一类黄酮并木脂素化合物及其提取方法
【专利摘要】垂穗披碱草在我国有大面积分布，是青藏高原主要的乡土牧草之一，植物资源丰富。本发明公开了从垂穗披碱草中分离10个黄酮并木脂素类化合物的方法，其中3个化合物为新化合物，8个化合物的纯度在95％以上。该类化合物具有保肝、降血脂、抗氧化等多种生理作用。此外，本发明所利用的是该植物的地上部位，生产周期短，对生态环境影响小，而且可以快速制备高纯度单体化合物，经济效益显著，对于科学合理开发垂穗披碱草资源具有非常重要的意义。
【专利说明】
一类黄酮并木脂素化合物及其提取方法
技术领域
[0001] 本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种从垂穗披碱草中提取高纯度黄酮并 木脂素类化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 披碱草属为禾本科小麦族的一个大属，有150种植物。它们在全世界均有广泛分 布，大多是重要的牧草。中国是该属植物分布较为广泛的国家之一。然而该属植物的化学成 分研究却未见报道。
[0003] 其中，垂穗披碱草在我国有大面积分布，从东北平原到内蒙草原再到青藏高原均 有分布，植物资源丰富。特别作为青藏高原主要的乡土牧草之一，在长期进化过程中，垂穗 披碱草已经适应青藏高原海拔高，昼夜温差大，阳光辐射强度高，全年低温缺氧，形成了独 特的次生代谢物。
[0004] 据文献报道，黄酮并木脂素类化合物具有保肝、降血脂、抗氧化、防止糖尿病、保护 心肌、抗血小板聚集和抗肿瘤等多种生理作用（韩百翠，黄酮并木脂素类化合物的研究进 展，2009年）。该类化合物在自然界相对含量较低，目前所报道分离得到的该类化合物仅有 51个，分布在20种植物中。
【发明内容】
[0005] 本专利提供一种从垂穗披碱草中分离10个黄酮并木脂素类化合物的方法，其中化 合物1、9和10为新化合物。
[0006] 本专利的提取方法，不仅丰富了该类化合物的种类结构，而且为该类化合物以及 垂穗披碱草的开发利用提供了前提。
[0007] 本发明提供一类黄酮并木脂素化合物的提取方法，包括以下步骤：
[0008] 采集垂穗披碱草地上部位，阴干粉碎后，用5-50倍甲醇或乙醇有机溶剂提取，超声 波或加热回流提取10-90分钟或在室温条件下冷浸，重复提取2-4次，减压浓缩，阴干，得到 垂糖披喊草提取物；
[0009] 将提取物用少量水溶液分散后，用乙酸乙酯萃取，萃取体积比为1:1，萃取次数2-4 次，减压浓缩，阴干，得到乙酸乙酯部分；
[0010]乙酸乙酯部分通过大孔树脂进行分离，用甲醇溶液梯度洗脱3次，其中甲醇的体积 比依次为:30 %，50 %，80 %，各9L;取80 %甲醇部分减压浓缩，阴干得到乙酸乙酯80 %部分；
[0011] 乙酸乙酯80%部分通过MCI树脂进行分离，用甲醇溶液梯度洗脱7次，其中甲醇的 体积比依次为30 %，40 %，50 %，60 %，70 %，80 %，90 %，；取70 % -90 %部分减压浓缩，阴干， 得到Fr.3;
[0012] 将Fr. 3以体积比为2:1的石油醚、丙酮混合溶剂为洗脱剂，使用200-300目分析纯 硅胶，进行硅胶柱层析;取层析物为Fr. 3d，该混合物为黄酮并木脂素类化合物的混合物，减 压浓缩阴干；
[0013] 利用半制备高效液相色谱从Fr.3d部分中制备黄酮并木脂素类化合物1-10。
[0014] 除化合物7和8以外，其余化合物纯度均大于95%。制备化合物2-8的方法详见实施 例2-4，制备新化合物1、9和10的方法如下：
[0015] 将Fr. 3d用20mL甲醇溶液充分振荡洗涤，洗涤液减压浓缩，制得Fr. 3dr，余下不溶 部分阴干制得Fr. 3dc。
[001 ?] 将Fr. 3dr经过Sephadex LH-20柱层析，以甲醇为洗脱剂，除去化合物苜蓿素。剩余 部分合并经硅胶柱层析，氯仿/甲醇= 10:1为洗脱剂纯化后，通过Waters 1525高效液相色 谱仪配备XBridge C18色谱柱（150X10mm，10ym)(以下用的制备液相均为同一仪器），色谱 溶剂为水和乙腈，色谱条件为:25 %乙腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，制备得到新 化合物l(4mg，保留时间：15.9min)。
