取代吲哚类衍生物及其制备方法与应用

文档序号:10642539阅读:745来源:国知局
取代吲哚类衍生物及其制备方法与应用【专利摘要】本发明公开了一种取代吲哚类化合物及其制备方法和应用,所述取代吲哚类化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药,具有通式Ⅰ所示的结构。本发明还提供取代吲哚类化合物的制备方法以及含有一个或多个此类化合物的组合物在制备治疗和预防人丙型肝炎药物中的应用。【专利说明】取代吲哚类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
[0001]本发明属于医药领域技术,具体涉及一类取代吲哚类衍生物,本发明还涉及这类衍生物的制备方法及其在制备抗丙型肝炎药物中的用途。【
背景技术
】[0002]丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)RNA聚合酶(Non-Structure5B,NS5B)在HCV生命周期具有不可替代的重要作用,新型高效、低毒、抗耐药并具有良好的药代动力学性质的NS5B抑制剂是抗HCV药物研发的重要方向。HCVNS5BThumbSiteI抑制剂中已经有多个化合物正处于临床研究阶段,但该类抑制剂较差的药代动力学性质限制了其临床应用。因此,具有新结构、新机制的抗丙型肝炎药物的研发具有重要意义。[0003]杂环化合物具有广泛的抗病毒活性,它们一般是作为构成药效团的基本结构母核,以适合药物特殊作用靶点的空间要求,或者是作为活性取代基或环系的组成部分而产生相应的生物活性。药物之所以依赖于杂环是因为杂环较脂肪或芳香化合物在体内更不易代谢分解,且具有更好的生物相容性。吲哚是一类重要的芳杂环,其衍生物具有广泛的生物活性以及临床应用。本发明基于吲哚类似物良好的抗HCV活性,设计合成了一系列取代吲哚类衍生物,现有技术中未见此类化合物及其应用。【
发明内容】[0004]针对现有技术的不足,提供一种取代吲哚类衍生物及其制备方法,本发明还提供取代吲哚类衍生物的抗丙型肝炎病毒活性筛选结果及其在制备抗丙型肝炎药物中的应用。[0005]本发明的技术方案如下:[0006]1.取代吲哚类衍生物[0007]-种取代吲哚类衍生物,或其药学上可接受的盐、酯或前药,具有通式I所示的结构:[0008][0009]其中,[0010]Ri、R2各自独立的选自取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环、各种脂肪环,各种饱和脂肪链或各种不饱和脂肪链;[0011]R3为各种羧酸、羧酸脂或酰胺。[0012]根据本发明优选的,通式I中,Ri、R2各自独立的选自苯基、对甲基苯基、对甲氧基苯基、2-呋喃基、3-噻吩基、间甲基苯基、间氟苯基或对三氟甲基苯基;R3为羧基或甲酯基。[0013]根据本发明,进一步优选的,取代吲哚类化合物为如下具体化合物之一:L〇〇17」本发明中所述的"药学上可接受的盐"是指在可靠的医药评价范围内,化合物的盐类适于与人或较低等动物的组织相接触而无不适当的毒性、刺激及过敏反应等,具有相当合理的收益与风险比例,通常是水或油可溶的或可分散的,并可有效地用于其预期的用途。包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐,在这里是可做预期的用途并与式I化合物的化学性质相容的。适宜的盐的列表参见S.M.Birge等,J.Pharm.Sci.,1977,66,1-19页。[0018]本发明中所述的"前药"是指药学上可接受的衍生物,以便这些衍生物所得的生物转换产物是如式I化合物所定义的活性药物。[0019]2、取代吲哚类衍生物的制备方法[0020]本发明取代吲哚衍生物的制备方法,步骤为如下路线之一:[0021]路线一:以吲哚-6-甲酸甲酯1为初始原料,首先在N,N_二甲基甲酰胺溶液中与氯乙酰吗啉发生亲和取代反应生成中间体化合物2;然后中间体化合物2在二氯甲烷溶液中与N-溴代丁二酰亚胺反应生成中间体化合物3;然后中间体化合物3在二氧六环溶液中与各种取代硼酸反应生成目标产物a,随后不同的目标产物a在甲醇溶液中与氢氧化钠溶液反应得到目标产物b;[0022]合成路线一如下:[0023][0024]其中,R1J2同上述通式I所示;[0025]试剂及条件:(i)氯乙酰吗啉,氢化钠,N,N_二甲基甲酰胺,室温;(ii)二氯甲烷,N-溴代丁二酰亚胺;(iii)取代硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(iv)甲醇,氢氧化钠水溶液,回流。[0026]所述的取代硼酸为苯硼酸、对甲氧基苯硼酸、间氟苯硼酸、3-呋喃硼酸、对甲基苯硼酸、间甲基苯硼酸、2,4-二甲基苯硼酸、2-噻吩硼酸、2,3-二甲基苯硼酸或2-氟-3-甲氧基苯硼酸。[0027]路线二:以中间体化合物3为原料,在二氧六环溶液中与苯硼酸反应生成中间体化合物4,随后与不同的取代硼酸反应生成目标产物a;然后化合物a在甲醇溶液中与氢氧化钠水溶液反应生成目标产物b;[0028]合成路线二如下:[0029][0030]其中,R1同上述通式I所示;[0031]试剂及条件:(i)苯硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(ii)取代硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(iii)甲醇,氢氧化钠水溶液,回流。[0032]所述的取代硼酸为苯硼酸、对甲氧基苯硼酸或3-呋喃硼酸。[0033]本发明所述的室温为25°C。[0034]本发明更为详细的,取代吲哚类衍生物的制备方法,步骤为如下路线之一:[0035]路线一:[0036](1)称取5.26g原料6-吲哚甲酸甲酯置于IOOmL烧瓶中,加入20mLN,N-二甲基甲酰胺溶解,加入791.9mg氢化钠,后室温搅拌30分钟,然后加入3.90mL氯乙酰吗啉,室温搅拌反应12小时,薄层检测反应完全后旋干溶剂,加20mL水和20mL二氯甲烷,分离有机相,20mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂得白色固体,真空干燥,得到中间体化合物2;[0037](2)称取4.53g中间体化合物2置于250mL烧瓶中,加入50mL二氯甲烷溶解,后分批加入5.61gN-溴代丁二酰亚胺,室温搅拌反应12小时,薄层检测反应完全后加30mL水淬灭反应,有机相30mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂后Flash柱层析得白色固体,真空干燥,得到中间体3;[0038](3)称取92.Omg中间体化合物3置于25mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六环溶解,加入420μπιο1不同取代的苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和89.2mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,薄层检测反应完全后将反应液用硅藻土过滤,旋干溶剂,固体用IOmL二氯甲烷溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到目标产物aOl;[0039](4)称取200.ΟΟμπιο1化合物a01于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值待稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用薄层板检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,加入IOmL乙酸乙酯溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得目标产物b01。[0040]路线二:[00411(1)称取92·Omg中间体3于50mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六溶解,加入24.4mg苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和46.7mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,得中间体4;[0042](2)向上一步反应的反应液中加入220.00μπιο1对甲氧基苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和46.7mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,TLC检测反应完全,反应液用硅藻土过滤,旋干溶剂,固体用20mL乙酸乙酯溶解后20mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到目标产物a02;[0043](3)称取200.