一种罗勒子挥发油的提取方法及其抗肿瘤应用
【专利摘要】本发明涉及一种罗勒子挥发油的提取方法及其抗肿瘤应用，提取方法包括以下步骤：将罗勒子阴干，粉碎，过40目筛；将过筛后的粉末喷洒原料质量0.6倍的溶有生物酶的缓冲溶液，密封，于45~55℃发酵2~3天；发酵后的原料进行微波?超声提取1~3h，过滤，滤液浓缩，得浓缩液；所得浓缩液经有机溶剂萃取、无水硫酸钠干燥、减压浓缩等步骤，即得罗勒子挥发油。本发明方法工艺简单、耗时少、收率高，提取的成分也较多，防止了挥发油的氧化、热解以及提高了挥发油的品质。本发明方法所得到的挥发油具有较好的抗肿瘤活性，为开发应用新一代天然来源的抗肿瘤药物开拓了新的途径。
【专利说明】-种罗勒子挥发油的提取方法及其抗肿瘤应用
[0001 ]
技术领域： 本发明属于医药技术领域，具体设及一种罗勒子挥发油的提取方法及其抗肿瘤应用。
[0002]
【背景技术】： 罗勒也被称为九层塔、金不换、圣约瑟夫和甜罗勒，是一种矮小、幼嫩的唇形科罗勒属 香草植物。罗勒子为罗勒的干燥成熟果实。据《本草纲目》记载，罗勒子俗称芒勒子、罗巧子， 具有生甘性寒、燥湿止泻、凉血止血、清热爽屯、等功能，主治湿热性或血粘质性疾病，如湿热 性频疾、腹痛、腹泻、便血、持疮出血及热性屯、脏疾病等。现代药理研究表明，罗勒子还具有 利尿、抗氧化、防腐、消炎、抑菌等作用。
[0003] 挥发油是植物中重要的活性成分之一。罗勒属植物为主要芳香油植物之一。目前， 对罗勒挥发油的研究主要集中在罗勒的茎和叶上，但对罗勒子中挥发油的研究较少。现有 对罗勒子挥发油提取方法的报道并不多见。
[0004] 常用的挥发油提取方法主要有水蒸气蒸馈法、超临界萃取法等。水蒸气蒸馈法提 取溫度高，时间长，易使对湿热不稳定的挥发性成分发生变化，且高沸点的成分难W检测； 而超临界流体萃取法是一种新的提取方法，提取挥发油能力强，具有防止氧化、热解及提高 挥发油品质等优点，但该工艺需要高压设备，技术要求高，设备费用投资大，应用还不普遍。
[0005]
【发明内容】
： 本发明的目的在于提供一种罗勒子挥发油的提取方法及其抗肿瘤应用。
[0006] 为了达到上述目的，本发明采用W下技术方案： 将罗勒子阴干，粉碎，过40目筛;将过筛后的粉末喷洒原料质量0.6倍的溶有生物酶的 缓冲溶液，密封，于45~55 °C发酵2~3天;发酵后的原料置于微波-超声装置中，加入原料质量 3~5倍的60~70%的乙醇溶液，于超声功率600W常开、微波功率600~800W的条件下提取1~化， 过滤，滤液浓缩，得浓缩液;所得浓缩液经有机溶剂萃取、无水硫酸钢干燥、减压浓缩等步 骤，即得罗勒子挥发油。
[0007] 所述的生物酶为质量比3:1的纤维素酶和酸性蛋白酶。
[000引所述的生物酶的添加量为原料质量的2%~3%。
[0009] 所述的缓冲溶液为pH 4.5~5.5的醋酸/醋酸钢缓冲溶液。
[0010] 所述的有机溶剂为石油酸或乙酸中的任意一种。
[0011] 本发明制得的罗勒子挥发油进行抗肿瘤活性实验表明：该化合物具有较强的抗肿 瘤活性，在天然新药开发中具有良好的应用前景。
[0012] 本发明制得的罗勒子挥发油采用MTT法（四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法)进行 抗肿瘤活性测试。
[001引试验用细胞株： T-98和U251-SP:人脑神经胶质瘤细胞株;HLE:人肝癌细胞株;MM1-CB和HMV-1:人黑色 素瘤细胞株。
[0014] 方法：（1 )0.25%膜酶消化对数生长期细胞，10%NBS的RPMI 1640调细胞浓度50000 个/1111。96孔板lOOul/孔。设溶剂对照，每组3平行孔。37°C，5%C0 2、95%空气的培养箱中预 培养2地，弃上清。
[0015] (2)加药物5个10倍稀释的浓度(溶剂为有二甲亚讽和水），为10 -4 mol/L。
[0016] (3)细胞连续培养4她，每孔加入10山5mg/ml的MTT溶液无血清培养基配制）， 继续培养地。
[0017] (4)吸去上清。加入20化1 DMS0,轻轻振荡W使甲臘完全溶解。570皿处用酶标仪测 定0D值。