[0017]取Fr.3dc通过反相色谱（RP_C18，Mitsubishi Chemical Corporation)，洗脱剂为 丙酮/水(体积比：30 %，50 %，70 %，90 % )，各2L。取90 % 部分为Fr. 3dc3。
[0018] Fr.3dc3部分经过Sephadex LH-20(以氯仿/甲醇=1:1为洗脱剂，50mL)，利用薄层 色谱层析合并相似成分，分别得到化合物9和10的混合物。化合物9和10的混合物通过半制 备HPLC，色谱条件为:37.5 %乙腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，制备得到新化合物 9(2mg，保留时间：26.7min)和 10(2mg，保留时间：28.1min)。
[0019] 垂穗披碱草是广泛分布于青藏高原地区的乡土牧草，植物资源非常丰富。本专利 所利用的是该植物的地上部位，生产周期短，对生态环境影响小，而且可以快速制备高纯度 黄酮并木脂素类化合物，经济效益显著，对于科学合理开发垂穗披碱草资源具有非常重要 的意义。
[0020] 本专利制备所得黄酮并木脂素类化合物工艺简单，纯度较高，并首次分离得到3个 新化合物，丰富了该类化合物的结构类型，有助于该类化合物的深入研发。此外，本专利的 应用将为青藏高原地区垂穗披碱草的开发和利用提供技术支撑。
【具体实施方式】
[0021] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂公司购买得到的。
[0022] 实施例1
[0023] 本发明的黄酮并木脂素类混合物的制备方法如下：
[0024] 采集垂穗披碱草地上部分，阴干粉碎，通过100目筛子得细粉。取11.8kg细粉用3倍 甲醇溶液，在室温下浸泡3次，依次为3天、3天、7天，减压蒸馏得到粗浸膏约980g。
[0025] 粗浸膏用500mL水溶后用乙酸乙酯以体积比（1:1)依次萃取3次，得到乙酸乙酯相 190g〇
[0026] 乙酸乙酯部分通过大孔树脂（HP-20，Mitsubishi Chemical Corporation)，洗脱 剂为甲醇-水，体积比依次为:30%，50%， 80%，甲醇，各9Ld其中取80%甲醇部分减压浓缩， 阴干得到40g。
[0027] 乙酸乙酯80%部分通过MCI树脂（CHP 20P，75~150ym，Mitsubishi Chemical Corporation)进行分离，用甲醇/水（体积比为30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%，甲 醇，各3L)梯度洗脱。将不同组分合并得到Fr.1-4四部分，即30%-40%部分为Fr.l，50%_ 60 %部分为Fr. 2，70 % -90 %部分为Fr. 3，甲醇冲柱部分为Fr. 4。其中Fr. 3部分减压浓缩，阴 干得到21g。
[0028] 将Fr · 3部分21g以石油醚/丙酮(体积比为20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，丙酮，各2L)为 洗脱剂硅胶柱(200-300目分析纯硅胶)层析。20:1部分为Fr. 3a，10:1部分为Fr. 3b，5:1部分 为Fr. 3c，2:1部分为Fr. 3d，1:1和丙酮部分为Fr. 3e。其中Fr. 3d部分为黄酮并木脂素类化合 物的混合物，减压浓缩，阴干得到12g，产率0.10 %。
[0029] 实施例2
[0030]本发明的化合物1和2的制备方法如下：
[0031] 取Fr. 3d部分（12g)用20mL甲醇溶液充分振荡洗涤，洗涤液减压浓缩，制得Fr. 3dr (2g)，余下部分阴干制得Fr.3dc。
