二苯甲酮‐二酮酸类化合物，组合物及用图

二苯甲酮‐二酮酸类化合物，组合物及用图
【专利摘要】本发明涉及二苯甲酮‐二酮酸类化合物，组合物及用途，所述二苯甲酮‐二酮类化合物具体为通式(Ⅰ)所示的化合物，通式(Ⅰ)的各取代基如说明书中的定义。本发明还涉及所述通式(Ⅰ)所示的化合物或其药学上可接受的盐或所述的药物组合物在制备用于抑制艾滋病病毒的药物中的用途。
【专利说明】
二苯甲酮-二酮酸类化合物，组合物及用途
技术领域
[0001] 本发明涉及二苯甲酮-二酮酸类化合物，组合物及用途，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)导致的传染性疾病。 针对HIV复制过程中的各个环节，如:阻断病毒的吸附和穿入、阻断基因组RNA的逆转录和整 合、阻断调控基因的早期表达、阻断结构基因和酶类基因的晚期表达、阻断病毒粒子的装配 和出芽释放等，均非常有效的抑制了HIV病毒。然而，HIV病毒易变异的特性使得现有药物很 容易失去抗耐药性，因此，应用新型药物设计策略研发更加高效、低毒且经济适用的抗AIDS 药物仍然是此领域面临的难题。
[0003]在临床上同时或序贯联合应用1种蛋白酶抑制剂(PI)和1种非核苷类逆转录酶抑 制剂(NNRTI)或2种核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)药物，对持续抑制病毒复制具有相加或协 同作用，能延缓或阻止因 HIV变异产生的耐药性，降低艾滋病的死亡率（Michaels，et al.N.Engl.J.Med.，1998,339,405-406)这种"鸡尾酒疗法"（cocktail)和"高效抗反转录病 毒疗法"（HAART)提示双靶点或多靶点药物设计策略将在抑制HIV病毒中表现出更明显的优 越性。在HIV的复制周期中，逆转录酶(Reverse transcriptase，RT)依靠其RNA/DNA依赖性 DNA聚合酶活性和RNase Η活性将原病毒RNA逆转录为双链DNA，整合酶（Integrase，IN)将此 双链DNA由胞浆中整合到宿主细胞基因组中，两个过程对病毒的增殖至关重要，阻断其中任 何一个或两个环节均能有效阻止HIV病毒的复制，以RT和IN为双作用靶点已成为设计开发 新型高效抗HIV药物的重要途径之一。
[0004] 2007年，Vince课题组（Vince et al.J.Med.Chem. ,2007,50,3416-3419.)首次采 用采用骈合原理，将非核苷类逆转录酶抑制剂TNK651与二酮酸结构的整合酶抑制剂叠加获 得了一类RT和IN双效抑制剂。此类分子对逆转录酶的抑制活性IC 5Q为0.009-0.23μΜ，对整合 酶的抑制活性IC5〇为1.8-7.7μΜ，且能有效抑制HIV对ΜΤ-4细胞感染，EC 5〇值高达0.01-0.052 μΜ。随后，他们将TNK651与整合酶抑制剂elvitegravir骈合获得了另一类双效抑制剂 (Vince et al · Bioorg .Med· Chem· Lett ·，2008，18，1293-1296 ·)，其对逆转录酶和整合酶均 表现出良好的抑制作用，抑制HIV-1细胞水平的活性也达0.22-2.2μΜ。最近，Vince等将 NNRTI类上市药物Delavirdine的C-5位的甲磺酰胺基团以二酮酸结构替代（Vince et al. Bioorg.Med. Chem.，2008，16，3587-3595.)，设计出一类新的双效抑制剂，此类化合物对 逆转录酶的抑制活性IC5Q为0.005-1. ΙμΜ，对整合酶抑制活性为3.9-1 ΙμΜ，在CEM细胞中抑制 HIV-1细胞水平的活性达到微摩尔，EC5Q为0.52-0.98μΜ。
[0005] 本发明以二苯甲酮类逆转录酶抑制剂和二酮酸类整合酶抑制剂为基本骨架，基于 药物与靶点的作用机制，设计了一类新型兼具二者骨架特征的二苯甲酮基二酮酸类化合物 (I)。计算机模拟技术发现，此分子骨架中的三芳环组成的二苯甲酮母体结构可与RT酶疏水 性结合"空腔"形成紧密结合，表现出高效的抑制RT酶活性，而新引入的β_二酮酸结构则通 过与Mg2+形成配位显示出抗HIV IN酶活性，预示此类分子具有双靶点抑制效果。初步抗HIV 活性测试进一步揭示；此类分子不仅表现出强的抗HIV ITT酶活性（纳摩尔浓度），且对HIV IN酶的抑制活性也达到微摩尔浓度。显然，此类分子有着独特的作用机制，对抑制HIV病毒 有较大的应用价值。

【发明内容】

[0006] -方面，本发明提供一种通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，所述通式 (I)所示的化合物具有如下结构：
[0008] 其中，
[0009] R1为独立自选氢，氯，溴，氟，烷基，C3-7环烷基，氰基或二者组合;优选地，该Cm 烷基为叔丁基；
[0010] R2为独立选自氢，氯，溴，氟，α-8烷氧基，氰基，三氟甲基或二者组合；
[0011] R3为独立选自氢，氯，溴，氟，烷氧基，氰基，三氟甲基或二者组合；
[0012] m= 1-3 ；
[0013] n = 1~2〇
[0014] 作为本发明的一种【具体实施方式】，本发明所述通式（I)所示的化合物具有（1-1)~ (1-26)所示的结构：


[0018]前述(1-1)~（1-26)所示的结构分别具有如下名称：
[0019] 4-(4-( (2-(2,4_二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基）苯基)-2,4_二酮酸（I-1)；
[0020] 4-(4-( (2-(4-叔丁基苯甲酰基）-4-氯苯氧基）乙酰氨基）苯基）-2,4_二酮酸（I-2)；
[0021] 4-(4-((2-苯甲酰基-5-甲氧基苯氧基)乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸(1-3);
[0022] 4-(4-((2-(3-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（1-4); [0023] 4-(4-((2-(3,5_二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（I- 5) ；