[001引巧)计算抑制率(％)=(对照0D-药物0D)/对照OD*1000/0 实验结果:罗勒子挥发油的抑制率W相对于对照(添加 DMS0)的结果如下表1表示。 「00191 亲1巧勒早摇失細的肿極细胞墙估袖制莖％
由表呵看出，罗勒子挥发油具有良好的抑制肿瘤细胞生长的活性，其可在制备抗肿瘤 药物中得到应用。
[0020] 本发明为制备抗肿瘤药物提供了一种新的选择。
[0021] 本发明所述罗勒子挥发油在制备抗肿瘤药物时，可按照常规的制剂方法W罗勒子 挥发油为药物活性成分，添加适宜的药物载体，制成各种药物剂型，如片剂、胶囊、滴丸、注 射剂、缓控释剂等等。
[0022] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0023]
【具体实施方式】： 实施例1: 将罗勒子阴干，粉碎，过40目筛;将过筛后的化g粉末喷洒600g的溶有质量比为3:1的纤 维素酶和酸性蛋白酶的抑为4.5的醋酸/醋酸钢缓冲溶液，密封，于45°C发酵2天;发酵后的 原料置于微波-超声装置中，加入原料质量3倍的60%的乙醇溶液，于超声功率600W常开、微 波功率600W的条件下提取化，过滤，滤液浓缩，得浓缩液;所得浓缩液经石油酸萃取、无水硫 酸钢干燥、减压浓缩等步骤，即得罗勒子挥发油562mL。
[0024] 实施例2: 将罗勒子阴干，粉碎，过40目筛;将过筛后的化g粉末喷洒600g的溶有质量比为3:1的纤 维素酶和酸性蛋白酶的抑为5.0的醋酸/醋酸钢缓冲溶液，密封，于50°C发酵3天;发酵后的 原料置于微波-超声装置中，加入原料质量4倍的65%的乙醇溶液，于超声功率600W常开、微 波功率700W的条件下提取化，过滤，滤液浓缩，得浓缩液;所得浓缩液经乙酸萃取、无水硫酸 钢干燥、减压浓缩等步骤，即得罗勒子挥发油584mL。
[0025] 实施例3: 将罗勒子阴干，粉碎，过40目筛;将过筛后的化g粉末喷洒600g的溶有质量比为3:1的纤 维素酶和酸性蛋白酶的抑为55的醋酸/醋酸钢缓冲溶液，密封，于55°C发酵3天;发酵后的原 料置于微波-超声装置中，加入原料质量5倍的70%的乙醇溶液，于超声功率600W常开、微波 功率800W的条件下提取化，过滤，滤液浓缩，得浓缩液;所得浓缩液经乙酸萃取、无水硫酸钢 干燥、减压浓缩等步骤，即得罗勒子挥发油573mL。
[0026] 实施例4: 本发明药物颗粒剂 将罗勒子挥发油加入乙醇作黏合剂，加入淀粉作填充剂，制成颗粒。
[0027] 实施例5: 本发明药物片剂 将罗勒子挥发油，加入淀粉、糊精、硬脂酸儀等，混合制成湿粒，压片，每片含罗勒子挥 发油200mg。
【主权项】
1. 一种罗勒子挥发油的提取方法，其特征在于包括以下步骤:将罗勒子阴干，粉碎，过 40目筛;将过筛后的粉末喷洒原料质量0.6倍的溶有生物酶的缓冲溶液，密封，于45~55°C发 酵2~3天;发酵后的原料置于微波-超声装置中，加入原料质量3~5倍的60~70%的乙醇溶液， 于超声功率600W常开、微波功率600~800W的条件下提取1~3h，过滤，滤液浓缩，得浓缩液;所 得浓缩液经有机溶剂萃取、无水硫酸钠干燥、减压浓缩等步骤，即得罗勒子挥发油。2. 根据权利要求1所述的一种罗勒子挥发油的提取方法，其特征在于，所述的生物酶为 质量比3:1的纤维素酶和酸性蛋白酶。3. 根据权利要求1所述的一种罗勒子挥发油的提取方法，其特征在于，所述的生物酶的 添加量为原料质量的2%~3%。4. 根据权利要求1所述的一种罗勒子挥发油的提取方法，其特征在于，所述的缓冲溶液 为pH 4.5~5.5的醋酸/醋酸钠缓冲溶液。5. 根据权利要求1所述的一种罗勒子挥发油的提取方法，其特征在于，所述的有机溶剂 为石油醚或乙醚中的任意一种。6. 根据权利要求1所述的提取方法制得的罗勒子挥发油在抗肿瘤药物中的应用。
【文档编号】A61K131/00GK106047492SQ201610300003
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司