ΟΟμmol化合物a02于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值直至其pH值稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用薄层板检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,IOmL乙酸乙酯溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得目标产物b02。[0044]3、取代吲哚类衍生物的应用[0045]对上述合成的23个具体化合物运用表面等离子共振仪进行了体外与NS5B蛋白的亲和力测定实验。由表1可以看出,本发明的取代吲哚类衍生物是一系列结构新颖的非核苷类HCV抑制剂,与NS5B具有不同的亲和力,因此,本发明还提供:[0046]取代吲哚类衍生物作为非核苷类HCV抑制剂的应用。具体地说,作为HCV抑制剂用于制备抗丙型肝炎药物。[0047]一种抗HCV药物组合物,包括本发明的取代吲哚类衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。[0048]本发明提供了结构全新的取代吲哚类衍生物及其制备方法,抗HCV活性筛选结果及其在抗病毒领域中的首次应用。经实验证明,本发明的吲哚类衍生物可作为HCV抑制剂应用并具有很高的应用价值。具体地说,作为HCV抑制剂用于制备抗丙型肝炎药物。【具体实施方式】[0049]通过下述实例有助于理解本发明,但是不能限制本发明的内容。[0050]实施例中所涉及的合成路线如下:[0051]合成路线一:[0055]实施例1:中间体2的制备[0056]称取6-吲哚甲酸甲酯(5·26g,30·OOmmo1)于IOOmL烧瓶中,加入20mLDMF溶解,加入氢化钠(791·9mg,33·OOmmol)后室温搅拌30分钟,然后加入氯乙酰吗啉(3·90mL,30.OOmmol),室温搅拌反应12小时,TLC检测反应完全后旋干溶剂,加20mL水和20mLDCM萃取,分离有机相,水洗(2X20mL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂得白色固体,用真空干燥箱干燥,得到中间体2,淡黄色固体,产率:92%,恪点:156-158°C。[0057]中间体2波谱数据:1!1匪1?(4001抱,0150-(16卬口111)5:8.06(8,1!1411(1〇16-!0,7.64-7.63(m,2H,indole-H),7.49(d,J=3.20Hz,lH,indole-H),6.55(dd,Ji=0.40Hz,j2=2.80Hz,lH,indole-H),5.22(s,2H,CH2),3.86(s,3H,C00CH3),3.71-3.68(m,2H,CH2),3.61-3.59(m,4H,CH2,CH2),3.46-2.44(m,2H,CH2).13CMMR(100MHz,DMS0-d6,ppm)S:167.76(COO),166.61(CON),136.55(indole-C),134.33(indole-C),132.28(indole-C),122.54(indole-C),120.55(indole-C),120.13(indole-C),112.62(indole-C),101.67(indole-C),66.53(morpholine-CH2),66.42(morpholine-CH2),52.25(CH3),47.55(CH2),445.23(morpholine-CH2),42.32(morpholIne-CH2).ESI-MS:303.5[M+H]+,320.4[M+NH4]+,325.4[M+Na]'Ci6Hi8N2〇4(302.13)。[0058]实施例2:中间体3的制备[0059]称取中间体2(4.53g,15.OOmmol)于250mL烧瓶中,加入50mL二氯甲烷溶解,后分批加入N-溴代丁二酰亚胺(5.61g,30.50mmol),室温搅拌反应12小时,TLC检测反应完全后加30mL水淬灭反应,有机相水洗(2X30mL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂后Flash柱层析得白色固体,真空干燥箱干燥,得到中间体3,白色固体,产率:94%,熔点:195°C分解。[0060]中间体3波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·23(s,1H,indole-H),7·80(ddJi=1.20HzJ2=12.00Hz,lH,indole-H),7.53(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),5.46(s,2H,CH2),3.88(s,3H,C00CH3),3.74-3.71(m,2H,CH2),3.66-3.64(m,2H,CH2),3.61-3.58(m,2H,CH2),3.46-3.43(m,2H,CH2).ESI-MS:303.5[M+H]+,320.4[M+NH4]+,325.4[M+Na]+?Ci6Hi8N2〇4(302.13).ESI-MS:461.3[M+H]+,463.2[M+H]+,476.2[M+NH4]+,478.2[M+NH4]+,476·2[M+NH4]+,483·2[M+Na]+,485·3[M+Na]+·Ci6Hi6Br2N2〇4(457·95)。[0061]实施例3:化合物aOl的制备[0062]称取中间体3(92.Omg,200.ΟΟμmol)于25mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六环溶解,加入苯硼酸(420.0Oymol),四(三苯基膦)钯(11.6mg,10.0Oymol),磷酸三钾(89.2mg,420.ΟΟμmol)。于微波反应器中150°C反应30分钟,TLC检测反应完全后将反应液用硅藻土过滤,旋干溶剂,固体用IOmL二氯甲烷溶解后水洗(2XIOmL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到目标产物aOl。白色固体,产率:64%,熔点:252-2540C.[0063][0064]化合物aOl波谱数据:1H匪R(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·16(s,1H,indole-H),7.78-7.74(m,2H,indole-H),7.45(s,3H,Ph-H),7.34-7.27(m,4H,Ph-H),7.26-7.20(s,3H,Ph-H),5.12(s,2H,CH2),3.89(s,3H^00CH3),3.54-3.50(m,2H,CH2),3.48-3.45(m,2H,CH2),3.44-3.38(m,4H,CH2,CH2).ESI-MS:455.5[M+H]+,472.5[M+NH4]+,477.4[M+Na]+?C28H26N2〇4(454.19)〇[0065]实施例4:化合物a03的制备[0066]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为4-甲氧基苯硼酸取代基。黄色针状结晶,产率:52.2%,熔点:208-209°C。[0067][0068]化合物a03波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·09(s,IH,indole-H),7·74(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.67(d,J=8.OOHz,1H,indole-H),7.20(t,J=8.OOHz,4H,Ph-H),7.02(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),6.91(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),5.08(s,2H,CH2),3.88(s,3H,C00CH3),3.79(s,3H,0CH3),3.74(s,3H,0CH3),3.56-3.50(m,4H,CH2,CH2),3.48-3.42(m,4H,CH2,CH2).ESI-MS:515.6[M+H]+,532.6[M+NH4]+,537.5[M+Na]+.C3QH3()N2〇6(514.21)。