布洛芬的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了布洛芬的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的布洛芬的药物组合物中含有布洛芬和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，布洛芬、化合物(Ⅰ)单独作用时，可降低模型大鼠血清TBIL含量，具有退黄作用；布洛芬和化合物(Ⅰ)联合作用时，退黄作用进一步提高，可以开发成治疗黄疸的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
布洛芬的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及布洛芬的新用途，具体涉及布洛芬的药物组合物 及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 布洛芬是世界卫生组织、美国FDA唯一共同推荐的儿童退烧药，是公认的儿童首选 抗炎药。布洛芬具有抗炎、镇痛、解热作用。治疗风湿和类风湿关节炎的疗效稍逊于乙酰水 杨酸和保泰松。适用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊椎炎和神经炎 等。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种布洛芬的药物组合物，该药物组合物中含有布洛芬和 一种结构新颖的天然产物，布洛芬和该天然产物可以协同治疗黄疸。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0006；
[0007] -种布洛芬的药物组合物，包括布洛芬、如权利要求1所述的化合物（I)和药学上 可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将牡丹皮粉碎，用85~95%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用8 %乙醇洗脱10个柱体积，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收集70 % 洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 化合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用90%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗黄疸的药物中的应用。
[0015] 上述布洛芬的药物组合物在制备治疗黄疸的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点:本发明提供的布洛芬的药物组合物中含有布洛芬和一种结构新颖 的天然产物，布洛芬、化合物（I)单独作用时，可降低模型大鼠血清TBIL含量，具有退黄作 用;布洛芬和化合物(I)联合作用时，退黄作用进一步提高，可以开发成治疗黄疸的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将牡丹皮(2kg)粉碎，用90%乙醇热回流提取(20LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗脱12 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱 体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?^]+为111/2 491.3142，结合核磁特征可得分子式为 C30H44〇4，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (1 · 48，m)，H-1 (1.83，m)，H-2(2.38，m)，H-2(2.64，m)，H-5(2.ll，m)，H-6(2.37，m)，H-6(2.55，m)，H-ll (2.16，m，2H)，H-12(1.68，m，2H)，H-15(2.37，m)，H-15(1.69，m)，H-16(1.93，m)，H-16(1.32， m)，H-17(1.50，m)，H-18(0.71，s)，H-19(1.21，s)，H-20(1.48，m)，H-21(1.03，d，J=6.0)，H-22(2.33，m)，H-22(1.86，m)，H-23(2.35，m)，H-23(1.51，m)，H-24(2.58，d，J=12.0)，H-26 (9.75，br，s)，H-27( 1.21，s)，H-28( 1.05, s)，H-29( 1.03, s)，H-30( 1.22, s);核磁共振碳谱 数据Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz) :35.2(CH2,卜C)，34.1 (CH2,2-C)，214.5(C，3-C)，47.2(C，4-C)，50.7(CH，5-C)，37.0(CH2,6-C)，198.1(C，7-C)，139.4(C，8-C)，162.8(C，9-C)，39.4(C， 10-C)，24.6(CH2，11-C)，30.1(CH2，12-C)，47.5(C，13-C)，44.8(C，14-C)，34.3(CH2，15-C)， 29.6(CH2，16-C)，50.1(CH，17-C)，16.1(CH 3，18-C)，18.1(CH3，19-C)，37.2(CH，20-C)，20.8 (CH 3,21-C)，33.0(CH2,22-C)，37.1(CH2,23-C)，61.6(CH，24-C)，79.5(C，25-C)，203.4(CH， 26-C)，14· 7(CH3，27-C)，25 · 3(CH3，28-C)，25 · 1 (CH3，29-C)，18 · 1 (CH3，30-C)。IR谱表明该化 合物含有羟基（3442CHT1)和α，β-不饱和羰基（ΠΟδαιΓ 1)基团。此外，紫外在252nm处有最大 吸收波长，也表明了该化合物含有α，β_不饱和羰基结构。1H-匪R谱显示六个单峰甲基信号 [SH0.71(3H，s，Me-18)，1.21(3H，s，Me-19)，1.21(3H，s，Me-27)，1.05(3H，s，Me-28)，1.03 (3!1，8，]\^-29)和1.22(3!1，8，]\^-30)]，一个双峰甲基信号[5!11.03(3!1，(1，了 = 6.0取，]\^-21)]，一个醛基质子信号[6!19.75(1!1，1^，8，!1-26)]以及一个含氧次甲基信号[6!12.58(1!1， d，J = 12. OHz，H-24) ]。13C-NMR谱显示30个共振碳信号，七个甲基，九个亚甲基，五个次甲基 (一个醛基和一个含氧次甲基），九个季碳(两个羰基碳，两个烯烃碳和一个含氧碳）。HMBC谱 中H2-UH2-2和H-5与C-3，Me-28和Me-29与C-3和C-4,以及H-5和H2-6与C-4的相关性表明C-3 为酮羰基，C-4连有两个甲基。HMBC谱中H 2-22和H2-23与C-24，H2-23、H-24、H-26和H3-27与C-25,以及H-26和H-24与C-27的相关性表明C-24和C-25为环氧结构，C-26为醛基。 13C-DEPT谱 中，碳信号叱198.1(07)，139.4((：-8)和162.8((：-9)表明该化合物含有一个共辄系统((：-7/ C-8/C-9)。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确 定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
