基于基本原理的癌症靶向疗法的设计的制作方法

基于基本原理的癌症靶向疗法的设计的制作方法
【专利摘要】本发明的方法、组合物和药剂盒与来他替尼降低SPOP底物的水平和途径活性的发现有关。因此，本文描述了使用来他替尼下调有需要的受试者中的一种或多种SPOP底物或其信号传导途径活性的方法和组合物。
【专利说明】基于基本原理的癌症靶向疗法的设计 交叉引用
[0001 ]本申请要求于2013年12月3日提交的美国临时申请号61 /911，423的权益，该临时 申请在此通过引用以其全文并入本文。
【背景技术】
[0002] 遍在蛋白（ubiquitin)介导的蛋白质降解通常通过遍在蛋白蛋白酶体途径发生。 在该途径中，遍在蛋白-蛋白质连接酶(例如，E3连接酶)通过将遍在蛋白链连接至待降解的 蛋白质而靶向选定的供降解的蛋白质。遍在蛋白化使得该蛋白质能够随后被蛋白酶体复合 物识别，然后该复合物降解该蛋白质。斑点（speckle)型P0Z蛋白（SP0P)通过起到底物识别 的作用而与遍在蛋白介导的靶蛋白降解有关。
[0003] SP0P通常包含两个结构域:MATH域以及痘病毒和锌指（P0Z)域（或者被称为BTB 域）。SP0P的一般结构在图1中示出。SP0P蛋白通常通过其MATH和P0Z域将蛋白质底物(例如， SP0P底物)募集至E3遍在蛋白连接酶。SP0P底物通常与SP0P蛋白的MATH域复合，而滞蛋白-3E3遍在蛋白连接酶与P0Z域相互作用。SP0P介导的SP0P底物向滞蛋白-3型E3遍在蛋白连接 酶的募集有利于SP0P底物的E3介导的遍在蛋白化，由此靶向供蛋白酶体降解的底物。
[0004] 人前列腺肿瘤的外显子组测序揭示，前列腺肿瘤的子集包含SP0P突变（Nature Genetics 2012;44:685-689,在此通过引用并入本文）。总而言之，发现SP0P突变存在于6-15%的研究中的前列腺肿瘤中（Nature Genetics 2012;44:685-689)。有趣的是，与前列腺 肿瘤相关的所有鉴别的SP0P突变都在SP0P的底物结合袋内（Nature Genetics 2012;44: 685-689)，表明这样的突变可能损害SP0P底物结合以及随后的遍在蛋白化（Proc Natl Acad Sci USA.2013 110:6997-7002,在此通过引用并入本文）。据报道，SRC-3蛋白在38% 的前列腺癌肿瘤样品中过表达(Br J Cancer.2001;85:1928-36,在此通过引用并入本文）。 另一项研究显示，SCR-3表达是前列腺癌细胞增殖和存活所需的，并且其水平与前列腺特异 性抗原(PSA)相关。在来自接受前列腺切除术的患者的一批前列腺癌样品中，证明了具有 SRC3高表达的肿瘤与较低的无复发生存率有关(Cancer Res ? 2005S印1;65( 17): 7976-83， 在此通过引用并入本文）。这些研究提示了 SCR-3在前列腺癌形成中以及作为不良预后因素 的重要作用。此外，与前列腺癌相关的SP0P突变阻碍了 SP0P诱导SRC-3的遍在蛋白依赖性降 解的能力（Proc Natl Acad Sci USA.2013 110:6997-7002)。也已经证明，SRC3在乳腺癌中 在基因水平和转录水平上均增加(Nature Reviews Clinical Oncology 2010;7:83-89,在 此通过引用并入本文）。例如，在一项研究中，58%的乳房肿瘤活检物展示了升高的SRC3基 因表达水平。升高的SRC3水平还与许多其他癌症有关。除了乳腺癌和前列腺癌之外，在胰腺 癌和胃癌中也显不了升尚的SRC3水平。
[0005] Kim等人(APMIS.2013; 121:626-33)通过单链构象多态性(SSCP)在45个胃癌样品、 45个结直肠癌样品和45个前列腺癌样品中完成了SP0P的突变和表达分析。此外，他们还通 过免疫组织化学分析了60个胃癌、60个结直肠癌和60个前列腺癌肿瘤标本中的SP0P蛋白表 达。SP0P基因在编码序列中的三个体细胞错义突变(2个在前列腺癌中，1个在结直肠癌中） (Serl4Leu、Tyr87Cys和Phel33Leu)全部位于N-末端底物结合域中。在免疫组织化学中， SPOP蛋白在正常的胃、结肠和前列腺上皮细胞中表达，而在30 %的胃癌、20%的结直肠癌和 37%的前列腺癌中发现了SPOP的丧失。
[0006] SRC3还在乳腺癌和其他恶性肿瘤中起关键作用（Science 1997; 277 :965-8，Ann 0ncol.2013;24:1414)。在Burandt(Breast Cancer Res Treat.2013 137:745-53)报道的 研究中，分析了2,197个乳腺癌样品，并且通过基因谱分析和免疫组织化学（IHC)发现SRC3 过表达与肿瘤大小、高组织学分级、低疾病特异性和总生存率有关。在11 %的癌中通过荧光 原位杂交(FISH)发现了 AIB1增加。它与高组织学分级、淋巴结累及以及疾病特异性存活差 有关（Breast Cancer Res Treat.2013137:745-53)。
[0007]在7%的胃癌标本中观察到SRC3增加，而在40%的胃癌标本中观察到SRC3过表达 (Int J Cancer.2000;89:217-23) JRC3增加通常与其过表达一致，并与预后不良有关。有 趣的是，8 6个胃腺癌病例中有1 5个（1 7 . 4 % )对雄激素受体是阳性的 (了.〇311.1^8.(：1111.〇11(3.2〇04;1 3〇:253-258)。与（41?-)患者相比，具有4即日性肿瘤(41?+)的患 者具有显著更差的预后（中值存活期9个月对24个月，P = 0.03)。
[0008] 鉴别出一种新的雌激素受体(ER)靶标一 DEK，其表达也促进乳腺癌细胞中雌激素 诱导的增殖。D E K消耗增加了 E R+乳腺癌细胞系中他莫昔芬诱导的细胞死亡（P L 〇 S 0 N E 2012; 7: e46985) AEK之前被鉴别为DNA重塑蛋白。DEK调控DNA损伤应答和信号传导修复。 DEK起到转录因子的作用，并且据报道还是一种癌基因并且在几乎所有器官和肿瘤中广泛 表达(Nucleic Acids Res. 2011;39:7465-76) AEK通过促进DNA双链断裂修复，经由p53依 赖性和非依赖性机制，保护肿瘤细胞免受DNA损伤剂的影响和免遭细胞死亡。DEK的高表达 与胃癌的预后不良有关(Diagn.Pathol.2014;9:67)。
[0009] 来他替尼(Lestaurtinib)是一种吲噪并味唑衍生物，其最初作为多种受体激酶的 抑制剂被发现，该受体激酶包括从1(2(1(： 50 = 0.911]\〇、？06邱（1(：50 = 21611]\〇、3丁八丁3(1(：50=1〇-30nM)、TRKB(IC5Q =〈25nM)、PRKl(IC5Q = 8.6nM)和PKC(IC5〇 = 226nM)以及FLT3(Cancer Res. 1999; 59:2395-401，Blood. 2002; 99:3885-91，其在此通过引用并入本文）。由于其受体 激酶抑制活性，提出来他替尼作为前列腺癌的潜在治疗剂。然而，2期人类临床试验证明，用 来他替尼治疗前列腺癌患者未能实现降低PSA水平的主要临床终点（Cancer Biol Ther. 2007;6:1360-7,在此通过引用并入本文）。此后，进行了非常有限的来他替尼临床开 发。

【发明内容】

[0010] 本发明的方法、组合物和药剂盒与来他替尼可以降低SP0P底物或其下游靶标的表 达水平和/或途径活性的发现有关。
[0011] 因此，本发明提供了一种下调有需要的受试者中的斑点型P0Z蛋白（SP0P)底物信 号传导的方法，其包括向该受试者施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐 的药物组合物，由此下调该受试者中的SP0P底物信号传导。
[0012] 在一些实施方案中，该底物选自SRC1、SRC2、SRC3、Daxx、G1 i、AWP-1、滞蛋白-4B、滞 蛋白-7和DEK。在一些实施方案中，该底物是SRC1、SRC2或SRC3。在一些实施方案中，该底物 是SRC3。在一些实施方案中，该底物是DEK。
[0013] 在一些实施方案中，该下调包括降低该SP0P底物或该底物的下游靶标的水平和/ 或活性。在一些实施方案中，该下调通过来源于该受试者的细胞中的下游靶标的活性降低 来呈现。在一些实施方案中，该下游靶标是PRK-1。在一些实施方案中，该下调包括降低该 SP0P底物的水平和/或活性。在一些实施方案中，该下调通过来源于该受试者的细胞中的底 物的水平降低来呈现。在一些实施方案中，该水平包括表达水平。在一些实施方案中，该表 达水平是蛋白质表达水平。在一些实施方案中，该表达水平通过该SP0P底物的转录物的水 平来呈现。在一些实施方案中，该下调通过该细胞的胞质部分中底物的水平降低来呈现。
[0014] 本发明还提供了一种治疗有需要的受试者的前列腺肿瘤的方法，其包括：向该受 试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可 接受的盐;确定来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物水平或其活性；以及如果与未施 用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物的对照受试者相比，该 底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的该药物组合物。
[0015] 本发明还提供了一种治疗受试者的前列腺肿瘤的方法，其包括向该受试者施用包 含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中与对照受试者相比， 该受试者展现出异常高的SP0P底物水平或其活性。
[0016] 在一些实施方案中，该异常高的水平通过该肿瘤中SP0P突变的存在来呈现。在一 些实施方案中，该突变导致该SP0P氨基酸序列的位置31-161之间的氨基酸序列改变。在一 些实施方案中，该氨基酸序列改变包括氨基酸置换。在一些实施方案中，该突变导致在该 SP0P氨基酸序列的￥87^102、5119^125、1(129、1131^133和/或1(134处的置换。在一些实施 方案中，该突变导致Y87C置换、Y87N置换、F102C置换、S119N置换、F125V置换、K129N置换、 W131G置换、F133L置换、F133V置换，或其置换的任意组合。
[0017] 在任意本文方法的实践中，所述受试者可以是人。在一些实施方案中，该受试者呈 现出疾病的症状。在一些实施方案中，该疾病是前列腺疾病。在一些实施方案中，该疾病是 前列腺肿瘤。在一些实施方案中，该前列腺肿瘤是雄激素敏感的。在一些实施方案中，该前 列腺肿瘤是雄激素不敏感的。在一些实施方案中，该前列腺肿瘤是雌激素敏感的。在一些实 施方案中，该前列腺肿瘤是雌激素不敏感的。在一些实施方案中，该疾病是乳房疾病或胃 病。在一些实施方案中，该疾病是乳房肿瘤或胃肿瘤。在一些实施方案中，该乳房肿瘤或胃 肿瘤是雄激素敏感的。在一些实施方案中，该乳房肿瘤或胃肿瘤是雄激素不敏感的。在一些 实施方案中，该乳房肿瘤或胃肿瘤是雌激素敏感的。在一些实施方案中，该乳房肿瘤或胃肿 瘤是雌激素不敏感的。
[0018] 本发明还提供了一种下调前列腺细胞中SP0P底物水平或其活性的方法，其包括： 向该细胞使用有效量的来他替尼，由此下调该细胞中的SP0P底物或其活性；以及评价该前 列腺细胞中SP0P底物水平或其活性的下调。
[0019] 在一些实施方案中，该前列腺细胞是前列腺癌细胞。在一些实施方案中，该前列腺 细胞是培养的细胞。在一些实施方案中，该前列腺细胞是雄激素敏感的前列腺细胞。在一些 实施方案中，该前列腺细胞是雌激素敏感的前列腺细胞。在一些实施方案中，该前列腺细胞 是LNCaP细胞。
[0020] 本发明进一步提供了一种下调乳房细胞或胃细胞中SP0P底物水平或其活性的方 法，其包括：（a)向该细胞施用有效量的来他替尼，由此下调该细胞中的SP0P底物或其活性； 以及(b)评价该乳房细胞或胃细胞中SPOP底物水平或其活性的下调。
[0021] 在单独但相关的实施方案中，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的乳房肿瘤 或胃肿瘤的方法，其包括：（a)向该受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含 治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐；（b)确定来源于该受试者的生物样品中的 SP0P底物水平或其活性；以及(c)如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可 接受的盐的药物组合物的对照受试者相比，该底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的 该药物组合物。
[0022] 在又一个实施方案中，本发明还提供了一种治疗受试者的乳房肿瘤或胃肿瘤的方 法，其包括向该受试者施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合 物，其中与对照受试者相比，该受试者展现出异常高的SP0P底物水平或其活性。
[0023]在再一个实施方案中，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的乳房肿瘤或胃肿 瘤的方法，其包括：（a)向该受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含治疗有 效量的来他替尼或其药学上可接受的盐；（b)确定来源于该受试者的生物样品中的SP0P底 物水平或其活性；以及(c)如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的 盐的药物组合物的对照受试者相比，该底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的该药物 组合物。
[0024] 在一些实施方案中，该乳房细胞或胃细胞是原发的或以其他方式培养的癌性乳房 细胞或胃细胞。在一些实施方案中，该乳房细胞或胃细胞是雄激素敏感或雌激素敏感的细 胞。在一些实施方案中，该乳房细胞是MCF7细胞。在一些实施方案中，该底物选自SRC1、 SRC2、SRC3(0ncogene 2011 ;30:4350-64)(Nat Rev Cancer.2009;9:615-30,其在此通过引 用并入本文）、Daxx(J Biol Chem.2006;281:12664-72,在此通过引用并入本文）、Gli(Dev Cell. 2006; 10:719-29,在此通过引用并入本文）、AWP-1、滞蛋白-4B、滞蛋白-7(0ncogene 2011; 30:4350-64)以及 DEK。
[0025] 本发明还提供一种药剂盒，其包含:药物组合物的至少一个单位剂型，该药物组合 物包含治疗有效量的来他替尼或其药学上有效的盐；以及关于实施本文所公开的任何方法 的说明。 援引并入
[0026] 本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如 同具体地且个别地指出每一单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
【附图说明】
[0027] 本发明的新颖特征在随附权利要求中具体阐述。通过参考以下对利用了本发明原 理的说明性实施方案加以阐述的详细描述以及附图，将会获得对本发明的特征和优点的更 好的理解，在附图中：
