大潜力，有待进一步研究。
[0005]菌株的铁载体对植物生长同样具有较好的促进作用。已有的研究表明，在缺铁环 境下的植物可以直接利用微生物产生的铁载体，从而增加了植物对铁的吸收，利于促进植 物生长。铁载体还可以通过抑制有害微生物来促进植物生长，因此，铁载体可以通过直接或 间接作用来促进植物的生长。Sheetal等筛选的阿氏芽孢杆菌WRP5能产铁载体。Sol等筛选 的四株阿氏芽孢杆菌均通过定性实验判断其能够产铁载体，但也没有进行定量测定。孙磊 等筛选的阿氏芽孢杆菌N44及N23的铁载体含量分别为11.8%和9.6%;目前大部分研究仅仅 只过定性判断阿氏芽孢杆菌能否产铁载体，定量测定铁载体单位活性的研究相对较少，尚 待进一步研究。
[0006] 阿氏芽孢杆菌作为一种新的微生物菌剂的优势菌株，目前的研究还局限于实验室 和盆栽实验阶段。譬如，Jian等对阿氏芽孢杆菌GZ03在实验室进行了一些理化性质的研究。 Aketi等用微宇宙土壤培养研究了阿氏芽孢杆菌对作物的促生效果。Seulki采用盆栽试验， 研究了阿氏芽孢杆菌促进土壤磷有效化的效果。Sol等在探究阿氏芽孢杆菌对植物的促生 效果时，利用了微宇宙实验进行了验证。因此，有待进一步确证阿氏芽孢杆菌的田间促生作 用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为了克服现有技术中存在上述不足，提供一株兼具高效产生长 素、产氨、产铁载体、解磷、耐盐、拮抗等多功能复合的阿氏芽孢杆菌J5,该菌株能提高种子 发芽率、促进植物生长和提高植物产量等。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供阿氏芽孢杆菌J5在产生长素或/和产氨或/和产铁 载体或/和解磷或/和耐盐或/和拮抗或/和促进种子发芽或/和促进植物生长中的应用。
[0009] 为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的： 一株阿氏芽抱杆菌(Bacillus aryabhattai)J5，简称J5菌株，该菌株于2015年10月15 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏编号为CGMCC No . 11508，分类命名：阿氏芽孢杆菌Bacillus aryabhattai ;保藏地址：北京市朝阳区北辰 西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0010] 本发明所述的阿氏芽孢杆菌(feciDus aiyaMaiiai )J5是从广东省广州市华南 农业大学农场的菜园土中分离纯化所得。该菌株具有一个内生芽孢，属革兰氏阳性菌，菌体 为杆状，有运动性，好氧;在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24小时的菌落为圆形或不规则形， 48h后菌落全部为圆形，微黄色，直径约为2~3mm，边缘不整齐，扁平湿润。菌株具有较强的 产IAA、铁载体及解磷能力，经过生理生化和分子鉴定为阿氏芽孢杆菌，其拉丁名为： aiyaMaiiai，菌株的16S rRNA基因序列测定结果如SEQ ID N0:1所不。
[0011] J5菌的保藏方法，其保藏培养基的成分为牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化钠5.0 g，琼脂15.0 g，蒸馏水1000 mL，或按照此比例配制成的培养基，pH值为7.0~7.2。按常规菌 种保藏温度保藏。
[0012] 一种微生物菌剂，包含如上所述的阿氏芽孢杆菌(ifeciDus aiyaMaiiai )J5。 [0013]优选地，所述的微生物菌剂中J5菌株的浓度为1.0~9.0 X 108cfu/ml。
[0014] 如上所述微生物菌剂在产生长素或/和产氨或/和产铁载体或/和蛋白酶或/和过 氧化氢酶或/和分解难溶性磷或/和耐盐或/和抑菌中的应用。
[0015] 如上所述微生物菌剂在促进种子发芽或/和促进植物生长中的应用。