[0069]实施例5:化合物a04的制备[0070]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为3-氟苯硼酸取代基。淡黄色固体,产率:84.1%,熔点:166-168°(:。[0071][0072]化合物a04波谱数据:匪R(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·20(s,IH,indole-H),7.85-7.75(m,2H,indole-H),7.65-7.60(m,IH1Ph-H),7.55-7.50(m,IH1Ph-H),7.42-7.35(m,2H,Ph-H),7.30-7.25(m,IH1Ph-H),7.17-7.14(m,IH1Ph-H),7.10-7.07(m,IH1Ph-H),7.02-6.80(m,lH,Ph-H),5.23(s,IH1CH2),5.18(s,IH1CH2),3.90(s,3H,COOCH3),3.58(s,1H,CH2),3.53-3.45(m,5H,CH2,CH2,CH2),3.44-3.40(m,2H,CH2).ESI-MS:508.5[M+NH4]+,513·6[M+Na]+·C28H24F2N2O4(490·17)。[0073]实施例6:化合物a06的制备[0074]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为4-三氟甲基苯硼酸取代基。白色固体,产率:92.4%,熔点:204-206°(:。[0075[0076]化合物a06波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·23(s,IH,indole-H),7·87(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.83-7.78(m,2H,indole-H),7.71(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.55(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.46(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),5.21(s,2H,CH2),3.90(s,3H,⑶OCH3),3.52-3.44(m,6H,CH2,CH2,CH2),3.42-3.39(m,2H,CH2).ESI-MS:591·4[Μ+Η]+,508·3[M+NH4]+,513·3[M+Na]+·C3QH24F6N2O4(590·16)。[0077]实施例7:化合物a08的制备[0078]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为2-噻吩硼酸取代基。淡黄色固体,产率:58.9%,熔点:210-212°(:。[0079][0080]化合物a08波谱数据:1H匪R(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·18(s,IH,indole-H),7.91-7.64(m,3H,indole-H,indole-H,thiophene-H),7.59-7.45(m,1H,thiophene-H),7.32-7.28(m,lH,thiophene-H),7.25-7.23(m,lH,thiophene-H),7.21-7.19(m,1H,thiophene-H),7.10-7.06(m,lH,thiophene-H),5.29(s,IH1CH2),5.18(s,IH1CH2),3.89(s,3H,COOCH3),3.60-3.53(m,4H,CH2,CH2),3.49-3.48(m,2H,CH2),3.45-3.43(m,2H,CH2).ESI-MS:467·11[M+H]+,489·09[M+Na]+·C24H22N2O4S2(466·10)。[0081]实施例8:化合物a09的制备[0082]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为4-甲基苯硼酸取代基。白色固体,产率:93.7%,熔点:144-146°C。[0083][0084]化甘物a09汲谐数据:iHNMR(400MHz,DMS〇-d6,ppm)δ:8·11(s,1H,indole-H),7.75-7.73(m,lH,indole-H),7.70-7.68(m,lH,indole-H),7.27-7.23(m,2H,Ph-H),7.18-7.15(m,2H,Ph-H),7.13-7.10(m,4H,Ph-H),5.08(s,2H,CH2),3.88(s,3H,⑶OCH3),3.54-3.50(m,4H,CH2,CH2),3.46-3.42(m,4H,CH2,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.28(s,3H,CH3).ESI-MS:483·4[M+H]+·C3〇H3()N2〇4(482·22)。[0085]实施例9:化合物alO的制备[0086]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为3-甲基苯硼酸取代基。黄色固体,产率:76.9%,熔点:170-172°(:。[0087][0088]化合物alO波谱数据:1HNMR(400MHz,DMS〇-d6,ppm)δ:8·13(s,1H,indole-H),7·77-7·70(m,2H,indole-H),7·30-7·26(m,2H,Ph-H),7·18-7.15(m,2H,Ph-H),7.12-7.10(m,lH,Ph-H),7.05(t,J=8.00Hz,2H,Ph-H),6.97(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),5.08(s,2H,CH2),3.88(s,3H,COOCH3),3.58-3.56(m,IH1CH2),3.54-3.52(m,IH1CH2),3.48-3.46(m,2H,CH2),3.45-3.43(m,3H,CH2,CH2),2.30(s,3H,CH3),2.25(s,3H,CH3).ESI-MS:483.4[M+H]+,500·4[M+NH4]+,505·5[M+Na]+·C3qH3()N2〇4(482·22)。[0089]实施例10:化合物all的制备[0090]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为3-甲基苯硼酸取代基。淡黄色固体,产率:87.2%,熔点:176-178°(:。[0091][0092]化合物all波谱数据:?匪R(400MHz,DMSO-Cl6,ρρπι)δ:8·15(s,lH,indole-H),7·75-7.63(m,2H,indole-H),7·ll(s,lH,Ph-H),7.07(s,lH,Ph-H),7.03(s,lH,Ph-H),6.88(s,lH,Ph-H),5.13(s,1H,CH2),5.05(s,1H,CH2),3.88(s,3H,⑶OCH3),3.59-3.56(m,2H,CH2),3·55-3.53(m,2H,CH2),3.44-3.42(m,4H,CH2,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.34(s,3H,CH3),2.25(s,3H,CH3),2.19(s,3H,CH3).ESI-MS:511.25[M+H]+,533.24[M+Na]+.C32H34N2〇4(510.25)。[0093]实施例11:化合物al2的制备[0094]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为3-氟-4-甲氧基苯硼酸取代基。黄色固体,产率:60.5%,熔点:187-189°(:。