[0028]图1示出了 SP0P蛋白的结构以及示例性SP0P突变的位点。
[0029] 图2示出了在以下3种前列腺癌细胞系中，来他替尼及其同源物星形孢菌素（STS) 对细胞生长的抑制:PC3(图2A)、22RV1 (图2B)和LNCaP克隆FGC(图2C)。
[0030] 图3示出了在以下3种乳腺癌细胞系中，来他替尼及其同源物星形孢菌素（STS)对 细胞生长的抑制:MCF7(图3A)、BT-474(图3B)和ZR-75-1 (图3C)。
[0031]图4示出了在以下4种胃癌细胞系中，来他替尼及其同源物星形孢菌素（STS)对细 胞生长的抑制:AGS(图 4A)、MKN-45(图 4B)、Hs746T(图 4C)和 NCI-N87(图 4D)。
[0032]表1示出了来他替尼在所有测试的癌细胞系中的IC5Q的汇总表。
[0033]图5示出了来他替尼对前列腺癌细胞系中的SRC-3和PRK1蛋白表达水平的影响。 [0034]图6示出了具有野生型SP0P的细胞相对于具有突变SP0P的细胞的AR转录活性调节 的工作模型。
[0035] 图7示出了在两种前列腺癌细胞中，来他替尼对SRC3(图7A和7B)和DEK(图7A和7C) 蛋白表达水平的剂量-响应影响。
[0036] 图8示出了在两种乳腺癌细胞中，来他替尼对SRC3 (图8A和8B)和DEK (图8A和8C)蛋 白表达水平的剂量-响应影响。
[0037] 图9示出了在两种胃癌细胞中，来他替尼对SRC3(图9A和9B)和DEK(图9A和9C)蛋白 表达水平的剂量-响应影响。
[0038]图10示出了人SP0P的氨基酸序列。
【具体实施方式】 [0039] 通用技术：
[0040]除非另有说明，本发明的实践将采用免疫学、生物化学、化学、分子生物学、微生物 学、细胞生物学、基因组学和重组DNA的常规技术，其均在本领域的技术范围内。参见，例如， Fritsch和Maniatis,MOLECULAR CL0NING:A LABORATORY MANUAL,第4版（2012);CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BI0L0GY(F.M.Ausubel，等人编著（1987)) ;METH0DS IN ENZYM0L0GY系列（Academic Press , Inc . ) : PCR 2 : A PRACTICAL APPROACH (M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R. Taylor编著（1995))以及ANIMAL CELL CULTURE (R. I .Freshney编著（1987)，其在此通过引用并入本文）。
[0041]如本说明书和权利要求中使用的，除非上下文明确指定，否则单数形式"一个"、 "一种"和"该"包括复数的指示物。例如，术语"一个细胞"包括多个细胞，包括其混合物。 [0042]
[0043] 多肽"、"肽"和"蛋白质"在本文中可互换使用，并且是指任何长度的氨基酸 的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，其可以包含修饰的氨基酸，并且其可被非氨基酸 中断。该术语还包括已被修饰的氨基酸聚合物;例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷 酸化或任何其他操作，如与标记组分的缀合。如本文所用的，术语"氨基酸"是指天然的和/ 或非天然或合成的氨基酸，包括甘氨酸和D或L光学异构体，以及氨基酸类似物和拟肽。 [0044]如本文所用的，术语"氨基酸"包括天然存在的和合成的氨基酸，以及以类似于天 然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗 传密码编码的那些氨基酸，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如，Y _羧基谷氨酸、羟基脯氨 酸和0-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构（即， 与氢、羧基、氨基和R基团结合的a碳）的化合物。示例性的氨基酸类似物包括但不限于高丝 氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜和甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有修饰的R基团（例 如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，只要其保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。"氨 基酸模拟物"是指这样的化学化合物，其具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但以类 似于天然存在的氨基酸的方式发挥作用。
[0045] 在本文中可以用公知的三字母符号或用由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的 单字母符号来指代氨基酸。
[0046] 在多肽的语境中，"序列"是多肽中的氨基酸在从氨基至羧基末端方向上的顺序， 其中该序列中彼此相邻的残基在该多肽的一级结构中是连续的。
[0047]术语"多核苷酸"、"核酸"、"核苷酸"和"寡核苷酸"可互换使用。它们是指任何长度 的核苷酸(无论是脱氧核糖核苷酸还是核糖核苷酸)或其类似物的聚合形式。多核苷酸可具 有任意的三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实 例:基因或基因片段的编码区或非编码区、从连锁分析确定的基因座、外显子、内含子、信使 RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA，核酶、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、任 意序列的分离的DNA、任意序列的分离的RNA、核酸探针以及引物。多核苷酸可以包含修饰的 核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在的话，可以在聚合物的组装之前或 之后赋予对该核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以 在聚合后进一步修饰，例如通过与标记组分缀合。
[0048]如本文中所使用的，"表达"是指多核苷酸被转录为mRNA的过程，和/或转录的mRNA (也称为"转录物"）随后被翻译成肽、多肽或蛋白质的过程。转录物和/或编码的多肽可以作 为表达水平的读出来评价。如果多核苷酸来源于基因组DNA，则表达可以包括真核细胞中 mRNA的剪接。
[0049]术语"有效量"或"治疗有效量"是指如下文所定义的、足以实现预期应用的本文所 述化合物的量，该应用包括但不限于疾病治疗。治疗有效量可以根据预期应用（体外或体 内），或所治疗的受试者和疾病状况，例如，受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、给 药方式等而改变，这些可以由本领域普通技术人员容易地确定。该术语也适用于将会诱导 革巴细胞中的特定响应例如血小板粘附和/或细胞迀移减少的剂量。具体剂量将根据选择的 具体化合物、遵循的给药方案、是否与其他化合物联合施用、施用的时机、所施用至的组织 以及携带它的物理递送系统而变化。
[0050] "亚治疗量"可以是小于该药剂的有效量的量。当与有效量或亚治疗量的一种或多 种其他药剂组合时，由于例如所产生的有效效果的协同作用或副作用的减少，该亚治疗量 可以产生医师所期望的结果。
[0051] 如本文所用的，术语"治疗"或"处理"在本文中可互换使用。这些术语是指用于获 得有益或期望的结果的途径，该结果包括但不限于治疗性益处和/或预防性益处。治疗性益 处可以意指所治疗的潜在病症的根除或改善。同样，治疗性益处可以伴随一种或多种与潜 在病症相关的生理症状的根除或改善而实现，使得在受试者中观察到好转，尽管该受试者 可能仍受该潜在病症的折磨。预防性效果包括延迟或消除疾病或病况的出现，延迟或消除 疾病或病况的症状发作，减缓、停止或逆转疾病或病况的进展，或其任意组合。对于预防性 益处，可以将组合物施用至处于发展出特定疾病的风险中的受试者，或施用至报告疾病的 一个或多个生理症状的受试者，即使可能尚未作出该疾病的诊断。
[0052] 如本文所用的，术语"共同施用"、"与...联合施用"及其语法等同语包括两种或多 种药剂向动物的施用，使得两种药剂和/或其代谢物同时存在于该受试者中。共同施用包括 以单独的组合物同时施用，以单独的组合物在不同的时间施用，或以两种药剂都存在的组 合物施用。
[0053] 术语"药学上可接受的盐"是指从多种本领域公知的有机和无机抗衡离子衍生的 盐，并且仅举例而言，包括碱加成盐和酸加成盐。在化合物包含酸性部分的情况下可以形成 碱加成盐。在化合物包含碱性部分的情况下可以形成酸加成盐。示例性的碱加成盐包括碱 金属盐，例如，钠、钾和锂盐，碱土金属盐，例如，钙和镁盐，铵盐如铵和四烷基铵盐，与有机 碱如三乙胺、吗啉、哌啶和二环己基胺形成的盐；以及与碱性氨基酸如精氨酸和赖氨酸形成 的盐。示例性的酸加成盐可以包括有机或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸 盐、甲酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、草酸 盐、甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐，等等。在具有超过一个碱性部分的化合 物中，超过一个碱性部分可以被转化成盐形式，包括但不限于二盐或三盐。或者，具有超过 一个碱性部分的化合物可以仅在一个碱性部分处形成盐。在本发明的范围内也包括具有一 个或多个氨基酸的母体化合物的盐。任何上述氨基酸都是合适的，特别是被发现作为蛋白 质组分的天然存在的氨基酸，虽然氨基酸通常是带有具有碱性或酸性基团的侧链的氨基 酸，例如，赖氨酸、精氨酸或谷氨酸，或是带有具有中性基团的侧链的氨基酸，如甘氨酸、丝 氨酸、苏氨酸、丙氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。
[0054] 如本文所用的，术语"卤素"或"卤代"表示氟、氯、溴或碘。
[0055] 术语"信号传导"、"信号传导途径"、"途径活性"和"信号传导途径活性"在本文中 可互换使用以指代这样的过程，在该过程期间，信号被传输进入细胞、离开细胞和/或在细 胞内传输以激发细胞内的响应。术语"SP0P底物信号传导"通常是指由SP0P底物介导的一种 或多种信号传导途径。示例性的SP0P底物和SP0P底物信号传导途径在本文中描述。术语 "SP0P底物信号传导"包括由SP0P底物和/或定位至SP0P底物途径的一种或多种下游分子介 导的蛋白质/蛋白质、蛋白质/糖蛋白、蛋白质/核酸和/或核酸/核酸相互作用。这样的下游 分子的非限制性实例在本文中描述。
[0056] 术语"确定"、"测量"、"评估"、"评价"、"测定"和"分析"在本文中可互换使用以指 代任何形式的测量，并包括确定要素是否存在。这些术语包括定量和/或定性测定。评价可 以是相对或绝对的。"评价...的存在"包括确定某种物质存在的量，以及确定其是否存在。
[0057] 概述
[0058]本发明的方法、组合物和药剂盒与来他替尼可以降低SP0P底物或其下游靶标的表 达水平和/或途径活性的发现有关。因此，本文描述了下调有需要的受试者中的SP0P底物信 号传导的方法。某些SP0P底物的异常高的水平和/或途径活性与多种疾病例如某些类型的 癌症有关。例如，某些SP0P底物的异常高的水平和/或途径活性与肿瘤例如前列腺癌、乳腺 癌或胃癌相关。因此，本文公开了多种使用来他替尼治疗受试者的前列腺肿瘤、乳房肿瘤或 胃肿瘤的方法和组合物，该受试者包含一种或多种SP0P底物或其信号传导途径活性的异常 高的水平。任何这些方法均可以包括向受试者施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上 可接受的盐的药物组合物。本文还描述了一种下调前列腺、乳房或胃细胞中的一种或多种 SP0P底物或其信号传导途径活性的方法。该方法可以包括(a)向该细胞施用有效量的来他 替尼或其药学上可接受的盐，由此下调肿瘤细胞如前列腺癌、乳腺癌或胃癌中的一种或多 种SP0P底物或其信号传导途径活性，以及(b)评价该肿瘤细胞如前列腺癌、乳腺癌或胃癌中 的一种或多种SP0P底物或其信号传导途径活性的下调。本发明的方法、组合物和药剂盒进 一步与以下发现有关:SPOP底物和SPOP底物途径活性的来他替尼介导的下调与来他替尼降 低肿瘤细胞活力的能力相关。
[0059] 因此，本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的肿瘤的方法。该方法可以包 括(a)向该受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的来他替尼 或其药学上可接受的盐；（b)确定来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物水平或其活性； 以及(c)如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物的 对照受试者相比，该底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的该药物组合物。本文还公开 了用于实施任意本发明方法的药剂盒。
[0060] 示例性的SP0P底物和SP0P底物信号传导途径
[0061] 在任意本发明方法的实践中，待下调的SP0P底物可以是能够与SP0P形成复合物的 任何蛋白质。在一些实施方案中，待下调的SP0P底物是能够与野生型SP0P形成复合物的蛋 白质。与SP0P (例如，与野生型SP0P)形成复合物可以通过该底物与SP0P的结合来呈现。该结 合可以是弱结合或强结合。该结合可以包括瞬时或永久的结合。在一些实施方案中，该SP0P 底物能够通过SP0P蛋白的MATH域中的一个或多个氨基酸与SP0P形成复合物。该MATH域可以 包含SP0P氨基酸序列的氨基酸31-161。在一些实施方案中，该SP0P底物能够与在SP0P蛋白 质序列的氨基酸位置31-161之间并且包括该SP0P蛋白质序列的氨基酸位置31-161的一个 或多个氨基酸形成复合物。在一些实施方案中，该SP0P底物能够与在SP0P蛋白质序列的氨 基酸位置60-140之间并且包括该SP0P蛋白质序列的氨基酸位置60-140的一个或多个氨基 酸形成复合物。在一些实施方案中，该SP0P底物能够与在SP0P蛋白质序列的氨基酸位置87-133之间并且包括该SP0P蛋白质序列的氨基酸位置87-133的一个或多个氨基酸形成复合 物。在一些实施方案中，该SP0P底物能够与SP0P蛋白的片段形成复合物。该片段可以包含 SP0P氨基酸序列的MATH域的部分或全部。例如，该片段可以包含SP0P蛋白质序列的氨基酸 31-161、60-140或87-133。
