一种嘧啶类化合物、egfr抑制剂及其应用

文档序号:10713569阅读:566来源:国知局
一种嘧啶类化合物、egfr抑制剂及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种嘧啶类化合物、EGFR抑制剂及其应用。该嘧啶类化合物包括式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药;EGFR抑制剂包含上述的嘧啶类化合物。本发明的嘧啶类化合物可以抑制一种或多种EGFR的激活或抗性突变;其在纳摩尔浓度下即可抑制EGFR T790M/L858R双突变酶的增殖,而对野生型EGFR酶的抑制则相对较弱;不但可用于EGFR敏感型突变癌症的治疗,还适用于目前EGFR?TKI治疗中产生继发性耐药的病例;同时其突变选择性大大减少了因抑制野生型EGFR而产生的毒副作用,是一种理想的由EGFR突变导致的疾病的治疗药物。
【专利说明】
-种略暗类化合物、EGFR抑制剂及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域,具体设及一种喀晚类化合物,同时还设及一种EGFR抑 制剂及其在制备用于调节EGFR络氨酸激酶活性或治疗EGFR相关疾病,尤其是非小细胞肺癌 的药物方面的应用。
【背景技术】
[0002] 表皮生长因子受体EGFR化pidermal Growth Factor Receptor)是erbB受体家族 的跨膜蛋白酪氨酸激酶的一种。当其与生长因子配体(例如表皮生长因子化GF))结合时,受 体可W与附加的EGFR分子发生同源二聚,或者与另一家族成员(例如erbB2化ER2)、erbB3 化ER3)、或者erbB4化邸4))发生异源二聚。erbB受体的同源二聚和/或异源二聚导致胞内域 中关键酪氨酸残基的憐酸化,并且导致对参与细胞增殖和生存的许多细胞内信号传导通路 的刺激。erbB家族信号传导的失调促进增殖、侵入、转移、血管生成、和肿瘤细胞生存,并且 已在许多的人类癌症中(包括肺癌、头颈部癌和乳腺癌等)得到描述。
[0003] 因此,WerbB家族为代表作为抗癌药物开发的合理祀点,如祀向EGFR或erbB2的许 多药物现在已经在临床上广泛的应用,包括吉非替尼(IRESSA?)、厄洛替尼(TARCEVA?)和 拉帕替尼(TYKERB?)等。New 化gland Journal of Medicine(2008,第358期,1160-1174)和 Biochemical and Bio地ysical Research Communications(2004,第319期,1-11)中提供 了对erbB受体信号传导及其在肿瘤发生中的参与的详细论述。
[0004] 肺癌是全球发病率最高的癌症,在中国肺癌发病率位居所有癌症中第一位,也是 中国发病率和死亡率最高的癌症,在中国的肺癌病人中,大约30%的病人具有EGH?突变,其 中L858R和外显子19缺失突变占大约90% W上,运类病人对EGFR抑制剂更为敏感。现有已上 市第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼等对运类病人有较好的疗效,能够使其中60% W上的病人肿瘤缩小,明显延长病人的无进展生存期。但绝大多数病人在6-12个月会获得 耐药,运种耐药模式是EGFR的进一步突变,运就降低了其对第一代EGFR抑制剂的敏感性。运 些突变中最常见的是所谓的"gateke邱e卢突变T790M(Science,2004,Vol. 304,1497-1500; 化w England Journal of Medicine 2004,350,2129-2139),由原来在该位点的k苏氨酸 巧)为心甲硫氨酸(Μ)替代,变异后的EGF酪氨酸激酶R不再与吉非替尼、厄洛替尼结合,从而 使第一代EGFR抑制剂将不再起效,导致运类病人目前处于无药可用的状态。临床发现对第 一代EGFR抑制剂产生耐药的病人中有50%检测都有EGFR T790M突变。在T790M突变细胞系 H1975中第一代EGFR抑制剂,如吉非替尼和厄洛替尼,均大于3μΜ,基本没有活性。