[0024] 4-(4-( (2-(3,5_二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基）苯基)-2,4_二酮酸（I- 6) ；
[0025] 4-(4-( (2-(2,3_二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基）苯基)-2,4_二酮酸（I- 7) ；
[0026] 4-(4-( (2-(3-氯-5-溴苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（I- 8) ；
[0027] 4_(4_( (2-苯甲酰基-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮酸（1-9);
[0028] 4-(4-((2-(2-辛氧基苯甲酰基)苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（1-10); [0029] 4-(3-甲基-4-((2-(2,4-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮 酸(1-11);
[0030] 4-(3-甲基-4-( (2-(4-叔丁基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮 酸(1-12);
[0031] 4-(3-甲基-4-( (2-苯甲酰基-5-甲氧基苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（I- 13)；
[0032] 4-(3-甲基-4-( (2-(3-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸 (1-14)；
[0033] 4-(3-甲基-4-( (2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二 酮酸(1-15);
[0034] 4- (3-甲基-4- ((2- (3，5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮 酸(1-16);
[0035] 4- (3-甲基-4- ((2- (2，3-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮 酸(1-17);
[0036] 4-(3-甲基-4-((2-(3-氯-5-溴苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基）苯基)-2,4_二 酮酸（1-18);
[0037] 4-(3-甲基-4-((2-苯甲酰基-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（1-19); [0038] 4-(3-甲基-4-( (2-苯甲酰基-5-辛氧基苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸（I-20)；
[0039 ] 4- (3-氯-4- ((2- (3，5-二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮 酸(1-21);
[0040] 4-(3-氯-4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸 (1-22);
[0041 ] 4- (3-氯-4- ((2- (3-甲基苯甲酰基)-4，5-二氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮 酸(1-23);
[0042] 4-(3-氯-4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4,5_二氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二 酮酸(1-24);
[0043] 4-(3-氟-4-((2-(3,5-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸 (1-25);
[0044] 4-(3-氟-4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸 (1-26)〇
[0045] 另一方面，本发明提供所述通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐的制备 方法，其中，通式(I)所示的化合物的制备方法具体见方程式一：
[0046] 方程式一：
[0048] 在碱的作用下，4-氨基苯基二酮酸（Ι-A)和二苯甲酮基乙酰氯（I-B)反应，结束后， 蒸除溶剂，加一定体积的水，析出固体，抽滤，水洗，甲醇重结晶，得二苯甲酮-二酮酯类似物 (I-C);化合物ι-c碱的作用下水解，酸化，即得目标分子。
[0049] 作为本发明所述方法的【具体实施方式】，其中，所述碱为无机碱或有机碱，所述无机 碱包括碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠中的一种或多种，优选碳酸氢钠和/或碳酸钾； 所述有机碱包括三乙胺、吡啶和二异丙基乙基胺中的一种或多种，优选三乙胺;所用的溶剂 为水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、N，N_二甲基甲酰胺、N，N_二甲基乙酰胺和丙酮中的一种或多 种;优选水和/或乙腈;反应温度为25 °C~120 °C，优选50-60 °C。
[0050] 再一方面，本发明提供一种药物组合物，其含有有效剂量的本发明所述通式（I)所 示的化合物或其药学上可接受的盐，及药用载体，所述药物组合物例如为脂质体或纳米粒。
[0051] 再一方面，本发明提供所述通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或所述 药物组合物在制备用于抑制艾滋病病毒的药物中的用途。
[0052] 作为本发明所述的用途的【具体实施方式】，其中，所述用于抑制艾滋病病毒是通过 同时作用HI V-1逆转录酶和HI V-1整合酶实现的。