[0062] 可以与SP0P形成复合物的SP0P底物可以包括包含SP0P共有结合序列（SP0P-CBS) 的蛋白质。该SP0P-CBS可以包含序列S-S/T-S/T。该SP0P-CBS可以包含序列jt-S-S/T-S/T或 (P-7I-S-S/T-S/T，其中(P是非极性氨基酸并且是极性氨基酸。示例性的非极性氨基酸包 括但不一定限于A、C、G、I、L、M、F、P、W、Y和Z。示例性的极性氨基酸包括但不一定限于R、N、D、 Q、Z和K。该SP0P-CBS可以包含前面是酸性氨基酸（例如，D或Z)的序列S-S/T-S/T。例如，该 SP0P-CBS可以包含序列D/E-Xi-S-S/T-S/T，其中X是任何氨基酸并且i=0-2。在一些实施方 案中，i = 0。在一些实施方案中，i = l。在一些实施方案中，i = 2。在一些实施方案中，该 SP0P-CBS是DSTT、DVSST、EVTSTT或DSTSS。可以通过在蛋白质数据库中搜索含有SP0P-CBS序 列的多肽来鉴别包含SP0P-CBS的多肽。例如，可以使用SP0P-CBS序列来采用蛋白质BLAST算 法查询蛋白质数据库。仅举例而言，包含SP0P-CBS的示例性SP0P底物包括AWP1、用于激活T 细胞家族成员1的连接体、滞蛋白4B以及滞蛋白7。
[0063]可以通过本领域技术人员已知的任何手段来确定SP0P底物与SP0P或其片段形成 复合物的能力。例如，对于本领域技术人员，多种用于评价蛋白质-蛋白质相互作用的方法 是可用的。在一些实施方案中，通过结合试验检测复合物的形成。可以使用结合试验来检测 SP0P与疑似为SP0P底物的蛋白质之间的结合。示例性的结合试验包括但不限于免疫共沉 淀、下拉试验(pul 1-down assay)、交联蛋白质相互作用分析、标记物转移蛋白质相互作用 分析以及far-western印迹分析。用于检测蛋白质-蛋白质相互作用的其他试验包括例如酵 母双杂交试验和表面等离子体共振试验。
[0064] 免疫共沉淀试验通常涉及使用捕获抗体来捕获靶蛋白以及与该靶蛋白复合的其 他任何蛋白质。然后可以通过本领域已知的任何手段例如考马斯染色、抗体检测和/或标记 物检测来测定与该靶蛋白复合的蛋白质。仅举例而言，可以将包含疑似SP0P底物的蛋白质 样品与固定在固体或半固体支持物例如珠子上的SP0P抗体一起温育。可以通过该固定的 SP0P抗体捕获包含SP0P (或SP0P片段）和SP0P结合配偶体（例如，SP0P底物）的任何复合物。 然后可以通过本领域已知的任何手段分析该复合物，以鉴别该SP0P结合配偶体。
[0065] 下拉试验通常使用捕获在固体或半固体表面上的钓饵蛋白。然后可将该固定的钓 饵蛋白与包含潜在"猎物"蛋白的蛋白质样品一起温育。"猎物"蛋白可以与该固定的钓饵蛋 白形成复合物。然后可以将捕获的"猎物蛋白"洗脱下来并通过本领域已知的任何手段来评 价。
[0066] 可以在结合配偶体的分离或鉴别之前利用化学交联将蛋白质相互作用"固定"到 位。用于该应用的常见交联剂包括不可裂解的NHS-酯交联剂，二磺基琥珀酰亚胺基辛二酸 酯(BS3);BS3的可裂解形式，二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯）（DTSSP);以及普遍用于 在ChIP试验中固定相互作用的亚氨酸酯交联剂二硫代二丙亚氨酸二甲酯（DTBP)。交联之 后，可以通过本领域技术人员已知的任何手段检测和/或鉴别蛋白质结合配偶体。例如，可 以通过质谱法例如高质量MALDI质谱法来鉴别结合配偶体。
[0067]标记物转移可以用于蛋白质相互作用的筛选或确认，并且可以提供关于相互作用 发生处的界面的信息。在典型的标记物转移反应中，将钓饵蛋白与可检测标记物连接。然后 可以允许该标记的钓饵蛋白与猎物蛋白形成复合物。复合物形成后，与该可检测标记物的 连接可以从该钓饵蛋白转移至该猎物蛋白。然后可以通过包括Western印迹分析、蛋白质序 列分析和质谱法在内的多种方法来分析蛋白质-蛋白质相互作用。
[0068] 在far-Western分析中，通常使用标记的或抗体可检测的"钓馆"蛋白来探测和检 测膜上的靶"猎物"蛋白。含有该猎物蛋白的样品中的蛋白质通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或非变性PAGE来分离，然后固定在固体或半固体支持物上。转移 后，用标记的钓饵蛋白探测该固体或半固体支持物。允许该钓饵蛋白与固定的结合配偶体 形成复合物。依赖于所使用的标记物，检测系统鉴别对应于该结合配偶体的条带。
[0069] 酵母双杂交试验的前提是用于激活例如报告基因的表达的转录因子可以被分成 两个模块化组分这一发现。该模块化组分可以包括DNA结合组分和转录激活组分。在酵母双 杂交试验中，用"钓馆"和"猎物"质粒转染酵母菌株。该钓饵质粒通常编码与两个模块化组 分之一(例如，DNA结合组分)融合的"钓馆"蛋白，而该"猎物"质粒通常编码与两个模块化组 分中的另一个(例如，转录激活组分)融合的"猎物"蛋白的疑似结合配偶体。包含该"钓馆" 蛋白和结合配偶体的复合物的形成通常使该转录因子的两个组分足够靠近，以实现报告基 因的转录。激活的报告基因转录的检测可以指示该钓饵蛋白与结合配偶体之间的复合物的 形成。在一些实施方案中，该钓饵蛋白是SP0P或SP0P片段，而结合配偶体是疑似SP0P底物。 在一些实施方案中，该钓饵蛋白是疑似SP0P底物，而结合配偶体是SP0P或SP0P片段。
[0070] 还可以利用表面等离子体共振(SPR)来检测SP0P结合配偶体。SPR通常利用固定在 SPR晶体上的钓饵蛋白。将包含"猎物"蛋白的液体溶液注射在钓饵层上。钓饵与猎物之间的 复合物的形成可以通过SPR信号（以响应单位RU表示）的增加来呈现。
[0071]在一些实施方案中，待下调的SP0P底物是能够被SP0P/遍在蛋白连接酶复合物遍 在蛋白化的蛋白质。SP0P底物被SP0P/遍在蛋白连接酶复合物遍在蛋白化的能力可以通过 本文所述的或其他本领域已知的方法在体内或体外确定。例如，SP0P底物被SP0P/遍在蛋白 连接酶复合物的遍在蛋白化可以在体外确定。示例性的体外遍在蛋白化测定包括在溶液中 合并（1)疑似SP0P底物，（2)遍在蛋白，（3) SP0P/遍在蛋白连接酶，和(4)遍在蛋白化所需的 任何反应组分。可以将该溶液温育足以发生SP0P底物的遍在蛋白化的时间。
[0072] SP0P底物被SP0P/遍在蛋白连接酶复合物的遍在蛋白化可以在体内确定。仅举例 而言，可以用标记的遍在蛋白、疑似SP0P底物和/或SP0P转染培养的细胞。可以用蛋白酶体 抑制剂处理该细胞，以使得遍在蛋白化的蛋白质能够积累。可以将包含标记的遍在蛋白的 遍在蛋白化的蛋白质固定在固体或半固体支持物上，并通过本领域已知的任何手段例如免 疫测定来检测和/或鉴别。
[0073] SP0P底物可以包括被SP0P/遍在蛋白连接酶复合物降解的蛋白质。SP0P介导的 SP0P底物的降解可以在体内或体外确定。可以通过例如在存在或不存在SP0P的情况下温育 表达SP0P底物的细胞，并将在SP0P的存在下生长的细胞中的SP0P底物水平与在不存在SP0P 的情况下生长的细胞中的SP0P底物水平进行比较，在体内确定SP0P介导的SP0P底物的降 解。与在不存在SP0P的情况下生长的细胞中的SP0P底物水平相比，在SP0P的存在下生长的 细胞中的SP0P底物水平的降低可以指示SP0P介导的SP0P底物的降解。
[0074] 在一些实施方案中，待下调的SP0P底物途径活性是受试者中的雄激素信号传导途 径。在一些情况下，待下调的SP0P底物增强雄激素信号传导途径的活性。雄激素信号传导通 常由雄激素受体介导。雄激素配体与AR的结合通常诱导AR的核易位。然后AR可以募集能够 调节靶基因的AR介导的转录调节的辅调节蛋白。例如，激活的AR可以与AR响应元件结合并 激活AR靶基因的转录。示例性的AR靶基因包括但不限于TMPRSS2、IGF 1-R、NKXX3.1、CXCR4、 皿八1(、]\^?、财41、61^81和?仙?5。这些41?靶基因代表了定位至3?0?底物途径的下游分子的非 限制性实例。
[0075]在一些实施方案中，增强雄激素受体信号传导的SP0P底物是AR辅调节蛋白，其还 增强雌激素受体(ER)信号传导。作为SP0P底物的示例性AR和ER辅调节蛋白包括pl60辅激活 物家族蛋白质。P160辅激活蛋白可以包括SRC1、SRC2 (TIF2)和SRC3 (也称为AIBi)。这些P160 辅激活蛋白可以激活AR/ER靶基因的AR/ER介导的转录激活。具体地，SRC3可以显著地激活 靶基因的AR/ER介导的转录，并且可以被SP0P/E3遍在蛋白化连接酶复合物遍在蛋白化。因 此，在一些实施方案中，本发明方法包括下调有需要的受试者中的P160辅激活蛋白信号传 导途径。在一些实施方案中，该P160辅激活蛋白是SRC3。不希望受理论的限制，有可能SP0P 活性降低可以导致SRC3的遍在蛋白化减少，由此提高SRC3蛋白水平并随后增加AR特异性的 基因表达。因此，在一些实施方案中，本发明方法包括下调有需要的受试者中的SRC3水平或 其信号传导活性。
[0076] 影响雄激素信号传导的SP0P底物还可以包括例如AN1型锌指蛋白eUWPlhAWPl通 常是指与肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)相互作用的锌指蛋白（Int J Biochem Cell Biol 2011 ;43:1612-1620)。降低AWP1蛋白水平可以增加肿瘤坏死因子a(TNFc〇诱导的细胞 死亡（Int J Biochem Cell Biol 2011;43:1612-1620)。相反，增加AWP1 蛋白可以抑制细胞 死亡，由此增强肿瘤形成。AWP1还与一种蛋白激酶C家族丝氨酸/苏氨酸激酶一PRK1相互作 用(Gene 2000;256:113-121) 1RK1的刺激可以导致AR的配体依赖性超活化(EMBO J 2003; 22: 270-280)。不希望受理论的限制，有可能SPOP活性降低可以导致AWP1的遍在蛋白化减 少，由此提高AWP1蛋白水平和AWP1活性。AWP1途径活性可以减少例如前列腺肿瘤细胞的细 胞死亡。此外，AWP1途径活性可以增强PRK1信号传导并随后诱导AR超活化。因此，在一些实 施方案中，本发明方法包括下调有需要的受试者中的AWP1或AWP1信号传导。
[0077]影响雄激素信号传导的SP0P底物还可以包括Gli蛋白。Gli蛋白通常是指介导 hedgehog信号传导途径的一类蛋白质转录因子。Gli蛋白可以包括Glil、Gli2和Gli3。特别 是，Glil可以在人体中充当癌蛋白。Gli途径活性可以增强AR特异性的基因表达，并且可以 使得雄激素敏感的LNCaP细胞能够在雄激素耗尽的培养基中生长。不希望受理论的限制，有 可能SP0P活性降低可以导致Gli的遍在蛋白化减少，由此提高Gli蛋白水平并随后增加AR特 异性的基因表达。因此，在一些实施方案中，本发明方法包括下调有需要的受试者中的Gli 底物信号传导。在特定的实施方案中，该Gli底物信号传导途径是Glil底物信号传导途径。 [0078] SP0P底物可以潜在地包括DEK;其蛋白质序列存在DSSTT和DESSS共有基序，提示 DEK可能能够被SP0P介导的途径降解，并且如果SP0P具有失能突变或由于其他原因的蛋白 质表达丧失，则其水平提高。在前列腺癌和胃癌细胞中，DEK的表达水平似乎高于SRC3，而在 乳腺癌中DEK表达水平较低，但在用来他替尼处理乳腺癌细胞后显示出降低，这与SRC3相 似。
[0079]在一些实施方案中，待下调的SP0P底物或底物途径活性影响细胞增殖、存活和/或 凋亡。例如，SP0P底物可以抑制细胞中的凋亡。这类SP0P底物的信号传导活性的下调可能能 够增强肿瘤细胞例如前列腺肿瘤细胞的凋亡。抑制细胞凋亡的示例性SP0P底物包括但不限 于AWP1和Daxx。Daxx途径活性可以抑制细胞死亡。例如，Daxx途径活性可以通过抑制肿瘤抑 制基因P53的活性来抑制细胞死亡。不希望受理论的限制，有可能SP0P活性降低可以导致 Daxx的遍在蛋白化减少，由此提高Daxx蛋白水平并随后抑制例如肿瘤细胞的细胞死亡。因 此，在一些实施方案中，本发明方法包括下调有需要的受试者中的Daxx底物信号传导。
[0080] SP0P底物水平或活性的下调
[0081] 在任意本发明方法的实践中，向有需要的受试者施用包含治疗有效量的来他替尼 的药物组合物可以导致该受试者中SP0P底物水平和/或途径活性的下调。同样，向肿瘤细胞 施用有效量的来他替尼可以导致该肿瘤细胞中的SP0P底物水平和/或途径活性。示例性的 SP0P底物及其途径活性在本文中描述。SP0P底物水平和/或其途径活性的下调可以通过多 种本文所述或其他本领域已知的方法来确定。例如，受试者中SP0P底物水平和/或其途径活 性的下调可以通过与对照受试者和/或对照群体的比较来确定。如果与对照受试者和/或对 照群体相比，受试者中SP0P底物或信号传导的水平降低，则可以认为该SP0P底物和/或其信 号传导在受试者中下调。该对照受试者可以是未施用来他替尼的个体。同样，对照群体可以 包含多个未施用来他替尼的个体。该对照受试者可以是需要SP0P底物下调或SP0P底物活性 下调、未施用来他替尼的受试者。与有需要但未施用来他替尼的对照受试者相比，其SP0P底 物或途径活性可以降低。
[0082] 对照受试者不必是与所述受试者不同的个体，而可以是在早些时间点的同一受试 者，例如，在接受第一剂量的来他替尼之前的同一受试者。因此，可以将来他替尼第一次施 用后受试者中SPOP底物或其信号传导的下调与来他替尼第一次施用前同一受试者中的 SP0P底物水平或其途径活性进行比较。例如，一种评价有需要的受试者中的SP0P下调的方 法可以包括在第一时间点测定该受试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物水平 或其途径活性。该受试者可以患有、疑似患有任意本文所述的疾病，或疑似处于任意本文所 述疾病的增加的风险中。例如，该受试者可以患有前列腺肿瘤、乳房肿瘤或胃肿瘤。该第一 时间点可以是在施用如本文所述的组合物前的时间点。该方法可以进一步包括在第二时间 点测定该受试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物水平或其途径活性。该第二时 间可以在该组合物的施用后。可以将在该第二时间点测定的水平与在该第一时间点测定的 水平进行比较，以确定是否已发生下调。在一些实施方案中，下调指示该药物组合物的施用 的临床效力。在一些实施方案中，该方法进一步包括如果SP0P底物水平或其途径活性降低， 则施用额外剂量的药物组合物。
[0083]可以在受试者或来源于该受试者的生物样品中确定SP0P底物水平或其信号传导。 该生物样品可以是流体样品。示例性的流体样品包括例如全血、血浆、血清、腹水、脑脊液、 汗液、尿液、眼泪、唾液或口腔样品。该生物样品还可以是固体生物样品。示例性的固体生物 样品包括例如粪便或组织活检物。该生物样品可以带有或疑似带有病变细胞或病变组织。 该病变细胞或组织可以是肿瘤细胞或肿瘤组织。该肿瘤细胞或组织可以是癌细胞或癌组 织。例如，该细胞可以是肿瘤干细胞或循环肿瘤细胞。该生物样品可以带有或疑似带有来源 于病变细胞或组织的大分子。该生物样品可以是带有或疑似带有来源于病变细胞或组织的 大分子的基本无细胞的样品。该大分子可以是多肽和/或多核苷酸。例如，该多核苷酸可以 是RNA或DNA。
[0084] SP0P底物水平可以指SP0P底物表达水平。SP0P底物表达水平可以指受试者或生物 样品中SP0P底物的蛋白质水平和/或浓度。可以通过本领域已知的任何手段来确定蛋白质 水平和/或浓度。示例性的方法包括但不限于western印迹、ELISA、免疫沉淀、放射免疫测 定、质谱法、成像例如PET成像、免疫荧光、蛋白质微阵列和免疫组织化学。
[0085] SP0P底物水平可以指编码该SP0P底物蛋白的多核苷酸的水平和/或浓度。例如，该 多核苷酸可以是DNA和/或RNA。评价多核苷酸的水平和/或浓度的方法是本领域技术人员已 知的。示例性的方法包括但不限于测序、新一代测序、微阵列、聚合酶链反应(PCR)、实时PCR (RT-PCR)、数字PCR、原位杂交（ISH)、RNA酶保护测定，等等。
