一种依普黄酮的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种依普黄酮的药物组合物及其医药用途，本发明提供的依普黄酮的药物组合物中含有依普黄酮和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，依普黄酮、化合物(Ⅰ)单独作用时，对糖皮质激素性骨质疏松具有治疗作用；依普黄酮和化合物(Ⅰ)联合作用时，对糖皮质激素性骨质疏松的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗糖皮质激素性骨质疏松的药物。
【专利说明】
一种依普黄酮的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及依普黄酮的新用途，具体涉及依普黄酮的药物组 合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 依普黄酮为抗骨质疏松药，可显著抑制骨密度、骨强度和甲状钙素的下降;还具有 增加骨量、促进甲状腺钙素分泌及抑制破骨细胞数的作用。用于治疗骨质疏松症。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种依普黄酮的药物组合物，该药物组合物中含有依普黄 酮和一种天然产物，依普黄酮和该天然产物可以协同治疗糖皮质激素性骨质疏松。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] -种依普黄酮的药物组合物，包括依普黄酮、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将麦冬粉碎，用80~90%乙醇 热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用大 孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85 %乙醇洗脱12个柱体积，收集85%洗脱 液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤 (c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 化合物(I)。
[0011]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用85%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗糖皮质激素性骨质疏松的药物中的应用。
[0015] 上述依普黄酮的药物组合物在制备治疗糖皮质激素性骨质疏松的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的依普黄酮的药物组合物中含有依普黄酮和一种结构新颖的天然产 物，依普黄酮和该天然产物单独作用时，对糖皮质激素性骨质疏松具有保护作用;二者联合 作用时，对糖皮质激素性骨质疏松的保护效果进一步提高，可以开发成治疗糖皮质激素性 骨质疏松的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]分离方法：（a)将麦冬（2kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱 12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1 (12个柱体积）、50:1 (10个柱体积）、25:1 (8个柱体积)和12:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(6个柱体积）、12:1(8个柱体积)和2:1(6 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0022] 结构确证:HR-ESI-MS显示[M+Na]+为m/z 421.1630,结合核磁特征可得分子式为 C23H26〇6，不饱和度为11。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 ·03，m)，H-1 (2.64，d，J=13.2)，H-2(1.42，m)，H-2(1.51，m)，H-3(1.05，m)，H-3(1.37，m)，H-5(2.26，s)， H-6(4.87，m)，H-14(6.78，s)，H-15(3.21，m)，H-16(1.08，d，J = 6.6)，H-17(1.22，d，J = 6.6)，!1-18(1.01，8)，!1-19(0.86,8)，!1-23(2.41，8);核磁共振碳谱数据6。(卯 111，0130-(16， 150MHz):27.1(CH23-C)，19.3(CH2,2-C)，38.7(CH2,3-C)，31.2(C，4-C)，38.4(CH，5-C)， 75.1(CH，6-C)，190.7(C，7-C)，154.4(C，8-C)，132.2(C，9-C)，46.1(C，10-C)，182.4(C，n-C)，175.3(C，12-C)，147.2(C，13-C)，134.1(CH，14-C)，31.1(CH，15-C)，21.8(CH 3，16-C)， 22.1(CH3，17-C)，31.1(CH3，18-C)，22.8(CH 3，19-C)，177.6(C，20-C)，120.5(C，21-C)，204.2 (〇，22-〇,28.1(〇1 3,23-〇。红外光谱表明该化合物含有羟基和羰基基团（3440，1629和 1585cm-^,Η-ΝΜΚ 谱显示五个甲基信号[SH1.08(3H，d，J = 6.6，Me-16)，1.22(3H，d，J = 6.6， 10-17)，1.01(3!1，8，]\^-18)，0.86(3!1，8，]^-19)和2.41(3!1，8，]\^-23)]，一个烯属次甲基质 子信号[阳6.78(1!1，8，!1-14)]，以及一个含氧次甲基质子信号[6!14.87(1!1，111，!1-6)]。 13(：-匪1? 谱显示了 23个共振碳信号，包括五个甲基，三个亚甲基，四个次甲基(一个烯烃碳，一个含氧 碳），以及十一个季碳(一个酯羰基碳，三个酮羰基碳，五个烯烃碳hHMBC谱中Η-1(δΗ2.64) 和Η-5与C-10和酯羰基碳(δα77.6)的相关性表明酯羰基位于C-20位。HMBC谱中含氧次甲基 质子信号（SH4.87)与C-4、C-5、C-10和C-20的相关性表明含氧次甲基质子信号为Η-6,且形 成 20,6-内酯结构。此外，!1-15与(：-12、(：-13和(：-14，以及!1-14与(：-7、(：-9、(：-12和(：-15的相关 性建立了 一个不饱和的七元环结构。ROESY谱中，Me-18与H-5，H-5与H-6的相关性表明H-5和 H-6均为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基 本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ΕΟ)试验确定，理论值与实验值基本一致。 该化合物化学式及碳原子编号如下：