[0053] 本发明所述化合物由于它们在药物中的可能用途，式（I)化合物的盐优选药物可 接受的盐。本发明的化合物为酸，其中所需盐形式可以通过本领域已知的合适方法制备，包 括用无机碱处理游离酸，所述无机碱例如碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水等、 或用有机碱处理游离酸、所述有机碱例如水杨酸钠、青霉素 G钾、对氨基水杨酸钙药学上可 接受的盐的实施例包括钾盐、钠盐、钙盐。也可以和有机碱或碱性氨基酸成盐。
[0054]本发明的药物组合物通常含有一种本发明化合物。然而，在一些实施方案中，本发 明的药物组合物含有超过一种本发明的化合物。另外，本发明的药物组合物还可任选包括 一种或多种其它药学活性化合物。
[0055]本发明还提供所述二苯甲酮-二酮酸类化合物，组合物通过抑制HIV-1逆转录酶 (Reverse奸3118(31'1口七386，1?1')和!11￥-1整合酶（11^68從86，預)进而抑制!11￥-1病毒的用途。 具体地，该用途为用于抑制HIV-1逆转录酶和HIV-1整合酶靶点，进而抑制HIV病毒的复制和 传播，所述的HIV病毒指人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，即艾滋 病(AIDS，获得性免疫缺陷综合征)病毒，该病毒通过破坏人体的T淋巴细胞，进而阻断细胞 免疫和体液免疫过程，导致免疫系统瘫痪，从而致使各种疾病在人体内蔓延。
【具体实施方式】
[0056] 以下结合具体实施例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发 明的范围。
[0057] 本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或 商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
[0058]实施例1目标分子的制备
[0059]薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使 用的娃胺板采用的规格是〇 . 15mm-0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm〇
[0060]本发明使用的原料主要购自可购买自国药集团化学试剂有限公司，北京偶合科技 有限公司、阿拉丁化学试剂有限公司、达瑞化学品等公司。
[0061 ]实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
[0062] 实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20°C_30°C。
[0063] 本发明采用的技术方案如下：
[0064] 方程式一：
[0066] 制备方法一
[0067]关键中间体Ι-C的制备：
[0068]将1-六(0.161111]1〇1)与碳酸氢钠（3.368,0.4〇1]11]1〇1)混合，溶于乙腈（5〇1111^)，加入1-13 (0.20mmo 1)，升温至60°C，反应4小时，反应结束后，倒入水中，抽滤，水洗，甲醇重结晶，得酯 类中间体I-C，未纯化直接下一步反应。
[0069]目标分子(I)的制备：
[0070] 将I-C(O.Olmmol)溶于甲醇-四氢呋喃（20mL，20mL)溶液中，然后慢慢加入氢氧化 钠水溶液(40mL，lmol/L)，渐渐升至室温反应30min后，加水(50mL)稀释，用浓盐酸调节溶液 pH至2-3,析出固体，抽滤，烘干，甲醇重结晶即得目标分子(I)，白色固体，收率31-57%。
[0071] 制备方法二
[0072] 关键中间体Ι-C的制备：
[0073]将1-六(0.161111]1〇1)与碳酸氢钠（3.368,0.4〇1]11]1〇1)混合，溶于乙腈（5〇1111^)，加入1-13 (0.20mmo 1)，升温至100°C，反应4小时，反应结束后，倒入水中，抽滤，水洗，甲醇重结晶，得 酯类中间体I-C，未纯化直接下一步反应。
[0074]目标分子(I)的制备：
[0075] 将I-C(0.01 mmo 1)溶于甲醇(40mL)溶液中，然后慢慢加入氢氧化钠水溶液(40mL， lmol/L)，渐渐升至室温反应30min后，加水(50mL)稀释，用浓盐酸调节溶液pH至2-3,析出固 体，抽滤，烘干，甲醇重结晶即得目标分子(I)，白色固体，收率11-32%。
[0076] 制备方法三
[0077]将Ι_Α(0 · 16mmol)与碳酸氢钠（3 · 36g, 0 · 40mmol)混合，溶于水（30mL)，加入I-B (0.20mmo 1)，升温至100°C，反应4小时，反应结束后，倒入水中，抽滤，水洗，甲醇重结晶，得 酯类中间体I-C，未纯化直接下一步反应。
[0078]目标分子(I)的制备：
[0079]将I-C(0.01 mmo 1)溶于四氢呋喃（40mL)溶液中，然后慢慢加入氢氧化钠水溶液 (40mL，lmol/L)，渐渐升至室温反应30min后，加水(50mL)稀释，用浓盐酸调节溶液pH至2-3， 析出固体，抽滤，烘干，甲醇重结晶即得目标分子(I)，白色固体，收率22-41%。
[0080]根据以上制备方法，获得了本发明中所述通式（I)的系列化合物：
[0081 ] 4-(4-((2-(2,4-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基)乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮酸(1-1)
[0082] 1.1.收率：66.1%;熔点：132.2-134.1。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.84(m,10H,PhH),8.0(br,ΙΗ,ΝΗ)；11.0(s,ΙΗ,ΟΗ)；MS(ESF) m/z 547.00[M-H] ；Anal.calcd for C25H16CI3NO7:C 54.72,H 2.94,Cl 19.38,N 2.55,0 20.41,found:C 54.70,H 2.93,Cl 19.37,N 2.56,0 20.44.