[0016] 如上所述的阿氏芽孢杆菌airaMaiiai )J5在产生长素或/和产氨或/ 和产铁载体或/和蛋白酶或/和过氧化氢酶或/和分解难溶性磷或/和耐盐或/和抑菌中的应 用。
[0017] 如上所述的阿氏芽孢杆菌(ifeciDus aiyaMaiiai )J5在促进种子发芽或/和促 进植物生长中的应用。
[0018] 更优选地，所述植物为玉米。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： 本发明的阿氏芽孢杆菌J5菌株在含盐量11%的培养条件下，生长良好，显示了超好的耐 盐性，在已报道的阿氏芽孢杆菌菌株中效果最好;菌株J5的铁载体实验显示其具有较大的 橙色晕圈，产铁载体含量高达53.7%，这是首次报道高螯合能力铁载体的阿氏芽孢杆菌菌 株。菌株J5不仅取得了很好的实验室及盆栽试验效果，还研究了菌株J5在玉米大田中的应 用，结果显示，玉米增产37.1%，穗长增加10.6%，穗粗提高7%，玉米总颗粒数增长9%，玉米的 鲜重提高了 35.8%，干重提高了 44.4%，百粒重提高了 35%。因此，本发明的阿氏芽孢杆菌J5具 备了产生长素，产铁载体，产氨，产蛋白酶，耐盐，拮抗，溶磷的综合功能，且效果显著。另外， 本研究还比较了不同菌剂施用方式对菌株J5进行盆栽玉米植株生长的影响，为后期科学合 理施肥方法提供数据支撑。若利用阿氏芽孢杆菌J5制成微生物菌剂作为粮食作物生长的新 生物菌剂，将具有巨大的市场应用前景。
【附图说明】
[0020] 图1为J5菌株芽孢染色显微照片，菌体中椭圆形部分为芽孢。
[0021] 图2为J5菌株革兰氏染色显微照片，菌体被染成紫色。
[0022]图3为J5菌株的系统发育树。
[0023]图4为不同菌株产IAA的定性颜色对比图。
[0024]图5为J5菌株耐盐性实验图。
[0025]图6为J5菌株产铁载体图。
[0026]图7为J5菌株产氨实验图片，A15为阳性对照。
[0027]图8为J5菌株产过氧化氢酶结果图，A15为阳性对照。
[0028]图9为J5菌株产蛋白酶实验结果。
[0029]图10为J5菌株对香蕉枯萎病的拮抗实验结果。
[0030]图11为J5菌株利用柠檬酸盐实验结果，A15为阳性对照。
[0031]图12为J5菌株的吲哚实验照片，A15为阳性对照。
[0032]图13为J5菌株的促进玉米发芽试验照片。
[0033]图14为J5菌剂促进玉米生长盆栽试验照片。
[0034]图15为J5菌剂不同施肥下对促进玉米生长盆栽试验照片。
[0035]图16为J5菌剂促进玉米生长田间小区试验照片。
【具体实施方式】
[0036]下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例 只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特 殊说明，均为常规方法;所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂 和材料。实施例1菌株的分离 S1.分离：以广东省广州市天河区华南农业大学跃进北农场的菜园土为筛选土样，采用 平板涂布法准确称取筛选土样l〇.〇g，放入装有90mL无菌水的250mL三角瓶中（加玻璃珠）， 摇床振荡30min，使细胞充分分散，静置20~30s，取上清液进行10倍递减稀释，采用104~106 稀释度，用移液枪分别吸取稀释液O.lmL，涂布在牛肉膏蛋白胨平板上，28°C倒置培养48h。 选择合适的浓度平板，按照形态、大小、颜色，挑取不同菌株的典型单个菌落，在培养基上纯 化后，将筛选的菌株进行斜面保存，备用。
[0037] S2.产生长素 IAA的筛选:经过平板稀释法，根据平板上长出菌落的形态、大小、质 地、颜色等形态学特征的不同，共分离出45株细菌。经过产IAA定性和定量筛选，J5菌株分泌 IAA最多，24 h时转化IAA达到20.1 mg · I/1，后经过多次传代，产IAA稳定。将筛选出的J5菌 株利用平板划线后，保存于牛肉膏蛋白胨培养基所制斜面，置于4°C冰箱备用。
[0038]实施例2 J5菌株特性鉴定 菌体形态特性:革兰氏阳性菌，有芽孢。菌体为杆状，有运动性，专性需氧。芽孢染色照 片见图1。