[0086] SP0P底物水平可以通过经由例如遍在蛋白-蛋白酶体降解途径靶向SP0P底物以供 降解的水平来呈现。这样的证明可以包括但不限于SP0P底物遍在蛋白化的呈现。在本文中 描述了用于评价SP0P底物遍在蛋白化的示例性方法。例如，SP0P底物遍在蛋白化的增强可 以指示SP0P底物下调的增强。SP0P底物水平可以通过评价SP0P底物的SP0P介导的降解来呈 现。本文中描述了用于评价SP0P底物的SP0P介导的降解的示例性方法。
[0087]可以通过本领域技术人员已知的任何方法，和/或通过本文描述的方法来确定受 试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物信号传导的水平。示例性的SP0P信号传导 途径在本文中描述，并且包括例如雄激素受体信号传导、PRK1活性和细胞死亡的抑制。可以 以多种方式确定雄激素受体信号传导。例如，可以通过测定雄激素受体激活的转录物的水 平和/或浓度来确定雄激素受体信号传导。可以通过本文所述的方法例如RT_PCR、RNA酶保 护测定、原位杂交等来确定转录物(例如，mRNA转录物）的水平和/或浓度。雄激素受体激活 的基因包括但不限于 了]^1?52、16?1-1?、1^?3.1、0乂〇?4、獻1(、]\^?、财41、61^81和?仙？5。举其 他例子来说，可以通过雄激素受体测定来确定雄激素受体信号传导。在示例性的雄激素受 体报告测定中，用在雄激素受体响应元件的控制下表达报告基因的质粒转染细胞。可以由 该测定中检测到的报告物的水平来推断雄激素受体活性。可以通过评价受试者或来源于该 受试者的生物样品对雄激素的敏感性来确定雄激素受体信号传导。例如，可以通过剂量-响 应曲线或通过测量受试者或生物样品对已知量的雄激素的响应来确定对雄激素的敏感性。 [0088]可以通过本文所述或其他本领域已知的方法来确定PRK1活性。例如，可以通过评 价已知PRK1靶标的磷酸化来确定PRK1活性。已知的PRK1靶标包括，例如，组蛋白H3 WRK1可 以将组蛋白H3在其苏氨酸11位置(H3T11)磷酸化。PRK1介导的H3T11磷酸化可以导致增强的 雄激素受体信号传导。可以通过例如Western印迹和/或激酶试验来确定H3T11磷酸化。 [0089]另一种示例性的SP0P信号传导途径涉及TNFa诱导的细胞死亡的AWP1介导的抑制。 TNFa信号传导途径可以包括NF-kB的激活。NF-kB的激活可以包括蛋白质TRAF2和RIP的募 集。TRAF2转而可以募集多组分蛋白激酶IKK，使得丝氨酸-苏氨酸激酶RIP能够将其激活。一 种在正常情况下与NF-kB结合并抑制其易位的抑制性蛋白质一 iKBa可以被IKK磷酸化，并且 随后被降解，从而释放NF-kB JF-kB通常是指一种异二聚体转录因子，其易位至细胞核，并 介导与细胞存活和增殖、炎症反应以及抗凋亡因子有关的大量蛋白质的转录。TNFa信号传 导途径可以包括MAPK途径的激活。例如，TNFa信号传导可以诱导应激相关的JNK途径，可以 诱导P38-MAPK途径，并且还可以诱导ERK。募集的TRAF2/Rac可以激活MLK2/MLK3、TAK1、 MEKK1和ASK1的诱导JNK的上游激酶（或者直接诱导，或者分别通过GCK和Trx诱导hSRC-Vav-Rac轴可以激活MLK2/MLK3 H2/MLK3激酶可以将MKK7磷酸化，然后磷酸化的MKK7可以 激活JNK<JNK可以易位至细胞核并激活转录因子如c-Jun和ATF2<JNK途径可以是促凋亡途 径。TNFa还可以诱导细胞坏死。细胞坏死可以是胱天蛋白酶非依赖性的细胞死亡。TNFa诱导 的坏死可以与活性氧(R0S)的生成相关。可以通过本领域已知的任何手段评价R0S。例如，可 以通过氧化时发荧光的报告探针来评价R0S。氧化时发荧光的示例性探针包括7'-二氯荧光 素(DCF)、羧基-H2DCFDA、H2DFFDA、二氢钙黄绿素、AM、氨基苯基荧光素、羟基苯基荧光素和 ?丐黄绿素，等等。用于评价R0S的试剂盒可以从例如Abcam、Cell Bio Labs、Life Technologies和Sigma-Aldrich商购。还可以通过形态学分析来确定坏死。坏死的形态学标 志包括但不限于遗传物质的密集的聚集和进行性破坏，以及细胞和细胞器的膜的破坏。例 如，由于DNA降解，核染色质可能褪色。可以通过细胞核的收缩、通过染色质凝聚以及细胞碎 裂来呈现坏死。质膜可能表现为不连续的。该不连续的膜可能由细胞出泡和微绒毛的损失 而导致。可以通过本领域已知的任何手段评价细胞死亡，包括但不限于细胞计数、MTT试验、 TUNEL染色、膜联蛋白V染色、膜联蛋白V/碘化丙锭染色，等等。
[0090]示例性的发明方法可以包括向肿瘤细胞施用有效量的来他替尼，由此下调该细胞 中的SP0P底物水平或其活性。该方法可以进一步包括评价该肿瘤细胞中SP0P底物水平或其 活性的下调。评价下调的方法在本文中描述。该肿瘤细胞可以包含SP0P底物的升高的水平 或途径活性。该肿瘤细胞可以是来源于如本文所述的受试者的细胞。该肿瘤细胞可以是前 列腺、乳房或胃肿瘤细胞。该肿瘤细胞可以是雄激素或雌激素敏感的前列腺、乳房或胃肿瘤 细胞。该肿瘤细胞可以是培养的细胞。该培养的细胞可以是例如LNCaP、PC3或MCF7细胞。在 一些实施方案中，该有效量是0 ? 01nM、0 ? 05nM、0 ? lnM、0 ? 5nM、lnM、5nM、10nM、20nM、30nM、 40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、100nM、150nM、200nM、250nM、300nM、350nM、400nM、 450nM、500nM、550nM、600nM、650nM、700nM、750nM、800nM、850nM、900nM、950nM、lOOOnM、 1lOOnM、1200nM、1300nM、1400nM、1500nM、1600nM、1700nM、1800nM、1900nM、2000nM、2100nM、 2200nM、2300nM、2400nM、2500nM、2600nM、2700nM、2800nM、2900nM、3000nM、3100nM、3200nM、 3300nM、3400nM、3500nM、3600nM、3700nM、3800nM、3900nM、4000nM、5000nM、6000nM、7000nM、 8000nM、9000nM、10000nM(10yM)、15yM、20yM、25yM、30yM、35yM、40yM、45yM、50yM、55yM、60y 1、65處、70處、75處、80虚、85虚、90處、95處、100處、200處、300處、400處、500處、600虚、70011 M、800yM、900yM或lOOOyM(lmM)。在一些实施方案中，该有效量是0.01-10nM、10nM-100nM、 30nM-1000nM、100nM-3000nM、500nM-10，000nM(10yM)、卜100虚或50yM-1000yM(ImM)。
[0091]有效量的来他替尼的施用或包含来他替尼的药物组合物的施用可以使SPOP底物 水平或其途径活性下调至少5 %、10 %、15 %、20 %、25 %、30 %、35 %、40 %、45 %、50 %、 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或超过 99%。本 文所述的药物组合物的施用可以使SP0P底物水平或其途径活性下调5-20%、10-40%、30_ 60%、40-80%、60-95%或75-99%。
[0092]通过施用包含来他替尼的药物组合物对SP0P底物水平或其途径活性的下调可能 对受试者具有治疗性益处。例如，在受试者罹患肿瘤或癌症(例如，前列腺肿瘤或癌症)的情 况下，受试者中SP0P底物水平或其途径活性的下调可以降低受试者中前列腺肿瘤或癌细胞 的活力。SP0P底物水平或其途径活性的下调可以延迟或中止受试者中的肿瘤或癌细胞生 长、可以减少受试者中的癌细胞数目、可以缩小受试者中的肿瘤或癌、可以防止或延迟受试 者中肿瘤或癌的转移，或者可以预防性地防止受试者中肿瘤或癌的形成。在患有前列腺癌 的受试者中，SP0P底物水平或其活性的下调可以降低该受试者中的血液PSA水平。
[0093]受试者中SP0P底物水平或其活性的下调可以用作受试者中来他替尼的治疗效力 的指示物。因此，本发明方法可以包括(a)向该受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物 组合物包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐；（b)确定来源于该受试者的生 物样品中的SP0P底物水平或其活性；以及(c)如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或 其药学上可接受的盐的药物组合物的对照受试者相比，该底物水平或其活性降低，则施用 额外剂量的该药物组合物。
[0094]示例性受试者
[0095]在任意本发明方法的实践中，受试者可以是需要SP0P底物水平或其途径活性的下 调的任何受试者。本文描述了示例性的受试者。
[0096]需要SP0P底物水平或其途径活性的下调的受试者可以具有包含升高的SP0P底物 水平或途径活性的细胞或组织。需要SP0P底物水平或其途径活性的下调的受试者可以具有 包含升高的SP0P底物水平或途径活性的细胞或组织。包含升高的SP0P底物水平或途径活性 的受试者细胞或组织可以是病变组织或细胞，例如肿瘤或癌性组织或细胞。在一些实施方 案中，与非病变组织或细胞相比，该病变细胞或组织包含升高的SP0P底物水平或途径活性。
[0097]升高的SP0P底物和/或其途径活性可以具有本文所述的任意SP0P底物或信号传 导。在一些实施方案中，该升高的SP0P底物和/或途径活性是P160类固醇激活物，如SRC1、 SRC2或SRC3。在一些实施方案中，该升高的SP0P底物和/或其途径活性是SRC3。该升高的 SP0P底物和/或其途径活性可以是AWP1。该升高的SP0P底物和/或其途径活性可以是Gli。该 升高的SPOP底物和/或其途径活性可以是Gli-l、Gli-2和/或Gli-3。升高的SPOP底物信号传 导途径可以导致增加的PRK1信号传导和/或PRK1表达。
[0098]可以在受试者或来源于该受试者的生物样品中确定升高的SP0P底物水平或途径 活性。本文描述了示例性的生物样品。
[0099]在一些实施方案中，与参考受试者或参考生物样品中的SP0P底物的水平或途径活 性相比，受试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物的水平或途径活性升高。在一 些实施方案中，该参考受试者不具有或未被怀疑具有与升高的SP0P底物水平相关的疾病。 在一些实施方案中，该参考生物样品来源于需要SP0P底物下调的受试者的非病变组织。在 一些实施方案中，如果受试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物的水平或途径活 性高于SP0P底物的阈值水平或途径活性，则该水平或途径活性被认为是升高的。可以由本 领域技术人员通过例如考虑在不需要SP0P下调的受试者群体中发现的SP0P底物或底物途 径活性的范围或平均值来确定该阈值水平或途径活性。
[0100]在一些实施方案中，受试者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物的水平或 途径活性比参考受试者或参考生物样品中的SP0P底物的水平或途径活性高5-50%、高40-100%、高80-200%、高100-500%、高400-1000%或高超过1000%。在一些实施方案中，受试 者或来源于该受试者的生物样品中的SP0P底物的水平或途径活性比参考受试者或参考生 物样品中的SP0P底物的水平或途径活性高5%、10%、15 %、20 %、25 %、30 %、35 %、40 %、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、110%、120%、 130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%、200%、250%、300%、400%、500%、 600%、700%、800%、900%、1000%或者高超过 1000%。
[0101]受试者或来源于该受试者的生物样品可以展现出升高的SP0P底物途径活性。如本 文所述，升高的SP0P底物途径可以是雄激素受体信号传导途径。可以通过如本文所述或本 领域已知的多种方式来确定雄激素受体信号传导。
[0102] 在一些实施方案中，升高的SP0P底物途径导致细胞死亡的抑制，例如TNFa诱导的 途径的AWP1介导的抑制。本文描述了示例性的TNFa诱导的途径。本文描述了用于评价细胞 死亡的方法。
[0103] 在一些实施方案中，需要SP0P底物水平或其途径活性下调的受试者或来源于该受 试者的生物样品展现出一种或多种SP0P突变。所述一种或多种SP0P突变可包括在编码SP0P 蛋白的多核苷酸(例如，DNA或RNA)(例如，SPOP基因）中的突变。该突变可以影响SPOP基因的 任何部分。所述一种或多种SP0P突变可包括SP0P蛋白中的突变。所述一种或多种SP0P突变 可以是点突变、插入、缺失、扩增、易位、倒位或杂合性丢失。在一些实施方案中，该突变是失 能突变或显性失活突变。该突变可以是移码突变。移码突变可破坏读框，导致与原序列相比 完全不同的经翻译的蛋白质。该突变可以是无义突变。无义突变可导致提前终止密码子，从 而编码截短的且可能无功能的蛋白质产物。该SP0P突变可以是无义突变，其中单核苷酸改 变引起在经翻译的蛋白质中的氨基酸置换。该突变可引起在SP0P蛋白的MATH域中的改变。 该突变可以改变SP0P氨基酸序列的位置31-161之间的氨基酸序列。该突变可引起SP0P氨基 酸序列的￥87、？102、3119、？125、1(129、1131小133和/或1(134处的置换。在一些实施方案中， 该突变引起Y87C置换、Y87N置换、F102C置换、S119N置换、F125V置换、K129N置换、W131G置 换、F133L置换、F133V置换或其置换的任意组合。该突变可降低SP0P蛋白与SP0P底物的结合 效力。该突变可降低SPOP促进SPOP底物的遍在蛋白化的能力。该突变可减少SPOP底物的降 解。