[0083] 4-( 4-( (2-( 4-叔丁基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮酸（1-2)
[0084] 1.2.收率：57.8% ;熔点：154·3-155·%~ JH 匪R(DMS〇-d6)S(ppm): 1.34(s，9H， CH3) ,4.78(s,2H,CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 1 lH,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, lH，0H);MS(ESI-)m/z 535.14[M-H]-;Anal.calcd for C29H26ClN〇7:C，64.99;H，4.89;N, 2.61；Cl,6.61；0,20.90,found:C 65.00,H 4.89,N 2.59,Cl 6.64,0 20.88.
[0085] 4-(4-((2-苯甲酰基-5-甲氧基苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（1-3)
[0086] 1.3.收率：61.3% ;熔点：213.3-214·6Γ ;4 NMR(DMS〇-d6)S(ppm): 3.73(s，3H, CH3)，4.78(s，2H，CH2)，4.88(s，2H，CH 2) ,6.38-7.84(m，12H，PhH)，8.0(br，ΙΗ,ΝΗ)，11.0(s， lH，0H);MS(ESI - )m/z 475.13[M-H] - ;Anal.calcd for C26H2iN〇8:C 65·68，Η4·45，Ν 2.95,0 26.92,found:C 65.66,H 4.46,N 2.98,0 26.90.
[0087] 4-(4-((2-(3-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（1-4)
[0088] 1.4.收率：68.2%;熔点：231.卜232.7。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):2.35(8,3!1， CH3) ,4.78(s,2H,CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 1 lH,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/z 493.09[Μ-Η] ^ ； Anal. calcd for C26H20CINO7: C63.23 ,Η 4.08,Cl 7.18,N 2.84,0 22.68,found:C 63.24,H 4.10,Cl 7.18,N 2.83,0 22.65,
[0089] 4-(4-((2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（I-5)
[0090] 收率：69.2% ;熔点：125.9-126.81^? 匪R(DMS〇-d6)S(ppm): 2.35(s，6H，CH3)， 4.78(s,2H,CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m,10H,PhH) ,8.0(br,lH,NH) ,11.0(s,1H, 0H);MS(ESI - )m/z 507.11[M-H] -;Anal.calcd for C27H22ClN〇7:C，63.85;H 4.37，C1 6.98， N 2.76,0 22.05,found:C,63.83；H 4.35,Cl 6.99,N 2.75,0 22.08.
[0091] 4-(4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基)乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸(1-6)
[0092] 1.5.收率：71.1%;熔点：201.卜202.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 10H,PhH) ,8.0(s, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(br, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESF) m/z 547.00[M-H] ；Anal.calcd for C25H16CI3NO7:C 54.72,H 2.94,Cl 19.38,N 2.55,0 20.41, found:C 54.71,H 2.95,Cl 19.34,N 2.57,0 20.43.
[0093] 4-(4-((2-(2,3-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基)乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸(1-7)
[0094] 1.6.收率：63.3%;熔点：173.卜175.2。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 10H,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESF) m/z 547.00[M-H]；Anal.calcd for C25H16CI3NO7: C 54.72,H 2.94,Cl 19.38 ,N2.55,0 20.41, found:C 54.72,H 2.96,Cl 19.36,N 2.53,0 20.43.
[0095] 4-(4-( (2-(3-氯-5-溴苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（I- 8)
[0096] 1.7.收率：74.3%;熔点：142.3-144.1。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 10H,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESF) m/z 590.95[M-H]-;Anal.calcd for C25Hi6BrCl2N〇7:C 50·62，Η 2.72，Brl3.47,Cl 11.95, N 2.36,0 18.88,found:C 50.60,H 2.75,Br 13.47,Cl 11.96,N 2.33,018.89.
[0097] 4-(4-((2-苯甲酰基-4-氯苯氧基)乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸(1-9)
[0098] 1.8.收率：74.0%;熔点：192.3-193.5。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.84(m, 12H,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESF) m/z 479.08[M-H] ；Anal.calcd for C25H18CINO7:C 62.57,H 3.78,Cl 7.39,N 2.92,0 23.34,found:C 62.55,H 3.78,Cl 7.39,N 2.93,0 23.35.