[0039] 菌落形态特性:在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24h后形成的菌落为圆形或不规则 状，48h后菌落全部为圆形，微黄色，直径约为2-3_，边缘不整齐，扁平湿润。
[0040] 生长特性:在牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化钠5.0 g，水1L的液体培养基中， 转速113 rpm，温度30°C，起始pH值为7.0的条件下，培养18h，测得活菌数为（1.94± 0.60) X 108cfu · mL_1〇
[0041] 生理、生化特性:参考《伯杰氏细菌鉴定手册》的常规实验方法，对此菌株进行一些 生理生化试验，实验结果见表1。
[0042] 表1菌株J5生理生化试验
注:表中"+"为阳性，"一"为阴性。
[0043]分子生物学特性:采用试剂盒法提取J5菌株的总DNA。采用细菌16S rDNA通用引物 27f:(AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG)和1492r:(TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT T)，PCR扩 增细菌的16S rDNA，在1 OOObp附近出现明显的条带，将PCR扩增产物回收后进行序列测定， 将获得的DNA序列输入GenBank，以Blast程序对数据库中的所有序列进行比较分析，结果发 现本发明所述菌株的16S rDNA序列和与GenBank中阿氏芽孢杆菌具有较高的同源性，其相 似度为100 % (见图3)。结合上述的平板菌落特征、生理生化特性、16S rDNA序列的结果，初 步鉴定J5菌株为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai strain)，分类命名：阿氏芽孢杆菌 Bacillus aryabhattai。该菌株于2015年10月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 11508,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1 号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0044]实施例3 J5菌产生长素效果 生长素定性测定:将J5菌接种于含有L-色氨酸（100 yg/mL)的50mL的LB液体培养 基中，30°C，150r/min摇床培养24h。取300 yL培养液滴于白色陶瓷板上，同时加300 yL Salkowski比色液，设300yL的灭菌LB培养基作为阴性对照，10、20、30、50(此/11^)生长素的 比色液作为阳性对照。将白色陶瓷板于室温、避光条件下放置30 min后观察，颜色变红者 表示能够产生长素。试验结果见图4。
[0045]生长素定量测定:将J5菌接种于含有L-色氨酸（100 yg/rnL)的50mL LB液体培养 基中，三个重复，30°C，150r/min摇床培养24h。将培养液分别在8000Xg下离心10min，取 4mL上清液加入4mL Salkowski比色液，混匀，室温、黑暗中静置30min，使用紫外分光光度 计，在53011111下测吸光度，同时用无菌培养基做相同处理作为对照，采用0、10、20、30、50( 11 g/mL)的生长素作标准曲线。J5菌产生长素含量达到20.1 mg/L。
[0046]实施例4 J5菌耐盐性测定 将J5菌株划线到0%，1%，3%，5%，7%，9%，11%，13%的营养琼脂平板上，培养24h，观察菌株 的生长情况。试验结果如图5。菌株J5的耐盐能力可达到11 g· 100ml/1。这么强的耐盐性在 目前已报道的阿氏芽孢杆菌中是最高的。
