一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法
【专利摘要】本发明涉及一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法，微生物发酵领域。培养基以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重量占固体物料重量的30％，其中，固体物料组分以重量比计，包括：沙土10％～49.5％、玉米粉30％～60％、稻壳10％～20％、玉米秸秆粉10％～20％、碳酸钙0.5％～1％。利用该组分制备的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基进行液?固双相发酵，即得到玫瑰黄链霉菌菌剂。该方法简单易行，成本低，孢子粉有效活菌数达到78亿～99亿个/g，且能够有效缩短生产周期，使生产效率得到极大的提高。
【专利说明】
-种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法
技术领域
[0001] 本发明设及微生物发酵领域，具体设及一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的配 方、培养基的制备W及固体发酵方法。
【背景技术】
[0002] 植物病原线虫是植物病害的重要病原物之一，每年都会对农林业造成严重损失。 随着人们环保意识的加强，被允许使用的化学杀线剂逐渐退出市场，仅有少数低毒高效低 残留的化学杀线剂仍在使用。人们越来越多地关注微生物，从中寻求新的防治线虫的解决 办法。放线菌(Actinomycete)是一种重要的产生抗生素的微生物资源，许多农用抗生素成 功开发用于防治植物病原线虫，譬如灰色链霉菌(S化eptomyces avermitilis)产生的阿维 菌素就可W有效防治根结线虫。由于链霉菌(Streptomyce化ceae)是抗生素主要产生菌，因 此是放线菌中研究最多的菌属。
[0003] 其中，玫瑰黄链霉菌（S化eptomyces roseoflavus)广泛分布于自然界的±壤、空 气及水中，对多种植物病害病原菌具有强烈的抑制作用，可W防治包括棉花黄萎病 (Verticillium dahliae)、番茄灰霉病（Botrytis cinerea)、黄瓜枯萎病（Fusarium oxysporum)等在内的多种种传和±传真菌病害。此外，其代谢产物对蔬菜根结线虫具有抑 制作用，因此，玫瑰黄链霉菌在农业生物防治上具有广阔的应用前景。
[0004] 但是，±壤中自然生长的玫瑰黄链霉菌数量太少，无法发挥上述抑菌促生的作用， 需要通过微生物发酵技术对菌种进行扩繁。但是，目前的发酵技术中，玫瑰黄链霉菌固体发 酵存在工艺复杂，发酵周期长、产抱量少等缺点，使其难W实现工业化生产。
[0005] 中国专利CN 104041519A公开了 一种玫瑰黄链霉菌微生物杀菌剂的颗粒剂的制备 方法，该发明是将在PDA培养基上培养了 4-5天的玫瑰黄链霉菌接种到种子培养基上培养3 天，后又接种至液体培养基上连续发酵两次进行扩繁，每次培养时间为3天，所制得的发酵 液与粉碎好的玉米忍进行固体发酵，培养5-7天，最后再干燥5-7天，制得玫瑰黄链霉菌的杀 菌剂颗粒剂。即使不把抱子粉有效活菌数检测的时间计算在内，杀菌剂颗粒的整个制备过 程也需要耗时26-31天，周期长，过程繁琐复杂，在生产上应用潜力较小。
[0006] 中国专利CN 103125527A公开了一种玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂的可湿性粉剂的制 备方法。该生物杀菌剂是先将玫瑰黄链霉菌菌种进行液体发酵，然后W娃藻±为基质进行 固体发酵，干燥后，添加木质素横酸钢制成玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂可湿性粉剂。该生物杀 菌剂对黄瓜白粉病有较好的防治效果，且玫瑰黄链霉菌的整个发酵周期有所减少，为10-11 天(不计抱子粉有效活菌数检测过程）。但是在其固体发酵过程中W娃藻上为基质，缺少微 生物生长、产抱所需要的有机物质，因而微生物的发酵产物不够理想，每克颗粒剂中含有链 霉菌活体抱子和菌丝体的总数仅为10~20亿个或W上。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，针对现有技术的不足，本发明目的在于提供一种玫瑰黄链霉菌固体发 酵培养基配方、培养基制备方法w及固体发酵方法，w解决现有技术中发酵工艺复杂、发酵 周期长、产抱量少等技术问题。
[0008] 本发明设及的玫瑰黄链霉菌，保存于中国普通微生物菌种保藏管理中屯、，菌种保 藏编号为CGMCC No.11963。
[0009] 本发明的技术方案如下：
[0010] -种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物料和水，水的重 量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分W重量比计，包括:沙±10%~49.5%、玉米 粉30 %~60 %、稻壳10 %~20 %、玉米賴杆粉10 %~20 %、碳酸巧0.5 %~1 %。
[0011] 本发明优选的，所述沙±包括重量比为4:1的细±和沙子;其中，所述的细±粉碎 后粒径为-60目；所述沙子为河沙，粒径为-40目；所述玉米賴杆粉为-5目。