[0005] 目前开发上市的第二代不可逆pan-EGFR抑制剂(Afatinib BIBW2992)对EGFR突变 肺癌病人疗效显著好于第一代EGFR抑制剂。但第二代抑制剂同时也具有很强的野生型EGFR 抑制活性,对野生型EGFR的抑制活性显著高于耐药T790M突变,病人皮疹等毒副作用严重且 耐药病人疗效较差,仅有小部分第一代EGFR抑制剂耐药病人对运类药物产生应答。
[0006] 为了提高对耐药EGFR T790M等突变的抑制活性,并且同时降低对野生型EGFR的抑 制活性,开发活性更高、选择性更好、毒性更低的第Ξ代66!^突变体选择性抑制剂具有重要 的意义。

【发明内容】

[0007]本发明的目的是提供一种喀晚类化合物,对EGW有很好的抑制活性。
[000引本发明的第二个目的是提供一种EGFR抑制剂。
[0009] 本发明的第Ξ个目的是提供一种上述EGFR抑制剂制备用于调节EGFR络氨酸激酶 活性或治疗EGFR相关疾病的药物方面的应用。
[0010] 为了实现W上目的,本发明所采用的技术方案是:
[0011] -种喀晚类化合物,包括式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构体、 溶剂化物或前药:
[0012]
[0013] 其中,Ar选自苯基或取代的苯基;
[0014] 化选自氨、面素、Ξ氣甲基或氯基;
[001引 R2选自甲氧基、二氣甲氧基、二氣気代甲氧基或Ξ氣甲氧基;
[0016] R3选自如下任意一种结构:
[0017]
[001引Xl、X2、X3各自独立的选自氨或面素。
[0019] 当Ar为取代的苯基时,所述取代的苯基为一取代、二取代或Ξ取代的苯基,取代基 各自独立的选自面素、氛基、硝基、醋基、Cl-4烷基或环烷基、Cl-4烷氧基或环烷氧基、Cl-4面代 烷基、Cl-4酷基、Cl-6烧氨基或环烧氨基。
[0020] 优选的,所述的喀晚类化合物中,式I所示的化合物选自:
[0021]
[0022]
[0023]
[0024] 所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐,所述无机酸盐选自盐酸盐、氨漠 酸盐、氨舰酸盐、硫酸盐、硫酸氨盐、硝酸盐、憐酸盐、酸式憐酸盐;所述有机酸盐选自甲酸 盐、乙酸盐、Ξ氣乙酸盐、丙酸盐、丙酬酸盐、径乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来 酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、巧樣酸盐、酒石酸盐、甲横酸盐、乙横酸盐、苯横酸盐、水杨酸盐、苦 味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、精脑酸盐、精脑横酸盐。
[0025] 本发明的喀晚类化合物,为式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构 体、溶剂化物或前药,该化合物可W抑制一种或多种EGFR的激活或抗性突变,例如L858R激 活突变体、Exonl9缺失EGFR激活突变体、T790M抗性突变体;该化合物提高了对耐药EGFR T790M等突变的抑制活性,并且同时降低了对野生型EGFR的抑制活性,可用于开发活性更 高、选择性更好、毒性更低的第Ξ代EGFR突变体选择性抑制剂。
[0026] 本发明的喀晚类化合物,体外实验表明其在纳摩尔浓度下即可抑制EGFR T790M/ L858R双突变酶的增殖,而对野生型EGFR酶的抑制则相对较弱。因此,此类化合物不但可用 于EGFR敏感型突变癌症的治疗,还适用于目前EGFR-TKI治疗中产生继发性耐药的病例;同 时其突变选择性大大减少了因抑制野生型EGFR而产生的毒副作用,是一种理想的由EGFR突 变导致的疾病的治疗药物。
[0027] 本发明中所提及的溶剂化物是指本发明的化合物与溶剂形成的配合物。它们或者 在溶剂中反应或者从溶剂中沉淀析出或者结晶出来。例如,与水形成的配合物称为水合物; 其他还包括醇合物、酬合物等。本发明所述的溶剂化物包括本发明式I所示的化合物及其 盐、立体异构体的溶剂化物。