Q
[0024] 实施例2:药理作用
[0025]本实施例使用地塞米松肌注法制备糖皮质激素性骨质疏松大鼠模型，观察药物增 强骨密度、增加血清骨钙素、降低尿羟脯氨酸/肌酐等方面的抗糖皮质激素性骨质疏松的作 用。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028] 3月龄雌性Wistar大鼠，体重140~160g，由第三军医大学动物研究所提供。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030]依普黄酮购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。地 塞米松磷酸钠注射液，湖北襄樊恒生药业有限公司生产。血清骨钙素放免试剂盒购自解放 军总医院科技开发中心放免所。羟脯氨酸测试盒购自南京建成生物工程研究所。
[0031] 1.3大鼠分组及模型制备
[0032] 大鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、依普黄酮组 (80mg · kg-"、化合物⑴组(80mg · kg-"、依普黄酮与化合物⑴组合物组【40mg · kg-1依普 黄酮+40mg · kg^1化合物（I)】。除正常对照组外，其余组大鼠予地塞米松0. lmg/100g肌肉注 射每周2次。正常对照组大鼠予等量生理盐水肌注。实验时间为8w。实验过程中，所有动物在 同等条件下饲养，自由饮水和摄食。8w后，按照上述剂量每天灌胃给药，连续灌胃给药7d，正 常对照组与模型对照组大鼠灌胃给予纯化水。
[0033] 1.5骨密度(BMD)测定实验
[0034] 处死前，给予大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠 3ml/kg麻醉，当大鼠呈稳定的昏睡状态 达到5min以上时，置于CHALLENGER双能X线骨密度仪的探头下，应用动物软件进行腰椎和股 骨扫描，测定骨密度值。
[0035] 1.6生化指标测定实验
[0036]血清骨钙素(BGP)、尿羟脯氨酸(HOP)测定，具体参照试剂盒说明进行。
[0037] 1.7统计学方法
[0038]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠骨密度的影响
[0041] 与正常对照组相比，模型对照组大鼠腰椎、股骨骨密度结果均明显下降(P〈0.05)， 其中腰椎骨密度下降尤为显著(p〈0.01);与模型对照组比较，依普黄酮与化合物（I)组合物 组大鼠腰椎、股骨骨密度明显增加(P<〇.01);与模型对照组比较，依普黄酮组、化合物（I) 组大鼠腰椎、股骨骨密度增加(P<〇. 05)。
[0042] 试验结果见表1。
[0043] 2.2对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠生化指标的影响
[0044]与正常对照组比较，模型对照组大鼠的血清骨钙素显著下降(P〈0.01)，24h尿羟脯 氨酸/肌酐显著上升(P〈〇.01)。与模型对照组比较，依普黄酮与化合物（I)组合物组大鼠的 血清骨钙素显著上升(？〈0.01)，241!尿羟脯氨酸/肌酐显著下降(？<0.01);与模型对照组比 较，依普黄酮组、化合物（I)组血清骨钙素上升（？〈〇.〇5)，241!尿羟脯氨酸/肌酐下降（？< 0.05)。试验结果见表1。
[0045]表1对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠骨密度和生化指标的影响
[0046]
[0047] 糖皮质激素可抑制骨基质蛋白合成，尤其抑制胶原合成以及抑制成骨细胞前身向 成骨细胞的转变，使骨形成减少;还可通过减少性激素的分泌、抑制肠道对钙的吸收、增加 肾对钙与磷的排泄、继发甲状旁腺功能亢进等，进一步增加骨的吸收，减少骨形成，导致骨 质疏松。
[0048]上述结果表明，依普黄酮、化合物（I)单独作用时，对糖皮质激素性骨质疏松具有 治疗作用;依普黄酮和化合物(I)联合作用时，对糖皮质激素性骨质疏松的治疗效果进一步 提高，可以开发成治疗糖皮质激素性骨质疏松的药物。
[0049]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种依普黄酮的药物组合物，其特征在于:包括依普黄酮、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的依普黄酮的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的依普黄酮的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将麦 冬粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱12 个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为1 〇〇: 1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用85%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗糖皮质激素性骨质疏松的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的依普黄酮的药物组合物在制备治疗糖皮质激素性骨质疏 松的药物中的应用。
【文档编号】A61P19/10GK106045945SQ201610416820
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月7日
【发明人】刘慎权
【申请人】刘慎权