[0095;[0096]化合物al2波谱数据:1HNMR(400MHz,DMS〇-d6,ppm)S:8·14(s,1H,indole-H),7·77(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.70(d,J=8.OOHz,1H,indole-H),7.28(t,J=8.OOHz,1H,Ph-H),7.17(t,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.05(t,J=8.00Hz,3H,Ph-H),5.13(s,2H,CH2),3.89(s,6H,C00CH3,CH3),3.83(s,3H,CH3),3.53-3.52(m,4H,CH2,CH2),3.49-3.48(m,2H,CH2),3.44-3.43(m,2H,CH2).ESI-MS:551.19[M+H]+,573.17[M+Na]+.C3〇H28F2N2〇6(550.19)〇[0097]实施例12:化合物al3的制备[0098]操作同实施例3,所不同的是将苯硼酸取代基替换为3,4_二甲基苯硼酸取代基。白色固体,产率:82.9%,熔点:116-118°(:。[0099][0100]化合物al3波谱数据:?NMR(400MHz,DMS0-d6,ppm)s:8.10(s,lH,indole-H),7.72(s,lH,indole-H),7.68(s,lH,indole-H),7.16(s,2H,Ph-H),7.07(s,lH,Ph-H),7.03(s,lH,Ph-H),6.96(s,lH,Ph-H),6.85(s,lH,Ph-H),5.06(s,2H,CH2),3.89(s,3H,⑶OCH3),3.56-3.54(m,3H,CH2,CH2),3.49-3.45(m,5H,CH2,CH2,CH2),2.27(s,3H,CH3),2.22(s,3H,CH3),2.19(s,6H,CH3,CH3).ESI-MS:511.6[M+H]+,528.5[M+NH4]+,533.3[M+Na]+.C32H34N2〇4(510.25)。[0101]实施例13:化合物bOl的制备[0102]称取化合物aOI(200.ΟΟμπιοI)于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值直至其pH值稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用TLC检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,加入IOmL乙酸乙酯溶解,水洗(2XIOmL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得相应目标产物bOl。白色固体,产率:87%,熔点:200-202°C。[0103][0104]化合物b01波谱数据:1HMMR(400MHz,DMS0-d6,ppm)S:12.71(s,lH,C00H),8.15-8.12(m,lH,indole-H),7.77-7.74(m,lH,indole-H),7.71-7.69(m,lH,indole-H),7.45-7.44(m,3H,Ph-H),7.32-7.27(m,4H,Ph-H),7.25-7.18(m,3H,Ph-H),5.09(s,2H,CH2),3.52-3.51(m,2H,CH2),3.48-3.47(m,2H,CH2),3.44-3.43(m,4H,CH2,CH2).13CNMR(100MHz,DMS〇-d6,ppm)S:168·60(C00H),166·35(C0),141·23(indole-C),137·12(Ph-C),134.57(indole-C),131·26(Ph-C),131.09(2XPh-C),130.08(indole-C),129.78(2XPh-C),129.32(Ph-C),129.04(2XPh-C),128.89(2XPh-C),125.60(Ph-C),124.64(indole-C),121.63(indole-C),118.84(indole-C),115.18(indole-C),113.22(indole-C),66.66(morpholine_CH2),66.50(morpholine_CH2),53.37(CH2),45.52(morpholine_CH2),45.39(morpholine-CH2).ESI-MS:439·6[M-H]-·C27H24N2〇4(440·17)〇[0105]实施例14:化合物b04的制备[0106]操作同实施例13,所不同的是将化合物a01取代基替换为化合物a04。淡黄色固体,产率:92.2%,懷点,178-1[0107][0108]化合物b04波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·76(s,IH,C00H),8·17(s,lH,indole-H),7.88(dd,Ji=1.20Hzj2=8.00Hz,lH,indole-H),7.83(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.54-7.48(m,IH1Ph-H),7.40-7.39(m,IH1Ph-H),7.36-7.34(m,IH1Ph-H),7.32-7.30(m,IH1Ph-H),7.15-7.13(m,IH1Ph-H),7.12-7.10(m,IH1Ph-H),7.08-7.06(m,1H,Ph-H),7.01-6.98(m,IH1Ph-H),5.16(s,2H,CH2),3.57-3.55(m,IH1CH2),3.53-3.48(m,5H,CH2,CH2,CH2),3·43-3·42(m,2H,CH2)·13C匪R(100MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:168·58(C00H),166·38(C0),163·94(Ph-C-F),163.57(Ph-C-F),161.42(Ph-C-F),161.09(Ph-C-F),140.06,138.33,137.16,136.80,136.72,133.25,133.10,131.34,130.85,129.59,127.51,125.94,125.21,124.43,121.97,118.90,117.94,117.72,116.27,116.05,114.40,113.51,113.30,66.68(morphoIine-CH2),66.58(morphoIine-CH2),45.61(morphoIine-CH2),45.43(morpholine_CH2),42·63((?)〇[0109]实施例15:化合物b06的制备[0110]操作同实施例13,所不同的是将化合物aOl取代基替换为化合物a06,白色固体,产率:83.5%,熔点:216-218°C。[0111][0112]化合物b06波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·91(s,IH,C00H),8·23(d,J=12.00Hz,lH,indole-H),7.88(q,J=4.00Hz,2H,Ph-H),7.83(tJ=8.00Hz,lH,indole-H),7.78(t,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.71(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.59(d,J=8.00Hz,lH,Ph-H),7.55(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),7.46(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),5.19(s,IH1CH2),5.01(S1IH1CH2),3.51-3.47(m,3H,CH2,CH2),3.42-3.40(m,2H,CH2),3.35-3.33(m,3H,CH2,CH2).13CNMR(100MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:170.36(⑶OH),168.46,168.38,166.21(CO),140.31,140.03,138.59,138.38,137.47,137.07,135.06,134.78,132.08,130.45,130.39,129.65,129.55,129.95,125.95,125.76,125.44,122.41,122.17,119.18,118.94,114.93,114.56,113.45,113.23,66.63(morpholine-CH2),66.53(morpholine-CH2),46.09(CH2),45·66(morpholine-CH2),45·41(morpholine-CH2)·ESI-MS:575·4[M-H]-·C29H22F2N2O4(576.15)。