[0028] 本发明所提及的立体异构体是指本发明中式I所示的化合物可W含有一个或多个 手性中屯、,并W不同的光学活性形式存在。当化合物含有一个手性中屯、时,化合物包含对映 异构体。本发明包括运两种异构体和异构体的混合物,如外消旋混合物。对映异构体可W通 过本技术领域已知的方法拆分,例如结晶W及手性色谱等方法。当式I所示的化合物含有多 于一个手性中屯、时,可W存在非对应异构体。本发明的立体异构体包括拆分过的光学纯的 特定异构体W及非对应异构体的混合物。非对映异构体可W由本技术领域已知方法拆分, 比如结晶W及制备色谱。
[0029] 本发明所提及的前药是指包括已知的氨基保护基和簇基保护基,在生理条件下被 水解或经由酶反应释放得到的母体化合物。具体的前药制备方法可参照现有技术 (Saulnier,M.G.;Frennesson,D.B.;Deshpande,M.S.;Hanse1,S.B and Vysa, D.M.Bioorg.Med.QiemLett.1994,4,1985-1990;和Greenwald,R.B.;Choe,Y.H.;Conover, C.D.;Shum,K.;Wu,D.;Royzen,M.J.Med.Oiem.2000,43,475.)D
[0030] -种上述的嚼晚类化合物的制备方法,包括将中间体A、中间体B和对甲苯礦酸溶 解在有机溶剂中,在保护气氛、50~10(TC条件下反应,反应结束后加入二氯甲焼和饱和碳 酸钢水溶液,分层,取有机相去除溶剂后,分离纯化,即得;
[0031 ]所述中间体A、中间体B的结构式分别如下所示:
[0032]
[0033] 其中,Ar、Ri、化、尺3八1瓜、乂3如式1中所定义。
[0034] 该制备方法设及的反应式如下:
[0035]
[0036] 所述中间体A与中间体B的摩尔比为1~5:1。所述对甲苯横酸是W-水对甲苯横酸 的形式加入的;对甲苯横酸与中间体B的摩尔比为0.5~2:1。所用的有机溶剂为2-戊醇;所 述有机溶剂的用量为:每50mg中间体B对应使用有机溶剂5ml。所述保护气氛为氮气。所述分 离纯化是采用柱层析进行分离。
[0037] 所述中间体A是由W下方法制备的:
[0038] 方法1:将化合物al与二异丙基乙胺、正下醇混合得混合物,将混合物冷却至-20 °C,加入化合物a2进行反应,后升溫至室溫,揽拌过夜后,去除反应体系的溶剂,在残留物中 加入乙酸乙醋和水,分层,取有机相去除溶剂,分离纯化,即得;
[0039] 或者,方法2:将化合物al与二异丙基乙胺、正下醇、化合物a2混合得混合物,将混 合物加热至l〇〇°C反应过夜,后去除反应体系的溶剂,在残留物中加入乙酸乙醋和水,分层, 取有机相去除溶剂,分离纯化,即得;
[0040] 所述化合物al、化合物a2的结构式如下所示:
[0041]
[0042] 其中,Ar、R桐式(I)中所定义。
[0043] 中间体A的制备方法设及的反应式如下:
[0044]
[0045] 其中,化合物al与化合物a2的摩尔比为1:0.5~2。所述二异丙基乙胺的用量为:每 4~9mmol的化合物al对应加入1~3ml的二异丙基乙胺。所述正下醇的用量为:每4~9mmol 的化合物al对应加入20~30ml的正下醇。在制备中间体A时,所述分离纯化是采用柱层析进 行分离。所述柱层析使用的展开剂为乙酸乙醋与石油酸的混合物。
[0046] 优选的,所述中间体A选自如下化合物:
[0047]
[004引
[0049] 所述中间体B是由W下方法制备的:
[0050] 将化合物bl制成酪钢盐,与舰甲烧或二氣漠乙酸乙醋或気水与二氣漠乙酸乙醋的 混合物(R2的前体)发生取代反应后,经还原(氨化)、硝化,用二碳酸二叔下醋保护氨基,再 与取代基R3的前体发生取代反应,后还原(氨化),再与丙締酸、面素取代的丙締酸或酷氯反 应得到中间体B。
[0化1] 设及的反应式如下:
[0化2]
[0053]上述中间体B的制备方法中,可根据现有技术中可获得原料的情况,从任意一步开 始直到获得中间体B。
[0054]优选的,中间体B选自如下的化合物:
[0化5]
[0056] -种EGFR抑制剂,包含上述的喀晚类化合物。