[0012] 本发明优选的，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物 料和水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分W重量比计，包括:沙±30% ~45 %、玉米粉30 %~39 %、稻壳10 %~20 %、玉米賴杆粉10 %~16 %、碳酸巧0.5 %~1 %。
[0013] 进一步优选的，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物 料和水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分包括：沙±45%、玉米粉 30.2 %、稻壳12 %、玉米賴杆粉12 %，碳酸巧0.8 %。
[0014] 进一步优选的，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物 料和水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分包括:沙±31.5%、玉米粉 40 %、稻壳12 %、玉米賴杆粉16 %，碳酸巧0.5 %。
[0015] 进一步优选的，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物 料和水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分包括：沙±30%、玉米粉 39 %、稻壳14 %、玉米賴杆粉16 %，碳酸巧1 %。
[0016] 进一步优选的，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，W重量百分比计，包括固体物 料和水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分包括:沙±34.5%、玉米粉 35%、稻壳20%、玉米賴杆粉10%，碳酸巧0.5%。
[0017] 本发明的还提供了一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法，包括W下步 骤：
[0018] A按照上述质量比称取玉米粉、稻壳、玉米賴杆粉、沙±^及碳酸巧，将各原料均匀 混合。
[0019] B在所述混合物中加入水，自然抑，揽拌均匀后经高压蒸汽灭菌处理，得到玫瑰黄 链霉菌固体发酵培养基。
[0020] 本发明优选的，高压蒸汽灭菌的处理条件为：在12rc、1.0~1.化g/cm3压力条件 下，灭菌30~60min。
[0021] 本发明还提供了一种玫瑰黄链霉菌的固体发酵方法，主要包括W下步骤：
[0022] (1)摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上培养3-5天的玫瑰黄链霉菌转接到 液体高氏一号培养基上，进行种子初步扩繁，制备摇瓶种子液；
[0023] (2)液体发酵:将步骤(1)制得的摇瓶种子液转接于液体发酵培养基上进行液体发 酵，振荡培养至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期，得 到液体发酵种子液；
[0024] (3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至W上述方法制备的玫瑰黄链霉菌固 体发酵培养基中，进行固体发酵；
[0025] (4)干燥:将上述固体发酵物干燥得到玫瑰黄链霉菌菌粉。
[0026] 根据本发明优选的，步骤(1)摇瓶种子液制备过程中，转接到液体高氏一号培养基 后，在25~28°C，恒溫培养箱振荡频率150~17化/min的条件下，恒溫振荡培养3~5天，进行 种子初步扩繁。
[0027] 根据本发明优选的，步骤(2)液体发酵步骤中，摇瓶种子液接种量为所述液体发酵 培养基体积的8~15% ;其中，所述液体发酵的条件为:溫度28~30°C，恒溫培养箱振荡频率 150~18化/min，恒溫振荡培养48~72h;所述液体发酵培养基为花生饼35g，淀粉20g，葡萄 糖20g，酵母膏2g，碳酸巧8.5g，硫酸亚铁0.7g，硫酸锋0.7g，氯化钢0.7g，硫酸二氨钟0.5g， 硫酸锭7g，定容至1升。
[0028] 根据本发明优选的，步骤(3)固体发酵步骤中，所述液体发酵种子液的接种量为所 述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基质量的10~20%;所述固体发酵条件为在28~3(TC下静置 培养4~6天。
[0029] 本发明优选的，所述步骤(3)固体发酵包括发酵初期和发酵后期，发酵后期即产抱 期;其中，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基在发酵初期水分含量为35~45%，在发酵后期 水分含量为28%~32%。发酵初期水分含量W固体发酵培养基所含水分为基础，液体发酵 种子液W100 %含水量计，补充液体发酵种子液至所需水分含量;发酵后期水分含量为将所 得固体发酵培养基称重(Wo)，彻底烘干后再次称重(Wt)，根据W下公式计算发酵后期水分 含量:发酵后期水分含量=(Wo-Wt) /Wg，环境湿度40-60 %。
[0030] 本发明优选的，所述干燥条件为自然惊干或40~60°C下W空气为干燥介质干燥。