[0032] 取Fr · 3dr部分样品（0 · 3g)，经过Sephadex LH-20(Sephadex LH-20，Amersham Pharmacia Biotech)柱层析，以甲醇为洗脱剂（200mL)，除去化合物苜蓿素(20mg)。剩余部 分合并经硅胶柱层析，氯仿/甲醇= 10:1为洗脱剂纯化后，利用甲醇溶解后，通过Waters 1525高效液相色谱仪，色谱溶剂为水和乙腈，色谱条件为:25 %乙腈等度，流速:2mL/min，检 测波长:340nm，多次重复累积制备得到化合物1 (4mg，保留时间：15.9min)和2(2mg，保留时 间：17·2min)〇
[0033] 利用核磁共振波谱、质谱、红外和紫外等现代光谱技术，确定化合物1的化学式为
[0034]
[0035]确定化合物2的化学式为 [0036]
[0037]波谱数据如下：
[0038]化合物l:[af -20?(c = 0.1，Me0H);UV(Me0H)Amax 272.3,363.9nm;IR(KBr)vmax cm_1:3421,2924,1653,1567,1513.HRESIMS m/z 501.1152[M+Na] + (calcd for C26H22〇9Na, 501.1156):? Mffi(400MHz，Acetone-d6，Sinppm，JinHz):SH6.22(lH，d，J=1.6Hz，H- 6) ,6.55( lH,d,J=1.6Hz,H-8) ,3.69( lH,dd,J= 10.4,4.4Hz,H-lle) ,3.23( lH,t,J = 10.0Hz,H-lla),3.55(lH,dd,J=10.4,4.4Hz,H-12),4.94(lH,s,H-13),6.88(2H,d,J= 8.4Hz,H-15,19) ,6.64(2H,d,J = 8.4Hz,H-16,18) ,Τ.δΚ?Η^,Η-θ7 ),3.61(3H,s,3/-0CH3),4.00(3H,s,5/-0CH3),13.02(1H,s,5-OH)； 13C NMR(125MHz,Acetone-d6,5in ppm)：5c 159.9(C-2),112.0(C-3),181.5(C-4),163.2(C-5),99.5(C-6),164.8(C-7),94.7(C-8), 158.1(C-9),105.1(C-10),62.6(C-11),42.1(C-12),36.7(C-13),138.8(C-14),129.2(C-15,19),115.9(0-16,18),156.6(0-17),118.8(0-1 7),128.6(0-27),147.1(0-37),148.8 (00,144.7(050,103.6(060,60.5(03416),56.7((:-5416)0
[0039] 化合物2: 4 MlR(400MHz ,Acetone_d6,3in ppm, J in Hz): 3h 6 · 22( 1H,d, J = 1.6Hz,H-6),6.54(lH,d ,J=1.6Hz,H-8) ,3.69(lH,dd ,J= 10.4,4.4Hz,H-lle) ,3.24( lH,t, J=10.0Hz,H-lla),3.59(lH,dd ,J= 10.4,4.4Hz,H-12),4.95( lH,s,H-13), 6.81( lH,d,J = 1.6Hz,H-15),6.58(lH,d ,J=1.6Hz,H-18), 6.64( lH,dd,J = 8.0,1.6Hz,H-19), 7.51( lH,s, Η-θ' ),3.14(3H,s,16-0CH3) ,3.62(3H,s,3/-0CH3) ,4.00(3H,s,57-〇CH3), 13.00(1H,s,5-OH);13CMMR(125MHz，Acetone-d6，Sinppm):S c159.9(C-2)，111.0(C-3)，181.5(C-4)， 163.2(C-5),99.5(C-6),164.7(C-7),94.7(C-8),158.1(C-9),105.1(C-10),62.6(C-11), 42.1(C-12),37.1(C-13),136.4(C-14),112.2(C-15),148.2(C-16),145.9(C-17),115.4 (0-18),120.5(0-19),118.9(0-1 7),128.4(0-27),147.1(0-37),148.8(0-4 7),144.7(C-50,103.6(060,56.2(016016),60.5(03416),56.8(05416)0
