一种lb固体培养基的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：S1、将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH＝7.1?7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A；S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45?55℃，加入抗生素，摇匀得到溶液B；S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800?1200r/min，吹风60?80min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。本发明避免了LB固体培养基制备过程中出现冷凝水的问题，避免细菌污染培养基，减少浪费，延长培养基的存放时间，大大增加了培养基吸收菌液的能力，缩短试验时间，提高试验效率。
【专利说明】
-种LB固体培养基的制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及培养基制备技术领域，尤其设及一种LB固体培养基的制备方法。
【背景技术】
[0002] LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种， 使菌种成倍扩增，达到使用要求，可分为液体培养基和固体培养基。
[0003] 目前，常用的制备LB固体培养基的方法为:配制培养基溶液、灭菌、铺板、凝固、倒 置保存。用此方法制备的LB固体培养基，由于培养基不能完全凝固，平板倒置保存后，培养 皿盖子上会出现较多的冷凝水，导致使用不便，易出现细菌污染、存放寿命很短的问题;而 且固体培养基吸收菌液的能力较弱，在做实验时，吸收菌液会消耗很长时间，延误试验进 程。
【发明内容】
[0004] 基于【背景技术】存在的技术问题，本发明提出了一种LB固体培养基的制备方法，本 发明对培养基溶液进行半风干处理，避免了出现冷凝水的问题，避免了细菌污染培养基的 问题，减少浪费，延长培养基的存放时间，大大增加了培养基吸收菌液的能力，促进菌液的 充分吸收，缩短试验时间，提高试验效率。
[0005] 本发明提出的一种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0006] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用氨氧化钢水溶液调节pH =7.1-7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A;
[0007] S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45-55Γ，加入抗生素，摇匀得到溶液B; [000引 S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800-1200r/min，吹风60- 80min，用无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
[0009]优选地，S1中，溶液A中膜化蛋白腺的浓度为9-llg/l，酵母提取物的浓度为4-6g/ 1，氯化钢的浓度为9-llg/l，琼脂粉的浓度为14-16g/l。
[0010]优选地，S1中，氨氧化钢水溶液的浓度为0.5-1.5mol/l。
[0011] 优选地，S2中，取S1中得到的溶液A，高压灭菌20-30min。
[0012] 优选地，S2中，加入抗生素，摇匀的操作需在超净工作台上完成。
[0013] 优选地，S3的操作需在超净工作台上完成。
[0014] 优选地，S3中，直径为90mm的培养皿加入20ml溶液B。
[001引优选地，S3中，用无菌封口膜封闭培养皿，于2-4°C保存得到L姻体培养基。
[0016] 上述水均为蒸馈水。
[0017] 上述膜化蛋白腺、酵母提取物、琼脂粉均可从市场上购得。
[0018] 上述抗生素不规定其种类和用量，根据具体需培养细菌的种类确定抗生素的种类 和用量。
[0019] 上述定容为本领域技术人员常用技术手段。
[0020] 本发明通过对培养基溶液进行半风干处理，避免了出现冷凝水的问题，使得试验 操作更加方便，同时配合使用无菌封口膜，封闭培养皿，避免了细菌污染培养基的问题，增 加了培养基的有效使用率，减少浪费，并能延长培养基的存放时间，培养皿正放或反放均 可，方便培养基的转移运输和存放；同时半风干的培养基，可W增加培养基吸收菌液的能 力，促进菌液的充分吸收，缩短试验时间，提高试验效率。
【具体实施方式】
[0021] 下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0022] 实施例1
[0023] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0024] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用氨氧化钢水溶液调节pH =7.2，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A;
[0025] S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至50°C，加入抗生素，摇匀得到溶液B;
[00%] S3、将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为lOOOr/min，吹风70min，用无菌 封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。
[0027]实施例2
[00%] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0029] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用浓度为0.5mol/l氨氧化 钢水溶液调节pH=7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中膜化蛋白腺的浓度 为9g^，酵母提取物的浓度为6g^，氯化钢的浓度为9g^，琼脂粉的浓度为16g/l;
[0030] S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌20min，冷却至55°C，转移至超净工作台上，加入 抗生素，摇匀得到溶液B;
[0031] S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为8(K)r/min，吹 风80min，用无菌封口膜封闭培养皿，于2 °C保存得到LB固体培养基。
[0032] 实施例3
[0033] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0034] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用浓度为1.5mol/l氨氧化 钢水溶液调节pH=7.1，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中膜化蛋白腺的浓度 为llg/1，酵母提取物的浓度为4g^，氯化钢的浓度为llg/1，琼脂粉的浓度为14g/l;