[0099] 4-(4-( (2-(2-辛氧基苯甲酰基)苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（1-10)
[0100] 1.9.收率：53.9%;熔点：243.卜244.6。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):0.96(七，3!1， CH3)，1.29(m，8H，CH2)，1.33(m，2H，CH2)，1.71(m，2H，CH2),3.94(t，2H，CH 2),4.78(s，2H， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.87-7.84(m, 12H,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESF) m/z 573.24[M-H] ；Anal.calcd for CssHssNOsiC 69.10,H 6.15,N2.44,0 22.31 ,found:C 69.09,H 6.13,N 2.47,0 22.31.
[0101] 1.10.4-(3-甲基-4-((2-(2,4-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2, 4_ 二酮酸(1-11)
[0102] 1.11.收率：66.1 % ;熔点：132.2-134. ΙΓ;1!! NMR(DMS0-d6)S(ppm):2.35(s，3H， CH3) ,4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.65(m,9H,PhH) ,8.0(br,lH,NH)；11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/z 547.00[M-H]^ ； Anal. calcd for C26H18CI3NO7: C 55.49 ,H3.22,Cl 18.90,N 2.49,0 19.90,found:C 55.45,H 3.23,Cl 19.92,N 2.51,0 19.89.
[0103] 4-(3-甲基-4-( (2-(4-叔丁基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4_二酮 酸(1-12)
[0104] 1.12.收率：57.8%;熔点：154.3-155.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):1.34(8,9!1， CH3),2.35(s,3H,CH3) ,4.78(s, 2H,CH2) ,4.88(s, 2H,CH2) ,6.81-7.65(m, 10H,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ) ,11.0(s,lH,0H)； [M-H]；Anal.calcd for C30H28CINO7: C,65.51 ；H, 5.13 ；N, 2.55 ； Cl,6.45；0,20.36,found:C 65.50,H 5.11,N 2.57,Cl 6.45,0 20.37.
[0105] 4-(3-甲基-4-( (2-苯甲酰基-5-甲氧基苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（I-13)
[0106] 1.13.收率：61.3% ;熔点：213.3-214·6Γ ;4 NMR(DMS〇-d6)S(ppm) :2.35(s,3H, CH3),3.73(s,3H,CH3) ,4.78(s, 2H,CH2) ,4.88(s, 2H,CH2) ,6.38-7.70(m, 1 lH,PhH) ,8.0(br, lH，NH)，11.0(s，lH，0H);MS(ESI - )m/z 475.13[M-H] - ;Anal.calcd for C27H23N〇8:C 66.25， H 4.74,N 2.86,0 26.15,found:C 66.24,H 4.74,N 2.87,0 26.15.
[0107] 4-(3-甲基-4-( (2-(3-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸 (1-14)
[0108] 1.14.收率：68.2%;熔点：231.卜232.7。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):2.35(8,3!1， CH3) ,4.78(s,2H,CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.65(m, 1 lH,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, 1H,0H) ；MS(ESDm/z 493.09[M-H] ^ ； Anal. calcd for C27H22CINO7: C63.85 ,H 4.37,Cl 6.98,N 2.76,0 22.05,found:C 63.87,H 4.35,Cl 6.99,N 2.77,0 22.03,
[0109] 4-(3-甲基-4-( (2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二 酮酸(1-15)
[0110] 收率：69.2% ;熔点：125.9-126.81^? 匪R(DMS〇-d6)S(ppm): 2.35(s，9H，CH3)， 4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.65(m,9H,PhH),8.0(br,lH,NH),11.0(s,lH,0H)； MS(ESF)m/z 507.11[M-H]；Anal.calcd for C28H24CINO7: C, 64.43 ； H4.63 , Cl 6.79,N 2.68,0 21.46,found:C,64.44；H 4.66,Cl 6.74,N 2.67,0 21.48.
[0111] 4-(3-甲基-4-( (2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮 酸(1-16)
[0112] 1.15.收率：71.1%;熔点：201.卜202.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):2.35(8,3!1， CH3) ,4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.65(m,9H,PhH) ,8.0(s,1H,NH) ,11.0(br, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/z 547.00[Μ-Η]_ ； Anal. calcd for C26H18CI3NO7: C 55.49,H 3.22,Cl 18.90, N 2.49,0 19.90,found:C 55.47,H 2.3.23,Cl 18.89,N 2.48,0 19.93.
[0113] 4-(3-甲基-4-( (2-(2,3-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮 酸(1-17)
[0114] 1.16.收率：63.3%;熔点：173.卜175.2。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):2.35(8,3!1， CH3) ,4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.65(m,9H,PhH) ,8.0(br,lH,NH),11.0(s, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/z 547.00[Μ-Η]_ ； Anal. calcd for C26H18CI3NO7: C 55.49,H 3.22,Cl 18.90, N 2.49,0 19.90,found:C 55.51,H 3.24,Cl 18.88,N 2.49,0 19.88.