[0057] 所述的EGFR抑制剂,还包含药学上可接受的载体。
[0058] 所述EGFR抑制剂可W是上述的式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异 构体、溶剂化物或前药,也可W是包含上述化合物的药物组合物。所述药物组合物还包括药 学上可接受的载体。
[0059] 本发明的EGFR抑制剂,可将式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构 体、溶剂化物或前药,与一种或多种药用载体形成适合的剂型施用。运些剂型适用于口服、 直肠给药、局部给药、日内给药W及其他非胃肠道施用(例如,皮下、肌肉、静脉等)。
[0060]本发明的EGFR抑制剂为药物组合物时,组合物W符合医学实践规范的方式配制, 定量和给药。给予化合物的"有效量"由要治疗的具体病症、治疗的个体、病症的起因、药物 的祀点W及给药方式等因素决定。
[0061 ] 一种上述的EGFR抑制剂在制备用于调控EGFR络氨酸激酶活性或治疗EGFR相关疾 病的药物方面的应用。
[0062] 所述调控EGFR络氨酸激酶活性或治疗EGFR相关疾病是指癌症、糖尿病、免疫系统 疾病、神经退行性疾病或屯、血管疾病。
[0063] -种上述的EGFR抑制剂在制备治疗非小细胞肺癌的药物方面的应用。本发明的 EGFR抑制剂尤其适用于制备治疗癌症,如非小细胞肺癌的药物。
[0064] 本发明的EGFR抑制剂可用于制备调控EGFR酪氨酸激酶活性或治疗EGFR相关疾病 方面的药物,如癌症、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病或屯、血管疾病等,尤其适用于 由EGFR突变,包括敏感型突变(如L858R突变或外显因子19缺失)和耐药性突变(如EGFR T790M突变),引起的非小细胞肺癌的治疗药物。
[0065] 本发明的EGFR抑制剂,含有如式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异 构体、溶剂化物或前药,在抗癌治疗中可W作为单独治疗的药物应用,或者除此之外还可W 与常规的手术或放射疗法或化学疗法或免疫疗法联合应用。上述疗法与本发明的EGFR抑制 剂可W并列地、同时地、序贯地、或分别地给药。
[0066] 用于调控EGFR络氨酸激酶活性或治疗EGFR相关疾病的药物,除本发明的EGFR抑制 剂之外,还可W包含W下药物中的任意一种或多种:吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替 尼、乂1^647、曆?-466-788、41?1?¥-334543、凡德他尼、?。00299804、西妥昔单抗、帕尼突单抗、帕 妥珠单抗、扎鲁木单抗、尼妥珠单抗、]?0乂-214、〔0乂-110、1]\?:-1巧8、〔册2024、坦螺旋霉素、阿 螺旋霉素、IPI-504、NVP-AUY922。
【具体实施方式】
[0067] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的说明。
【具体实施方式】 [0068] 中,eq均为反应物的摩尔当量。
【具体实施方式】 [0069] 中,所用的中间体A和中间体B的合成如下。在中间体A和中间体B的 合成反应式中,Ar选自苯基或取代的苯基,所述取代的苯基为一取代、二取代或Ξ取代的苯 基,取代基各自独立的选自面素、氯基、硝基、醋基、Cl-4烷基或环烷基、Cl-4烷氧基或环烧氧 基、Cl-4面代烷基、打-4酷基、Cl-6烧氨基或环烧氨基;Rl选自氨、面素、Ξ氣甲基或氯基;R2选自 甲氧基、二氣甲氧基、二氣気代甲氧基或Ξ氣甲氧基;R3选自如下任意一种结构:
[0070]
[0071] Xl、X2、X3各自独立的选自氨或面素。
[0072] 中间体A的制备方法为方法A1、方法A2或方法A3,具体如下。
