抑制EGFR基因表达的siRNA及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种抑制EGFR基因表达的siRNA及其应用。所述siRNA的核苷酸序列为以下双链RNA分子中的任意一种：正义链：5’?GCAGAUCAUCAGAGGAAAU?3’，反义链：5’?AUUUCCUCUGAUGAUCUGC?3’；正义链：5’?CCAAGGAAGCCAAGCCAAA?3’，反义链：5’?UUUGGCUUGGCUUCCUUGG?3’；正义链：5’?GGAGAUAAGUGAUGGAGAU?3’，反义链：5’?AUCUCCAUCACUUAUCUCC?3’。这些siRNA可以特异高效地抑制EGFR基因表达，降低细胞生长增殖速率。
【专利说明】
抑制EGFR基因表达的s i RNA及其应用
技术领域
[00011本发明涉及一种抑制EGFR基因表达的siRNA及其应用，属于分子生物与生物医药
技术领域。
【背景技术】
[0002] RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内 同源mRNA从而阻断靶基因表达，是细胞出现靶基因缺失的表型。小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)为21-25个核苷酸的小分子干扰核糖核酸，可有效地定位目标 mRNA，siRNA具有特殊的结构特征，即5 '端磷酸基团和3 '端的羟基，其两条链的3 '端各有两 个碱基突出于末端。由siRNA中的反义链指导合成一种被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC) 的核糖体，再由RISC介导切割目的mRNA分子中与siRNA反义链互补的区域，从而实现干扰靶 基因表达的功能。同时，siRNA可以作为特殊的引物，在依赖于RNA的RNA聚合酶的作用下，以 目的mRNA为模版合成dsRNA，后者又可被降解为新的siRNA，重新进入上述循环。因此，即使 外源siRNA的注入量较低，该信号也可能迅速被放大，导致全面的基因沉默。
[0003] 表皮生长因子受体（epidermal growth factory receptor，EGFR)是一个由单一 肽链组成的跨膜糖蛋白，由氨基端细胞外配体结合结构域、疏水性单一跨膜螺旋和胞浆 酪氨酸激酶结构域组成，C-端含有数个重要的酪氨酸残基和受体调苄基序，属于HER家族， 主要分布于细胞膜的表面。EGFR在许多肿瘤中过表达或发生突变，其主要作用机制是通过 与细胞外的配体结合后进行同源或异源二聚化，引起胞内酪氨酸残基自身磷酸化，活化的 受体募集信号合体并活化下游信号转导蛋白，从而调节肿瘤细胞的生长、侵袭、转化、血管 生成及转移。
[0004] 人类恶性肿瘤普遍表达EGFR，上消化道、结肠、胰腺、乳腺、卵巢、膀胱、肾等组织恶 性肿瘤和神经胶质瘤中EGFR mRNA或蛋白表达过量，或伴有EGFR基因的扩增。研究显示，与 不表达EGFR配体的肿瘤相比，共表达EGFR及其配体的肿瘤生长迅速，恶性度高，患者生存期 短。EGFR除了能刺激肿瘤细胞增殖外，还与肿瘤细胞血管形成有关。
[0005] 许多肿瘤组织同时表达EGFR及其配体，能够通过自分泌和旁分泌途径活化EGFR。 已有的体内外研究表明，用EGFR抑制剂阻断肿瘤细胞内EGFR活化的信号通路能够抑制肿瘤 细胞的增殖和生存。另外，研究发现成人EGFR缺乏明显的生理作用，而EGFR过表达与肿瘤患 者预后较差相关，这些研究结果表明EGFR及其配体网络可作为肿瘤分子治疗策略的合理靶 位。采用RNAi技术研究EGFR在肿瘤发病过程中行使的功能是对肿瘤发病机制研究的重要补 充。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供能够特异高效地抑制EGFR基因表达的s iRNA及其 应用。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
[0008] 抑制EGFR基因表达的s iRNA，其核苷酸序列为以下双链RNA分子中的任意一种：
[0009] 正义链:5' -GCAGAUCAUCAGAGGAAAU-3'，反义链:5' -AUUUCCUCUGAUGAUCUGC-3' ； [0010]正义链:5 ' -CCAAGGAAGCCAAGCCAAA-3 '，反义链:5 ' -UUUGGCUUGGCUUCCUUGG-3 ' ；
[0011] 正义链:5 ' -GGAGAUAAGUGAUGGAGAU-3 '，反义链:5 ' -AUCUCCAUCACUUAUCUCC-3 '。
[0012] 本发明还包括上述抑制EGFR基因表达的siRNA在制备预防或治疗人类表皮生长因 子受体相关的疾病的药物中的应用。具体的，所述的疾病为肺癌。
[0013] 进一步地，本发明还提供一种降低人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长增殖率的方 法，具体为:将上述siRNA导入目的细胞，使目的细胞的生长增殖速率下降。
[0014] 与现有技术相比，本发明提供一系列新的抑制EGFR基因表达的SiRNA及其在制药 中的应用，体外试验结果表明，这些siRNA可以特异高效地抑制EGFR基因表达，降低细胞生 长增殖速率。
【附图说明】
[0015]图1为实施例2中各实验组和对照组分别作用于叱1-!1460细胞后16 8七6以 blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平的实时拍照图；