[0115] 4-(3-甲基-4-((2-(3-氯-5-溴苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二 酮酸（1-18)
[0116] 1.17.收率：74.3% ;熔点：142.3-144.1Γ ;4 NMR(DMS〇-d6)S(ppm) :2.35(s,3H, CH3) ,4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.75(m,9H,PhH) ,8.0(br,lH,NH),11.0(s, lH，OH);MS(ESI - )m/z 590.95[M-H] -;Anal.calcd for C26Hi8BrCl2N〇7:C51.43，H 2.99，Br 13.16,Cl 11.68,N 2.31,0 18.44,found:C 51.40,H 2.98,Br 13.15,C111,74,N 2.33,0 18.43.
[0117] 4-(3-甲基-4-((2-苯甲酰基-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（1-19)
[0118] 1.18.收率：74.0% ;熔点：192.3-193.5Γ ;4 NMR(DMS〇-d6)S(ppm) :2.35(s,3H, CH3) ,4.78(s,2H,CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.70(m, 1 lH,PhH) ,8.0(br, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(s, 1H,0H) ；MS(ESDm/z 479.08[M-H]^ ；Anal. calcd for C26H20CINO7: C 63.23 ,H4.08 ,Cl 7.18,N 2.84,0 22.68,found:C 63.21,H 4.10,Cl 7.19,N 2.86,0 22.65.
[0119] 4-(3-甲基-4-( (2-苯甲酰基-5-辛氧基苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（I-20)
[0120] 收率：53.9%;熔点：243.卜244.6。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):0.96(七，3!1，〇13)， 1.29(m，8H，CH2)，1.33(m，2H，CH2)，1.71(m，2H，CH2)，2.35(s，3H，CH3)，3.94(t，2H，CH2)，4.78 (s,2H,CH 2) ,4.88(s,2H,CH2),6.87-7.70(m,llH,PhH),8.0(br,lH,NH),11.0(s,lH,0H)；MS (ESI-)m/z 573.24[M-H]-;Anal.calcd for C34H37N〇8:C 69·49，Η6·35，Ν 2.38,0 21.78， found:C 69.49,H 6.37,N 2.37,0 21.77.
[0121] 4-(3-氯-4-((2-(3,5-二甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮 酸(1-21)
[0122] 收率：69.2% ;熔点：125.9-126.81^? 匪R(DMS〇-d6)S(ppm): 2.35(s，6H，CH3)， 4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.85(m,9H,PhH),8.0(br,lH,NH),11.0(s,lH,0H)； MS(ESF)m/z 507. ll[M-H]；Anal.calcd for C27H21CI2NO7: C, 59.79 ；H3.90 ,C1 13.07,N 2.58,0 20.65,found:C,59.77；H 3.90,Cl 13.09,N 2.58,0 20.65.
[0123] 4-(3-氯-4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸 (1-22)
[0124] 1.19.收率：71.1%;熔点：201.卜202.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.85(m,9H,PhH) ,8.0(s, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(br, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/ z 547.00[M-H] ；Anal.calcd for C25H15CI4NO7:C 51.49,H 2.59,Cl 24.32,N 2.40,0 19.20,found:C 51.50,H 2.60,Cl 24.30,N 2.41,0 19.19.
[0125] 4- (3-氯-4- ((2- (3-甲基苯甲酰基)-4，5-二氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2，4-二酮 酸(1-23)
[0126] 1.20.收率：68.2%;熔点：231.卜232.7。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):2.35(8,3!1， CH3)，4.78(s，2H，CH2)，4.88(s，2H，CH2) ,6.82-7.85(m，9H，PhH)，8.0(br，ΙΗ,ΝΗ)，11.0(s， ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/z 493.09[M-H]_ ； Anal. calcd for C26H18CI3NO7: C 55.49,H 3.22,Cl 18.90,N 2.49,0 19.90,found:C 55.50,H 3.21,Cl 18.90,N 2.45,0 19.94,
[0127] 4-(3-氯-4-((2-(3,5-二氯苯甲酰基)-4,5-二氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二 酮酸(1-24)
[0128] 1.21.收率：71.1%;熔点：201.卜202.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.82-7.85(m,8H,PhH) ,8.0(s, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(br, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/ ζ 547.00[M-H] ；Anal.calcd for C25H14CI5NO7:C 48.61,Η 2.28,Cl 28.70,Ν 2.27,0 18.13,found:C 48.63,Η 2.30,Cl 28.69,N 2.25,0 18.12.