[0040] 实施例3
[0041 ]本发明的化合物3-6的制备方法如下：
[0042] 取Fr. 3d部分（12g)用20mL甲醇溶液充分振荡洗涤，洗涤液减压浓缩，制得Fr. 3dr (2g)，余下不溶部分阴干制得Fr.3dc。
[0043]取Fr.3dc(10g)通过反相（RP_Ci8，Mitsubishi Chemical Corporation)，洗脱剂为 丙酮/水（体积比：30 %，50 %，70 %，90 % )，各2L。30 %和50 %部分为Fr. 3dc 1，70 %部分为 Fr. 3bc2，90 % 部分为 Fr. 3dc3，丙酮部分为 Fr. 3dc4。
[0044] Fr. 3dc2部分经过硅胶柱层析以氯仿：甲醇，体积比依次为20 :1，10:1，5:1，各 300mL，梯度洗脱。取氯仿：甲醇（10:1)部分，采用20cm X 20cm制备用硅胶板，氯仿/甲醇= 10:1为洗脱剂，得到两部分，分别利用Sephadex LH-20柱层析（以氯仿/甲醇= 1:1为洗脱 剂，100mL)，纯化得到Fr. 3dc2-l和Fr. 3dc2-2两部分。
[0045] 取Fr. 3dc2-l部分样品（50mg)，用甲醇溶解，通过半制备HPLC，色谱条件为:25%乙 腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，多次重复累积制备得到化合物4 (9mg，保留时间： 28.6min)和3(9mg，保留时间：30.4min)。
[0046] 取Fr.3dc2-2部分样品（60mg)，用甲醇溶解，通过半制备HPLC色谱条件为：25%乙 腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，多次重复累积制备得到化合物5 (10mg，保留时间： 30.4min)和6(10mg，保留时间：38.8min)。
[0047]利用核磁共振波谱、质谱、红外和紫外等现代光谱技术，确定化合物3和化合物4的 化学式为：
[0048]
[0049] 利用核磁共振波谱、质谱、红外和紫外等现代光谱技术，确定化合物5和化合物6的 化学式为：
[0050]
[°051 ]奴 pgrmmyur:
[0052] 化合物3:? NMR(400MHz，DMS0-d6，Sin ppm，J in Ηζ):δΗ 7.03(lH，s，H-3)，6.19 (1H,s,H-6),6.54(1H,s,H-8),7.31(2H,s,H-2 / ,67 ), 7.19(2H,d ,J = 8.4Hz ,Η-277,677) ,6.68 (2H，d，J = 8.4Hz，H-3〃，5〃），4.85(lH，brs，H-7〃），4.22(lH，m，H-8〃），3.64(lH，dd，J=11.5， 4.4Hz，H-9〃a)，3.23(lH，dd，J=ll .2,4.8Hz，H-9〃b) ,3.86(611,8,37 ,5' -〇CH3) ;13C 匪R (100MHz，DMS0-d6，Sin ppm): δ。163.0(C-2)，104.9(C-3)，181.8(04)，161.4(05)，99.2 (0-6),164.2(0-7),94.5(0-8),157.5(0-9),103.7(0-10),125.3(0-10,104.3(0-2 7 ,67), 153.0(0-37 ,50,140.0(0-40,132.4(0-1^),127.9(0-2^,6^),114.4(0-3^,5^),156.3(0-4^,71.6(07^,87.1(08^,60.4(09^,56.4((:-3:5416)0