[0016] 图2为实施例2中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后We stern blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平定量图；
[0017]图3为实施例3中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后各处理组细胞被 Α0/ΕΒ染色的形态图，其中（a)为空白对照组，（b)为阴性对照组，（c)为EGFR siRNA正常实验 组；
[0018] 图4为实施例4中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后We stern blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平的实时拍照图；
[0019] 图5为实施例4中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后We stern blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平定量图；
[0020] 图6为实施例5中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后各处理组细胞胞 被Α0/ΕΒ染色的形态图，其中（a)为空白对照组，（b)为阴性对照组，（c)为EGFR siRNA正常实 验组；
[0021] 图7为实施例6中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后We stern blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平的实时拍照图；
[0022] 图8为实施例6中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后We stern blotting检测各处理组细胞中EGFR的表达水平定量图。
[0023]图9为实施例7中各实验组和对照组分别作用于NCI-H460细胞后各处理组细胞被 Α0/ΕΒ染色的形态图，其中（a)为空白对照组，（b)为阴性对照组，（c)为EGFR siRNA正常实验 组。
【具体实施方式】
[0024] 本发明提供了三种抑制EGFR基因表达的siRNA，分别如下：
[0025] 第一种：正义链：5'-GCAGAUCAUCAGAGGAAAU-3'（SEQIDN0·l)，反义链 ：5'-AUUUCCUCUGAUGAUCUGC-3'（SEQ ID N0.2);
[0026] 第二种：正义链：5'-CCAAGGAAGCCAAGCCAAA-3'（SEQIDN0·3)，反义链 ：5'-UUUGGCUUGGCUUCCUUGG-3'（SEQ ID N0.4);
[0027] 第三种：正义链：5'-GGAGAUAAGUGAUGGAGAU-3'（SEQIDN0·5)，反义链 ：5'-AUCUCCAUCACUUAUCUCC-3'（SEQ ID N0.6)。
[0028] 本发明还提供上述抑制EGFR基因表达的siRNA在制备预防或治疗人类表皮生长因 子受体相关的疾病的药物中的应用，具体是在制备预防或治疗人类肺癌的药物中的应用。
[0029] 本发明进一步还提供一种降低人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长增殖率的方法， 具体为:将上述siRNA导入目的细胞，使目的细胞的生长增殖速率下降。
[0030] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但 本发明并不限于以下实施例。
[0031 ]下述各实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述各实施例中所用 的实验材料，如无特殊说明，均为来自常规生化试剂商店购买得到的。
[0032]人非小细胞肺癌NCI-H460,购于中国科学院细胞库。
[0033] Gibco? DMEM basic(lX)培养液、Gibco? FBS Qualifieg Australia Origin胎 牛血清购自Lifetechnologies公司。兔抗人EGFR-抗、鼠抗人β-actin购自Abeam公司。抗兔 IgG二抗、抗鼠 IgG二抗购自北京中杉金桥公司。PBS、RIPA裂解液、BCA法蛋白测定试剂盒购 自北京碧云天公司。Lipofectamine? 2000购自Invitrogen。化学发光剂Supersignal West Pico购自Thermo AO-EB双染试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。
[0034] 实施例1:EGFR siRNA的设计合成
[0035] -、EGFR siRNA的合成
[0036] 通过Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)数据库中获取人EGFR喊 基序列全长(T01001)，如下：
[0038] 根据RNAi原理，结合设计软件，在实验的基础上，设计合成三条EGFRsiRNA和一条 阴性对照siRNA。进行BLAST比对检查一保证和其他基因没有同源性。
[0039] 第一条：正义链：5'-GCAGAUCAUCAGAGGAAAU-3'（SEQIDN0·l)，反义链 ：5'-AUUUCCUCUGAUGAUCUGC-3'（SEQ ID N0.2);