[0104] 可通过本领域已知的任何手段确定SP0P突变的存在，其包括基因分型试验和测序 方法。测序方法可包括新一代测序、靶向测序、外显子组测序、全基因组测序、大规模平行测 序等。若干用于新一代测序的平台是商购可得的。商购可得的平台包括，例如，用于合成测 序、离子半导体测序、焦磷酸测序、可逆染料终止子测序、连接测序、单分子测序、杂交测序 和纳米孔测序的平台。用于合成测序的平台可从例如IIlumina、454Life Sciences、 Helicos Biosciences和Qiagen获得。Illumina平台可包括，例如，Illumina的Solexa平台、 Illumina的基因组分析仪，并且在Gudmundsson等人(Nat .Genet ? 2009 41:1122-6)，0ut等 人(Hum.Mutat.2009 30:1703-12)和Turner(Nat.Methods 2009 6:315-6)，美国专利申请 公开号 US20080160580 和 US20080286795,美国专利号 6306597、7115400 和 7232656 中描述， 这些文献通过引用并入于此。454Life Science平台包括，例如，GS Flex和GS Junior，并且 在通过引用并入于此的美国专利号7,323,305中描述。来自Helicos Biosciences的平台包 括True Single Molecule Sequencing平台。用于离子半导体测序的平台包括，例如，Ion Torrent Personal Genome Machine(PGM)，并且在通过引用并入于此的美国专利号 7948015中描述。用于焦磷酸测序的平台包括GS Flex 454系统，并且在通过引用并入于此 的美国专利号7211390、7244559、7264929中描述。用于连接测序的平台和方法包括，例如， SOLiD测序平台，并且在通过引用并入于此的美国专利号5750341中描述。用于单分子测序 的平台包括来自Pacific Bioscience的SMRT系统和Helicos True Single Molecule Sequencing平台。纳米孔测序方法在通过引用并入于此的Soni GV and Meller A.Clin Chem 53:1996-2001 [ 2007 ]中描述。纳米孔测序DNA分析技术正在被包括Oxford Nanopore Technologies (Oxford, Uni ted Kingdom)在内的许多公司进行工业开发。纳米孔测序通常 是指一种单分子测序技术，通过该技术，当DNA单分子穿过纳米孔时直接对其进行测序。纳 米孔可以是直径为1纳米数量级的小孔。在导电流体中浸没纳米孔以及跨过它施加电势（电 压)可导致由离子通过纳米孔传导引起的轻微的电流。流动的电流的量对纳米孔的大小和 形状敏感，并且对例如DNA分子的堵塞敏感。当DNA分子穿过纳米孔时，DNA分子上的每一个 核苷酸可以不同程度地阻塞纳米孔，从而不同程度地改变通过纳米孔的电流的量级。因此， 当DNA分子穿过纳米孔时电流的这种变化代表了该DNA序列的读取结果。尽管自动化Sanger 法被认为是'第一代'技术，但本发明的方法也可以采用Sanger测序，包括自动化Sanger测 序。
[0105] 任何本文所述的受试者可能患有、被诊断为患有、被怀疑患有与异常高水平的 SP0P底物相关的疾病，或被怀疑处于发展为该疾病的风险中。例如，该受试者可能被诊断为 患有、被怀疑患有与异常高水平的SRC3相关的疾病，或被怀疑处于发展为该疾病的风险中。 与异常高水平的SRC3相关的示例性疾病包括但不限于前列腺癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌。
[0106] 任何本文所述的受试者可以是动物。该动物可以是脊椎动物。示例性的脊椎动物 包括两栖动物、禽类、哺乳动物和爬行动物。示例性的哺乳动物包括但不限于小鼠、兔、豚 鼠、猫、狗、猪、绵羊、马、牛、人和猴。示例性的两栖动物包括但不限于蛙、蟾蜍、火蜥蜴和蝾 螈。示例性的爬行动物包括但不限于蜥蜴、蛇和龟。示例性的禽类包括但不限于鸡、水禽、 雀、燕雀、鹰、隼和雕。在一些实施方案中，该受试者是无脊椎动物，例如秀丽隐杆线虫 (Caenorhabditis elegans)，或昆虫，例如黑腹果绳（Drosophila melongaster) 〇 [0107]示例性化合物
[0108]通常，本发明的方法包括向受试者施用包含治疗有效量的式（I)化合物或其药学 上可接受的盐的药物组合物。在一些实施方案中，本发明方法包括向肿瘤细胞施用有效量 的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，式I化合物是：
(I)， 其中R1、R2、R3和R4独立地为H、乙酰基、氨基、卤素、C0NH 2、0H、CH2CH2Br，其中W1和W2独立 ttSH、0、02j*X*0H、C0NH0H、C0NH2、C0NHCH2CH20H、C02Et、C02Me、CH20H、 CH2〇COCH2CH2C〇2H、CH2N3、CH2NH2、CH2NHCH2C〇2Me、CH2NHCH2C〇2H、CH 2N = CH-NMe2、 CH2NH⑶CH2NH2、_CH2O -、CH2NHMe、CH2NHCH2CH = CH2、CH2NHCH2CH(OH) CH2O、CH2SMe、CH2S (0) Me、-〇-、
其中Y为0H、0-乙酰基，或者X和Y-起形成环。
[0109] 在一些实施方案中，R\R2、R3和R4中的至少一个为H。在一些实施方案中，R\R 2、R3 和R4中的至少两个为H。在一些实施方案中，R\R2、R3和R 4中的至少三个为H。在一些实施方案 中，R\R2、R3和R4中的每一个均为H。在一些实施方案中，W 1和W2中的至少一个为H。在一些实 施方案中，X或Y中的至少一个为0H。在一些实施方案中，X为CH 20H。
[0110] 在一些实施方案中，R\R2、R3和R4中的每一个均为IW 1和W2为H，X为CH20H，并且Y为 0H〇
[0111] 在一些实施方案中，所述化合物是式(II)化合物或其药学上可接受的盐：
[0112] 这样的化合物在本文中通常被称为"来他替尼"、"CEP-701"、"KT-5555"、"SPM-924"。这样的化合物和制备该化合物的方法在美国专利号4923986、PCT公开号 TO2007075307、W02008086510中描述，所有这些参考文献均通过引用并入于此。通常，来他 替尼可以配制成药学上可接受的游离碱或盐的形式。本文描述了药学上可接受的盐。
[0113] 式I或式II化合物(例如，来他替尼）可通过若干供应商购买以供制备所述药物组 合物。例如，来他替尼在CAS登录库中列出（CAS号111358-88-4)。来他替尼可以购自例如 Tocris Biosciences(目录号3395)、LC Laboratories)目录号L-6307)、Cayman Chemical (目录号 12094 )、Bio Vi si on，Inc ?(目录号 1805-1000)和 Santa Cruz Biotech (目录号 sc-218657)等。在一些实施方案中，式I或式11化合物或包含该化合物的药物组合物可由 Cephalon, Inc ?或Abbott Laboratories，Inc ?制备。
[0114] 药物组合物
[0115] 通常，本发明的方法使用包含治疗有效量的来他替尼的药物组合物。包含有效量 的式I或式II化合物的组合物可包含药学上可接受的载体。该组合物的药学上可接受的载 体可包括但不限于氨基酸、肽、生物聚合物、非生物聚合物、单糖或淀粉、无机盐和树胶，它 们可以单独地或以其组合存在。在可接受的载体中使用的肽可包括例如明胶和/或白蛋白。 纤维素或其衍生物可以在药学上可接受的载体中使用。在可接受的载体中使用的糖可以是 乳糖和/或葡萄糖。可在该药物组合物中使用的其他有用的糖包括但不限于果糖、半乳糖、 乳糖醇（lacticol)、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、松三糖、肌醇、palatinate、棉子糖、水苏糖、 蔗糖、海藻糖、木糖醇、它们的水合物，和它们的组合。药学上可接受的载体可包含粘合剂。 粘合剂的实例包括但不限于淀粉(例如，玉米淀粉或马铃薯淀粉）、明胶;天然的或合成的树 胶如阿拉伯胶、褐藻酸钠、粉末状西黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素或纤维素衍生物(例如，甲基纤 维素、乙基纤维素、乙酸纤维素）；微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和它们的混合物。在可接受 的载体中使用的无机盐可以是镁盐，例如，氯化镁或硫酸镁。可以使用其他无机盐，例如钙 盐。钙盐的实例包括但不限于氯化钙、硫酸钙。可在药学上可接受的载体中使用的物质的其 他实例包括但不限于植物油，如花生油、棉籽油、橄榄油、玉米油；多元醇，如甘油、丙二醇、 聚乙二醇;无热原水、等渗盐水、磷酸盐缓冲溶液;乳化剂，如吐温權;湿润剂、润滑剂、着色 剂、调味剂、防腐剂。
[0116]术语"湿润剂"可与"表面活性剂"可互换地使用，并且是指降低液体的表面张力从 而使液体更容易扩散的物质。可用于形成本发明的药物组合物和剂型的表面活性剂包括但 不限于亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂及其混合物。换言之，可以采用亲水性表面活 性剂的混合物，可以采用亲脂性表面活性剂的混合物，或者可以采用至少一种亲水性表面 活性剂和至少一种亲脂性表面活性剂的混合物。
[0117] 合适的亲水性表面活性剂通常可具有至少10的HLB值，而合适的亲脂性表面活性 剂通常可具有等于或小于约10的HLB值。可用于表征非离子两性分子化合物的相对亲水性 和疏水性的有用的参数是亲水亲脂平衡值（"HLB"值）。具有较低HLB值的表面活性剂是更疏 水的，并且在油中具有更大的溶解度，而具有较高HLB值的表面活性剂是更亲水的，并且在 水溶液中具有更大的溶解度。亲水性表面活性剂通常被认为是HLB值大于约10的那些化合 物，以及HLB度量通常不适用的阴离子、阳离子或两性离子化合物。类似地，亲脂性（即，疏水 性)表面活性剂通常被认为是HLB值等于或小于约10的化合物。然而，表面活性剂的HLB值仅 提供了通常用来使得能够配制工业、药物和化妆品乳液的粗略的指导。
[0118] 亲水性表面活性剂可以是离子型的或非离子型的。合适的离子型表面活性剂包括 但不限于烷基铵盐、氨基酸的脂肪酸衍生物、氨基酸的甘油酯衍生物、夫西地酸盐、寡肽和 多肽、寡肽和多肽、卵磷脂和氢化卵磷脂、溶血卵磷脂和氢化溶血卵磷脂、磷脂及其衍生物、 脂肪酸盐、溶血磷脂及其衍生物、肉碱脂肪酸酯盐、烷基硫酸酯的盐、多库酯钠、酰基乳酸酯 (acylactylates)、单甘油酯和二甘油酯的单乙酰化和二乙酰化的酒石酸酯、琥I自酰化的单 甘油酯和二甘油酯、单甘油酯和二甘油酯的柠檬酸酯，和它们的混合物。
[0119] 在上述组内，离子型表面活性剂包括但不限于卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂、溶血磷 脂及其衍生物、肉碱脂肪酸酯盐、脂肪酸盐、烷基硫酸酯的盐、多库酯钠、酰基乳酸酯、单甘 油酯和二甘油酯的单乙酰化和二乙酰化的酒石酸酯、琥珀酰化的单甘油酯和二甘油酯、单 甘油酯和二甘油酯的柠檬酸酯，和它们的混合物。
[0120] 离子型表面活性剂可以是离子化形式的脂肪酸的乳酰酯、卵磷脂、溶血卵磷脂、磷 脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂 酰丝氨酸、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂 酰乙醇胺、硬脂酰乳酰乳酸酯（8丨631'〇71-2-13(^713丨6)、硬脂酰乳酸酯、琥1自酰化单甘油 酯、单/二甘油酯的单/二乙酰化的酒石酸酯、单/二甘油酯的柠檬酸酯、胆酰肌氨酸 (cholylsarcosine)、己酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、棕榈酸酯、油酸酯、亚 油酸酯、亚麻酸酯、硬脂酸酯、蓖麻油酸酯、十二烷基硫酸酯、十四烷基硫酸酯（teracecyl sulfate)、多库酯、月桂酰肉碱、棕榈酰肉碱、肉豆蔻酰肉碱以及它们的盐和混合物。
[0121] 亲水性非离子型表面活性剂可包括但不限于烷基葡萄糖苷，烷基硫代葡萄糖苷， 烷基麦牙糖甘，十^烷基聚乙^醇甘油醋，聚氧化稀烷基酿如聚乙^醇烷基酿，聚氧化稀烧 基酚如聚乙二醇烷基酚，聚乙二醇甘油脂肪酸酯，聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯如聚乙二醇脂 肪酸单酯和聚乙二醇脂肪酸二酯，聚甘油脂肪酸酯，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物及其混 合物，聚氧化烯失水山梨醇脂肪酸酯如聚乙二醇失水山梨醇脂肪酸酯，多元醇与由甘油酯、 植物油、氢化植物油、脂肪酸和留醇组成的组中的至少一个成员的亲水性酯交换产物，聚氧 乙烯留醇及其衍生物或类似物，聚氧乙烯化维生素及其衍生物，聚乙二醇失水山梨醇脂肪 酸酯，以及多元醇与由甘油三酯、植物油和氢化植物油组成的组中的至少一个成员的亲水 性酯交换产物。该多元醇可以是甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、丙二醇、季戊四醇或糖 类。
[0122] 其他亲水性非离子型表面活性剂包括但不限于TOG-10月桂酸酯、PEG-12月桂酸 酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20油酸酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、 PEG-32月桂酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、PEG-15 硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯、 PEG-25甘油基三油酸酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20甘油基月桂酸酯、PEG-20三油酸酯、PEG-30甘油基月桂酸酯、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基油酸酯、PEG-30甘油基油酸酯、 PEG-30甘油基月桂酸酯、PEG-40甘油基月桂酸酯、PEG-50氢化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40棕榈仁油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60 玉米油、PEG-6癸酸/辛酸甘油酯、PEG-8癸酸/辛酸甘油酯、聚甘油基-10月桂酸酯、PEG-30胆 固醇、PEG-25植物甾醇、PEG-30大豆甾醇、PEG-40失水山梨醇油酸酯、PEG-80失水山梨醇月 桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、P0E-9十二烷基醚、POE-23十二烷基醚、P0E-10油醚、 P0E-20油醚、P0E-20硬脂醚、生育酚PEG-100琥珀酸酯、PEG-24胆固醇、聚甘油基-10油酸酯、 吐温40、吐温60、蔗糖单硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、PEG10-100壬基苯酚 系列、PEG15-100辛基苯酚系列和泊洛沙姆。
[0123] 合适的亲脂性表面活性剂包括但不限于脂肪醇，甘油脂肪酸酯，乙酰化甘油脂肪 酸酯，低级醇脂肪酸酯，丙二醇脂肪酸酯，失水山梨醇脂肪酸酯，聚乙二醇失水山梨醇脂肪 酸酯，留醇和留醇衍生物，聚氧乙烯化留醇和留醇衍生物，聚乙二醇烷基醚，糖醚，糖酯，多 元醇与由甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和留醇组成的组中的至少一个成员的疏水性 酯交换产物，油溶性维生素/维生素衍生物，单甘油酯和二甘油酯的乳酸衍生物，以及它们 的混合物。在该组内，优选的亲脂性表面活性剂包括甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯及其混 合物，或者是多元醇与由植物油、氢化植物油和甘油三酯组成的组中的至少一个成员的疏 水性酯交换产物。
[0124] 可在所述药物组合物中使用的润滑剂包括但不限于琼脂、硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿 物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑 石、氢化植物油（例如，花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油）、硬脂酸 锌、油酸乙酯、乙基月桂酸酯或它们的混合物。举例而言，另外的润滑剂包括syloid硅胶、合 成二氧化硅的凝聚型气溶胶或它们的混合物。可任选地以小于药物组合物的约1重量％的 量添加润滑剂。