〇
[0024] 实施例2:药理作用
[0025]本实施例使用一次性灌胃异硫氰酸-1-萘酯(ANIT)复制大鼠黄疸模型，测定药物 对黄疸模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素 (TBIL)含量的影响，观察药物对肝脏的保护作用。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028] 清洁级SD大鼠，??有，体质量260~300g，购自昆明医学院实验动物中心。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030] 布洛芬购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。联苯 双酯滴丸(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，规格1.5mg/粒）；异硫氰酸-1-萘酯(ANIT，华 北地区特种化学试剂开发中心）；丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总 胆红素(TBIL)测试盒均购自南京建成生物工程研究所。
[0031] 1.3仪器
[0032] 721型分光光度计（上海分析仪器厂）；RM 6240BD型多道生理信号采集处理系统 (北京天创尚邦仪器设备有限公司）。
[0033] 1.4大鼠分组及模型制备
[0034] 60只SD大鼠（$3兼半）随机均分为6组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组 (联苯双酯〇.l〇g/kg)和布洛芬组(80mg · kg^1)、化合物（I)组(80mg · kg^1)、布洛芬与化合 物（I)组合物组【40mg · kg-1布洛芬+40mg · kg-1化合物（lUg给药，每天1次，连续10d。正 常对照组和模型对照组分别给予生理盐水，于给药第8天后lh，正常对照组大鼠 ig等量色拉 油，其余各组大鼠均一次性igANIT(2g溶于100ml色拉油中）100mg/kg以复制黄疸模型。 [0035] 1.5大鼠血清生化指标测定实验
[0036] 于末次给药后lh大鼠摘眼球取血2ml，以离心半径为8cm、3000r/min离心15min分 离血清，用分光光度计检测大鼠血清生化指标ALT、AST和TBIL。
[0037] 1.6统计学方法
[0038]采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，实验所得数据用i±s表示，采用完全随 机设计的单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较采用q检验。P<〇.05为差异有统计 学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对黄疸模型大鼠血清生化指标的影响
[0041 ] 与正常对照组比，模型对照组大鼠 TBIL、ALT、AST水平显著升高(P<0.01)，说明造 模成功。与模型对照组比，阳性对照组大鼠 TBIL、ALT、AST水平显著降低(P < 0.01);与模型 对照组比，布洛芬组、化合物（I)组大鼠 TBIL、ALT、AST水平降低(P<0.05);与模型对照组相 比，布洛芬与化合物（I)组合物组大鼠 TB IL、ALT、AST水平显著降低(P < 0.01)。结果见表1。
[0042] 表1对黄疸模型大鼠血清生化指标的影响= 10)
[0043]
[0044] 肝脏分泌胆汁后储存于胆囊中，然后经胆总管流入十二指肠，由胆总管中收集胆 汁可直观反映胆汁的分泌与排放情况。胆汁的分泌与排放情况是肝脏功能正常与否的反 映，胆汁的正常流动有利于胆道系统内的炎症产物和小颗粒结石等堵塞物顺利流出，有利 于对胆道进行冲刷，使胆道系统保持畅通，并且有利于消除胆汁淤积变质而引起的对胆囊 组织的持续刺激。各种因素引起的胆汁滞留必定会使胆囊组织在化学刺激下遭受损伤。
[0045] 现代医学认为，胆囊炎的发生与胆汁成分改变和胆道动力障碍有关，使胆囊壁增 厚、肌肉纤维萎缩，故胆囊的收缩功能减退。该疾病的治疗难点是胆囊壁的不良重构而引起 胆囊收缩功能的丧失，单纯应用西药抗感染很难达到恢复胆囊收缩功能的目的。胆汁在胆 道系统内的储存、排出有赖于胆囊和胆道口括约肌的协调运动。胆囊收缩功能下降或胆汁 浓聚，不利于胆汁的排泄，从而加剧胆囊炎的急性发作。
[0046] 如果肝细胞受到损伤，胆红素就可以直接进入血液而导致血液中的胆红素含量升 高，并沉积在眼球和皮肤等部位，引起黄疸，因此血浆中的胆红素水平可以直接反映肝脏的 健康状况。ANIT诱发大鼠黄疸的生化指标和病理形态学改变，类似于人类肝内胆汁淤积病 变。在大鼠一次性igANIT 48h时血清TBIL达高峰，72h后开始下降。当肝细胞发生病变，肝细 胞肿胀，肝小胆管管腔闭塞，排泄胆汁受阻，则血中胆红素升高，就会发生肝细胞性黄疸。 [0047]上述结果表明，布洛芬、化合物（I)单独作用时，可降低模型大鼠血清TBIL含量，具 有退黄作用；布洛芬和化合物（I)联合作用时，退黄作用进一步提高，可以开发成治疗黄疸 的药物。
[0048]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种布洛芬的药物组合物，其特征在于:包括布洛芬、如权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的布洛芬的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体包 括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或 润滑剂。4. 根据权利要求2所述的布洛芬的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶囊 剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓 剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将牡 丹皮粉碎，用85~95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗 脱12个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用90%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗黄疸的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的布洛芬的药物组合物在制备治疗黄疸的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/58GK106008640SQ201610332762
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月19日
【发明人】蒋灵锟
【申请人】蒋灵锟