[0040] 第二条：正义链：5'-CCAAGGAAGCCAAGCCAAA-3'（SEQIDN0·3)，反义链 ：5'-UUUGGCUUGGCUUCCUUGG-3'（SEQ ID N0.4);
[0041] 第三条：正义链：5'-GGAGAUAAGUGAUGGAGAU-3'（SEQIDN0·5)，反义链 ：5'- AUCUCCAUCACUUAUCUCC-3'（SEQ ID N0.6)。
[0042] 上述各EGFR siRNA序列均由英潍捷基（上海）贸易有限公司（厂址：北京东三环北 路2号南银大厦1711，邮编：100027)进行化学合成：以NTP为原料，利用ABI3900核酸合成仪 分别化学合成单链RNA，最后在退火缓冲液的条件下各单链RNA退火形成双链RNA。为提高 siRNA在体内的稳定性，在各链化学合成前，利用化学反应将各链合成原料中的嘧啶核苷酸 的核糖进行2 '羟基的甲氧基替代修饰。
[0043] 二、阴性对照siRNA的合成
[0044] 正义链：5'-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3'（SEQ ID N0.7)，反义链：5'_ ACGUGACACGUUCGGAGAA-3'（SEQ ID N0.8)。
[0045] 由英潍捷基(上海)贸易有限公司（厂址:北京东三环北路2号南银大厦1711，邮编： 100027)进行化学合成：以NTP为原料，利用ABI3900核酸合成仪分别化学合成单链RNA，最后 在退火缓冲液的条件下各单链RNA退火形成双链RNA。为提高siRNA在体内的稳定性，在各链 化学合成前，利用化学反应将各链合成原料中的嘧啶核苷酸的核糖进行2'羟基的甲氧基替 代修饰。
[0046] 实施例2:实施例1中第一条EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞EGFR基因表达的影 响
[0047] 一、分组转染
[0048] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板种，分为3组：
[0049] 空白对照组：含有10% (体积分数含量）灭活的胎牛血清的DMEM basic(IX)培养 液。
[0050] EGFR SiRNA正常实验组:含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清的DMEM basic (IX)培养液;转染1 OOprno 1实施例1中第一条EGFR siRNA。
[0051 ] 阴性对照组(Negative Control):含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清DMEM bas i c (1X)培养液;转染1 OOpmo 1实施例1中的阴性对照s iRNA。
[0052] 三组细胞先常规培养24h，然后根据组别进行转染(按Lipofectamine?2000试剂说 明书操作），转染后继续培养6h后，根据组别更换相应的培养液，继续培养48h后进行实验； 培养条件:置于37 °C、5 % C02、饱和湿度的C02培养箱中培养。
[0053]二、Western blotting检测EGFR蛋白的表达
[0054]移除干净6孔板中的培养液，用冷PBS洗涤2次，收集细胞后充分裂解，4°C、12000转 离心15min，收集上部澄清裂解液后使用BCA蛋白测定试剂盒测定3组裂解液的蛋白浓度，按 裂解液比Loading Buf f er为4:1混匀，与100°C加热变性5min，按每个泳道30yg总蛋白量换 算上样体积上样，行10 % SDS-PAGE电泳，待蛋白充分分离后，转移至PVDF膜上，置于含5 %脱 脂奶粉TBST的封闭液中，室温封闭lh，取出膜用IX TBST溶液洗膜5次，每次5min，将裁剪好 的膜分别置于EGFR-抗（1:5000稀释)和内参β-actin-抗（1:800稀释)4°C孵育过夜，然后 用IX TBST洗膜5次，每次5min，分别与抗兔IgG二抗（1:3000稀释）、抗鼠 IgG二抗（1:3000稀 释)室温孵育2h，将膜与化学发光液孵育后进行显色，扫描图片。检测各组EGFR蛋白和内参 β-actin蛋白所对应的条带A值，然后将Aegfr/Ajs-actin的比值进行统计学分析(Quantity One 软件）。
[0055] 结果如图1、图2。与阴性对照组比较，EGFR s iRNA转染后细胞中EGFR基因表达显著 下调(P〈0.01)。
[0056] 实施例3:实施例1中第一条EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响 [0057] 一、分组转染
[0058] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板中，分为3组。具体分组同实施例2的步骤一。
[0059] 二、EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响
[0060]消化各组细胞并收集，用冷PBS清洗2次后，在用新鲜冷PBS悬浮细胞，按lml细胞悬 浮液加入20μ1 Α0-ΕΒ混合液(Α0-ΕΒ试剂使用方法见说明书），避光染色3-5分钟后，制片于 荧光显微镜下观察拍照。