[0113]实施例16:化合物b09的制备[0114]操作同实施例13,所不同的是将化合物a01取代基替换为化合物a09,白色固体,产率:87.1%,熔点:268°C分解。[0115][0116]化合物b09波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·77(s,IH,C00H),8·08(d,J=4.00Hz,lH,indole-H),7.74(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.67(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.26(tJ=8.00Hz,2H,Ph-H),7.16(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),7.12(s,4H,Ph-H),5.06(d,J=12.40Hz,2H,CH2),3.88(s,3H,COOCH3),3.54-3.50(m,4H,CH2,CH2),3.46-3.44(m,4H,CH2,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.28(s,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMS0-d6,ppm)S:168.67(COOH),166.52(C0),141.06(indole-C),138.60(Ph-C),137.04(Ph-C),135.41(indole-C),131·69(Ph-C),130·59(2XPh-C),130.91(2XPh-C),130.21(Ph-C),129.66(2XPh-C),128.52(2XPh-C),128.29(indole-C),124.50(indole-C),121.49(indole-C),118.75(indole-C),114.95(indole-C),113.04(indole-C),66.67(morpholine-CH2),66·53(morpholine_CH2),45·51(morpholine-Qfe),45·39(morpholine_CH2),42·58(CH2),21·38(CH3),21·16(CH3)·ESI-MS:467·5[M-H]-·C29H28N2O4(468·20)。[0117]实施例17:化合物blO的制备[0118]操作同实施例13,所不同的是将化合物a01取代基替换为化合物alO,淡黄色固体,产率:90·2%,熔点:246-248°C。[0119][0120]化合物blO波谱数据,HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·65(s,IH,C00H),8·10(d,J=4.00Hz,lH,indole-H),7.76(ddJi=12.OOHzJ2=1.20Hz,1H,indole-H),7.70(dJ=8.00Hz,lH,indole-H),7.42-7.29(m,2H,Ph-H),7.27-7.25(m,2H,Ph-H),7.16-7.13(m,2H,Ph-H),7.1l(s,IH1Ph-H),7.05(t,J=8.00Hz,2H,Ph-H),6.97(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),5.16(d,J=40.00Hz,2H,CH2),3.54-3.52(m,2H,CH2),3.48-3.47(m,2H,CH2),3.44-3.43(m,4H,CH2,CH2),2.30(s,3H,CH3),2.25(s,3H,CH3).13C匪R(100MHz,DMSO-Cl6,ρρπι)δ:168.68(⑶OH),166.54(C0),141·20(Ph-C),138.05(Ph-C),137.80(Ph-C),137.12(indole-C),134.54(indole-C),131.25(Ph-C),130.37(Ph-C),130.H(Ph-C),129.88(Ph-C),128.87(Ph-C),128.70(indole-C),128.40(Ph-C),127.07(Ph-C),126.96(Ph-C),124.52(Ph-C),121.53(indole-C),118.90(indole-C),115.09(indole-C),113.12(indole-C),102.31(indole-C),66.69(morpholine_CH2),66.54(morpholine_CH2),45.59(morpholine_CH2),45.39(morpholine-CH2),42.61(CH2),21.59(CH3),21.50(CH3).ESI-MS:467.5[M-H]-?C29H28N2〇4(468.20)〇[0121]实施例18:化合物blI的制备[0122]操作同实施例13,所不同的是将化合物aOl取代基替换为化合物all,白色固体,产率:85.9%,熔点:244°(:分解。[0123][0124]化合物b11波谱数据:1HMMR(400MHz,DMS0-d6,ppm)S:12.67(s,lH,C00H),8.12-8.01(m,lH,indole-H),7.81(dd,Ji=8.00HzJ2=1.20Hz,lH,indole-H),7.69-7.65(m,lH,indole-H),7.62-7.52(m,lH,Ph-H),7.ll-7.02(m,2H,Ph-H),6.88-6.84(m,3H,Ph-H),5.14-5.03(m,2H,CH2),3.58-3.53(m,4H,CH2,CH2),3.46-3.44(m,4H,CH2,CH2),2.35(s,3H,CH3),2.33(s,3H,CH3),2.25(s,3H,CH3),2.19(s,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMSO-Cl6,ρρπι)δ:168.70(C00H),166.64(C0),145.OO(Ph-C),141.73(indole-C),137.79(2XPh-C),137.49(2XPh-C),134.46(indole-C),131.16(Ph-C),130.24(Ph-C),128.64(2XPh-C),128.16(indole-C),127.65(2XPh-C),126.96(Ph-C),124.40(indole-C),121.41(indole-C),118.97(indole-C),115.01(indole-C),113.08(indole-C),66.70(morpholine-CH2),66.61(morpholine_CH2),45.67(morpholine_CH2),45.39(morpholine_CH2),42.61(0?),21.48(CH3),21.45(CH3),21.40(CH3),21.37(CH3)〇[0125]实施例19:化合物bl3的制备[0126]操作同实施例13,所不同的是将化合物aOl取代基替换为化合物al3,淡黄色固体,产率:84.4%,熔点:276°C分解。