[0053] 化合物4:? NMR(400MHz，DMS0-d6，Sin ppm，J in Ηζ):δΗ 7.02(lH，s，H-3)，6.19 (lH，d，J= 1 ·8Ηζ，H-6)，6.54( lH，d，J=1.8Hz，H-8)，7.16(2H，d，J = 8.8Hz，H-2〃，6〃），6.69 (2H，d，J = 8.8Hz，H-3〃，5〃），4.77(lH，brs，H-7〃），4.31 (lH，m，H-8〃），3.72(lH，m，H-9〃a)， 3.48(lH,m,H-9//b),3.86(6H,s,3 /,δ^Ο?)；1^ NMR(100MHz ,DMS〇-d6,5in ppm)：5c 163.1 (C-2),104.9(C-3),181.9(C-4),161.5(C-5),99.l(C-6),164.3(C-7),94.5(C-8),157.5 (0-9),103.9(0-10),125.4(0-1 7 ),104.3(0-27 ,60,153.1(0-37 ,50,139.4(0-40,132.6 (C-l〃），128.0(C-2〃，6〃），114.5(C-3〃，5〃），156.3(C-4〃），72.0(C-7〃），86.5(C-8〃），60.2 (09^,56.4(03:5416)0
[0054] 化合物5:4 NMR(400MHz，Acetone_d6，3in ppm, J in Hz): 3h 6 · 82( 1H, s，H_3)， 6.28(lH,brs,H-6),6.58(lH,brs,H-8),7.42(2H,brs,H-2/,6 7),7.07(lH,d,J=1.4Hz,H- 2〃），6.79(lH，d，J = 8.1Ηz，Η-5〃），6.87(lH，dd，J = 8.1，1.4Hz，H-6〃），5.05(lH，d，J = 4.4Hz，H-7〃），4.36(lH，m，H-8〃），3.91 (lH，dd，J= 12.0,5.6Hz，H-9〃a)，3.54(lH，dd，J = 12·0，3·2Hz，H-9〃b),4.01(6H，s ,3' J'-OCHs)，3.84(3H，s，3〃-0CH3) ,12.91(lH，s，5-OH); 13C NMR(100MHz,Acetone-d6,5in ppm)：5c 164.4(C-2),106.0(C-3),183.1(C-4),163.4 (C-5) ,99·9(C-6)，165· 2(C-7) ,95 ·0(C-8)，158·9(C-9), 105.4(010), 127.6(01'），105.1 (C-27 ,67),154.7(0-37 ,57),140.1(0-47),133.7(0-1^),111.0(0-2^),148.0(0-3^), 146.6(C-4〃），115.2(C-5〃），120.2(C-6〃），73.6(C-7〃），88.2(C-8〃），61.2(C-9〃），57.0(C-
[0055] 化合物6:4 NMR(400MHz，Acetone_d6，3in ppm, J in Hz): 3h 6 · 82( 1H, s，H_3)， 6.28(lH,d ,J = 2.0Hz,H-6), 6.58( lH,d,J = 2.0Hz,H-8) ,7.43(2H,brs,H-2/ ,67 ) ,7.07( 1H, d,J=1.6Hz,H-2//) ,6.78(lH,d,J = 8.0Hz,H-5//),6.93(lH,dd,J = 8.0,1.6Hz,H-6//),5.04 (lH，d，J = 7.2Hz，H-7〃），4.18(lH，m，H-8〃），3.74(lH，dd，J=12.0,3.6Hz，H-9〃a)，3.39(lH， dd ,J=12.0,3.2Hz,H-9//b),4.04(6H,s,3/ ,57 -〇CH3), 3.82(3H, s, 3^-0?), 12.91 (1H, s, 5-OH).13CMMR(100MHz，Acetone-d6，Sinppm):Sc164.6(C-2)，106.1(C-3)，183.1(C-4)， 163.4(C-5)，99·9(C-6)，165.3(C-7)，95.1(C-8)，158.9(09)，105.4(010)，127.6(C-1'）， 105.KC-2 7 ,67 ),154.4(0-37 ,57 ),140.6(0-47 ),133.7(0-1^),111.4(0-2^),148.0(0-3〃），146·9(C-4〃），115·2(C-5〃），120·7(C-6〃），73·9(C-7〃），89·8(C-8〃），61·8(C-9〃），57·0