[0129] 4-(3-氟-4-((2-(3,5-甲基苯甲酰基)-4-氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)- 2,4-二酮酸 (1-25)
[0130] 收率：69.2% ;熔点：125.9-126.81^? 匪R(DMS〇-d6)S(ppm): 2.35(s，6H，CH3)， 4.78(s,2H,CH2),4.88(s,2H,CH2),6.81-7.73(m,9H,PhH),8.0(br,lH,NH),11.0(s,lH,0H)； MS(ESF)m/z 507.11[M-H]；Anal.calcd for C27H21CIFNO7: C ,61.66 ；H4.02 , Cl 6.74,F 3.61,N 2.66,0 21.30,found:C,61,67；H 4.05,Cl 6.70,F 3.61,N 2.65,021.31.
[0131] 1.22. 4-(3-氣_4_((2-(3,5-二氯苯甲酰基)_4_氯苯氧基）乙酰氨基)苯基)-2,4-二酮酸（1-26)
[0132] 1.23.收率：71.1%;熔点：201.卜202.9。(：； 1!1匪1?(0150-(16)3(??111):4.78(8,2!1， CH2) ,4.88(s,2H,CH2) ,6.81-7.73(m,9H,PhH) ,8.0(s, ΙΗ,ΝΗ), 11.0(br, ΙΗ,ΟΗ) ；MS(ESDm/ z 547.00[M-H] ；Anal.calcd for C25H15CI3FNO7:C 52.98,H 2.67,Cl 18.77,F 3.35,N 2.47,0 19.76,found:C 53.00,H 2.68,Cl 18.75,F 3.34,N 2.45,0 19.78.
[0133] 目标分子成盐的方法有机碱盐的制备方法:取目标分子（lmmol)溶于lOmL无水甲 醇中，冰浴下，慢慢滴加有机碱的（lmmol)无水甲醇溶液(5mL)，滴加完毕，于此温度下搅拌 30分钟，然后常温蒸除甲醇，即得目标分子的有机碱盐。通过该方法制备了化合物1-4的钾 盐（1-4-1 )、钠盐（1-4-2)、钙盐（1-4-3)、氨基酸盐（1-4-4)
[0134] 无机碱盐的制备方法:取目标分子（lmmol)溶于10mL无水甲醇中，冰浴下，慢慢滴 加无机碱（lmmol)的干燥乙醚（5mL)，滴加完毕，于此温度下搅拌30分钟，然后常温蒸除溶 剂，即得目标分子的无机碱盐。通过该方法制备了化合物1-4的钾盐(1-4-5)、钠盐（1-4-6)、 钙盐（1-4-7)。
[0135] 目标分子组合物的制备
[0136] 取等摩尔量（lmmol)的上述两个目标分子于无水甲醇中（5mL)，室温搅拌10分钟， 常温蒸除溶剂，即得目标分子的组合物。通过该方法制备了（1-4)-(1-7)、（1-4)-(1-9)、（I-3)-(1-7)三个组合物。
[0137] 实施例2目标分子生物活性评价
[0138] 1、HIV-1逆转录酶水平活性
[0139] 抑制HIV RT酶活性检测采用以地拉夫定(delavirdine)为参照物的商业测试工具 箱。抑制IN酶活性检测是采用一种非放射性的类似于ELISA方法。供体DNA是由生工合成的 两条单链寡核昔酸链(VU5BR: 5 ' -生物素-GTGTGGAAAATCTCTAGCAGT-3 '，VU5:5 ' -ACTGCTAGA GATTTTCCACAC-3'）退火而成。VU5BR/VU5按l:l·2混合于TEN缓冲液（10mMTris-HClpH 8.0，lmM EDTA pH 8.0,0.1M NaCl)中，80°C加热3min，慢慢降至室温，存放在4°C冰箱。将包 被好的96孔板用蒸馏水洗三次，2.5 % BSA 37 °C封闭3h，0.1 % PBST洗三次。每孔加目标分子 (20mM HEPES pH 7.5,l〇mM MnC12,l〇mM MgC12,30mM NaCl,l〇mM DTT,0.05%NP-40,1 00μ g/mL BSA, 5nM VU5/VU5BR，2 · 5-80nM不同浓度的整合酶）100yL; 37 °C孵育 lh, 0 · 1 % PBST洗 三次，每孔加 l〇〇yL链亲和素标记的辣根过氧化物酶（1:3000，0.1 %BSA+0.025 %PBST稀释） 溶液，37°C孵育lh』. 1%PBST洗三次，加 TMB lyL，37°C放置20~30min，加50μ!7孔2M H2S04，450nm波长下检测吸光度。
[0141] 2、HIV_1整合酶水平活性
[0142] 采用HIV整合酶ELISA法进行测试，具体为：将供体底物包被实验板，洗板后加入： 反应缓冲液、不同浓度药液和标定HI V整合酶，37 °C反应1小时。加入靶底物，混合，37 °C反应 1小时。洗板。加入BSA(牛血清蛋白），室温30分钟。洗板。加入碱性磷酸酶标记的亲和素，室 温反应1小时。洗板。加入显色底物30分钟，加0 · Imol/LNaOH终止显色反应，用酶标仪405nm 测定0D值。同时设酶对照和空白对照，计算IC50。