[0127][0128]化合物bl3波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·62(s,IH,C00H),8·06(s,lH,indole-H),7.73(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.66(d,J=8.00Hz,1Η,indole-H),7.18-7.15(m,2H,Ph-H),7.06(s,IH1Ph-H),7.03(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),6.96(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),6.86(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),5.03(s,2H,CH2),3.55-3.53(m,2H,CH2),3.49-3.47(m,2H,CH2),3.46-3.44(m,4H,CH2,CH2),2.26(s,3H,CH3),2.21(s,3H,CH3),2.19(s,3H,CH3),2.18(s,3H,CH3).13CNMR(100MHz,DMS〇-d6,ppm)5:168.71(COOH),166.63(C0),141,05(Ph-C),137.33(Ph-C),137.01(indole-C),136.68(indole-C),136.41(Ph-C),134.18(Ph-C),132.13(Ph-C),131.56(Ph-C),130.87(Ph-C),130.35(Ph-C),130.05(indole-C),129.96(Ph-C),128.74(Ph-C),128.72(Ph-C),127.32(Ph-C),124.30(indole-C),121.38(indole-C),118.84(indole-C),114.92(indole-C),113.01(indole-C),66.69(morpholine_CH2),66·55(morpholine_CH2),45·57(morpholine_CH2),45·39(morpholine_CH2),42.59(CH2),20.OO(CH3),19.95(CH3),19.71(CH3),19.49(CH3).ESI-MS:495.5[M-H]-?C3iH32N2〇4(496.24)。[0129]实施例20:中间体4的制备[0130]称取中间体3(92.Omg,200.ΟΟμπιοI)于50mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六溶解,加入苯硼酸(24·4mg,200·OOymol),四(三苯基膦)钯(I1·6mg,10·ΟΟμπιο1),磷酸三钾(46.7mg,220.0Ommo1)。于微波反应器中150°C反应30分钟,直接进行下一步反应。[0131]中间体4波谱数据:ESI-MS:457·4[M+H]+,459·4[M+H]+,474·3[M+NH4]+,476·3[M+NH4]+,481.3[M+Na]+,483.3[M+Na]+.C22H2iBrN2〇4(456.07)。[0132]实施例21:化合物a02的制备[0133]向上一步反应的反应液中加入4-甲氧基苯硼酸取代基(220.ΟΟμmol),四(三苯基膦)钯(11.611^,10.0(^111〇1),磷酸三钾(46.71^,220.00111111〇1)。于微波反应器中150°(:反应30分钟,TLC检测反应完全后将反应液用娃藻土过滤,旋干溶剂,固体用20mL乙酸乙酯溶解后水洗(2X20mL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到相应的目标产物a02。白色针状结晶,产率:31.8%,熔点:208-210°C。[0134][0135]化合物a02波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:8·13(s,IH,indole-H),7·76(d,J=8.00Hz,1H,indole-H),7·69(d,J=8·00Ηζ,lH,indole-H),7.44(s,3H,Ph-H),7.29(s,2H,Ph-H),7.17(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),6.89(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),5.09(s,2H,CH2),3.88(s,3H,COOCH3),3.73(s,3H,OCH3),3.52-3.50(m,2H,CH2),3.47-3.46(m,2H,CH2),3.43-3.41(m,4H,CH2,CH2)。[0136]实施例22:化合物a05的制备[0137]操作同实施例21所不同的是将4-甲氧基苯硼酸取代基替换为3-呋喃硼酸取代基。白色固体,产率:33.2%,熔点:170-172°(:。[0138][0139]化合物a05波谱数据:?NMR(400MHz,DMS0-d6,ppm)S:8.16(s,lH,indole-H),8.02(s,lH,furan-H),7.93(s,lH,furan-H),7.80(s,lH,indole-H),7.75-7.73(m,lH,indole-H),7.67-7.65(m,lH,Ph-H),7.56-7.54(111,lH,Ph-H),7.39-7.37(m,2H,Ph-H),7.28(s,lH,Ph-H),6.71-6.36(m,lH,furan-H),5.32(s,IH1CH2),5.24(s,IH1CH2),3.88(s,3H,COOCH3),3.64-3.61(m,2H,CH2),3.58-3.56(m,4H,CH2,CH2),3.46-3.44(m,2H,CH2)。[0140]实施例23:化合物b02的制备[0141]称取化合物a02(200.ΟΟμπιοI)于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值,使其稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用TLC检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,IOmL乙酸乙酯溶解,水洗(2XIOmL),无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得相应目标产物b02。白色固体,产率.叩松占令奋I[0142][0143]化合物b02波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·72(s,IH,C00H),8·12(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.76(dd,Ji=8.00Hzj2=8.00Hz,lH,indole-H),7.67(dJ=8.00Hz,lH,indole-H),7.45(t,J=4.00Hz,3H,Ph-H),7.30-7.27(m,2H,Ph-H),7.17(dJ=8.00Hz,2H,Ph-H),6.89(d,J=8.00Hz,2H,Ph-H),5.07(s,2H,CH2),3.73(s,3H,CH3),3.52-3.50(m,2H,CH2),3.47-3.46(m,2H,CH2),3.43-3.42(m,4H,CH2,CH2).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:168.68(COOH),166.48(CO),158.00(Ph-C-O),140.79(indole-C),137.04(indole-C),131.35(Ph-C),131.09(2XPh-C),130.89(2XPh-C),130.35(Ph-C),129.23(indole-C),129.01(2XPh-C),126.69(Ph-C),124.49(indole-C),121.45(indole-C),118.85(indole-C),114.91(indole-C),114.43(2XPh-C),113.06(indole-C),66.69(morpholine_CH2),66.50(morpholine_CH2),55.45(CH3),45.50(morpholine_CH2),45.38(morpholine_CH2),42·59((?)〇[0144]实施例24:化合物b05的制备[0145]操作同实施例13,所不同的是将化合物aOl取代基替换为化合物a05,白色固体,产率:89.5%.懷占,州4。