[0031] 现有技术中，微生物固体培养基常用的教皮和黄豆粉存在W下问题:教皮营养成 分含量高，但其价格贵，且杂菌含量较高，在生产发酵过程中易感染杂菌，从而提高所得菌 剂中的杂菌含量；而W黄豆粉为菌体的唯一氮源时，菌体生长速度缓慢，不利于抱子的产 生，菌剂抱子产生的数量较少。
[0032] 本发明提供的固体发酵培养基W玉米粉、玉米賴杆粉及稻壳取代常规固体发酵培 养基中的教皮和黄豆粉。其中W玉米粉为氮源，有利于玫瑰黄链霉菌的生长，缩短发酵周 期，避免发酵周期过长导致感染杂菌。花生饼粉、豆巧粉等常用物料也可W作为固体发酵培 养基的氮源。
[0033] 稻壳和玉米賴杆粉分别是是大米收获后的外壳W及玉米賴杆磨成的粉。利用稻壳 及玉米賴杆粉代替教皮，一方面能够起到提高固体发酵培养基透气性的作用，另一方面，玉 米賴杆粉中含有大量的碳水化合物及蛋白质和脂肪，能够促进菌体生长及抱子的产生。
[0034] 本发明的沙±是指包括重量比4:1的±壤和沙子的混合物。按此比例混合的±壤 及沙子能够作为固体培养所需的支持体。
[0035] 本发明优选的固体发酵培养基的灭菌处理条件为：在12rC下施加1.0~1.化g/ cm3压力条件下，灭菌30~60min。按此条件进行灭菌，能充分消灭固体发酵培养基中的杂 菌，尤其是±壤中的杂菌，能够降低发酵过程中染菌的几率。
[0036] 本发明提供的固体发酵培养基发酵采用液-固双相发酵方法，该液体发酵是在固 体发酵前用于种子液的发酵，目的是为菌株提供氮源、碳源和无机盐养分，通过液体发酵过 程，使玫瑰黄链霉菌得到充分萌发及扩繁。而液体发酵可w选择对玫瑰黄链霉菌生长有利 的液体发酵培养基及条件，避免其他杂菌生长。
[0037] 所述液体发酵过程中，采用溫度为28~30°C，震荡频率为150~18化/min的发酵条 件，恒溫振荡培养48~72h，有利于玫瑰黄链霉菌菌体生长，不易染杂菌。
[0038] 本发明所述的固体发酵过程中，液体发酵液接种量为固体发酵培养基质量的10% ~20%。采用该接种量接种，能够保证接入固体发酵培养基中的菌体数量适宜，避免水分过 大，导致菌体增殖缓慢。
[0039] 所述的固体发酵阶段分为发酵初期和发酵后期即产抱期。固体发酵培养基水分含 量在发酵初期控制在35~45%，发酵后期水分含量控制在28%~32%。采用此条件发酵，能 够避免过度培养，导致后期染菌，并降低成本。
[0040] 本发明所述的干燥过程中，干燥条件为自然惊干或40~60°C下W空气为干燥介 质。采用该方法能够避免玫瑰黄链霉菌抱子受热不均匀，降低活性。另外，该固体发酵培养 基具有良好的透气性，能够加快干燥速度。
[0041] 按照发明所述的方法制备的玫瑰黄链霉菌发酵培养基具有多种用途，可用于生产 微生物肥料、微生物杀菌剂颗粒、微生物杀菌剂可湿性粉剂、种子处理剂、肥料增效剂等。
[0042] 本发明的有益效果在于：
[0043] 1、本发明提供的固体发酵培养基通过加入稻壳、玉米賴杆粉，并优化玉米粉和沙 ±，使其保证足够有机质的同时，也能增加固体发酵培养基质内的通气量，使玫瑰黄链霉菌 的生长量和产抱量得到提高，抱子粉有效活菌数达到78亿~99亿个/g。
[0044] 2、本发明采用液体-固体联合发酵培养工艺进行玫瑰黄链霉菌菌剂的培养，发酵 条件适宜，生产一批次玫瑰黄链霉菌菌粉周期约12~14天，其中包括:液体发酵约3天，固体 发酵约5天，干燥约2~4天，抱子粉有效活菌数检测约2天。采用本发明提供的生产方法，能 够有效缩短生产周期，使生产效率得到极大的提高。
【具体实施方式】
[0045] 下面通过实施例对本发明做进一步说明，但不限于此。
[0046] W下结合实施案例对本发明进行详细说明，但本发明可W有权利要求限定和覆盖 的多种不同方式实施。
[0047] W下实施例中所采用原料和设备均为市售商品，其中各种培养基按常规方法配 审IJ。液体发酵在恒溫振荡器上完成，高压灭菌处理在立式高压灭菌锅内完成，固体发酵在 30cm X 20cm X 4cm托盘内完成，干燥室内自然风干。实施例所述玫瑰黄链霉菌，保存于中国 普通微生物菌种保藏管理中屯、，菌种保藏编号为CGMCC No. 11963。
[004引实施例1:
[0049] 1、制备玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基：
[(K)加]A按质量百分比计，称取W下物料:沙±45%、玉米粉30.2%、稻壳12%、玉米賴杆 粉12%、碳酸巧0.8%，在金属托盘中混合均匀。
[0051] B加入占固体物料重量30%的水，用牛皮纸将托盘与物料包起来，在12TC施加 l.OKg/cm3压力条件下灭菌40min，即得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
[0052] 2、玫瑰黄链霉菌的发酵方法：
[0053] (1)摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上已经培养3天的玫瑰黄链霉菌转接 到液体高氏一号培养基;在25°C，恒溫培养箱振荡频率15化/min的条件下，恒溫振荡培养5 天，进行种子初步扩繁，制备摇瓶种子液；
[0054] (2)液体发酵:将上述步骤制备的摇瓶种子液按8 %的接种量，转接于液体发酵培 养基，在28 °C下15化/min振荡培养72h，至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄 链霉菌的对数生长期，得到液体发酵种子液；