[0047]实施例5 J5菌产铁载体能力测定 定性:将菌株转接到LB平板上培养24-48 h后，采用点接种法接在MSA-CAS固体检测平 板上，点3个重复，30°C培养72 h，观察检测平板上菌落外黄色晕圈的大小，分泌铁载体的细 菌菌落周围会出现明显的橙色铁载体晕圈。结果菌株J5晕圈较大，产铁载体能力强。如图6。 [0048]定量:将菌株接种于限铁MSA液体培养基中，28°C摇床培养（150 rpm)48 h;菌悬 液经lOOOOrpm离心15 min，取上清液，菌液和CAS检测液1:1的体积充分混匀，静止1 h后，测 定630 nm波长处的吸光值(As)，取双蒸水作为对照调零，以同法测定的未接种的MSA液体培 养基的吸光值作为参比值(Ar)，并计算铁载体活性单位（[(Ar-A S)/Ar]X100)。菌株J5的活 性可达53.7%，首次报道属于产高螯合铁载体的阿氏芽孢杆菌。
[0049] 实施例6 J5菌产水溶性磷的效果实验 三角瓶中装入50mL已灭菌的难溶无机磷培养基（葡萄糖10.0g，硫酸铵0.5g，氯化钠 〇.3g，氯化钾0.3g，七水硫酸亚铁0.03g，硫酸猛0.03g，酵母膏0.4g，磷酸^lOg，蒸 馏水1000mL)，pH 7.0~7.5(磷酸钙的浓度为5.0g · I/1)，接入J5菌制成菌液后在28°C， 150rpm，摇床培养7d。将培养液在10000 rpm，4°C离心15min，取上清液用钼锑抗比色法测定 有效磷含量。经过5天的培养，有效溶磷量为94. Omg. kg"1。
[0050] 实施例7 J5菌产氨效果试验 将J5菌适量接种于蛋白胨水培养基中，置室温培养3d，加入NessleH式剂数滴，观察是 否出现黄褐色沉淀。试验结果见图7。结果表明:J5菌具有产氨功能。
[0051 ]实施例8 J5菌产过氧化氢酶试验 将J5菌在牛肉膏蛋白胨培养基上活化24 h后，挑适量供试菌株于载玻片上，滴加3%过 氧化氢于供试菌株上，立即观察，有大量气泡产生，即为阳性，反之为阴性。以A15为阳性对 照，试验结果如图8所示，表明J5菌的过氧化氢酶试验为阳性。
[0052]实施例9 J5菌产蛋白酶效果试验 将J5菌株接种到蛋白酶检测培养基(蛋白胨10 g，氯化钠5 g，氯化钙0.1 g，脱脂奶粉 10 g，琼脂18 g，115°C灭菌30 min，pH 7.2~7.4。）上，30 °C培养2 d，观察菌落周围的透明 圈大小来判断菌株的蛋白质水解能力，结果如图9所示，与对照相比，菌株平板上的蛋白质 几乎都被利用完全，说明该菌株利用蛋白质的能力很强。
[0053]实施例10 J5菌对病原菌的抑制效果试验 将香蕉枯萎病菌腫/. SjO.cMaose )接种于营养琼脂培养基平 板的中央，同时于该平板的两侧各划线接种J5菌株，培养，观察。结果表明J5菌对香蕉枯萎 病菌有一定抑制作用，如图10。
[0054]实施例11 J5菌株对玉米种子发芽的影响 将玉米种子用75%乙醇浸泡lmin，然后再利用5%次氯酸钠溶液浸泡2min，再用无菌水冲 洗3~4次，然后用无菌的滤纸干燥种子，所有操作尽可能保证无菌条件下进行。处理好的种 子放在干燥无菌的容器里备用。设置两个处理组(第一组加入J5菌株的发酵液，第2组加入 未接种菌株的培养基作为空白对照），将玉米种子分别在一二组中浸泡30min。将灭菌的培 养皿里事先铺好两层无菌滤纸，将浸种处理的种子放置在培养皿中（每皿10颗种子），在种 子上覆盖一层滤纸，培养(30 °C)。每天每皿加2mL无菌水，加水时间统一。各菌种处理设置4 个重复。测定其根长、芽长及发芽率(见表2)。菌株J5的根长和芽长及发芽率在发芽的第五 天达到显著效果，较对照处理分别提高了 47.2%，4.6%，12.5%。如图13所示。
[0055]表2 J5菌株对玉米种子发芽的影响
注:表中各数值为平均值±标准误(n=4)，同列数据中的相同字母者表示方差分析无显 著差异(P<〇.05)，以下各表数据处理方法相同。
[0056]实施例12 J5菌株促进盆栽玉米植株生长效果的试验 菌悬液制备:将J5菌种活化后点接入LB液体培养基，经过24h振荡培养，培养温度为30 °C，转速为150r/min;将菌液滴入血球计数板，在光学显微镜下计数，得出菌液中菌体细胞 浓度;将菌液于高速离心机中离心，转速6000r/min，离心5min;将菌体用灭菌水重悬；用于 接种生菜的菌株浓度为3.0X10 8cfu/ml的菌悬液。
[0057]玉米育苗:玉米水洗催芽，用滤纸沁润保存水分，放置在30 °C培养箱中，两天后露 芽播种至苗床上，苗生长至高约25 cm，方可移苗，每盆四棵苗。