[0125] 所述组合物可包含增溶剂以确保化合物的良好溶解并减少本发明的化合物的沉 淀。增溶剂可用来提高化合物或其他活性成分的溶解度，或可用来使组合物保持为均匀的 溶液或分散体。合适的增溶剂的实例包括但不限于醇和多元醇如乙醇、异丙醇、聚乙烯醇、 明胶、甘露醇、羧甲基纤维素钠(CMCNa)、聚维酮、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、 环糊精或环糊精衍生物，分子量平均约200至约6000的聚乙二醇醚如PEG，酰胺和其他含氮 化合物如2-吡咯烷酮、2-哌啶酮、e-己内酰胺、N-烷基吡咯烷酮、N-羟烷基吡咯烷酮、N-烷基 哌啶酮、N-烷基己内酰胺、二甲基乙酰胺和聚乙烯吡咯烷酮;酯如丙酸乙酯、柠檬酸三丁酯、 乙酰柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三丁酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、丁酸乙酯、三 乙酸甘油酯、丙二醇单乙酸酯、丙二醇二乙酸酯、己内酯及其异构体、戊内酯及其异构 体、丁内酯及其异构体，以及本领域中已知的其他增溶剂如二甲基乙酰胺、异山梨醇二甲 醚、N-甲基吡咯烷酮、单辛精、二乙二醇单乙醚、水或它们的混合物和/或组合。
[0126] 还可以使用增溶剂的混合物。实例包括但不限于油酸乙酯、辛酸乙酯、三乙酸甘油 酯、柠檬酸三乙酯、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、 羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、聚乙二醇200-100、卡必醇(transcutol)、丙二醇、 四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)和二甲基异山梨醇酯。特别优选的增溶剂包括山梨糖 醇、甘油、三乙酸甘油酯、乙醇、PEG-400、四氢呋喃聚乙二醇醚和丙二醇。
[0127] 可包含的增溶剂的量没有特别限制。可将给定的增溶剂的量限制为生物可接受的 量，这可由本领域技术人员容易地确定。在一些情况下，包含远超过生物可接受量的量的增 溶剂可能对于例如最大化药物的浓度是有利的，其中在向受试者提供该组合物之前使用常 规技术如蒸馏或蒸发去除过量的增溶剂。因此，基于药物和其他赋形剂的合并重量，增溶剂 (如果存在)可以是按重量计10%、25%、50%、75%、100%或最高约200%的重量比。如果需 要，也可以使用极小量的增溶剂，如5%、2%、1%、0.5%或甚至更少。一般而言，增溶剂可以 以按重量计约1 %至约100 %，更典型地约5 %至约25 %的量存在。
[0128] 所述组合物可包含一种或多种药学上可接受的添加剂，该添加剂可包括但不限于 防粘剂、消泡剂、缓冲剂、抗氧化剂、聚合物、防腐剂、螯合剂、增味剂、遮光剂、悬浮剂、填充 剂、增塑剂和它们的混合物。
[0129] 在一些实施方案中，按w/w、w/v或v/v计，药学上可接受的载体包括药物组合物的 大于90 %、大于80 %、大于70 %、大于60 %、大于50 %、大于40 %、大于30 %、大于20 %、大于 10%、大于9 %、大于8 %、大于6%、大于5%、大于4 %、大于3%、大于2%、大于1 %、大于 0.5%、大于0.4%、大于0.3%、大于0.2%、大于0.1%、大于0.09%、大于0.08%、大于 0.07%、大于0.06%、大于0.05%、大于0.04%、大于0.03%、大于0.02%、大于0.01 %、大于 0.009%、大于0.008 %、大于0.007 %、大于0.006 %、大于0.005 %、大于0.004 %、大于 0.003 %、大于 0.002 %、大于 0.001 %、大于 0.0009 %、大于 0.0008%、大于 0.0007 %、大于 0.0006%、大于0.0005%、大于0.0004%、大于0.0003%、大于0.0002%或大于0.0001 %。
[0130] 在一些实施方案中，按w/w、w/v或v/v计，所述组合物中式I或式II化合物的浓度包 括药物组合物的小于100%、小于90%、小于80%、小于70%、小于60%、小于50%、小于 40%、小于30 %、小于20 %、小于10 %、小于9 %、小于8 %、小于6 %、小于5 %、小于4%、小于 3 %、小于2 %、小于1 %、小于0.5 %、小于0.4 %、小于0.3 %、小于0.2 %、小于0.1 %、小于 0.09%、小于0.08%、小于0.07%、小于0.06%、小于0.05%、小于0.04%、小于0.03%、小于 0.02%、小于0.01 %、小于0.009 %、小于0.008 %、小于0.007 %、小于0.006 %、小于 0.005 %、小于 0? 004%、小于 0.003 %、小于 0.002 %、小于 0.001 %、小于 0.0009 %、小于 0 ? 0008 %、小于0 ? 0007 %、小于0 ? 0006 %、小于0 ? 0005 %、小于0 ? 0004 %、小于0 ? 0003 %、小 于0.0002%或小于0.0001 %。
[0131 ]在一些实施方案中，按w/w、w/v或v/v计，式I或式II化合物的浓度在药物组合物的 约0.0001 %至约50 %、约0.001 %至约40 %、约0.01 %至约20%、约0.02 %至约29 %、约 0.03%至约28%、约0.04% 至约27%、约0.05%至约 26%、约0.06%至约25 %、约0.07% 至 约24%、约0.08%至约23%、约0.09%至约22%、约0.1 %至约21 %、约0.2 %至约20 %、约 0.3%至约19%、约0.4%至约18%、约0.5%至约17%、约0.6%至约16%、约0.7%至约 15%、约0.8%至约14%、约0.9%至约12%或约1 %至约10%的范围内。
[0132]在一些实施方案中，按w/w、w/v或v/v计，式I或式II化合物的浓度在药物组合物的 约0.0001 %至约5%、约0.001 %至约4%、约0.01 %至约2%、约0.02%至约1 %或约0.05% 至约0.5%的范围内。
[0133] 在一些实施方案中，所述药物组合物中式I或式II化合物的量为约O.OOOOlmg、 0?0001mg、0?001mg、0?005mg、0?01mg、0?05mg、0?lmg、0?25mg、0?5mg、lmg、2mg、4mg、8mg、 10mg、12mg、14mg、16mg、18mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、 70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、 450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、lg、1.lg、 1.2g、l.3g、l.4g、l.5g、l.6g、l.7g、l.8g、l.9g、2g、2.5g、3g、3.5g、4g、4.5g、5g、6g、7g、8g、 9g或10g〇
[0134] 以下描述了药物组合物的一些非限制性实例。
[0135] 用于口服施用的药物组合物
[0136] 可配制包含有效量的式I或式II化合物的药物组合物用于口服施用。在一些实施 方案中，用于口服施用的包含有效量的式I或式II化合物的药物组合物是固体药物组合物。 在一些实施方案中，该固体药物组合物可以呈现为离散的（例如，单位）口服剂型。离散口服 剂型的非限制性实例包括片剂、胶囊、囊片、明胶胶囊、持续释放制剂、锭剂、薄膜、棒棒糖 (1〇11 ipops)和口 香糖。
[0137] 离散口服剂型如片剂可通过已知技术进行包衣，以延迟或延长在胃肠道中的吸 收，从而提供一段较长时间的持续作用。在一些实施方案中，式I或式II化合物与一种或多 种惰性固体稀释剂如碳酸钙或磷酸钙混合。在一些实施方案中，式I或式II化合物呈现为软 明胶胶囊，其中该化合物例如与水或油介质如花生油或橄榄油混合。
[0138] 在一些实施方案中，用于口服施用的包含有效量的式I或式II化合物的药物组合 物是液体药物组合物。用于口服施用的液体组合物的非限制性实例包括亲水性悬浮液、乳 液、液体、凝胶、糖浆、浆液、溶液、酏剂、软胶囊、酊剂和水凝胶。在一些实施方案中，用于口 服施用的包含有效量的式I或式II化合物的固体或液体组合物包含各种甜味剂或调味剂或 着色剂。着色剂的实例包括适用于食物的染料，如那些被称为F.D.&C.的染料，和天然着色 剂，如葡萄皮提取物、甜菜红粉末、0胡萝卜素、胭脂树、洋红、姜黄、红辣椒等。也可以使用任 何上述有色化合物的衍生物、类似物和异构体。
[0139] 这样的剂型可通过本领域例如药学领域技术人员公知的方法来制备。这样的方法 将包括使式I或式II化合物与药学上可接受的载体结合。
[0140] 本发明进一步包括包含有效量的式I或式II化合物的无水药物组合物和剂型，因 为水可促进该化合物的降解。在一些实施方案中，使用无水或低水分含量的成分制备本发 明的无水药物组合物和剂型。在一些实施方案中，在低湿度或低水分条件下制备本发明的 无水药物组合物和剂型。如果预期在生产、包装和/或储存过程中与水分和/或湿度实质接 触，则可将含有乳糖的本发明药物组合物制备成无水的。可制备并储存包含有效量的式I或 式II化合物的无水药物组合物，使得维持其无水的性质。例如，可使用已知防止暴露于水的 材料包装该无水组合物，使得它们可被包含在合适的处方药剂盒中，该药剂盒的实例包括 但不限于密封的箱、塑料等，单位剂量容器，泡罩包装和条带包装。
[0141] 用于注射或肠胃外施用的药物组合物
[0142] 在一些方面，所述药物组合物被配制用于肠胃外施用。"肠胃外施用"通常是指除 了胃肠道以外的施用途径。肠胃外施用的实例包括但不限于静脉内注射、皮下注射、肌内注 射、输注或植入。输注可以是皮内或皮下输注，或通过经皮植入物进行。用于肠胃外施用的 示例性药物组合物在通过引用并入于此的以下文献中公开：美国专利申请公开号2006/ 0287221，美国专利号5244925、4309421、4158707和5164405,所有这些文献均通过引用并入 于此。
[0143] 配制用于肠胃外施用的组合物可包括常用于注射和/或输注的水性溶液和/或缓 冲液。常用的水性缓冲液和/或溶液可包括但不限于约〇. 9%的氯化钠溶液、磷酸盐缓冲液、 乳酸林格氏溶液(Lactated Ringer's solution)、乙酸林格氏溶液(Acetated ringer's solution)、磷酸盐缓冲盐水、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液、组氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、 甘氨酸缓冲液、N-甘氨酰甘氨酸(N-glycylglycine)缓冲液等。用于肠胃外施用的其他药学 上可接受的载体可包括乙醇、甘油、丙二醇、环糊精和环糊精衍生物、植物油等。
[0144] 在一些实施方案中，药物组合物注射液和/或输注液包含以有效防止或减少微生 物污染或降解的量存在的防腐剂。多种试剂，例如，苯酚、间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸酯、氯 丁醇、甲氨蝶呤、山梨酸、硫柳汞（thimerosol)、羟苯乙酯、三溴酚铋、羟苯甲酯、杆菌肽、羟 苯丙酯、红霉素、5-氟尿嘧啶、阿霉素、米托蒽醌、利福霉素、氯甲酚、苯扎氯铵可以用来防止 或减少污染。
[0145] 在一些实施方案中，通过将所需量的式I和/或II化合物引入具有如本文所述的各 种其他成分的合适溶剂中，然后根据需要过滤除菌来制备无菌溶液。通常，通过将各种无菌 活性成分引入含有基本分散介质和来自以上列举的那些的所需其他成分的无菌载体中来 制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，某些制备方法包括但不限 于真空干燥和冷冻干燥技术，该技术由活性成分以及任何附加所需成分的先前无菌过滤的 溶液产生活性成分加任何附加所需成分的粉末。
[0146] 其他药物组合物。
[0147] 本发明采用的药物组合物可配制用于眼内、局部、直肠或鼻内施用。适合于眼内施 用的制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于合适的载体中，尤其是用于活性成分的 水性溶剂中。该活性成分优选以〇. 5 %至20 %、有利地0.5 %至10 %、特别是约1.5 % w/w的浓 度存在于这样的制剂中。适合于局部施用例如在口中施用的制剂包括在调味基质一通常是 蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶一中包含活性成分的锭剂;在惰性基质如明胶和甘油，或蔗糖和 阿拉伯胶中包含活性成分的软锭剂；以及在合适的液体载体中包含活性成分的漱口药。用 于直肠施用的制剂可以呈现为具有合适的基质的栓剂，该基质包含例如可可脂或水杨酸 盐。适合于肺内或经鼻施用的制剂可具有例如在0.1至500微米范围内的颗粒大小(包括以 微米增量如〇.5、1、30微米、35微米等处于0.1至500微米范围内的颗粒大小），该制剂通过经 由鼻腔通道快速吸入或通过经由口腔吸入以到达肺泡囊而施用。合适的制剂包括活性成分 的水性或油性溶液。适合于气雾剂或干燥粉末施用的制剂可根据常规方法制备，并可与其 他治疗剂如此前在以下所述癌性感染的治疗或预防中使用的化合物一起递送。这样的药物 组合物的制备例如在Anderson,Philip 0.;Knoben,James E.;Troutman,William G编著， Handbook of Clinical Drug Data,第十版，McGraw-Hill, 2002;Pratt 和Taylor 编著， Principles of Drug Action,第三版，Churchill Livingston,New York, 1990；KatzungH) 著，Basic and Clinical Pharmacology,第九版，McGraw Hill, 20037ybg;Goodman 和 Gilman 编著，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第十版，McGraw Hill，2001; Remingtons Pharmaceutical Sciences,第20版，Lippincott ffilliams&ffilkins.,2000； Martindale，The Extra Pharmacopoeia，第三十二版（The Pharmaceutical Press , London，1999)中描述;所有这些文献均通过引用以其全文并入本文。
[0148] 示例性的治疗方案和施用途径