[0061] 吖啶橙(Α0)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色 荧光，溴化乙锭(ΕΒ)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现 为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧 光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态:活 细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或 圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞 (NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。结果如图3所示，空白对照组和阴性对照组细胞形 态与正常实验组有明显差别，有显著性差异(Ρ〈〇.05)。
[0062] 上述实验结果说明在体外NCI-H460细胞中，EGFR siRNA可以促进细胞发生凋亡。 [0063] 实施例4:实施例1中第二条EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞EGFR基因表达的影 响
[0064] 一、分组转染
[0065] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板种，分为3组：
[0066] 空白对照组：含有10% (体积分数含量）灭活的胎牛血清的DMEM basic(IX)培养 液。
[0067] EGFR siRNA正常实验组:含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清的DMEM basic (IX)培养液;转染1 OOprno 1实施例1中第二条EGFR siRNA。
[0068] 阴性对照组:含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清DMEM basic(lX)培养液； 转染lOOpmol实施例1中的阴性对照siRNA。
[0069] 三组细胞先常规培养24h，然后根据组别进行转染(按Lipofectamine?2000试剂说 明书操作），转染后继续培养6h后，根据组别更换相应的培养液，继续培养48h后进行实验； 培养条件:置于37 °C、5 % C02、饱和湿度的C02培养箱中培养。
[0070] 二、Western blotting检测EGFR蛋白的表达
[0071]移除干净6孔板中的培养液，用冷PBS洗涤2次，收集细胞后充分裂解，4°C、12000转 离心15min，收集上部澄清裂解液后使用BCA蛋白测定试剂盒测定3组裂解液的蛋白浓度，按 裂解液比Loading Buf f er为4:1混匀，与100°C加热变性5min，按每个泳道30yg总蛋白量换 算上样体积上样，行10 % SDS-PAGE电泳，待蛋白充分分离后，转移至PVDF膜上，置于含5 %脱 脂奶粉TBST的封闭液中，室温封闭lh，取出膜用IX TBST溶液洗膜5次，每次5min，将裁剪好 的膜分别置于EGFR-抗（1:5000稀释)和内参β-actin-抗（1:800稀释)4°C孵育过夜，然后 用IX TBST洗膜5次，每次5min，分别与抗兔IgG二抗（1:3000稀释）、抗鼠 IgG二抗（1:3000稀 释)室温孵育2h，将膜与化学发光液孵育后进行显色，使用红外成像系统进行拍照。检测各 组EGFR蛋白和内参β-act in蛋白所对应的条带A值，然后将AECFR/Afiitin的比值进行统计学分 析(Quantity One软件）。
[0072] 结果如图4、图5。与阴性对照组比较，EGFR siRNA转染后细胞中EGFR基因表达下 调。
[0073] 实施例5:实施例1中第二条EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响 [0074] 一、分组转染
[0075] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板中，分为3组。具体分组同实施例4的步骤一。
[0076] 二、EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响
[0077]消化各组细胞并收集，用冷PBS清洗2次后，在用新鲜冷PBS悬浮细胞，按lml细胞悬 浮液加入20μ1 Α0-ΕΒ混合液(Α0-ΕΒ试剂使用方法见说明书），避光染色3~5分钟后，制片于 荧光显微镜下观察拍照。
[0078] 吖啶橙(Α0)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色 荧光，溴化乙锭(ΕΒ)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现 为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧 光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态:活 细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或 圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞 (NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。结果如图6所示，空白对照组和阴性对照组细胞形 态与正常实验组有明显差别。
[0079] 上述实验结果说明在体外NCI-H460细胞中，EGFR siRNA可以促进细胞发生凋亡。
[0080] 实施例6:实施例1中第三条EGFR SiRNA在体外对NCI-H460细胞EGFR基因表达的影 响
[0081 ] 一、分组转染
