一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法
【专利摘要】一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法，其特征在于：包括6种液体好氧菌剂与4种液体厌氧菌剂，液体好氧菌剂由液体产朊假丝酵母菌剂、液体硝酸菌剂、液体细黄链霉菌剂、液体枯草芽孢杆菌剂、液体地衣芽孢杆菌剂、液体纳豆芽孢杆菌剂组成；液体厌氧菌剂由液体沼泽红假单胞菌剂、液体双岐杆菌剂、液体植物乳菌剂、液体嗜酸乳杆菌剂组成。制备方法包括以下步骤：将6种好氧菌培养制成6种液体好氧菌剂；将4种厌氧菌培养制成4种混合的液体厌氧菌剂；将6种液体好氧菌剂注入到液体厌氧菌剂中，得到复合微生物液体菌剂。本发明制备的复合液体微生物菌剂的保存期比一般制剂延长数倍，具有分解污物、净化水体、修复生态环境的作用。
【专利说明】
一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及属于农业微生物、生态种植和微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]目前，我国畜牧业、水产养殖业滥用抗生素的现象普遍，被超量抗生素污染的水体通过生态循环，导致人体细菌耐药性增大，损害了人体健康。水产养殖业中滥用化肥肥水的现象也非常普遍，化肥超量使用加速了水体腐败发臭，亚硝酸盐、氨氮、硫化氢、甲烷等有害物质超标，养殖的水产品药化残留超标，品质下降，威胁人体健康，也对生态环境造成了严重破坏。
[0003]最近，国家农业部已经提出了化肥农药零增长的行动方案。要实现化肥农药零增长的同时又要保证农产品增产增收实现供给侧的有效供应，就需要能够有效替代化肥农药的产品。由此能够替代化肥和减少农药的微生物制剂成为当前发展生态农业的急需，用微生物制剂来改善养殖环境，改良产品品质，实现增产增收，已成为现代养殖的必然趋势，是发展绿色可持续高效生态农业的必然选择。
[0004]在饲料中添加微生物有益菌，可以促进动物对饲料的消化吸收，增强免疫力和防病抗病能力，可大幅度减少抗生素用量;在养殖水体中添加微生物有益菌，可分解污染物，解毒，净化水质，增加溶氧，可大幅度减少化肥肥水用量，使生态水环境得到修复和改良。
[0005]近年来各种微生物肥料如雨后春笋般大量涌现，但肥效明显可以达到或超过化肥的产品却并不多见，其主要原因:一是微生物菌种单一，解决不了作物生长的诸多问题;二是菌剂保存期短，肥效不明显，无论是单一菌剂还是复合菌剂都难以解决液体菌剂腐败、有效菌死亡、保存期短的问题。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法，该复合微生物液体菌剂及其制备方法解决了微生物菌剂菌种单一、保存期短以及肥效不明显的问题。
[0007]为达到上述发明目的，本发明采用的一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法的技术方案是:所述复合微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为3:7?7:3;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体产朊假丝酵母菌剂I?3质量份，
液体硝酸菌剂I?3质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂I?2质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂I?2质量份， 液体纳豆芽孢杆菌剂I?2质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体沼泽红假单胞菌剂I?2质量份，
液体双岐杆菌剂I?2质量份，
液体植物乳菌剂I?5质量份，
液体嗜酸乳杆菌剂I?5质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0008]上述技术方案中的有关内容解释如下:
1、上述方案中，所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1-0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。
[0009]为达到上述发明目的，本发明采用的一种保质期长的复合微生物液体菌剂的制备方法的技术方案是:所述制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(1)分别配制产朊假丝酵母菌、硝酸菌、纳豆芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C，120?140r/min，pH值在6.5-7.5条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的0.9-1.1%;
(3 )再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的I?1.5%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及双岐杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的0.9-1.1%;
(3)分别取4种二级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的三级扩大培养，得到4种三级厌氧菌液，其中，每种二级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的I?1.5%;
(4)按上一个技术方案的配方比例将所述4种三级厌氧菌液直接混合均匀，得到复合的所述液体厌氧菌剂；
第三步，将6种液体好氧菌剂按权利要求1的配方比例缓慢注入到复合的所述液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述复合微生物液体菌剂。
