一种新型牙髓干细胞培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种新型牙髓干细胞培养基，每1L牙髓干细胞培养基中由以下成分组成：100?150ml的胎牛血清、10?15ml的青链霉素双抗、1?5ng TGF?β、1?5mM L?谷氨酰胺、1640培养基余量；制备方法：取总量1/3的1640培养基，加入TGF?β、L?谷氨酰胺、青链霉素双抗，搅拌溶解，补加余下1640培养基定容至1L，搅拌均匀；配制的溶液用0.22um滤膜过滤，无菌条件下加入胎牛血清，即得；本发明的培养基中，基础培养基为1640，其含有乳牙牙髓基质细胞向成牙本质细胞方向分化所需要的无机成分；培养基中含有胎牛血清，提供细胞生长所需营养物质并可以促进细胞贴壁生长；谷氨酰胺和TGF?β可以增强细胞的增殖；青链霉素双抗起到抗菌作用。
【专利说明】
一种新型牙髓干细胞培养基
技术领域
[0001 ]本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及新型牙髓干细胞培养基。
【背景技术】
[0002]干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，是原始且未特化的细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能。干细胞存在所有多细胞组织里，能经由有丝分裂与分化来分裂成多种的特化细胞，而且可以利用自我更新来提供更多干细胞。干细胞的来源有很多，包括骨髓、脐带、脐带血、牙齿与脂肪。
[0003]2000年首次发现了牙髓干细胞，Gronthos等发现在离体的乳牙和智齿中都存在牙髓干细胞。这是一类具有高增殖能力、高度自我更新能力、多项分化能力的细胞。已有研究利用该细胞成功地构建牙髓、牙本质以及牙齿组织。牙髓干细胞与其他组织来源的干细胞在生物学特性上有很多相似之处。而乳牙的获取则容易无痛，且每个人一生中首先长出来的是20颗乳牙，乳牙在半岁左右即开始萌出，约2岁半出齐，6-12岁之间乳牙陆续脱落，因此从乳牙牙髓获取间充质干细胞将越来越普遍。
[0004]2003年，Miura等从脱落乳牙的牙髓中分离出具有高度增殖能力和多向分化能力的干细胞-SHED。由于其具有良好的间充质干细胞的生物学特性，组织来源易得且无创伤，被认为是干细胞组织工程技术中进行组织再生修复比较理想的种子细胞。
[0005]现代研究发现乳牙间充质干细胞在治疗骨和牙组织再生修复、神经系统疾病及肌肉萎缩、免疫系统疾病、皮肤外伤、肝脏疾病等方面有广阔的应用前景。因此，开发简单、快速、安全获得大量乳牙间充质干细胞方法成为当务之急，在干细胞的培养中，培养基的选择是基础的研究，合适的培养基选择是做干细胞培养成功的保证。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种新型牙髓干细胞培养基。
[0007]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:一种新型牙髓干细胞培养基，每IL牙髓干细胞培养基中由以下成分组成:
胎牛血清100-150ml
青链霉素双抗 10_15ml TGF-βl-5ng
L-谷氨酰胺l_5mM
1640培养基余量。
[0008]在上述方案基础上优选的，每IL牙髓干细胞培养基中由以下成分组成:
胎牛血清120ml
青链霉素双抗12ml
TGF-β3ng
L-谷氨酰胺3mM 1640培养基余量。
[0009]—种制备牙髓干细胞培养基的方法，包括以下步骤:
步骤一，取总量I/3的1640培养基，加入TGFH-谷氨酰胺、青链霉素双抗，搅拌溶解，补加余下1640培养基定容至1L，搅拌均匀；
步骤二，将步骤一配制的溶液用0.22um滤膜过滤，无菌条件下加入胎牛血清，即得；用
0.22um滤膜过滤，可以达到很好的除菌目的。
[0010]本发明的有益效果:本发明中的培养基，基础培养基为1640，其含有乳牙牙髓基质细胞向成牙本质细胞方向分化所需要的无机成分;培养基中含有胎牛血清，提供细胞生长所需营养物质并可以促进细胞贴壁生长;谷氨酰胺和TGF-β可以增强细胞的增殖;青链霉素双抗起到抗菌作用。
【具体实施方式】
[0011 ]以下结合具体实施例对本发明作进一步说明:
实施例1
制备IL新型牙髓干细胞培养基:
取胎牛血清10ml、青链霉素双抗1ml、TGFKsigma) 5叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)511^[、1640培养基IL;
取0.3L的1640培养基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青链霉素双抗(sigma)，搅拌溶解，补加1640培养基至IL定容，搅拌均勾，用0.22um滤膜过滤除菌，无菌条件下加入胎牛血清(gibco)，将制得的溶液无菌分装至已灭菌的收集瓶内保存。
[0012]实施例2
制备IL新型牙髓干细胞培养基:
取胎牛血清120ml、青链霉素双抗12ml、TGFKsigma) 3叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)311^[、1640培养基IL;
取0.3L的1640培养基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青链霉素双抗(sigma)，搅拌溶解，补加1640培养基至IL定容，搅拌均勾，用0.22um滤膜过滤除菌，无菌条件下加入胎牛血清(gibco)，将制得的溶液无菌分装至已灭菌的收集瓶内保存。
[0013]实施例3
制备IL新型牙髓干细胞培养基:
取胎牛血清150ml、青链霉素双抗15ml、TGFKsigma) Ing、L-谷氨酰胺(sigma)ImM、1640培养基IL;
取0.3L的1640培养基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青链霉素双抗(sigma)，搅拌溶解，补加1640培养基至IL定容，搅拌均勾，用0.22um滤膜过滤除菌，无菌条件下加入胎牛血清(gibco)，将制得的溶液无菌分装至已灭菌的收集瓶内保存。
【主权项】
1.一种新型牙髓干细胞培养基，其特征在于，每IL牙髓干细胞培养基中由以下成分组成: 胎牛血清100-150ml 青链霉素双抗 10_15ml TGF-βl-5ng L-谷氨酰胺l_5mM 1640培养基余量。2.根据权利要求1所述的新型牙髓干细胞培养基，其特征在于，每IL牙髓干细胞培养基中由以下成分组成: 胎牛血清120ml 青链霉素双抗12ml TGF-β3ng L-谷氨酰胺3mM 1640培养基余量。3.—种制备牙髓干细胞培养基的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤一，取总量I/3的1640培养基，加入TGF-13、L-谷氨酰胺、青链霉素双抗，搅拌溶解，补加余下1640培养基定容至1L，搅拌均匀； 步骤二，将步骤一配制的溶液用0.22um滤膜过滤，无菌条件下加入胎牛血清，即得。
【文档编号】C12N5/074GK106011053SQ201610475763
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月27日
【发明人】晁若瑜, 王丽丽
【申请人】安徽新生命干细胞科技有限公司