[0143] 3、抑制HIV-1病毒细胞水平活性测试
[0144] 抗HIV细胞活性的测定是采用MTT法，将目标分子用DMS0或水溶解后用磷酸盐缓冲 NaCl水溶解稀释，将3X105MT-4细胞用100yL各化合物不同浓度溶液在37°C预培养lh。然后 向该混合物中加入l〇〇yL适当的病毒稀释液，将细胞于37°C培养lh。洗三次后，将细胞再次 悬浮于含有或不含化合物的培养介质中。接着将细胞在5%的C0 2氛围中，于37°C再培养7 天，并于感染后第三天用含有或不含化合物的培养介质替换补充液。每种培养都重复三次， 并对病毒的细胞病变作用每天都用反向光学显微镜监控。
[0145] 测试结果
[0146] 下表1显示本发明中化合物在抑制HIV-IRI1酶、HIV-1IN酶及HIV-1IIIB细胞的活 性。活性指定为"A"的化合物提供的IC 5K200nmol，活性指定为"B"的化合物提供的1(：50为 201-500nmol，活性指定为"C"的化合物提供的IC 5Q为501-1000nmol，活性指定为"D"的化合 物提供的IC5Q为1001-5000nmol，活性指定为?"的化合物提供的IC 5Q>5001nmol。
[0147] 表1

[0150]以上生物活性结果表明，本发明中的分子对HIV-1 ITT酶有较强的抑制效果，大部 分化合物达到了纳摩尔水平的活性级别，其中有10个分子(1-1，1-4,1-5,1-7,1-15,1-16， 1-17,1-19,1-21，1-23)的有效抑制浓度IC 5Q值小于200nM，且成盐型化合物1-4-6和1-1-7也 具有强的抑制HIV-1RT酶活性（IC5Q〈200nM)。此外，化合物 1-3，1-4,1-7，1-9，1-14，1-17，I-23，1-24对HIV-1IN酶也显示出了一定的抑制活性（IC5Q在501-1000nM)，显然化合物1-4，1_ 7,1-17,1-23表现出了双靶点的抑制效果。细胞水平的活性结果基本与酶水平的活性结果 吻合，上述三个化合物对HIV-1病毒显示出了纳摩尔级的抑制活性，进一步证实此类分子做 为双靶点的抑制剂，在抗HIV病毒方面的应用价值。
【主权项】
1. 一种通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，所述通式（I)所示的化合物具有 如下结构： 其中，R1为独立自选氢，氯，溴，氟，烷基，C3-7环烷基，氰基或二者组合； R2为独立选自氢，氯，溴，氟，Ci-8烷氧基，氰基，三氟甲基或二者组合； R3为独立选自氢，氯，溴，氟，Ci-3烷氧基，氰基，三氟甲基或二者组合； m=l_3; n= 1-2〇2. 如权利要求1所述的通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述通式 (I)所示的化合物具有(1-1)~（1-26)所示的结构：3.权利要求1或2所述通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其中， 通式(I)所示的化合物的制备方法具体见方程式一： 方程式一：在碱的作用下，4-氨基苯基二酮酸（I-A)和二苯甲酮基乙酰氯（I-B)反应，结束后，蒸除 溶剂，加一定体积的水，析出固体，抽滤，水洗，甲醇重结晶，得二苯甲酮_二酮酯类似物（I-C);化合物I-C碱的作用下水解，酸化，即得目标分子。4. 如权利要求3所述制备方法，其中，所述碱为无机碱或有机碱，所述无机碱包括碳酸 钾、碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠中的一种或多种;所述有机碱包括三乙胺、吡啶和二异丙 基乙基胺中的一种或多种;所用的溶剂为水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、N， N-二甲基乙酰胺和丙酮中的一种或多种反应温度为25°C~120°C。5. -种药物组合物，其含有有效剂量的权利要求1或2所述通式（I)所示的化合物或其 药学上可接受的盐，及药用载体，所述药物组合物例如为脂质体或纳米粒。6. 权利要求1或2所述通式（I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求5所述 的药物组合物在制备用于抑制艾滋病病毒的药物中的用途。7. 根据权利要求6所述的用途，其中，所述用于抑制艾滋病病毒是通过同时作用HIV-1 逆转录酶和HI V-1整合酶实现的。
【文档编号】A61K31/196GK106045874SQ201610341300
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】马晓东, 许佳生, 宋振东, 葛阳, 张建斌, 金越, 王长远, 彭金咏, 刘克辛
【申请人】大连医科大学