[0010]上述技术方案中的有关内容解释如下:
1、上述方案中，在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1~0.2%，所述微量元素选自8、211、111、01、(:0中任意一种或至少两种以上的混合物。
[0011 ] 2、上述方案中，所述产朊假丝酵母菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水95.7% ；
所述硝酸菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蛋白胨1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.03%，氯化钠0.5%，无菌水97.87% ；所述纳豆芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖3%，磷酸氢二钾0.1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.2%，无菌水96.5%;
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述沼泽红假单胞菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化钱0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述双岐杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏1g。
[0012]本发明的设计特点是:本发明的复合微生物液体菌剂是好氧菌群与厌氧菌群复合而成的微生物液体菌剂，其特点为先分别制备A和B两类复合微生物菌剂，A菌剂由6种好氧菌及兼性好氧菌组成，每种好氧菌采用好氧发酵工艺单独发酵。B菌剂由4种厌氧菌及兼性厌氧菌组成，4种厌氧菌每种菌株采用厌氧发酵的工艺单独厌氧发酵，再将4种厌氧菌液直接混合得到B制剂。最后将6种A菌剂分别按比例混入B菌剂中。该特点的好处在于，在好氧发酵阶段对6种菌株单独培养，可在保证菌种纯度和功能性的前提下，促进好氧菌快速增长繁殖。好氧发酵完成后，当6种液体好氧菌剂按比例混入厌氧发酵的B菌剂中之后，好氧菌群受到厌氧菌群及弱酸条件的抑制，增长繁殖变得缓慢下来，多数菌株形成了芽孢，菌株间形成互不拮抗的优良共生的环境条件，在常温下液体菌剂可以保存较长时间。
[0013]本发明与现有技术相比，具有以下有益效果:
(I)常规的微生物菌剂在液态条件下，菌株数分钟至数小时就繁殖一世代，由于不断快速繁殖生长，菌株很快就会畸形死亡，菌剂就会变黑发臭，这种菌剂在稀释后，多数菌群已经变得畸形乏力，无法发挥其有效功能，在常温条件下保存期很短，一般只有数月。而本发明的复合微生物液体菌剂中有效活菌数多，保存期长，A、B两种菌剂分别发酵然后再按比例复配，复配后在弱酸性的环境下，菌群的生长条件受到了抑制，同时养分与代谢能又得到了互补，菌群间形成了依存共生、互不拮抗的优良共生环境。由此，菌群的生长得到抑制，同样在液态常温的条件下，菌群变得缓慢生长，多数菌株形成芽孢状态，菌株活力得到保持并暂时处于休眠状态。在常温条件下，本发明的复合微生物液体菌剂保存有效期可以达到I年以上，稀释后，菌株又能很快恢复生长并发挥作用。
[0014](2 )本发明的复合微生物液体菌剂中多菌种协同增效，功能全面。本发明采用A (即6种好氧菌群)、B(即4种厌氧菌群)两种菌剂分别发酵然后再按比例复配的方法，可以使更多的不同功能菌株复配共生。施用后不仅能起到分解污染物，净化水质，产生免疫代谢物，抑菌、抗虫、防病害，使水产品品质突出改善，还能为实现水污染的生物治理，改善生态环境，创造有利条件。
【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例对本发明作进一步描述:
实施例1: 一种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法所述复合微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为11:14;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体产朊假丝酵母菌剂2质量份，
液体硝酸菌剂2质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂2质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂2质量份，
液体纳豆芽孢杆菌剂2质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体沼泽红假单胞菌剂2质量份，
液体双岐杆菌剂2质量份，
液体植物乳菌剂5质量份，
液体嗜酸乳杆菌剂5质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0016]所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1 %，所述微量元素为B、Zn、Mn三者的混合物。
[0017]所述制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(I)分别配制产朊假丝酵母菌、硝酸菌、纳豆芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C，120r/min，pH值在6.5-7.5条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C、120r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1%;