[0055] (3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中，接 种量为玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基物料重量的10%，揽拌均匀，在28Γ下培养4天。在此 期间定期取样并用显微镜观察是否产抱。发酵初期控制玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分 为40%，后期控制玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分为30%。
[0056] (4)风干：固体发酵结束后，置于室外阴凉处风干3天，即可得到玫瑰黄链霉菌菌 粉。
[0化7]实施例2:
[005引所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0059] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的固体原料配比不同，为沙±31.5%、玉米粉 40 %、稻壳12 %、玉米賴杆粉16 %、碳酸巧0.5 %。
[0060] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，步骤(1)摇瓶种子液制备步骤中，所选取的玫瑰黄链 霉菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同，为5天;转接到液体高氏一号培养基上，在28 °C，恒溫培养箱振荡频率17化/min的条件下，恒溫振荡培养3天，进行种子初步扩繁。
[0061] 步骤(3)所述固体发酵过程中，固体发酵培养基的水分状况不同，发酵初期玫瑰黄 链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在45%，发酵后期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分 含量控制在32% ;所述干燥过程中，固体发酵物的风干时间不同，为2天。
[0062] 实施例3:
[0063] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0064] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同，为沙±30%、玉米粉39%、稻 壳14 %、玉米賴杆粉16 %、碳酸巧1 %。
[0065] 玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备过程中，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基 的高溫高压灭菌时间为30min。
[0066] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，步骤(1)摇瓶种子液制备步骤中，将玫瑰黄链霉菌转 接到液体高氏一号培养基上，在26°C，恒溫培养箱振荡频率16化/min的条件下，恒溫振荡培 养4天，进行种子初步扩繁。
[0067] 步骤(2)液体发酵过程中，所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种子液的接种量 为 10%;
[0068] 步骤(3)固体发酵过程中，培养时间不同，为5天，固体发酵培养基的水分状况也不 同，发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在40%，发酵后期玫瑰黄链霉菌 固体发酵培养基水分含量控制在28 %。
[0069] 实施例4:
[0070] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0071] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同，为沙±34.5%、玉米粉35%、 稻壳20%、玉米賴杆粉10%、碳酸巧0.5%。
[0072] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，所述摇瓶种子液制备步骤中，所选取的玫瑰黄链霉 菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同，为4天;所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种 子液的接种量为10% ;所述固体发酵过程中，培养时间不同，为5天，固体发酵培养基的水分 状况也不同，发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在35%，发酵后期玫瑰 黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在30%;所述干燥过程中，固体发酵物的风干时间 不同，为2天。
[0073] 实施例5
[0074] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0075] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同，为沙±20%、玉米粉50%、稻 壳10 %、玉米賴杆粉19 %、碳酸巧1 %。