[0073] 方法A1:将7.8mmol的化合物al-1加入到100ml的单口瓶中,加入3ml的二异丙基乙 胺和3 0 m 1的正下醇得混合物;采用冷浴将混合物冷却至-2 0°C,慢慢的滴加化合物a 2 (13.8mmol),加完后低溫反应化,去冷浴升溫至室溫,揽拌过夜,将溶剂减压蒸干,将残留物 加入100ml的乙酸乙醋化A),再加入50ml的水洗涂2次,将有机相蒸干,残余物进行柱层析分 离(洗脱剂为乙酸乙醋:石油酸= 1:30(体积比)),即得中间体A1。
[0074] 上述方法A1设及的反应式如下:
[0075]
[0076] 其中,Ar选自苯基或取代的苯基,所述取代的苯基为一取代、二取代或Ξ取代的苯 基,取代基各自独立的选自面素、氯基、硝基、醋基、Cl-4烷基或环烷基、Cl-4烷氧基或环烧氧 基、Cl-4面代烷基、Cl-4酷基、Cl-6烧氨基或环烧氨基。
[0077] 方法A2:将4.35mmol的化合物al-2加入到50ml的单口瓶中,加入1ml的二异丙基乙 胺和20ml的正下醇,再加入2.2mmol的化合物曰2得混合物,将混合物加热至100 °C反应过夜, 将溶剂减压蒸干,残留物加入50ml的乙酸乙醋化A),加入50ml的水洗涂2次,将有机相蒸干, 残余物进行柱层析分离,即得中间体A2。
[007引上述方法A2设及的反应式如下:
[0079]
[0080] 方法A3:将9mmol的化合物al-3加入到50ml的单口瓶中,加入1ml的二异丙基乙胺 和25ml的正下醇,再加入9mmol的化合物a2得混合物,将混合物加热至100°C反应过夜,将溶 剂减压蒸干,残留物加入50ml的乙酸乙醋巧A),加入50ml的水洗涂2次,将有机相蒸干,残余 物进行柱层析分离(洗脱剂为乙酸乙醋:石油酸= 1:20(体积比)),即得中间体A3。
[0081 ] 上述方法A3设及的反应式如下:
[0082]
[0083] 中间体B的制备方法为方法B1或方法B2,具体如下。
[0084] 方法B1包括下列步骤:
[0085] 1)化合物bl-2的合成:将50g化合物bl-1溶解在250ml四氨巧喃中,将12.6g氨氧化 钢溶解在250ml水中,将两溶液混合揽拌过夜,旋蒸除去四氨巧喃,将水相用二氯甲烧洗涂 两次,旋蒸除去大部分水,将剩余部分自然挥干,真空干燥箱彻底干燥,得到55g橘黄色固 体,为化合物b 1 -2。该化合物的分析数据如下:1H-NMR (400MHz,&DMS0 ):S:7.73(t,J = 8.22, lH);6.02(dd,J = 2.97,13.79,lH);5.77(dt,J = 2.87,7.45,lH)。
[0086] 2)化合物bl-3的合成:将7g化合物bl-2与17.5g碳酸钟加入反应瓶中,然后氣气保 护下,向反应瓶中加入700ml的DMF(二甲基甲酯胺)、70g気水与17.5g漠代二氣乙酸乙醋,逐 渐升溫至50°C,揽拌过夜,TLC显示原料大部分消失,冷却后,将反应液用水稀释,用二氯甲 烧萃取Ξ次,合并有机相,用水洗涂5次,将有机层干燥旋干,残留物经柱层析分离得到6.2g 淡黄色油状物,为化合物bl-3。该化合物的分析数据如下:lH-NMR(400MHz,CDCl3): δ: 8.01 (q J = 5.58,3.51,lH);7.07-7.15(m,2H)〇
[0087] 3)化合物bl-4的合成:将Ig化合物bl-3溶解在25ml乙醇中,加入钮碳,氨气氛围 下,室溫常压揽拌过夜;TLC检测原料消失,过滤掉钮碳,乙醇洗涂,旋干溶剂得到0.7?化合 物bl-4,为黄色油状物。该化合物的分析数据如下:lH-NMR(400MHz,CDC13): : δ : 6.70-6.84 (m,3H);3.71(br,2H);MS m/z化SI):179[Μ+扣+。
[008引 4)化合物bl-5的合成:将0.7?化合物bl-4分批加入冰水浴冷却的5ml浓硫酸中, 溫度低于10°C,使其全部溶解,然后加入0.45g硝酸钟,室溫揽拌过夜,反应结束,将反应液 倒入冰水中,然后用氨水碱化,用乙酸乙醋萃取有机层,合并有机层,用饱和食盐水洗涂一 次,干燥旋干有机层,残留物进行柱层析分离,得到0.8g黄色固体,即为化合物bl-5。该化合 物的分析数据如下:1H-醒R(400MHz,CDCl3):S:7.46(d,J = 6.48,lH);6.99(d,J=10.94, 1H);4.03(br,1H);MS m/z化SI):224[M+扣+。