(^;魅"[0146][0147]化合物b05波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)S:12.73(s,lH,C00H),8·15(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),8.01(s,lH,furan-H),7.92(tJ=1.60Hz,lH,furan-H),7.81(td,Ji=8.OOHz1J2=I.60Hz,lH,indole-H),7.73(dd,Ji=8.OOHz1J2=1.60Ηζ,1Η,indole-H),7.64(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),7.53(d,J=8.00Hz,IH1Ph-H),7.41-7.35(m,2H,Ph-H),7.29(tt,Ji=8.OOHzJ2=1.60Hz,IH1Ph-H),6.71-6.36(dJ=180.00Hz,lH,furan-H),5.29(s,lH,CH2),5.22(s,lH,CH2),3.62-3.60(m,2H,CH2),3.57-3.55(m,4H,CH2,CH2),3.46-3.44(m,2H,CH2).13CMMR(100MHz,DMS0-d6,ppm)S:168.66(C00H),166.18(C0),158.00(Ph-C-O),144.67(furan-C),144.59(furan-C),136.81(indole-C),134.55(indole-C),133.05(indole-C),130.Il(Ph-C),129.87(2XPh-C),128.89(2XPh-C),126·72(furan-C),122·57(Ph-C),121·50(indole-C),118.48(indole-C),115.51(indole-C),114.51(indole-C),112.47(indole-C),111.46(furan-C),70.59(morpholine-CH2),69·96(morpholine_CH2),66·82((?),45·53(morpholine_CH2),45·51(morpholine_CH2)〇[0148]实施例25:化合物a07的制备[0149]称取中间体4(200.ΟΟμπιοI)于25mL烧瓶中,加入IOmL无水四氢咲喃溶解,后于氮气保护环境下加入1〇μπι〇1[1,Γ-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯,340μπι〇1四甲基乙二胺,340μηιο1硼氢化钠,室温搅拌反应19小时后停止反应,将反应液倒入20mL冷水中,加入IOmL乙酸乙酯提取两次,合并有机相,旋干溶剂,Flash柱层析得化合物a07,白色固体,产率:51.5%,熔点:218-219°C。[0150][0151]化合物a07波谱数据:1H匪R(400MHz,CDCl3,ppm)δ:7·97(s,1H,indole-H),7·84(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.65(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.46-7.44(m,5H,Ph-H),6.63(s,1H,indole-H),4·88(s,2H,CH2),3.93(s,3H,C00CH3),3.69-3.68(m,2H,CH2),3.65-3.62(m,4H,CH2,CH2),3.42-3.40(m,2H,CH2).ESI-MS:379.5[M+H]+,396.5[M+NH4]+,401.5[M+Na]+.C22H22N2〇4(378.16)。[0152]实施例26:化合物b07的制备[0153]操作同实施例13,所不同的是将化合物aOl取代基替换为化合物a07,产率:89.4%,熔点:266°C分解。[0154][0155]化合物b07波谱数据:1HNMR(400MHz,DMSO-Cl6,ppm)δ:12·62(s,IH,C00H),8·03(s,1Η,indole-H),7.71(dd,Ji=8.00Hz,J2=4.00Hz,1H,indole-H),7.64(d,J=8.00Hz,lH,indole-H),7.52(d,J=4.00Hz,2H,Ph-H),7.49-7.47(m,3H,Ph-H),6.67(s,lH,indole-H),5.17(s,2H,CH2),3.58-3.56(m,4H,CH2,CH2),3.54-3.53(m,2H,CH2),3.47-3.46(m,2H,CH2)?13CMMR(IOOMHz,DMS〇-d6,ppm)δ:168·75(C00H),166·64(C0),144·88(indole-C),138·20(indole-C),132.IO(Ph-C),131.49(Ph-C),129.31(2XPh-C),129.28(2XPh-C),129.08(indole-C),124.02(indole-C),121.20(indole-C),120.11(indole-C),113.02(indole-C),102.48(indole_C),66.73(morpholine_CH2),66·64(morpholine_CH2),45·83(morphoIine-CH2),45·41(morpholine-CH2),42·58(CH2)·ESI-MS:363·4[M-H]-·C21H2QN2O4(364.14)。[0156]实施例27:目标化合物与NS5B的亲和力测定实验[0157]实验原理[0158]光学表面等离子共振(SurfacePlasmonResonance,SPR)是一种光学物理现象。当一束P偏振光在一定的角度范围内入射到棱镜端面,在棱镜与金属薄膜(Au或Ag)的界面将产生表面等离子波。当入射光波的传播常数与表面等离子波的传播常数相匹配时,引起金属膜内自由电子产生共振,即表面等离子共振。分析时,先在传感芯片表面固定一层生物分子识别膜,然后将待测样品流过芯片表面,若样品中有能够与芯片表面的生物分子识别膜相互作用的分子,会引起金膜表面折射率变化,最终导致SPR角变化,通过检测SPR角度变化,获得被分析物的浓度、亲和力、动力学常数和特异性等信息。[0159]材料与方法[0160]实验材料及仪器设备[0162]实验方法[0163]CM5芯片表面活化和蛋白偶联[0164]采用0.2mol/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和0.05mol/LN-琥珀酰亚胺(NHS)溶液活化CM5芯片表面。然后将HisCaptureKit试剂盒中Anti-histidineantibody用试剂盒中Immobilizationbuffer稀释至50yg/mL,采用设定流速(10yL/min)及时间(7min)模式进样,采用0.05mmol/L的NHS和0.2mol/L的EDC活化芯片表面的羧基,将Anti-histidineantibody蛋白偶联于芯片的Fcl和Fc2通道,直到两通道达到设定的偶联水平(9000~15000RU)。最后将芯片表面用乙醇胺封闭7分钟,再使用1.05XPBS(5%DMS0)清洗芯片两次,将系统中流动相替换为带有DMSO的体系同时除去未偶联的蛋白。[0165]溶剂校正[0166]将事先配置好的DMSO梯度溶液置于检测器中,同时向仪器中加入足量的NS5B稀释溶液和芯片再生液,调用仪器的Kniticassay工具中capturemode模式,将DMSO梯度溶液同时进样参比通道Fcl和工作通道Fc2,在25°C,pH为7.4的环境下进行结合反应<^358稀释液流速设定lOyL/min,进样时间为2min,稳定时间为4minJMSO梯度溶液液流速设定30μ!7min,进样时间为2min,稳定时间为lmin。再生液的流速设定30yL/min,进样时间为lmin,稳定时间为Imin。[0167]小分子抑制剂与NS5B的亲和动力学分析[0168]将事先配置好的梯度浓度待测小分子样品置于检测器中,同时每个样品均设12.5μΜ为重复浓度。小分子抑制剂活性测定步骤与溶剂校正操作步骤完全相同。[0169]亲和动力学数据分析[0170]溶剂校正[0171](1)建立溶剂校正曲线。使用BIAevaluation软件打开溶剂校正结果文件,选择Rpointtable。在打开的表格中使用Data/fiIter命令,在通道列的数据中选择Fcl,在Id列数据中选择Bindingl,然后将RelResp列的数据复制到一个新建的表格中,并将该列命名为Fcl。回到原始表格中在通道列选择Fc2-1,然后将RelResp列的数据复制到新建的表格中并将该列命名为Fc2_l。在新建表格中使用Data/GenerateCalibration命令,将X设置为Fc2_1,Y列设置为Fcl,选择Other下拉菜单中的Line命令后确认即可得到溶剂校正标准曲线。[0172](2)样品检测结果去除溶剂校正的影响。溶剂校正曲线建立后,直接打开小分子测试的结果文件,选择Rpointtable方式打开。