一种周期素依赖性蛋白激酶抑制剂的结晶形式及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种周期素依赖性蛋白激酶抑制剂的结晶形式及其制备方法。具体而言，本发明涉及一种周期素依赖性蛋白激酶(CDK4&6)抑制剂的I型结晶及其制备方法。具体地，本发明涉及6?乙酰基?8?环戊基?5?甲基?2?((5?(哌啶?4?基)吡啶?2?基)氨基)吡啶并[2,3?d]嘧啶?7(8H)?酮(式(I)化合物)的I型结晶及其制备方法，所述结晶具有如图1所示的X?射线粉末衍射图谱。本发明所得到式(I)化合物的I型结晶具备良好的化学稳定性和晶型稳定性，并且所用结晶溶剂低毒低残留，可更好地用于临床治疗。
【专利说明】
一种周期素依赖性蛋白激酶抑制剂的结晶形式及其制备方法
技术领域
[00011 本发明涉及6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-( (5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氨基)吡 啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)_酮及其I晶型。根据本发明的方法制备获得的式(I)化合物可用于 乳腺癌的治疗。
【背景技术】
[0002] 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，具有发病率高，颇具侵袭性，但病程进展缓 慢，中国人口协会2010年2月1日在北京发布了《中国乳腺疾病调查报告》，报告显示，我国城 市地区乳腺癌的死亡率增长了38.91%，乳腺癌已经成为对妇女健康威胁最大的疾病，目前 在研和上市的乳腺癌药物至少有156种，其中68%为靶向治疗药物，大量研究发现肿瘤与细 胞周期反常相关，肿瘤细胞中有丝分裂信号蛋白的大量突变和抗有丝分裂信号蛋白缺陷导 致增殖紊乱；同时大部分肿瘤都存在基因组不稳定性(GIN)和染色体组不稳定性(CIN)，这 三种基本的细胞周期缺陷都直接或间接由CDKs的失控引起。周期素依赖性蛋白激酶(CDK， Cyclin Dependent Kinase)抑制剂日益成为热门革巴标。
[0003] 目前开发的一代二代⑶K抑制剂很多，最受关注的二代药物包括Pfizer公司和 Onyx公司共同开发的CDK4&6抑制剂PD-0332991，其通过抑制CDK4&6的活性，抑制Rb的磷酸 化，使E2F-Rb复合物留滞在胞浆中，阻断细胞周期的启动。临床试验结果(NCT00721409)显 示，来曲唑单药治疗的患者的无进展存活期(Progression-free survival，PFS)为7.5月， 而来曲唑和Η)-0332991药物联用治疗的患者其无进展存活期则延长至26.1月，这一显著优 势获得了广泛关注，2013年初Π)Α在审核了这种药物的中期结果后认为这可能是一种突破 性的抗癌药物。
[0004] W02014183520公开了与Η)-0332991结构相似的CDK4&6抑制剂，具有显著的CDK4&6 的抑制活件和高度诜择件，其中包括如下化合物：
[0005]
[0006] 但W02014183520未深入研究该化合物的结晶形式。本领域技术人员公知，药用的 活性成分的晶型结构往往影响到该药物的化学稳定性，结晶条件及储存条件的不同有可能 导致化合物的晶型结构的变化，有时还会伴随着产生其他形态的晶型。一般来说，无定型的 药物产品没有规则的晶型结构，往往具有其它缺陷，比如产物稳定性较差，析晶较细，过滤 较难，易结块，流动性差等。因此，改善上述化合物的各方面性质是很有必要的，我们需要深 入研究找到晶型纯度较高并且具备良好化学稳定性的新晶型。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-((5-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氨基） 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)_酮(如式(I)所示），
[0008]
[0009]式（I)所示化合物在不同结晶条件下得到的一系列结晶产物，对所得结晶产物进 行了 X-衍射及DSC检测，发现式（I)所示化合物在常规的结晶条件下，可以得到一种稳定性 良好的晶型，我们称其为I型结晶。本申请中的I型结晶的DSC图谱显示在289.22°C附近有熔 融吸热峰，X-射线粉末衍射图谱如图1所示，使用Cu-Ka辐射，以2Θ角度和晶面间距(d值)表 示的X-射线粉末衍射图谱，其中在4.91 (17.99)，9·91 (8.92)，10.53(8.39)，14.82(5.98)， 16·04(5·52)，17·34(5·11)，18·51(4·79)，19·92(4·45)，21·19(4·19)，22·65(3·92)，24·15 (3.68)，26·92(3.31)，和28.98(3.08)有特征峰。