(3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C、120r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及双岐杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30 °C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1%;
(3)分别取4种二级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30°C条件下静置，进行菌种的三级扩大培养，得到4种三级厌氧菌液，其中，每种二级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1%;
(4)按上述配方比例将所述4种三级厌氧菌液直接混合均匀，得到复合的所述液体厌氧菌剂；
第三步，将6种液体好氧菌剂按上述配方比例缓慢注入到复合的所述液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述复合微生物液体菌剂。
[0018]在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1 %，所述微量元素为B、Zn、Mn三者的混合物。
[0019]所述产朊假丝酵母菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水 95.7% ；
所述硝酸菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蛋白胨1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.03%，氯化钠0.5%，无菌水97.87% ；
所述纳豆芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖3%，磷酸氢二钾0.1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.2%，无菌水96.5%;
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述沼泽红假单胞菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化钱0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述双岐杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏1g。
[0020]实施例1的复合微生物液体菌剂在水产养殖中的对比实验:
实验地:广西合浦县西塘乡虾塘10亩。
[0021]实施情况:养殖品种为南美白对虾。从养殖前肥水-放虾苗-成品虾出塘全过程，时间6月中旬。实验设2个养殖水塘，每个水塘5亩。2个水塘都是多年养殖的旧水塘，铺有塑料膜并在塘底有压底泥。
[0022]实验结果:实验设2个养殖水塘，2个水塘都是多年养殖的旧水塘，铺有塑料膜并在塘底有压底泥，平均水深I.5 ο其中A水塘施用实施例1的复合微生物液体菌剂，面积为4亩;B水塘为常规养殖的对照塘，面积为5亩。B水塘按常规养殖培肥水质，亩施用(水深I米)碳酸氢铵20kg+过磷酸钙1kg+有机肥1kg，水质呈茶褐色后，投放虾苗6万尾/亩。为防治虾病，每周用土霉素、呋喃西林等药物全塘泼洒I次，并在饲料中混拌土霉素、氯霉素、维生素、免疫多糖、伏碘、大黄等多种药物。在养殖中后期为净化底质，施用液体光合菌剂3~5kg/亩(水深I米)，每10天I次。A水塘与B水塘同样按常规培水肥塘，同样投放虾苗。不同之处有3点:一是在投放虾苗I周后，即开始用在常温下存放6个月的实施例1的复合微生物液体菌剂3?5kg/亩(水深I米)，全塘泼洒，每1天I次;二是A水塘防治虾病的用药比B水塘减少了一半；三是A水塘没有使用B水塘用的光合菌剂。养殖过程中A水塘比B水塘水色纯正，病害少，当对虾长到商品规格时，经分疏起捕，分次收获后，最终产量，A塘960斤/亩，B塘720斤/亩，A塘比B塘增加240斤/亩，增产33%。
[0023]实施例2:—种保质期长的复合微生物液体菌剂及其制备方法
所述复合微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为5:3;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体产朊假丝酵母菌剂3质量份，
液体硝酸菌剂3质量份，
液体细黄链霉菌剂I质量份，
液体枯草芽孢杆菌剂I质量份，
液体地衣芽孢杆菌剂I质量份，
液体纳豆芽孢杆菌剂I质量份；
所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成:
液体沼泽红假单胞菌剂I质量份，
液体双岐杆菌剂I质量份， 液体植物乳菌剂2质量份，
液体嗜酸乳杆菌剂2质量份；
其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。
[0024]所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.2%，所述微量元素为Zn、Mn、Cu三者的混合物。
[0025]所述制备方法包括以下步骤:
第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂，
(1)分别配制产朊假丝酵母菌、硝酸菌、纳豆芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C，14(^/!1^11，？田直在6.5~7.5条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液；
(2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C、140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的1.1%;