[0058] 试验共设4个处理，每个处理4个重复，每个重复4棵苗。每盆装土量10.0 kg(未施 加任何化肥）。各处理为:不施加菌剂简称CK;施加菌剂J5。菌液活菌数达105~6 cfu · ml/1，移 苗两天后，分别接种菌液经离心用无菌水重悬液30 mL，CK做同样处理。每天浇水适量，每盆 的水量要相同，播撒均匀，不要使水流出盆底以免肥料损失造成误差。
[0059] 各菌剂对玉米生长影响的测定方法:接种20天和40天后，分别采样测定4处理的玉 米株高，叶片数，叶绿素，根长，叶长，叶宽，茎粗，鲜重和干重。测量玉米株高(玉米地面到玉 米叶片捋直后叶尖端的高度），测量玉米叶片(包括长出的所有叶片），叶绿素（用叶绿素仪 测定从下至上第三片叶子），叶长和叶宽（用卷尺测定从下至上第三片叶子），茎粗（用游标 卡尺测定）。鲜重:取每盆的玉米苗，将玉米植株洗净后，将茎、叶和地下部分分离，用万分之 一电子天平分别称量其鲜重，然后于105 °C杀青15 min，65 °C恒温烘干至恒重，并用万分 之一电子天平称重。结果表明，J5菌株对玉米植株的生长是有促进作用的。玉米植株的生长 情况如图14。
[0060]表3接种10天后，J5菌株对盆栽玉米植株生长的影响 表3接种10天后，J5菌株对盆栽玉米植株生长的影响
注:表3至表表17中各数值均为每一棵的测定结果。
[0061]
实施例13在不同施肥方式下，J5菌株对盆栽玉米植株生长的影响研究 试验共设4个处理，每个处理4个重复，每个重复4棵苗。每盆装土量10.0 kg(按照每千 克土壤施加50 g N、10 g P205、10 g K20)。各处理为:不施加菌肥简称CK;将菌液直接沿植 株茎周围浇灌下去，简称浇施;将菌液与土壤混合搅拌后移栽植株，简称混施;将玉米苗的 根部分在菌液中浸泡10 min后移栽，简称蘸根。菌液活菌数达105-106 cfu · ml/1，移苗两天 后，分别接种菌液经离心用灭菌水的重悬液30 mL，CK做同样处理。每天浇水适量，每盆的水 量要相同，播撒均匀，不要使水流出盆底以免肥料损失造成误差。
[0062]接种20天和40天后，分别采样测定4处理的玉米株高，叶片数，叶绿素，根长，叶长， 叶宽，茎粗，鲜重和干重。测量玉米株高（玉米地面到玉米叶片捋直后叶尖端的高度），测量 玉米叶片(包括长出的所有叶片），叶绿素（用叶绿素仪测定从下至上第三片叶子），叶长和 叶宽（用卷尺测定从下至上第三片叶子），茎粗（用游标卡尺测定）。鲜重:取每盆的玉米苗， 将玉米植株洗净晾干后，将茎、叶和地下部分分离，用万分之一电子天平分别称量其鲜重， 然后于105 °C杀青15 min，65 °C恒温烘干至恒重，并用万分之一电子天平称重。结果表明， 采用不同的施用菌剂方式，对玉米的促生效果各不相同，为今后科学施肥提供了重要依据。 玉米植株生长情况如图15。
[0063]表8接种20天，J5菌株在不同施肥方式下对盆栽玉米植株生长的影响
注:各数值均为每一棵的测定结果，且为平均值(n=4)，同列的数据的相同字母表示无
显著性差异。
[0064]表9接种40天，J5菌株在不同施肥方式下对盆栽玉米植株生长的影响
注:各数值均为每一棵的测定结果，且为平均值(n=4)，同列的数据的相同字母表示无 显著性差异。
[0065]表10收获时，J5菌株在不同施肥方式下对盆栽玉米植株各部位鲜重的比较
注:各数值均为每一棵的测定结果，且为平均值(n=4)，同列数据相同字母表示无显著 性差异。[0066] 表11收获时，J5菌株在不同施肥方式下对盆栽玉米植株各部位干重的比较
注:各数值均为每一棵的测定结果，且为平均值(n=4)，同列数据相同字母表示无显著 性差异。
[0067] 实施例14 J5菌株提高大田玉米植株生长的研究 试验共设计了 3个处理:CK处理;菌剂4处理;菌剂5处理。各处理均施加等量的化肥。试 验共9个小区，共3排，每排3个小区，每个处理3个重复，按照同排同行均不同处理的原则随 机分配个处理的种植位置。每个小区种植玉米植株2行，行距为50 cm，同行植株前后距离为 20 cm，每个小区共种植了40颗玉米植株，每个小区包括左右保护行所占面积约为8.2 m2， 施肥量按照7.5千克每亩的标准施加1~2次。