[0082] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板种，分为3组：
[0083] 空白对照组：含有10% (体积分数含量）灭活的胎牛血清的DMEM basic(IX)培养 液。
[0084] EGFR siRNA正常实验组:含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清的DMEM basic (1X)培养液;转染1 OOprno 1实施例1中第三条EGFR s iRNA。
[0085] 阴性对照组:含有10% (体积分数含量)灭活的胎牛血清DMEM basic(lX)培养液； 转染lOOpmol实施例1中的阴性对照siRNA。
[0086] 三组细胞先常规培养24h，然后根据组别进行转染(按Lipofectamine?2000试剂说 明书操作），转染后继续培养6h后，根据组别更换相应的培养液，继续培养48h后进行实验； 培养条件:置于37 °C、5 % C02、饱和湿度的C02培养箱中培养。
[0087] 二、Western blotting检测EGFR蛋白的表达
[0088]移除干净6孔板中的培养液，用冷PBS洗涤2次，收集细胞后充分裂解，4°C、12000转 离心15min，收集上部澄清裂解液后使用BCA蛋白测定试剂盒测定3组裂解液的蛋白浓度，按 裂解液比Loading Buf f er为4:1混匀，与100°C加热变性5min，按每个泳道30yg总蛋白量换 算上样体积上样，行10 % SDS-PAGE电泳，待蛋白充分分离后，转移至PVDF膜上，置于含5 %脱 脂奶粉TBST的封闭液中，室温封闭lh，取出膜用IX TBST溶液洗膜5次，每次5min，将裁剪好 的膜分别置于EGFR-抗（1:5000稀释)和内参β-actin-抗（1:800稀释)4°C孵育过夜，然后 用IX TBST洗膜5次，每次5min，分别与抗兔IgG二抗（1:3000稀释）、抗鼠 IgG二抗（1:3000稀 释)室温孵育2h，将膜与化学发光液孵育后进行显色，使用红外成像系统进行拍照。检测各 组EGFR蛋白和内参β-act in蛋白所对应的条带A值，然后将AECFR/Afiitin的比值进行统计学分 析(Quantity One软件）。
[0089] 结果如图7、图8。与阴性对照组比较，EGFR siRNA转染后细胞中EGFR基因表达下 调。
[0090] 实施例7:实施例1中第三条EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响 [0091] 一、分组转染
[0092] 将NCI-H460细胞均匀铺在6孔板中，分为3组。具体分组同实施例6的步骤一。
[0093] 二、EGFR siRNA在体外对NCI-H460细胞凋亡的影响
[0094]消化各组细胞并收集，用冷PBS清洗2次后，在用新鲜冷PBS悬浮细胞，按lml细胞悬 浮液加入20μ1 Α0-ΕΒ混合液(Α0-ΕΒ试剂使用方法见说明书），避光染色3~5分钟后，制片于 荧光显微镜下观察拍照。
[0095] 吖啶橙(Α0)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色 荧光，溴化乙锭(ΕΒ)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现 为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧 光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态:活 细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或 圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞 (NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。结果如图9所示，空白对照组和阴性对照组细胞形 态与正常实验组有明显差别。
[0096] 上述实验结果说明在体外NCI-H460细胞中，EGFR siRNA可以促进细胞发生凋亡。
【主权项】
1. 抑制EGFR基因表达的s iRNA，其特征在于：其核苷酸序列为以下双链RNA分子中的任 意一种： 正义链:5 ' -GCAGAUCAUCAGAGGAAAU-3 '，反义链:5 ' -AUUUCCUCUGAUGAUCUGC-3 ' ； 正义链:5 ' -CCAAGGAAGCCAAGCCAAA-3 '，反义链:5 ' -UUUGGCUUGGCUUCCUUGG-3 ' ； 正义链:5 ' -GGAGAUAAGUGAUGGAGAU-3 '，反义链:5 ' -AUCUCCAUCACUUAUCUCC-3，。2. 权利要求1所述抑制EGFR基因表达的siRNA在制备预防或治疗人类表皮生长因子受 体相关的疾病的药物中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于:所述的疾病为肺癌。4. 降低人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长增殖率的方法，其特征在于:将权利要求1所 述siRNA导入目的细胞，使目的细胞的生长增殖速率下降。
【文档编号】A61K48/00GK105985961SQ201610583517
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2016年7月22日
【发明人】张国海, 彭艳, 吴亦明, 曾淑兰
【申请人】广西师范大学