[00巧]S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌30min，冷却至45°C，转移至超净工作台上，加入 抗生素，摇匀得到溶液B;
[0036] S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为1200r/min， 吹风60min，用无菌封口膜封闭培养皿，于4°C保存得到LB固体培养基。
[0037] 实施例4
[0038] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0039] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用浓度为0.8mol/l氨氧化 钢水溶液调节pH = 7.25，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中膜化蛋白腺的浓 度为9.5g^，酵母提取物的浓度为5.5g^，氯化钢的浓度为9.5g^，琼脂粉的浓度为15.5g/ 1;
[0040] S2、取SI中得到的溶液A,高压灭菌23min，冷却至52°C，转移至超净工作台上，加入 抗生素，摇匀得到溶液B;
[0041 ] S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为9(K)r/min，吹 风75min，用无菌封口膜封闭培养皿，于2 °C保存得到LB固体培养基。
[0042] 实施例5
[0043] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0044] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用浓度为1.2mol/l氨氧化 钢水溶液调节pH = 7.15,加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中膜化蛋白腺的浓 度为10.5g/l，酵母提取物的浓度为4.5g/l，氯化钢的浓度为10.5g/l，琼脂粉的浓度为 14.5g/l；
[0045] S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌27min，冷却至48°C，转移至超净工作台上，加入 抗生素，摇匀得到溶液B;
[0046] S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为llOOr/min， 吹风65min，用无菌封口膜封闭培养皿，于：3 °C保存得到LB固体培养基。
[0047] 实施例6
[0048] -种LB固体培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0049] S1、将膜化蛋白腺、酵母提取物、氯化钢加入水中溶解，用浓度为lmol/1氨氧化钢 水溶液调节pH = 7.2，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A，其中，溶液A中膜化蛋白腺的浓度为 lOg/1，酵母提取物的浓度为5g/l，氯化钢的浓度为lOg/1，琼脂粉的浓度为15g/l;
[0化0] S2、取S1中得到的溶液A，高压灭菌25min，冷却至50°C，转移至超净工作台上，加入 抗生素，摇匀得到溶液B;
[0化1] S3、在超净工作台上，将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为lOOOr/min， 吹风70min，用无菌封口膜封闭培养皿，于4°C保存得到LB固体培养基。
[0化2] 试验例1
[0053] W实施例6得到的LB固体培养基为实验组，W常规方法制备得到的LB固体培养基 为对照组，试验组和对照组添加的抗生素相同，分别用实验组和对照组吸收菌液，记录吸收 的菌液量和吸收菌液所需时间，结果如下表：
[0化4] __ 组别 I直径为90mm培养皿培养基吸收的菌液量(ml) I吸收1ml菌液所需时间 试验组~ 1 6s 对照组 I 0.1 20min
[0055] 备注:直径为90mm培养皿培养基中含有20mlLB固体培养基。
[0056] 由上表可W看出，本发明制备得到的LB固体培养基具有良好的吸收菌液的能力， 且吸收菌液所需时间短，均远高于对照组。
[0057] W上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明掲露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其 发明构思加 W等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种LB固体培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 51、 将胰化蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中溶解，用氢氧化钠水溶液调节pH = 7.1-7.3，加入琼脂粉混匀，定容得到溶液A; 52、 取S1中得到的溶液A，高压灭菌，冷却至45-55 °C，加入抗生素，摇匀得到溶液B; 53、 将S2中得到的溶液B加入培养皿中，调节风速为800-1200r/min，吹风60-80min，用 无菌封口膜封闭培养皿得到LB固体培养基。2. 根据权利要求1所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S1中，溶液A中胰化蛋白 胨的浓度为9-llg/l，酵母提取物的浓度为4-6g/l，氯化钠的浓度为9-llg/l，琼脂粉的浓度 为14-16g/l。3. 根据权利要求1或2所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S1中，氢氧化钠水溶 液的浓度为0.5-1.5mol/l。4. 根据权利要求1-3任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S2中，取S1中 得到的溶液A，高压灭菌20-30min。5. 根据权利要求1-4任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S2中，加入抗 生素，摇匀的操作需在超净工作台上完成。6. 根据权利要求1-5任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3的操作需在 超净工作台上完成。7. 根据权利要求1-6任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3中，直径为 90_的培养皿加入20ml溶液B。8. 根据权利要求1-7任一项所述LB固体培养基的制备方法，其特征在于，S3中，用无菌 封口膜封闭培养皿，于2-4 °C保存得到LB固体培养基。
【文档编号】C12N1/20GK106011015SQ201610483050
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】刘振云, 许国贞
【申请人】安徽未名细胞治疗有限公司