(3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C、140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的I?I.5%;
第二步，将4种厌氧菌培养制成混合的液体厌氧菌剂，
(1)分别配制沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及双岐杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液；
(2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1.1%;
(3)分别取4种二级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在37°C条件下静置，进行菌种的三级扩大培养，得到4种三级厌氧菌液，其中，每种二级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的1.5%;
(4)按上述的配方比例将所述4种三级厌氧菌液直接混合均匀，得到复合的所述液体厌氧菌剂；
第三步，将6种液体好氧菌剂按上述的配方比例缓慢注入到复合的所述液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述复合微生物液体菌剂。
[0026]在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1?0.2%，所述微量元素选自Zn、Mn、Cu三者的混合物。
[0027]所述产朊假丝酵母菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水 95.7% ；
所述硝酸菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蛋白胨1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.03%，氯化钠0.5%，无菌水97.87% ； 所述纳豆芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖3%，磷酸氢二钾0.1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.2%，无菌水96.5%;
所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ；
所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙
0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ；
所述沼泽红假单胞菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化钱0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g;
所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g;
所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ；
所述双岐杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏1g。
[0028]实施例2的复合微生物液体菌剂在在养猪场处理猪粪尿液中的对比实验实验地点:广西陆川县三塘养殖场
实施情况:该养殖场商品猪存栏5000头，其中选定I个猪舍为A猪舍(80头猪)使用本发明的复合微生物制剂，其它的猪舍为B猪舍作为对照。A猪舍使用实施例2的复合微生物液体菌剂，使用方法如下:1、在日粮中添加本菌剂1%; 2、在饮用水中添加本菌剂1%; 3、将本菌剂用清水稀释20倍，在猪身及圈舍内外每天喷洒I次;4、每天在粪尿水池中混倒入本菌剂1%。连续使用I个月后，A猪舍生活环境比B猪舍有了明显改善，经环境保护监测部门检测，恶臭浓度下降97.7%，臭气强度降至2.5级以下，达到国家一级标准。
[0029]上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，尤其是本发明中所述的6种好氧菌和4种厌氧菌各自单独培养时的培养基配方属于现有技术，例如产朊假丝酵母菌的液体好氧菌培养基配方、纳豆芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方以及沼泽红假单胞菌的液体厌氧菌培养基配方等，本领域技术人员可在上述公开的范围内做适当变换，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种保质期长的复合微生物液体菌剂，其特征在于:所述复合微生物液体菌剂包括6种用液体培养基培养的液体好氧菌剂与4种用液体培养基培养的液体厌氧菌剂，所述液体好氧菌剂与液体厌氧菌剂的质量比为3: 7-7: 3;所述液体好氧菌剂由以下质量份的菌剂组成: 液体产朊假丝酵母菌剂I?3质量份， 液体硝酸菌剂I?3质量份， 液体细黄链霉菌剂I质量份， 液体枯草芽孢杆菌剂I?2质量份， 液体地衣芽孢杆菌剂I?2质量份， 液体纳豆芽孢杆菌剂I?2质量份； 所述液体厌氧菌剂由以下质量份的菌剂组成: 液体沼泽红假单胞菌剂I?2质量份， 液体双岐杆菌剂I?2质量份， 液体植物乳菌剂I?5质量份， 液体嗜酸乳杆菌剂I?5质量份； 其中，每一种液体好氧菌剂中的好养菌含量大于等于2亿个/毫升，每一种液体厌氧菌剂中的厌氧菌含量大于等于2亿个/毫升。2.根据权利要求1所述的一种保质期长的复合微生物液体菌剂，其特征在于:所述微生物液体菌剂还包括微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1?.0.2%，所述微量元素选自B、Zn、Mn、Cu、Co中任意一种或至少两种以上的混合物。3.