[0149] 本发明的各种化合物或药物组合物的施用可通过能够将该化合物递送至作用部 位的任何方法进行。可口服、腹膜内、肠胃外、眼内、局部、直肠或鼻内施用该组合物。在一些 实施方案中，口服施用该组合物。在一些情况下，口服施用可包括施用如本文所述的任何口 服剂型。施用的式I或式II化合物的有效量将依赖于正在治疗的受试者，病症或病况的严重 程度，施用速率，该化合物的性质(disposition)和处方医生的判断。受试者可施用日剂量 的来他替尼。该日剂量可以为每天约〇.〇lmg/kg至约100mg/kg体重。该日剂量可以为每天约 0.0111^/1^至1011^/1^体重。成人的日剂量可以为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、 20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、120、140、160、180、200、300、400、 500、600、700、800、900或100011^。来他替尼可以以一个或多个单位剂型施用，并且还可每天 施用一至十次、一至八次、一至六次、一至四次、一至两次或每天一次。单位剂型可包含约 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、 30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、120、140、160、180、200、300、400、500、600、 700、800、900或lOOOrng的来他替尼。
[0150 ] 来他替尼的剂量还可以为浓度为15至2 5mg/mL、16mg/mL或2 5mg/mL的液体或悬浮 液的形式。来他替尼的液体或悬浮液剂型可包括上述剂量(mg)的等效剂量。例如，来他替尼 的剂量可包括 1至 5mL 的25mg/mL 溶液，或1、1.2、1.4、1.6、1.8、2、2.2、2.4、2.6、2.8、3、3.2、 3.4、3.6、3.8或4mL的25mg/mL溶液，其中60mg剂量的来他替尼可提供于2.4mL的溶液中， 80mg剂量的来他替尼可提供于3.2mL的溶液中，并且100mg剂量的来他替尼可提供于4mL的 溶液中。此外，20mg剂量的来他替尼可以由1.25mL的16mg/mL溶液提供。
[0151] 在一些实施方案中，施用可包括输注。在一些情况下，输注可包括长期稳定的给 药。用于长期稳定（即，通过控制栗）给药的装置是本领域已知的（实例可在US 7341577、 US7351239、US8058251中描述，这些文献通过引用并入本文）。
[0152] 只要需要，即可持续施用本发明的化合物。在一些实施方案中，施用本发明的化合 物多于1、2、3、4、5、6、7、14或28天。在一些实施方案中，施用本发明的化合物多于1个月、多 于2个月、多于4个月、多于6个月、多于1年、多于2年或多于5年。在一些实施方案中，施用本 发明的化合物少于1个月、少于2个月、少于4个月、少于6个月、少于1年、少于2年或少于5年。 在一些实施方案中，施用本发明的化合物少于28、14、7、6、5、4、3、2或1天。在一些实施方案 中，不间断地长期施用本发明的药剂，例如，用于治疗或预防与升高的SP0P底物水平或其途 径活性相关的疾病。
[0153] 本领域已知，由于化合物药代动力学的受试者间差异，给药方案的个性化和/或调 整对于最优疗法可能是必要的。在一些实施方案中，选择剂量以在受试者中达到约0.05至 20iig/mL或约1至20iig/mL来他替尼的血清水平。
[0154] 示例性的联合疗法
[0155] 在一些实施方案中，所述方法包括共同施用其他药剂和包含来他替尼的药物组合 物。其他药剂可以是:小分子、营养物、维生素例如维生素D、药物、前药、生物制剂、肽、肽模 拟物、抗体、抗体片段、细胞或组织移植物、疫苗、多核苷酸、DNA分子、RNA分子（即，s iRNA、 miRNA)、与药物缀合的抗体、毒素、融合蛋白。可通过载体递送药剂，该载体包括但不限于质 粒载体、病毒载体、非病毒载体、脂质体制剂、纳米颗粒制剂、毒素、治疗性放射性同位素等。
[0156] 在一些实施方案中，所述其他药剂是抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的非限制性实例包括微 管蛋白相互作用剂、拓扑异构酶抑制剂和药剂、阿曲汀(acitretin)、鸡骨常山碱、氨萘非 特、amphethinile、安吖啶、ankinomycin、抗肿瘤物质、阿非迪霉素甘氨酸盐、天冬酰胺酶、 燕茜素、batracylin、苯氟隆(benf luoron)、氯苯酰色氨酸、溴硫磷酰胺(bromofosfamide)、 卡醋胺、盐酸卡美噻唑（carmethizole hydrochloride)、氯硫喹喔酮 (chlorsulfaquinoxalone)、克兰氟脲、claviridenone、克立那托、curaderm、阿糖胞苷、 cytocytin、达卡巴嗪、达替氯铵（datelliptinium)、二血B卜啉醚、二氢仑哌隆 (dihydrolenperone)、地那林、偏端霉素、多西紫杉醇、elliprabin、依利醋铵、埃博霉素、麦 角胺、依托泊苷、依曲替酯、维甲酰酚胺、硝酸镓、芫花瑞香宁、十六烷胆碱磷酸、HDAC抑制 剂、高三尖杉酯碱、羟基脲、伊莫福新、异谷酰胺、异维甲酸、白细胞调节素（leukoregulin)、 氯尼达明、美巴龙（merbarone)、部花青（merocyanlne)衍生物、甲基苯胺B丫啶 (methylanilinoacridine)、灭活素(minactivin)、米托萘胺、米托喹酮、米托蒽醌、莫哌达 醇、莫维A胺、N-(视黄酰基)氨基酸、N-酰化-脱氢丙氨酸、那法扎琼、诺考达唑衍生物、奥曲 肽、oquizanocine、紫杉醇、水鬼蕉碱(pancratistatin)、帕折普汀、吡罗蒽醌、聚血卟啉、 po 1 ypreic acid、吗丙嗪、甲基节肼、丙谷胺、丙亚胺、瑞替普汀、spato 1、螺环丙烷衍生物、 螺锗（spirogermanium)、strypoldinone、超氧化物歧化酶、替尼泊苷、菌体胚素、生育三稀 酸、拓扑替康、ukrain、硫酸长春碱、长春新碱、长春地辛、vinestramide、长春瑞滨、长春曲 醇、长春利定和睡前交酯。
[0157] 在一些实施方案中，所述其他药剂是抗癌剂。抗癌剂的非限制性实例包括醋孟南、 阿柔比星、阿地白介素、阿仑珠单抗、阿利维甲酸、六甲蜜胺、氨磷汀、安吖啶、阿那格雷、阿 那曲唑、安西司亭、贝沙罗汀、溴尿苷、卡培他滨、西莫白介素、西曲瑞克、克拉屈滨、克霉唑、 达珠单抗、右雷佐生、地拉卓、二十二醇、去氧氟尿苷、溴麦角环肽、卡莫司汀、阿糖胞苷、双 氯芬酸、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、乙嘧替氟、依西美坦、依昔舒林、法倔唑、红细 胞生成素、非格司亭、非那雄胺、磷酸氟达拉滨、福美坦、福莫司汀、硝酸镓、吉西他滨、 glycopine、庚钼(heptaplatin)、伊班膦酸、咪喹莫特、碘节胍、伊立替康、伊索拉定、兰瑞 肽、来氟米特、来格司亭、香菇多糖硫酸酯、来曲唑、利阿唑、洛铂、氯尼达明、马索罗酚、美拉 胂醇、甲氧氯普胺、米非司酮、米替福新、米立司亭、米托胍腙、二溴卫矛醇、莫拉司亭、那法 瑞林、那托司亭、奈达铂、尼鲁米特、那可丁、奥普瑞白介素、奥沙特隆、奥沙利铂、帕米膦酸、 培门冬酶、木聚硫钠、喷司他丁、毕西巴尼(picibanil)、吡柔比星、n卜吩姆钠、雷洛昔芬、雷 替曲塞、拉布立酶、利妥昔单抗、罗莫肽、沙格司亭、西佐喃(sizofuran)、索布佐生、索纳明、 舒拉明、他索纳明、他扎罗汀、替加氟、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、四氯十烷氧化物 (tetrachlorodecaoxide)、沙利度胺、血小板生成素、胸腺法新、促甲状腺激素a、拓扑替康、 托瑞米芬、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维甲酸、曲洛司坦、三甲曲沙、乌苯美司、戊柔比星、维替 泊芬和长春瑞滨。
[0158] 在一些实施方案中，所述其他药剂是抗雄激素。示例性的抗雄激素包括比卡鲁胺、 氟他胺、螺内酯、醋酸环丙孕酮、非那雄胺、度他雄胺、恩杂鲁胺(enzalutamide)、酮康唑、阿 比特龙、galeterone和尼鲁米特。
[0159] 在一些实施方案中，所述其他药剂是促进自噬的药剂。该自噬促进剂可以是mTOR 或mTOR途径抑制剂。示例性的mTOR和/或mTOR途径抑制剂包括但不限于雷帕霉素、坦西莫 司、umirolimus、佐他莫司、TOR 激酶抑制剂如 0SI-027、INK-128、AZD-8055、AZD-2014、 Palomid 529^Pp-242^BEZ235^AZD-8055^BGT226^XL765^GDC-0980^GSK2126458^PF-04691502、PF-05212384类似物或其衍生物。
[0160] 在一些实施方案中，所述其他药剂是PI3K抑制剂。示例性的PI3K抑制剂包括但不 限于3卩1126、5卩1101、8￡2235、8碰120、8丫1719、861'-226、父1-147、60(：-0941、251'1(-474、？父-866、60〇0980、？1(1-587、？卩-04691502、8訂33597、？1-103、0八1-101、6陬-477或其任意衍生 物。
[0161] 其他药剂和来他替尼的剂量可根据采用的附加治疗剂的类型，根据正在治疗的疾 病或病况等而不同。可以使用亚治疗量的其他药剂和来他替尼中的一种或两种。可以使用 治疗有效量的其他药剂和来他替尼中的一种或两种。可以同时或依序施用来他替尼和其他 药剂。如果依序施用，则主治医生或照护者可以决定施用该化合物和该附加治疗剂的适当 顺序。
[0162] 药剂盒
[0163] 本发明还提供了药剂盒。本发明的药剂盒可以包含在合适的包装中的至少一个或 多个单位剂量的本文所述药物组合物，以及关于在实施一种或多种本发明方法中使用的说 明。这样的药剂盒还可以包含诸如科学参考文献、包装插页材料、临床试验结果和/或这些 的概要等信息，该信息指示或表明了该组合物的活性和/或优势，和/或描述了给药、施用、 副作用、药物相互作用或对医疗保健提供者有用的其他信息。这些信息可以基于各种研究 的结果，例如使用涉及体内模型的实验动物的研究和基于人临床试验的研究。该药剂盒可 以进一步含有另一种药剂。在一些实施方案中，本发明的化合物和所述药剂作为单独的组 成物在药剂盒内的单独容器中提供。在一些实施方案中，本发明的化合物和所述药剂作为 单一组合物在药剂盒中的容器内提供。合适的包装的实例包括但不限于密封的箱、塑料等， 单位剂量容器，泡罩包装和条带包装。
[0164] 实施例
[0165] 实施例1:材料与方法
[0166] 材料和细胞系:前列腺癌、乳腺癌和胃癌细胞系和它们的来源示于下表中。各个肿 瘤细胞系的生长条件按照ATCC的建议在后续表格中示出。将星形孢菌素(来自Sigma，目录 号S4400-lmg，批号017k4059)和来他替尼（来自 Sigma，目录号C7869-lmg，批号072M4750V) 溶解在DMS0( Sigma)中。

[0167]细胞增殖试验:使用MTT试验测定来他替尼对前列腺癌细胞的生长抑制。将细胞以 60%的汇合度接种在96孔板中，并在奶'1'试验之前与0.1%01^0(对照）、10、30、100、300、 1000、3000nM来他替尼一起温育48小时。来他替尼的每个浓度重复至少3次以使变异最小 化。将MTT试剂（Promega?的CellTiter96?Aqueous One Solution Reagent)与DMEM培养基 混合，并用吸液管将i〇〇yl的该混合物移入每个孔中。培养基的颜色从黄色/棕色变为深棕 色，这指示MTS四唑鐵转化为甲.騰。随后通过酶标仪(plate reader)SpectraMax M5对甲勝 定量。还获得了仅含有MTT混合物的空白孔以用于背景减除。
[0168]细胞裂解物的蛋白质分析:使用BioRad蛋白质分析试剂通过比色法测定蛋白质浓 度。简而言之，将2yL细胞裂解物与lmL 1:5稀释的试剂混合，并通过SmartSpec 3000?分光 光度计（Bio Rad)测量0D595。使用4-20%Criterion? TGX?预制凝胶，通过SDS-PAGE(十二 烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析等量的蛋白质。添加预染色的蛋白质标准物以供与 样品共迀移，以估算分子量。一旦电泳完成，将蛋白质从凝胶转移至硝酸纤维素膜，以供 Western印迹分析。使用丽春红S(Ponceau S)将蛋白质染色。首先将膜与在TBST(Tris缓冲 盐水-吐温20)中的5%牛奶一起温育以阻断非特异性结合1小时，然后与一抗（1:1000稀释） 一起温育过夜。在用TBST将膜洗涤3次各30分钟之后，添加辣根过氧化物酶缀合的抗兔二抗 以另外温育60min。使用化学发光和X射线胶片检测条带。针对SRC-3的兔多克隆抗体(5E11) 购自 Cell Signaling Technology (Boston，MA)。针对 PRK1 (07-557)的兔多克隆抗体来自 Upstate/Millipore(Billerica，MA)〇
[0169] 亚细胞分级分离:进行亚细胞分级分离以从细胞中分离细胞核和细胞质。将PC3、 DU145和LNCaP细胞与0.1%DMS0(对照）或lyM来他替尼一起温育6小时，之后收获用于亚细 胞分级分离。将含有ImM EDTA(乙二胺四乙酸）、0. lx PBS(磷酸盐缓冲盐水)和一系列蛋白 酶体抑制剂的低渗裂解缓冲液添加至细胞5min。通过用结核菌素注射器的27G针剪切25次， 将细胞刮掉并打碎。首先通过在4 °C下以3，OOOrpm离心10分钟使细胞核沉淀，随后将上清液 在4°C下以15,000rpm离心10分钟，并使用该上清液作为细胞质。全细胞裂解物、细胞核级分 和细胞质级分用于蛋白质分析和Western印迹分析。针对微管蛋白、肌动蛋白和组蛋白的抗 体用于加样和定位对照。
[0170] 实施例2:搜索SP0P底物
[0171] SP0P依赖性蛋白质降解的PubMed搜索揭示了 SRC_3、Daxx和Gli是SP0P的已知底物 (J Biol Chem.2006；281:12664-72,Oncogene 2011；30:435〇-64,Dev Cell.2006；10:719-29)。我们搜索了NCBI数据库，尝试鉴定参与雄激素受体信号传导的其他SP0P底物。NCBI中 的结构数据库揭示了三种肽序列可以与SP0P相互作用。这些序列包括：
[0172] KAASADSTTEGTPAD ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/mmdb/mmdbsrv.cgi?uid=77512)
[0173] NTLFPDVSSSTH ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/mmdb/mmdbsrv.cgi?uid=77549)
[0174] DEVTSTTSSS ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/mmdb/mmdbsrv.cgi?uid=77550)
[0175] 所有三种肽序列与先前报道(Proc Natl Acad Sci USA.2009; 106:21191-6)的多 个Ser/Thr继以酸性残基的共有序列一致。我们使用该共有序列进行了BLAST搜索，以便鉴 定具有该共有序列的其他蛋白质，该蛋白质可能是过去未曾认识到的潜在的SP0P底物。采 用DSTSS的BLAST搜索导致了许多匹配。以下列出了四个示例性的匹配。

通过序列DSSTT进行的另一个BLAST搜索鉴定了 DEK(NCBI参考序列:NP_003463.1) >gi | 4503249 | ref | NP_003463 ? 11 蛋白质DEK同种型 1 [智人]
[0176] 实施例3:前列腺癌、乳腺癌和胃癌细胞对来他替尼的敏感性