[0076] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，所述摇瓶种子液制备步骤中，所选取的玫瑰黄链霉 菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同，为4天;所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种 子液的接种量为10% ;所述固体发酵过程中，培养时间不同，为6天，固体发酵培养基的水分 状况也不同，发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在35%，发酵后期玫瑰 黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在30%;所述干燥过程中，固体发酵物的风干时间 不同，为2天。
[0077] 实施例6
[0078] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0079] 玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备过程中，在12rc下施加1.5Kg/cm3压力条件 下灭菌60min，即得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
[0080] 实施例7
[0081] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0082] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，步骤(2)液体发酵:摇瓶种子液接种量为所述液体发 酵培养基体积的15%，转接于液体发酵培养基，在30°C下18化/min振荡培养4她，至所述液 体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期，得到液体发酵种子液。
[0083] 实施例8
[0084] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于：
[0085] 玫瑰黄链霉菌的发酵过程中，步骤(3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫 瑰黄链霉菌固体发酵培养基中，接种量为玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基物料重量的20%， 揽拌均匀，在30°C下培养4天。
[00化]对比例1
[0087] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于固体发酵培养基组份W重量百分比计，包括娃藻±60%，教皮20%，黄豆 粉15%，其余为水。
[0088] 对比例2
[0089] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基组份W重量百分比计，包括固体物料和 水，水的重量占固体物料重量的30 %，其中，固体物料组分包括:沙± 10 %、玉米粉70 %、稻 壳5%、玉米賴杆粉10%、碳酸巧5%。
[0090] 对比例3
[0091] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于，摇瓶种子液接种到液体发酵培养基后，在溫度35°C，振荡频率15化/分 钟条件下，装恒溫振荡摇床培养72小时。
[0092] 对比例4
[0093] 所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施 例1，不同之处在于，固体发酵时，将液体发酵种子液接种到所得固体发酵培养基后，固体发 酵培养条件为在35 Γ下静置培养6天。
[0094] 实验例
[00M]所制备菌粉中有效活菌数的测定方法:培养基为高氏一号培养基，硝酸钟l.Og/L、 憐酸二氨钟0.5g/L、硫酸儀0.5g/L、硫酸亚铁0.0 lg/L、氯化钢0.5g/L、可溶性淀粉20g/L、琼 月旨20g/L、pH7.2-7.4，121°C高压蒸汽灭菌20min，冷却至50~55°C，制备成无菌平皿，备用。
[0096] 表1实施例1~8、对比例1~4的有效活菌数、杂菌含量、固体发酵时间表
[0097]
[0098] 根据表1可W看出，采用本发明提供的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及发酵方法， 能够提高有效活菌数即抱子数，另一方面能够减少发酵过程中杂菌的污染，降低杂菌含量， 提高生产效率。
【主权项】
1. 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，以重量百分比计，包括固体物料和 水，水的重量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分以重量比计，包括:沙土 10%~ 49 · 5 %、玉米粉30 %~60 %、稻壳10 %~20 %、玉米秸杆粉10 %~20 %、碳酸钙0 · 5 %~1 %。2. 根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，所述沙土包括重 量比为4:1的细土和沙子;其中，所述的细土粉碎后粒径为-60目；所述沙子为河沙，粒径为-40目；所述玉米秸杆粉为_5目。3. 