在打开的表格中使用Data/fiIter命令,在通道列的数据中选择Fcl,在Id列数据中选择Bindingl,然后将RelResp列的数据复制到一个新建的表格中,并将该列命名为Fcl,再按照同样的方法复制得到Fc2-1,并命名为Fc2-1,然后使用Data/Calculatevalues命令,在弹出的对话框中选择刚刚得到的溶剂矫正曲线后点击next,将Y设置为Fcl,即可得到相对应的溶剂校正因子,将溶剂校正因子列命名为corr,在下一列中用Fc2-1的数据分别减去对应的溶剂校正因子即可获得Fc2-1的真实数值,将该列命名为True〇[0173]样品小分子曲线的建立以及平衡解离常数的计算[0174]将得到的去除溶剂效应的响应值(True列)数据复制到一个新建表格中,同时将各个数据对应的小分子样品浓度复制到旁边一列中并命名该列为Cone,注意Conc列的数据不能带有单位。随后使用CreatCurve命令,将X设置为Conc列,将Y设置为True列,确认即可得到响应值与浓度之间的关系曲线点,然后使用软件中的拟合功能,采用Fit/general命令,在弹出的对话框中选择steadystateaffinity对曲线数据进行拟合,即可得到小分子化合物的平衡解离常数Kd。该常数的含义为使一半的总蛋白与配体结合时所需的配体浓度,该数值越小,则说明化合物与蛋白质的结合能力越强。[0175]目标化合物与NS5B亲和力测定实验结果[0176]表1目标化合物与NS5B亲和力实验结果[0180]活性化合物已加粗。[0181]aKD:代表化合物与蛋白质的平衡解离常数,其值越小,则化合物和蛋白质的亲和力越强。[0182]结论:[0183]由表1可以看出,本发明的取代吲哚类衍生物是一系列结构新颖的非核苷类HCV抑制剂,与NS5B具有不同的亲和力。其中化合物a02、a03、a11和b05均具有与阳性对照化合物相当甚至略好于阳性对照的亲和力。特别是化合物alO(KD=2.8yM)和bl3(KD=2.3yM),其与NS5B的亲和力分别是阳性对照化合物121(Kd=90.8μΜ)的32倍和39倍,远远超过阳性对照化合物,因此该类取代吲哚类衍生物具有进一步研发的价值,可作为抗HCV的先导化合物加以利用。【主权项】1.一种取代吲哚类衍生物,或其药学上可接受的盐、酯或前药,其特征在于,具有通式I所示的结构:其中,R^R2各自独立的选自取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环、各种脂肪环,各种饱和脂肪链或各种不饱和脂肪链;R3为各种羧酸、羧酸脂或酰胺。2.如权利要求1所述的取代吲哚类衍生物,其特征在于,通式I中,1^、1?2各自独立的选自苯基、对甲基苯基、对甲氧基苯基、2-呋喃基、3-噻吩基、间甲基苯基、间氟苯基或对三氟甲基苯基;Rb为駿基或甲酯基。3.如权利要求1或2所述的取代吲哚类衍生物,其特征在于,为如下具体化合物之一:4.如权利要求1或2所述的取代吲哚类衍生物的制备方法,步骤为如下路线之一:路线一:以吲哚-6-甲酸甲酯1为初始原料,首先在N,N-二甲基甲酰胺溶液中与氯乙酰吗啉发生亲和取代反应生成中间体化合物2;然后中间体化合物2在二氯甲烷溶液中与N-溴代丁二酰亚胺反应生成中间体化合物3;然后中间体化合物3在二氧六环溶液中与各种取代硼酸反应生成目标产物a,随后不同的目标产物a在甲醇溶液中与氢氧化钠溶液反应得到目标产物b;合成路钱一加下,其中,R1J2同上述通式I所示;试剂及条件:(i)氯乙酰吗啉,氢化钠,N,N-二甲基甲酰胺,室温;(ii)二氯甲烷,N-溴代丁二酰亚胺;(iii)取代硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(iv)甲醇,氢氧化钠水溶液,回流;所述的取代硼酸为苯硼酸、对甲氧基苯硼酸、间氟苯硼酸、3-呋喃硼酸、对甲基苯硼酸、间甲基苯硼酸、2,4_二甲基苯硼酸、2-噻吩硼酸、2,3-二甲基苯硼酸或2-氟-3-甲氧基苯硼酸;路线二:以中间体化合物3为原料,在二氧六环溶液中与苯硼酸反应生成中间体化合物4,随后与不同的取代硼酸反应生成目标产物a;然后化合物a在甲醇溶液中与氢氧化钠水溶液反应生成目标产物b;合成路钱一加下,其中,R1同上述通式I所示;试剂及条件:(i)苯硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(ii)取代硼酸,四(三苯基膦)钯,磷酸钾,二氧六环,90°C;(iii)甲醇,氢氧化钠水溶液,回流;所述的取代硼酸为苯硼酸、对甲氧基苯硼酸或3-呋喃硼酸。5.如权利要求4所述的取代吲哚类衍生的制备方法,步骤为如下路线之一:路线一:(1)称取5.26g原料6-吲哚甲酸甲酯置于IOOmL烧瓶中,加入20mLN,N-二甲基甲酰胺溶解,加入791.9mg氢化钠,后室温搅拌30分钟,然后加入3.90mL氯乙酰吗啉,室温搅拌反应12小时,薄层检测反应完全后旋干溶剂,加20mL水和20mL二氯甲烷萃取,分离有机相,20mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂得白色固体,真空干燥,得到中间体化合物2;(2)称取4.53g中间体化合物2置于250mL烧瓶中,加入50mL二氯甲烷溶解,后分批加入5.61gN-溴代丁二酰亚胺,室温搅拌反应12小时,薄层检测反应完全后加30mL水淬灭反应,有机相30mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂后Flash柱层析得白色固体,真空干燥,得到中间体3;(3)称取92.Omg中间体化合物3置于25mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六环溶解,加入420μπιο1不同取代的苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和89.2mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,薄层检测反应完全后将反应液用娃藻土过滤,旋干溶剂,固体用IOmL二氯甲烷溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到目标产物aOl;(4)称取200.ΟΟμπιο1化合物a01于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值待稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用薄层板检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,加入IOmL乙酸乙酯溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得目标产物b01;路线^.:(1)称取92·Omg中间体3于50mL微波反应器中,加入IOmL重蒸二氧六溶解,加入24·4mg苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和46.7mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,得中间体4;(2)向上一步反应的反应液中加入220.ΟΟμmol对甲氧基苯硼酸、11.6mg四(三苯基膦)钯和46.7mg磷酸三钾;于微波反应器中150°C反应30分钟,TLC检测反应完全,反应液用硅藻土过滤,旋干溶剂,固体用20mL乙酸乙酯溶解后20mL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,Flash柱层析,层析产物乙醇重结晶,得到目标产物a02;(3)称取200.ΟΟμmol化合物a02于25mL烧瓶中,加入15mL甲醇溶解,升温回流,向反应液中缓慢滴加IM氢氧化钠溶液,并实时监测溶液pH值直至其pH值稳定在10以上时,停止滴加氢氧化钠溶液,并用薄层板检测反应完全,用IM盐酸调节pH值为1,后旋干溶剂,IOmL乙酸乙酯溶解,IOmL水洗两次,无水硫酸钠干燥,旋干溶剂,乙醇重结晶得目标产物b02。6.如权利要求1-3任一所述的取代吲哚类衍生物作为HCV抑制剂用于制备抗丙型肝炎药物。7.-种抗HCV药物组合物,包括权利要求1-3任一所述的取代吲哚类衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。【文档编号】C07D409/14GK106008306SQ201610495845【公开日】2016年10月12日【申请日】2016年6月28日【发明人】刘新泳,赵法宝,展鹏,刘娜,贾海永【申请人】山东大学
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1