[0010] 本发明还提供了制备6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-((5-(哌啶-4-基）吡啶-2-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)_酮的I型结晶的方法，所述方法包括下述步骤：
[0011] 1)将任意晶型或无定型的式(I)所示化合物加入适量的溶剂中，加入酸，溶清后加 入碱，析晶，所述溶剂选自碳原子数小于等于3的醇类、酮类、腈类的任意一种或它们与水的 混合溶剂；
[0012] 2)过滤结晶并洗涤，干燥。
[0013] 在优选的实施方案中所述酸为无机酸，优选为盐酸;所述碱为无机碱，优选为碳酸 氢钠或碳酸氢钾。
[0014] 在优选的实施方案中步骤1)中所述的溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈或甲 醇/水、乙醇/水、丙酮/水、乙腈/水、异丙醇/水;优选乙醇。
[0015] 重结晶的方法没有特别限定，可以用通常的重结晶操作方法进行。例如，可以用原 料式（I)所示化合物在有机溶剂加热溶解后慢慢冷却析晶，结晶完成后，经过滤干燥，即可 得到所需要的结晶。需特别说明的是，所滤取的结晶体通常在减压下，在30~100°C左右，优 选40~60°C的加热条件下进行真空干燥，就能达到去除重结晶溶剂的效果。
[0016] 通过差示扫描热分析(DSC)、X_衍射图谱测定，对得到的式（I)所示化合物结晶体 进行了晶型研究，同时对所得结晶的溶剂残留进行了检测。
[0017] 按照本发明的方法制备的式（I)所示化合物I型结晶不含有或仅含有较低含量的 残留溶剂，符合国家药典规定的有关医药产品残留溶剂的限量要求，因而本发明的结晶可 以较好地作为医药活性成分使用。
[0018] 经研究表明，本发明制备的式(I)所示化合物的I型结晶在光照、高温、高湿的条件 下稳定性良好，且在研磨、压力和受热等条件下，晶型稳定性良好，能够满足生产运输储存 的药用要求，生产工艺稳定可重复可控，能够适应于工业化生产。
【附图说明】
[0019] 图1式⑴所示化合物I型结晶的X-射线粉末衍射图谱。
[0020] 图2式（I)所示化合物I型结晶的DSC图谱。
【具体实施方式】
[0021] 以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技 术方案，并非限定本发明的实质和范围。
[0022] 实验所用的测试仪器
[0023] 1、DSC谱
[0024] 仪器型号：MettlerToledo DSC 1 Staree System
[0025] 吹扫气:氮气
[0026] 升温速率：10. (TC/min
[0027] 温度范围：40-350Γ
[0028] 2、Χ_射线衍射谱
[0029] 仪器型号:Bruker D8 Focus X-射线粉末衍射仪
[0030] 射线:单色 Cu-Κα 射线(λ=1·5406)
[0031] 扫描方式:Θ/2Θ，扫描范围：2_40。
[0032] 电压：40KV，电流:40mA
[0033] 实施例1
[0034] 取（1.(^，2.24111111〇1)式（1)所示化合物（按冊2014183520提供的方法制备）加入到 250ml锥形瓶中，加入40ml乙醇，室温下搅拌，然后滴入稀盐酸（219mg，6.0lmmol)(溶于4ml 水），加热至60°C，溶清，滴入碳酸氢钠溶液（1.21g，14.40mmol)(溶于40ml水）中，降温至室 温搅拌过夜。干燥得固体〇.89g，收率为89.0%。该结晶样品的X-射线衍射谱图见图1。该结 晶在约4.91 (17.99)，9·91 (8.92)，10.53(8.39)，14.82(5.98)，16.04(5.52)，17.34(5.11)， 18.51(4.79)，19.92(4.45)，21·19(4.19)，22.65(3.92)，24·15(3.68)，26.92(3.31)，和 28.98 (3.08)处有特征峰。DSC谱图见图2，有尖锐熔融吸热峰289.22 °C，将此晶型定义为I晶 型。
[0035] 实施例2
[0036] 取（1.0g，2.24mmol)式（I)所示化合物(按实施例1制备)加入到250ml锥形瓶中，加 入40ml甲醇，室温下搅拌，然后滴入稀盐酸(219mg，6.0lmmo 1)(溶于4ml水），加热至60 °C，溶 清，滴入碳酸氢钠溶液（1.21g，14.40mmol)(溶于40ml水）中，降温至室温搅拌过夜。干燥得 固体0.98g，收率为98.0%。其X-衍射和DSC图谱经研究比对，确定产物为I晶型。
[0037] 实施例3