[0177] 为了考查使用来他替尼治疗前列腺癌、乳腺癌、胃癌和其他癌症的可行性，研究了 具有不同程度的雄激素敏感性的三种前列腺癌细胞系对来他替尼的敏感性:PC3 (雄激素不 敏感的）、DU145(雄激素不敏感的）和LNCaP(雄激素敏感的）（图2)。还测试了三种乳腺癌细 胞系:MCF7、BT-474和ZR-75-1 (图 3)，和四种胃癌细胞系:AGS、MKN-45、Hs746T和NCI-N87 (图 4)，以测定它们对来他替尼的IC5Q，并将其与一种具有更宽的激酶抑制活性的来他替尼类 似--星形孢菌素进行比较。用DMS0(对照)或10、30、100、300、1000或300011]\1来他替尼或星 形孢菌素处理所有肿瘤细胞48小时。随后进行MTT试验以测定药物处理对肿瘤细胞活力的 影响。IC 5Q被确定为达到细胞活力最大减少量的一半时来他替尼的浓度。如图2至图4所示， 来他替尼对降低前列腺癌和胃癌细胞的活力是有效的，而乳腺癌细胞对来他替尼更具抗 性，其IC5Q更高。每种肿瘤细胞系的IC5Q汇总在表1中。
[0178] 实施例4: SRC-3和PRK1蛋白在前列腺癌细胞中的表达水平
[0179] 使用Western印迹法，考查在来他替尼处理前后在三种前列腺癌细胞系中SRC-3蛋 白表达的水平。用lyM来他替尼处理LNCaP、DU145和PC3细胞6小时，并收获用于亚细胞分级 分离。使用不同的抗体，采用Western印迹法分析全细胞裂解物、细胞核级分和胞质溶胶级 分。肌动蛋白、微管蛋白和组蛋白-H3用作加样和定位对照。
[0180] 未处理的LNCaP、PC3和DU145细胞展现了类似的SRC-3蛋白表达水平（图5,上图）。 然而，来他替尼处理的LNCaP细胞展现了 SRC-3的极大降低，而在来他替尼处理的PC3和 DU145细胞中的SRC-3蛋白水平没有显著改变（图5,上图）。相反，在任何测试的细胞系中来 他替尼处理均没有显著改变PRK1蛋白表达水平。
[0181] 实施例5:在细胞核和细胞质中SRC-3和PRK1蛋白的变化
[0182] 使用亚细胞分级分离研究考查在三种前列腺癌细胞系中来他替尼处理对SRC-3和 PRK的细胞内定位的影响。用lOOOnM来他替尼或对照载体处理LNCaP、PC3和DU145细胞系6小 时。获得细胞核和胞质溶胶级分并通过Western印迹法对其进行分析。使用的抗体包括SRC- 3、PRK、微管蛋白、组蛋白-H3和肌动蛋白。Western印迹分析揭示，来他替尼处理减少了所有 三种细胞系的细胞质中的SRC-3蛋白。相比于来他替尼处理的PC3或DU145细胞，在来他替尼 处理的LNCaP细胞中细胞质SRC-3的减少更加显著（图5,下图）。来他替尼处理没有引起 LNCaP、DU145或PC3细胞中细胞核SRC-3蛋白水平的降低（图5，下图）。相反，在所有三种细胞 系中来他替尼处理均增加了细胞核PRK-1蛋白水平，但来他替尼处理没有改变细胞质PRK-1 水平（图5，下图）。
[0183] 基于以上数据，提出了一种模型（图6)。在具有正常水平的SP0P活性的细胞中， SP0P底物如Gli、SRC-3和AWP1可通过SP0P依赖性蛋白质降解而降解，这调节AR活性（左图， 图6)。然而，在具有降低的SP0P活性的前列腺癌细胞(例如，具有突变的SP0P的前列腺癌细 胞）中，SP0P对SP0P底物如SRC-3、Gli、AWP1的降解受到损害，导致SP0P底物的积累和增强的 AR和/或促存活途径活性。发现来他替尼介导的雄激素依赖性前列腺癌细胞的细胞死亡与 SRC3水平的显著降低有关，SRC3是一种充当雄激素受体辅激活物的SP0P底物。该数据表明， 来他替尼可用来有效治疗具有异常高水平的SP0P底物或底物途径活性的受试者如具有 SP0P突变和/或高SRC3水平的受试者的疾病。这一机理提供了通过阻止该过程来中断雄激 素受体激活的基于基本原理的方法。
[0184] 实施例6:前列腺癌、乳腺癌和胃癌细胞中的SRC3和DEK蛋白水平的变化 基于它们对来他替尼的敏感性，选择LNCaP和PC3前列腺癌细胞、MCF7和ZR75-1乳腺癌 细胞以及MKN-45和NCI-N87胃癌细胞来测试在用两种不同剂量的来他替尼处理前和处理后 24小时的表达水平。选择实现约40%和70%生长抑制的剂量进行处理并针对Western印迹 法进行检查。对于图7显示的前列腺癌，在较高剂量处理的细胞中SRC3蛋白水平降低，但DEK 蛋白水平没有看出明显变化。对于图8显示的乳腺癌，MCF7具有在基线的最高水平的SRC3， 并在来他替尼处理后显示出最大的剂量依赖性降低。ZR75-1具有低得多的SRC3水平，但在 处理后没有明显变化。然而MCF7和ZR75-1细胞在处理后均具有降低的DEK蛋白水平。在图9 显示的胃癌中，在采用较高剂量的来他替尼处理后，SRC3表达水平在MKN-45细胞中显示降 低，但在NCI-N87中没有降低。如图9所示，在来他替尼处理后DEK水平没有变化。
[0185] 尽管本文中已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员显 而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本发明的情况 下现将想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文中所述的本发明实施方案的各种替代方 案可用于实施本发明。目的在于以下述权利要求限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利 要求范围内的方法和结构及其等同项。
【主权项】
1. 一种下调有需要的受试者中的斑点型ΡΟΖ蛋白（SPOP)底物信号传导的方法，其包括 向该受试者施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物，由此下 调该受试者中的SP0P底物信号传导。2. 如权利要求1所述的方法，其中所述底物选自SRCl、SRC2、SRC3、Daxx、Gli、AWP-ldf 蛋白-4B和滞蛋白-7。3. 如权利要求2所述的方法，其中所述底物是SRC1、SRC2或SRC3。4. 如权利要求3所述的方法，其中所述底物是SRC3。5. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述下调包括降低所述SP0P底物或所述 底物的下游靶标的水平和/或活性。6. 如权利要求5所述的方法，其中所述下游靶标是PRK-1。7. 如权利要求5所述的方法，其中所述下调包括降低所述SP0P底物的水平和/或活性。8. 如权利要求5所述的方法，其中所述下调通过来源于所述受试者的细胞中所述下游 靶标活性的降低来呈现。9. 如权利要求5所述的方法，其中所述下调通过来源于所述受试者的细胞中所述底物 水平的降低来呈现。10. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水平包括表达水平。11. 如权利要求10所述的方法，其中所述表达水平是蛋白质表达水平。12. 如权利要求10所述的方法，其中所述表达水平通过所述SP0P底物的转录物的水平 来呈现。13. 如权利要求1所述的方法，其中所述下调通过所述细胞的胞质部分中所述底物水平 的降低来呈现。14. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者呈现出疾病的症状。15. 如权利要求14所述的方法，其中所述疾病是前列腺疾病。16. 如权利要求14所述的方法，其中所述疾病是前列腺肿瘤。17. -种治疗有需要的受试者的前列腺肿瘤的方法，其包括： (a) 向所述受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的来他 替尼或其药学上可接受的盐； (b) 确定来源于所述受试者的生物样品中的SP0P底物水平或其活性；以及 (c) 如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物的 对照受试者相比，所述底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的所述药物组合物。18. -种治疗受试者的前列腺肿瘤的方法，其包括向所述受试者施用包含治疗有效量 的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中与对照受试者相比，所述受试者展 现出异常高的SP0P底物水平或其活性。19. 如权利要求18所述的方法，其中所述异常高的水平通过所述肿瘤中SP0P突变的存 在来呈现。20. 如权利要求19所述的方法，其中所述突变导致所述SP0P氨基酸序列的位置31-161 之间的氨基酸序列改变。21. 如权利要求19所述的方法，其中所述氨基酸序列改变包括氨基酸置换。22. 如权利要求19所述的方法，其中所述突变导致在所述SP0P氨基酸序列的Y87、F102、 5119小125、1(129、1131、？133和/或1(134处的置换。23. 如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。24. 如权利要求16或18所述的方法，其中所述前列腺肿瘤是雄激素敏感的。25. 如权利要求16或18所述的方法，其中所述前列腺肿瘤是雄激素不敏感的。26. -种下调前列腺细胞中的SPOP底物水平或其活性的方法，其包括： (a) 向所述细胞施用有效量的来他替尼，由此下调所述细胞中的SPOP底物或其活性；以 及 (b) 评价所述前列腺细胞中的SPOP底物水平或其活性的下调。27. 如权利要求26所述的方法，其中所述前列腺细胞是前列腺癌细胞。28. 如权利要求26所述的方法，其中所述前列腺细胞是培养的细胞。29. 如权利要求26所述的方法，其中所述前列腺细胞是雄激素敏感的细胞。30. 如权利要求26所述的方法，其中所述前列腺细胞是LNCaP细胞。31. 如权利要求26所述的方法，其中所述底物选自SRCl、SRC2、SRC3、Daxx、Gli、AWP-l、 滞蛋白-4B和滞蛋白-7。32. 如权利要求31所述的方法，其中所述底物是SRC蛋白。33. 如权利要求32所述的方法，其中所述SRC蛋白是SRC3蛋白。34. 如权利要求26-33中任一项所述的方法，其中所述下调通过所述细胞中的所述底物 水平的降低来呈现。35. 如权利要求34所述的方法，其中所述表达水平包括蛋白质表达水平。36. 如权利要求26-33中任一项所述的方法，其中所述下调通过所述细胞的胞质部分中 所述底物的表达水平的降低来呈现。37. -种药剂盒，其包含： (a) 药物组合物的至少一个单位剂型，该药物组合物包含治疗有效量的来他替尼或其 药学上有效的盐；以及 (b) 关于实施前述权利要求中任一项所述的方法的说明。38. 如权利要求1所述的方法，其中所述底物是DEK。39. 如权利要求38所述的方法，其中所述下调包括降低所述SPOP底物或所述底物的下 游靶标的水平和/或活性。40. 如权利要求39所述的方法，其中所述下游靶标是PRK-1。41. 如权利要求39所述的方法，其中所述下调包括降低所述SPOP底物的水平和/或活 性。42. 如权利要求39所述的方法，其中所述下调通过来源于所述受试者的细胞中所述下 游靶标活性的降低来呈现。43. 如权利要求39所述的方法，其中所述下调通过来源于所述受试者的细胞中所述底 物水平的降低来呈现。44. 如权利要求38-43中任一项所述的方法，其中所述水平包括表达水平。45. 如权利要求44所述的方法，其中所述表达水平是蛋白质表达水平。46. 如权利要求44所述的方法，其中所述表达水平通过所述SPOP底物的转录物的水平 来呈现。47. 如权利要求38-46中任一项所述的方法，其中所述受试者呈现出疾病的症状。48. 如权利要求47所述的方法，其中所述疾病是前列腺疾病、乳房疾病或胃病。49. 如权利要求47所述的方法，其中所述疾病是前列腺肿瘤、乳房肿瘤或胃肿瘤。50. 如权利要求14所述的方法，其中所述疾病是乳房疾病或胃病。51. 如权利要求14所述的方法，其中所述疾病是乳房肿瘤或胃肿瘤。52. -种治疗有需要的受试者的乳房肿瘤或胃肿瘤的方法，其包括： (a) 向所述受试者施用第一剂量的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的来他 替尼或其药学上可接受的盐； (b) 确定来源于所述受试者的生物样品中的SPOP底物水平或其活性；以及 (c) 如果与未施用包含治疗有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物的 对照受试者相比，所述底物水平或其活性降低，则施用额外剂量的所述药物组合物。53. -种治疗受试者的乳房肿瘤或胃肿瘤的方法，其包括向所述受试者施用包含治疗 有效量的来他替尼或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中与对照受试者相比，所述受 试者展现出异常高的SPOP底物水平或其活性。54. 如权利要求53所述的方法，其中所述异常高的水平通过所述肿瘤中SPOP突变的存 在来呈现。55. 如权利要求54所述的方法，其中所述突变导致所述SPOP氨基酸序列的位置31-161 之间的氨基酸序列改变。56. 如权利要求54所述的方法，其中所述氨基酸序列改变包括氨基酸置换。57. 如权利要求54所述的方法，其中所述突变导致在所述SPOP氨基酸序列的Y87、F102、 5119小125、1(129、1131、？133和/或1(134处的置换。58. 如权利要求38-57中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。59. 如权利要求17或49或51或52或53所述的方法，其中所述肿瘤是雄激素敏感的。60. 如权利要求17或49或51或52或53所述的方法，其中所述肿瘤是雄激素不敏感的。61. 如权利要求16或17或18或49或51或52或53所述的方法，其中所述肿瘤是雌激素敏 感的。62. 如权利要求16或17或18或49或51或52或53所述的方法，其中所述肿瘤是雌激素不 敏感的。63. -种下调乳房细胞或胃细胞中的SPOP底物水平或其活性的方法，其包括： (a) 向所述细胞施用有效量的来他替尼，由此下调所述细胞中的SPOP底物或其活性；以 及 (b) 评价所述乳房细胞或胃细胞中的SPOP底物水平或其活性的下调。64. 如权利要求63所述的方法，其中所述乳房细胞或胃细胞是乳腺癌细胞或胃癌细胞。65. 如权利要求63所述的方法，其中所述乳房细胞或胃细胞是培养的细胞。66. 如权利要求63所述的方法，其中所述乳房细胞或胃细胞是雄激素敏感的细胞。67. 如权利要求26或63所述的方法，其中所述细胞是雌激素敏感的细胞。68. 如权利要求63所述的方法，其中所述乳房细胞是MCF7细胞。69. 如权利要求26或63所述的方法，其中所述底物是DEK。70. 如权利要求63-69中任一项所述的方法，其中所述下调通过所述细胞中的所述底物 水平的降低来呈现。71. 如权利要求70所述的方法，其中所述表达水平包括蛋白质表达水平。72. 如权利要求63-69中任一项所述的方法，其中所述下调通过所述细胞的胞质部分中 所述底物的表达水平的降低来呈现。73. -种药剂盒，其包含： (a) 药物组合物的至少一个单位剂型，该药物组合物包含治疗有效量的来他替尼或其 药学上有效的盐；以及 (b) 关于实施权利要求38-72中任一项所述的方法的说明。
【文档编号】A61K31/00GK106029905SQ201480074107
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年12月3日
【发明人】艾伦·J·李, 詹森·J·李, 戴维·M·卢, 瑞民·李
【申请人】塞雷斯特拉生命科学有限责任公司