[0056] 实施例4
[0057] 本发明的化合物7-10的制备方法如下：
[0058] 取Fr. 3dc3部分样品（60mg)，经过Sephadex LH_20(以氯仿/甲醇=1:1为洗脱剂， 50mL)，利用薄层色谱层析合并相似成分，分别得到化合物7和8、9和10的混合物。
[0059]化合物7和8的混合物，用甲醇溶解，通过半制备HPLC，色谱条件为：37.5%乙腈等 度，流速:2mL/min，检测波长：340nm，经过多次重复累积得到比例为1:2和2:1的7(保留时 间：28.3min)和8 (保留时间：29. lmin)混合物(共12mg)。
[0060] 化合物9和10的混合物，用甲醇溶解，通过半制备HPLC，色谱条件为:37.5 %乙腈等 度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，经过多次重复累积制备得到化合物9(2mg，保留时间： 26.711^11)和10(211^，保留时间 ：28.111^11)。
[0061] 利用核磁共振波谱、质谱、红外和紫外等现代光谱技术，确定化合物7和化合物8的 化学式为：
[0062] ο
[0063] 化合物9和化合物10的化学式为：
[0064]
[0065]波谱数据如下：
[0066] 化合物7:咕匪R(400MHz，Acetone-d6，Sin ppm，J in Ηζ):δΗ 6·79-6·89(3Η， over lapped, Η-3,57/,677) ,6.28( lH,br s ,Η-6) ,6.59( lH,br s ,Η-8), 7.38(2H,brs ,Η-27 , 6' )，7.01(lH，d，J=1.6Hz，H-2〃），4.61(lH，d，J = 6.8Hz，H-7〃），4.39(lH，m，H-8〃），3.57 (lH,dd,J=12.4,2.8Hz,H-9//a),3.28(lH,dd,J=12.4,4.8Hz,H-9 //b),3.99(6H,s,3/ ,57-0CH3)，3.84(3H，s，3〃-0CH3)，3.18(3H，s，7〃-0CH 3)，12.92(lH，s，5-OH);13C 匪R(100MHz, Acetone-d6,5in ppm)：5c 164.54(C-2),105.8(C-3),183,0(C-4),163.0(C-5),99.8(C-6), 165.2(0-7),95.1(0-8),158.9(0-9),105.4(0-10),126.9(0-1 7 ),105.1(0-27 ,60,154.5 (C-3' ,5' ) ,141.7(047 )，131.0(C-1〃），111.8(C-2〃），148.2(C-3〃），147.1(C-4〃），115.4 (0-5^),121.3(0-6^),84.9(0-7^),87.1(0-8^),62.2(0-9^),56.9(0-3 7 ,5^10),56.3(0-3〃0Me)，57.0(C-7〃0Me)。
[0067] 化合物8:? 匪R(400MHz，Acetone-d6，Sin ppm，J in Ηζ):δΗ 6·77-6·88(3Η， over lapped, H-3,57/,677) ,6.28( lH,br s ,H-6) ,6.58( lH,br s ,H-8), 7.34(2H,brs ,Η-27 , 6' )，7.01(lH，d，J=1.6Hz，H-2〃），4.59(lH，d，J = 6.0Hz，H-7〃），4.34(lH，m，H-8〃），3.57 (lH,dd,J=12.8,2.8Hz,H-9//a),3.28(lH,dd,J=12.8,5.2Hz,H-9 //b),3.94(6H,s,3/ ,57-0CH3)，3.86(3H，s，3〃-0CH3)，3.26(3H，s，7〃-0CH 3)，12.91(lH，s，5-OH);13C 匪R(100MHz, Acetone-d6，Sin ppm):δ。