—种根据权利要求1所述的保质期长的复合微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:所述制备方法包括以下步骤: 第一步，将6种好氧菌分别培养制成6种液体好氧菌剂， (1)分别配制产朊假丝酵母菌、硝酸菌、纳豆芽孢杆菌、细黄链霉菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基，再分别向6种液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C，120?140r/min，pH值在6.5-7.5条件下进行菌种的一级扩大培养，得到6种一级好氧菌液； (2)再分别取6种一级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的二级扩大培养，得到6种二级好氧菌液，其中，每种一级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的0.9-1.1%; (3)再取6种二级好氧菌液向6种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C、120?140r/min条件下进行菌种的三级扩大培养，得到6种液体好氧菌剂，其中，每种二级好氧菌液的接种量为其液体好氧菌培养基质量的I?1.5%; 第二步，将4种厌氧菌培养制成混合的液体厌氧菌剂， (1)分别配制沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及双岐杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的一级扩大培养，得到4种一级厌氧菌液； (2)再分别取4种一级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的二级扩大培养，得到4种二级厌氧菌液，其中，每种一级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的0.9-1.1%; (3)分别取4种二级厌氧菌液向4种所述液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在30?37°C条件下静置，进行菌种的三级扩大培养，得到4种三级厌氧菌液，其中，每种二级厌氧菌液的接种量为其液体厌氧菌培养基质量的I?1.5%; (4)按权利要求1的配方比例将所述4种三级厌氧菌液直接混合均匀，得到复合的所述液体厌氧菌剂； 第三步，将6种液体好氧菌剂按权利要求1的配方比例缓慢注入到复合的所述液体厌氧菌剂中并搅拌均匀，静置，待均质稳定后，得到所述复合微生物液体菌剂。4.根据权利要求3所述的一种保质期长的复合微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:在所述第三步中，同时加入微量元素，微量元素的添加量为所述复合微生物液体菌剂质量的0.1~0.2%，所述微量元素选自8、211、111、(:11、(:0中任意一种或至少两种以上的混合物。5.根据权利要求3所述的一种保质期长的复合微生物液体菌剂的制备方法，其特征在于:所述产朊假丝酵母菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸铵0.2%，可溶性淀粉2%，碳酸钙0.5%，豆油0.5%，无菌水9 5.7%; 所述硝酸菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蛋白胨1%，磷酸氢二钾0.1%，酵母膏0.5%，硫酸镁0.03%，氯化钠0.5%，无菌水97.87% ； 所述纳豆芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖3%，磷酸氢二钾0.1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.2%，无菌水96.5%; 所述细黄链霉菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:可溶性淀粉2%，磷酸氢二钾0.05%，硝酸钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.005%，硫酸亚铁0.001%，无菌水97.794% ； 所述枯草芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙.0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ； 所述地衣芽孢杆菌的液体好氧菌培养基配方按照各组分所占的质量百分含量由以下组分组成:蔗糖1%，磷酸氢二钾0.05%，酵母膏0.05%，牛肉膏0.02%，蛋白胨0.05%，碳酸钙.0.025%，氯化钠 0.02%，硫酸锰 0.001%，无菌水98.784% ； 所述沼泽红假单胞菌的液体厌氧菌培养基配方为:每I升无菌水里含乙酸钠3.3g，氯化钱0.6g，硫酸镁0.5g，酵母膏1.5g; 所述植物乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g; 所述嗜酸乳杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乙酸钠5g，柠檬酸铵2g，硫酸镁0.5g，酵母膏6g，牛肉膏12g，磷酸氢二钾2g，蛋白胨1g，硫酸猛0.05g ； 所述双岐杆菌的液体厌氧菌培养基配方为:在每I升无菌水里含乳清粉50g，碳酸钙2g，酵母膏1g。
【文档编号】C12R1/72GK106047770SQ201610639970
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月8日 公开号201610639970.5, CN 106047770 A, CN 106047770A, CN 201610639970, CN-A-106047770, CN106047770 A, CN106047770A, CN201610639970, CN201610639970.5
【发明人】刘 文, 韩莉华, 刘海龙
【申请人】江苏春语生物科技有限公司