[0038] 取（1.0g，2.24mmol)式（I)所示化合物(按实施例1制备)加入到250ml锥形瓶中，加 入40ml异丙醇，室温下搅拌，然后滴入稀盐酸(219mg，6. Olmmol)(溶于4ml水），加热至60°C， 溶清，滴入碳酸氢钠溶液（1.21g，14.40mmol)(溶于40ml水）中，降温至室温搅拌过夜。干燥 得固体0.52g，收率为52.0%。其X-衍射和DSC图谱经研究比对，确定产物为I晶型。
[0039] 实施例4
[0040] 取（1.0g，2.24mmol)式（I)所示化合物(按实施例1制备)加入到250ml锥形瓶中，加 入40ml丙酮，室温下搅拌，然后滴入稀盐酸(219mg，6.0lmmo 1)(溶于4ml水），加热至60 °C，溶 清，滴入碳酸氢钠溶液（1.21g，14.40mmol)(溶于40ml水）中，降温至室温搅拌过夜。干燥得 固体0.76g，收率为76.0%。其X-衍射和DSC图谱经研究比对，确定产物为I晶型。
[0041 ] 实施例5
[0042] 取（1.0g，2.24mmol)式（I)所示化合物(按实施例1制备)加入到250ml锥形瓶中，加 入40ml乙腈，室温下搅拌，然后滴入稀盐酸(219mg，6.0lmmo 1)(溶于4ml水），加热至60 °C，溶 清，后滴入碳酸氢钠溶液（1.21g，14.40mmol)(溶于40ml水）中，降温至室温搅拌过夜。干燥 固体0.66g，收率为66.0%。其X-衍射和DSC图谱经研究比对，确定产物为I晶型。
[0043] 实施例6
[0044] 将实施例1所得的I型结晶产物样品分别敞口平摊放置，考察在光照(4500LUX)，加 热(40 °C，60 °C )，高湿(RH75 %，RH90 % )条件下样品的稳定性。考察取样时间为5天和10天， HPLC检测纯度见表1。
[0045]表1、式(I)所示化合物I晶型样品的稳定性比较
[0046]
[0048] 稳定性考察结果表明式(I)所示化合物I型结晶样品在敞口放置的条件下，样品在 光照及高温条件下，样品略有降解，在高湿条件下，稳定性则较好。
[0049] 实施例7
[0050] 将按实施例1方法制得的式（I)所示化合物I型结晶进行研磨、加热及压片处理，研 究结果表明晶型稳定，详细的实验数据参见下表2。
[0051 ]表2.式⑴所示化合物I晶型特殊稳定性研究 [0052]
【主权项】
1. 如式（I)所示化合物的I型结晶，其特征在于:使用Cu-Ka辐射，得到以2Θ角度和晶面 间距表示的X-射线粉末衍射图谱，所述结晶具有如图1所示的X-射线粉末衍射图谱，其中在 约4.91(17.99)，9·91(8.92)，10.53(8.39)，14.82(5.98)，16.04(5.52)，17.34(5.11)， 18.51(4.79)，19.92(4.45)，21·19(4.19)，22.65(3.92)，24·15(3.68)，26.92(3.31)，和 28.98 (3.08)有特征峰，2. -种制备根据权利要求1所述的如式（I)所示化合物的I型结晶的方法，所述方法包 括下述步骤： 1) 将任意晶型或无定型的式（I)所示化合物加入适量的溶剂中，加入酸，溶清后加入 碱，析晶，所述溶剂选自碳原子数小于等于3的醇类、酮类、腈类的任意一种或它们与水的混 合溶剂； 2) 过滤结晶并洗涤，干燥。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其中所述酸为无机酸，优选为盐酸。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其中所述碱为无机碱，优选为碳酸氢钠或碳酸氢 钾。5. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于在步骤1)中所述的溶剂为甲醇、乙醇、异丙 醇、丙酮、乙腈或甲醇/水、乙醇/水、丙酮/水、乙腈/水、异丙醇/水;优选乙醇。6. -种药物组合物，其含有权利要求1所述的如式（I)所示化合物的I型结晶以及药学 上可接受的载体。7. 根据权利要求1所述的如式（I)所示化合物的I型结晶或权利要求6所述的药物组合 物在制备治疗与周期素依赖性蛋白激酶(CDK4&6)有关的疾病的药物中的用途;所述疾病优 选乳腺癌。
【文档编号】C07D471/04GK106065016SQ201610248169
【公开日】2016年11月2日
【申请日】2016年4月20日 公开号201610248169.8, CN 106065016 A, CN 106065016A, CN 201610248169, CN-A-106065016, CN106065016 A, CN106065016A, CN201610248169, CN201610248169.8
【发明人】武乖利, 郭昌山, 边林, 卢韵, 沈灵佳
【申请人】江苏恒瑞医药股份有限公司