164.3(C-2)，105.9(03)，183.0(04)，163.0(05)，99.8(C-6)， 165.2(0-7),95.1(0-8),158.8(0-9),105.4(0-10),127.4(0-1 7 ),105.1(0-27 ,60,154.5 (C-3' ,5' )，140.2(047 )，131.4(C-1〃），111. 9(C-2〃），148.1 (C-3〃），147.0(C-4〃），115.2 (0-5^),121.7(0-6^),83.4(0-7^),86.8(0-8^),60.9(0-9^),56.9(0-37 ,5^10),56.3(0-3〃0Me)，57.2(C-7〃0Me)。
[0068] 化合物9:UV(Me0H)Amax 269.9,340. lnm;HRESMS m/z 533.1414[M+Na].(calcd for 027^6010^,533.1418).? NMR(400MHz，Acetone-d6，Sin ppm, J in Hz) :δΗ 6.83(1H， s,overlap,H-3),6.28(lH,br s,H-6),6.59(lH,br s,H-8),7.41(2H,brs,H-2/,67),7.23 (2H，d，J = 8.4Hz，H-2〃，6〃），6.84(2H，d，J = 8.4Hz，H-3〃，5〃），4.62(lH，d，J = 6.8Hz，H-7〃）， 4.38(lH,m,H-8//),3.86(lH,dd ,J=11.6,4.0Hz,H-9//a), 3.58 (lH,dd, overlapped, H-^b), 4.00(611,8,37 ,5' -〇CH3) ,3.16(3H，s，7〃-0CH3)，12.92(lH，s，5-OH) ;13C 匪R(100MHz, Acetone-d6，Sin ppm):δ。164.6(C-2)，106.0(03)，183.1 (C-4)，163.3(05)，99.9(C-6)， 165.2(0-7),96.6(0-8),158.9(0-9),105.4(0-10),125.4(0-17 ),105.1(0-27 ,60,154.5 (C-3' ,5' ) ,141.7(0^ )，130.4(C-1〃），129.8(C-2〃，6〃），115.8(C-3〃，5〃），158.0(C-4〃）， 84.7(07^,87.1(08^,62.2(09^,56.9(03:5416),57.0((:-7^16)0
[0069] 化合物 10:UV(Me0H)Amax 269.9,340. lnm;HRESMS m/z 511.1596[M+H] + (calcd for 026^20911,511.1599).? NMR(400MHz，Acetone-d6，Sin ppm,J in Hz):δΗ 6.77(lH，s， H-3),6.26(lH,br s,H-6),6.55(lH,br s,H-8),7.35(2H,brs,Η-27 ,67),7.24(2H,d,J= 8.4Hz，H-2〃，6〃），6.84(2H，d，J = 8.4Hz，H-3〃，5〃），4.57(lH，d，J = 6.0Hz，H-7〃），4.30(lH， m，H-8〃），3.86(lH，dd，J=12.0,4.0Hz，，H-9〃a) ,3.60(lH，dd，J= 12.0,2.8Hz，H-9〃b) ,3.94 ,5^0^), 3.24(3H,s, 7^-0^3),12.90( 1H,s,5-OH)；13C NMR( 100MHz ,DMS〇-de, δ in ppm)：5c 164.6(C-2),104.7(C-3),181.6(C-4),163.3(C-5),99.9(C-6),165.2(C-7), 96.6(0-8),156.8(0-9),103.2(0-10),125.4(0-1 7),104.1(0-27 ,67),153.0(0-37 ,57), 139.0(0-40,128.8(0-1^),128.6(0-2^,6^),114.7(0-3^,5^),157.6(0-4^),82.1(0-7^), 85.2(08^,62.2(09^,56.3(03:5416),59.8(07^16)0