根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，所述玫瑰黄链霉 菌固体发酵培养基，以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重量占固体物料重量的 30 %，其中，固体物料组分以重量比计，包括：沙土30 %~45 %、玉米粉30 %~39 %、稻壳 10%~20%、玉米秸杆粉10%~16%、碳酸钙0·5%~1 %。4. 根据权利要求3所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，所述玫瑰黄链霉 菌固体发酵培养基，以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重量占固体物料重量的 30 %，其中，固体物料组分包括:沙土45 %、玉米粉30.2 %、稻壳12 %、玉米秸杆粉12 %，碳酸 钙0.8%; 或，所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重 量占固体物料重量的30%，其中，固体物料组分包括:沙土30%、玉米粉39%、稻壳14%、玉 米秸杆粉16%，碳酸钙1 %。5. 根据权利要求3所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，所述玫瑰黄链霉 菌固体发酵培养基，以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重量占固体物料重量的 30 %，其中，固体物料组分包括:沙土31.5 %、玉米粉40 %、稻壳12 %、玉米秸杆粉16 %，碳酸 钙0.5%〇6. 根据权利要求3所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基，其特征在于，所述玫瑰黄链霉 菌固体发酵培养基，以重量百分比计，包括固体物料和水，水的重量占固体物料重量的 30 %，其中，固体物料组分包括:沙土34.5 %、玉米粉35 %、稻壳20 %、玉米秸杆粉10 %，碳酸 钙0.5%〇7. -种如权利要求1-6任意一项权利要求所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方 法，包括以下步骤： (A) 称取玉米粉、稻壳、玉米秸杆粉、沙土以及碳酸钙，将各原料均匀混合； (B) 在所述混合物中加入水，自然pH，搅拌均匀后经高压蒸汽灭菌处理，得到玫瑰黄链 霉菌固体发酵培养基;优选的，高压蒸汽灭菌的处理条件为:在121°C、1.0~1.5kg/cm 3压力 条件下，灭菌30~60min。8. -种利用如权利要求1-6任意一项权利要求所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基进行 玫瑰黄链霉菌的固体发酵方法，包括以下步骤： (1) 摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上培养3-5天的玫瑰黄链霉菌转接到液体 高氏一号培养基上，进行种子初步扩繁，制备摇瓶种子液;优选的，步骤(1)摇瓶种子液制备 过程中，转接到液体高氏一号培养基后，在25~28°C，恒温培养箱振荡频率150~170r/min 的条件下，恒温振荡培养3~5天，进行种子初步扩繁； (2) 液体发酵:将步骤（1)制得的摇瓶种子液转接于液体发酵培养基上进行液体发酵， 振荡培养至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期，得到液 体发酵种子液； (3) 固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中，进行固 体发酵； (4) 干燥:将上述固体发酵物干燥得到玫瑰黄链霉菌菌粉;优选的，干燥条件为自然晾 干或40~60 °C下以空气为干燥介质干燥。9. 根据权利要求8所述的固体发酵方法，其特征在于，步骤(2)液体发酵步骤中，摇瓶种 子液接种量为所述液体发酵培养基体积的8~15% ;其中，所述液体发酵的条件为:温度28 ~30°C，恒温培养箱振荡频率150~180r/min，恒温振荡培养48~72h;所述液体发酵培养基 为花生饼35g，淀粉20g，葡萄糖20g，酵母膏2g，碳酸|丐8.5g，硫酸亚铁0.7g，硫酸锌0.7g，氯 化钠〇.7g，硫酸二氢钾0.5g，硫酸铵7g，定容至1升。10. 根据权利要求8所述的固体发酵方法，其特征在于，步骤(3)固体发酵步骤中，所述 液体发酵种子液的接种量为所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基质量的10~20%;所述固体 发酵条件为在28~30°C下静置培养4~6天； 优选的，所述步骤(3)固体发酵包括发酵初期和发酵后期；其中，所述玫瑰黄链霉菌固 体发酵培养基在发酵初期水分含量为35~45%，玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基在发酵后期 水分含量为28 %~32 %。
【文档编号】C12R1/465GK106011022SQ201610538584
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月8日
【发明人】李新柱, 胡兆平, 徐文凤, 顾志光, 徐春英
【申请人】菏泽金正大生态工程有限公司, 金正大生态工程集团股份有限公司