[0068] 用常规法测定不同时期玉米株高、根长、叶片数、叶长、叶宽、茎粗、鲜重和干重，成 熟期穗长、穗粗、穗粒数、百粒重和经济产量等(产量:为单个处理内的一个实验区的产量； 穗长:为样品植株上玉米果实的长度;穗粗:样品植株上玉米果实选取周长最长部位出的直 径;总颗粒数:玉米果实上行数*列数的结果;鲜重:为样品植株上玉米果实的鲜重;干重:为 样品植株上玉米果实的干重；百粒重：采集的样品植株上随机挑选的100颗玉米粒的重 量）。经济产量取样方法为每一小区玉米鲜重。结果表明，施用菌剂J5对大田玉米的生长具 有显著的促进作用。目前已有的报道，阿氏芽孢杆菌的研究主要是集中在实验室和盆栽阶 段，本研究通过田间试验进一步确证了阿氏芽孢杆菌对粮食作物的促生作用。玉米的生长 情况如图16。
[0069] 表12接种30天后，J5菌株对大田玉米植株生长的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0070] 表13接种30天后，J5菌株对大田玉米植株鲜重的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0071] 表14接种30天后，J5菌株对大田玉米植株干重的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0072] 表15接种75天后，J5菌株对大田玉米植株生长指标的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0073] 表16接种75天后，J5菌对大田玉米植株鲜重的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0074] 表17接种75天后，J5菌株对大田玉米植株干重的影响
注:各数值均为一棵植株的测量值，且为平均值(n=4)，同列的数据的不同字母表示有 显著性差异。
[0075] 表18收获时玉米的产量及果实的各指标比较
注:各数值均为平均值，且ri=4,同列数据的不同字母表示有显著性差异。产量:为单个 处理内的一个实验区的总产量。穗长:为样品植株上玉米果实的长度;穗粗:样品植株上玉 米果实选取周长最长部位出的直径;总颗粒数:玉米果实上行数*列数的结果;鲜重:为样品 植株上玉米果实的鲜重;干重：为样品植株上玉米果实的干重；百粒重:采集的样品植株上 随机挑选的100颗玉米粒的重量。
【主权项】
1. 一株阿氏芽孢杆菌)J5,其特征在于，所述菌株于2015年10 月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 115012. -种微生物菌剂，其特征在于，包含权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌 aryabhattai )J5〇3. 根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，J5菌株的浓度为1.0~9.0 X 108cfu/ ml〇4. 权利要求2所述微生物菌剂在产生长素或/和产氨或/和产铁载体或/和蛋白酶或/和 过氧化氢酶或/和分解难溶性磷或/和耐盐或/和抑菌中的应用。5. 权利要求2所述微生物菌剂在促进种子发芽或/和促进植物生长中的应用。6. 权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌(feciDus aiyaMaiiai )J5在产生长素或/和产氨 或/和产铁载体或/和蛋白酶或/和过氧化氢酶或/和分解难溶性磷或/和耐盐或/和抑菌中 的应用。7. 权利要求1所述的阿氏芽孢杆菌(feciDus aiyaMaiiai )J5在促进种子发芽或/和 促进植物生长中的应用。8. 根据权利要求5或7所述的应用，所述植物为玉米。
【文档编号】A01N63/00GK105985922SQ201610036163
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2016年1月20日
【发明人】蔡燕飞, 曹禺, 李永涛, 江亚雄, 王玉琪, 王琰, 张慧敏
【申请人】华南农业大学