【主权项】
1. 一类黄酮并木脂素化合物，其特征在于，化合物具有下述结构式：2. -类黄酮并木脂素化合物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 采集垂穗披碱草地上部位，阴干粉碎后，用5-50倍甲醇或乙醇有机溶剂提取，超声波 或加热回流提取10-90分钟或在室温条件下冷浸，重复提取2-4次，减压浓缩，阴干，得到垂 糖披喊草提取物； B、 将提取物用少量水溶液分散后，用乙酸乙酯萃取，萃取体积比为1:1，萃取次数2-4 次，减压浓缩，阴干，得到乙酸乙酯部分； C、 乙酸乙酯部分通过大孔树脂进行分离，用甲醇溶液梯度洗脱3次，其中甲醇的体积比 依次为:30 %，50 %，80 %，取80 %甲醇部分减压浓缩，阴干得到乙酸乙酯80 %部分； D、 乙酸乙酯80%部分通过MCI树脂进行分离，用甲醇溶液梯度洗脱7次，其中甲醇的体 积比依次为30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%，取70%-90%部分减压浓缩，阴干，得 到Fr.3; E、 将Fr. 3以体积比为2:1的石油醚、丙酮混合溶剂为洗脱剂，使用200-300目分析纯硅 胶，进行硅胶柱层析;取层析物为Fr. 3d，该混合物为黄酮并木脂素类化合物的混合物，减压 浓缩阴干； F、 利用半制备高效液相色谱从Fr.3d部分中制备黄酮并木脂素类化合物1-10。3. 如权利要求2所述的黄酮并木脂素化合物的提取方法，其特征在于，所述的利用半制 备高效液相色谱从Fr. 3d部分中制备黄酮并木脂素类化合物1的方法，包括以下步骤： 步骤一:取Fr. 3d部分用甲醇溶液充分振荡洗涤，洗涤液减压浓缩，制得Fr. 3dr; 步骤二：取Fr. 3dr部分样品，经过Sephadex LH-20柱层析，以甲醇为洗脱剂，除去化合 物苜蓿素;剩余部分合并经硅胶柱层析，氯仿/甲醇=10 :1为洗脱剂纯化后，利用甲醇溶解 后，通过半制备高效液相色谱仪，色谱溶剂为水和乙腈，多次重复累积制备得到化合物1。4. 如权利要求2所述的黄酮并木脂素化合物的提取方法，其特征在于，所述的利用半制 备高效液相色谱从Fr.3d部分中制备黄酮并木脂素类化合物9和化合物10的方法，包括以下 步骤： 步骤一:将Fr. 3d用20mL甲醇溶液充分振荡洗涤，洗涤液减压浓缩，制得Fr. 3dr，余下部 分阴干制得Fr.3dc; 步骤二:取Fr. 3dc通过反相色谱梯度洗脱4次，洗脱剂为体积比：30 %，50 %，70 %，90 % 的丙酮溶液，取90 %部分为Fr. 3dc3; 步骤三:Fr.3dc3部分经过Sephadex LH-20柱层析，以氯仿/甲醇=1:1为洗脱剂，利用 薄层色谱层析合并相似成分，分别得到化合物9和10的混合物;化合物9和10的混合物通过 半制备高效液相色谱仪色谱，色谱溶剂为水和乙腈，制备得到化合物9和10。5. 如权利要求3所述的黄酮并木脂素化合物的提取方法，其特征在于，所述的步骤二 中，高效液相色谱仪色谱条件为:25 %乙腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，新化合物 1的保留时间为15.9min。6. 如权利要求4所述的黄酮并木脂素化合物的提取方法，其特征在于，所述的步骤三 中，高效液相色谱仪色谱条件为:37.5 %乙腈等度，流速:2mL/min，检测波长:340nm，制备得 到新化合物9的保留时间：26.7min，制备新化合物10的保留时间：28. lmin。
【文档编号】C07D311/30GK106008445SQ201610317500
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月12日
【发明人】高坤, 刘权, 吴成慧
【申请人】兰州大学