[0089] 5)化合物bl-6的合成:将3.1g化合物bl-5与171mg的DMAP(4-二甲氨基化晚)溶解 在40ml乙腊中,冰浴下加入3.6g的(Boc)20(二碳酸二叔下醋),然后逐渐升至室溫揽拌过 夜,TLC检测原料消失,然后直接旋干反应液,残留物进行柱层析分离,得到3g黄色固体,即 为化合物bl-6。该化合物的分析数据如下:1H-醒R(400MHz,CDCl3):S:8.99(d,J = 8.10, lH);7.07(d,J = 12.15,lH);6.85(br,lH);MS m/z化SI):324[M+扣+。
[0090] 6)化合物bl-7的合成:将1.5g化合物bl-6、950mg的Ν,Ν,Ν'-Ξ甲基乙二胺与1.8g 二异丙基二胺溶解在20ml的DMAC(N,N-二甲基乙酷胺)中,然后升溫至60°C揽拌过夜,TLC检 测原料消失,将反应液倒入水与乙酸乙醋化A)中,水层再用乙酸乙醋化A)洗涂一次,然后合 并EA层用水洗涂5次去除DMA,然后干燥旋干有机层;残留物进行柱层析分离,得到2.2g黄色 固体,即为化合物b 1-7。
[0091] 7)化合物bl-8的合成:将2.2g化合物bl-7溶解在40ml的乙酸乙醋化A)中,然后加 入〇.2g钮碳,氨气氛围下,室溫揽拌过夜,TLC检测原料消失,过滤掉钮碳,旋干母液得到2g 黄色油状物,即为化合物bl-8。该化合物的分析数据如下:lH-NMR(400MHz,CDCl3): δ: 7.47 (s,lH);6.78(s,lH);6.69(br,lH);4.25(br,2H);2.85(t J = 6.89,lH);2.62(s,3H);2.36 (t,J = 6.48,lH);2.25(s,6H);MS m/z化SI):376[M+扣+。
[OOW] 8)中间体B-1的合成:将2g化合物bl-8溶解在40ml二氯甲烧中,然后加入0.83g二 异丙基乙胺,然后氮气保护下,冰盐浴降溫至〇°C左右,然后滴加0.55g丙締酷氯,滴加完毕 后逐渐升溫至室溫,揽拌两个小时,TLC检测原料消失,接着旋干反应液,再向剩余物中加入 5ml浓盐酸,揽拌两个小时,TLC显示原料消失,然后用饱和碳酸钢水溶液调PH至8左右,使体 系碱化,用(乙酸乙醋化A萃取反应液Ξ次,合并有机层,干燥,旋干,残留物进行柱层析分 析,得到750mg黄色油状物,即为中间体B1。该化合物的分析数据如下:1H-應R(400M化, CDC13): δ :8.07( S,1H); 6.92( s,lH); 6.39(dd,J= 1.63,17.09, lH);6.22(dd,J= 10.48, 17.47,lH);5.68(dd J=1.42,9.91,lH);3.81(br,2H);2.77(t J = 5.44,lH);2.63(s,3H); 2.23(s,8H);MS m/z化SI):330[M+扣+。
[0093] 方法B1设及的反应式如下:
[0094]
[00巧]方法B2包括下列步骤:
[0096] 1)化合物b2-2的合成:取50g化合物b2-l,加入500ml甲醇全溶解,加入lOg的Pd/C (钮碳),35°C下氨化反应两天;点板监控,原料反应完毕,直接滤除Pd/C,旋干甲醇相得到化 合物b2-2粗品39g。
[0097] 2)化合物b2-3的合成:取化合物b2-2粗品39g,加入到500ml的浓硫酸中(冰盐浴), 在T<10°C条件下揽拌全溶,保持在该溫度下加入lep的硝酸钟,室溫下揽拌过夜;次日将反 应液倒入冰水中,用氨水调节PH〉7,乙酸乙醋萃取,干燥,进行柱层析分离,得到Mg产品,即 为化合物b2-3。该化合物的分析数据如下:1H NMR(CDCl3)S7.39(d,J = 7.2Hz,1H),6.63(d, J = 12.4Hz,IH),3.94(s,3H),3.90(broad,2H)。
[0098] 3)化合物b2-4的合成:取20g的化合物b2-3,加入到500ml的二氯甲烧中,冰盐浴冷 却到-5°C,滴加 l.leq的二碳酸二叔下醋的二氯甲烧溶液,滴毕,加入0.2eq的DMAP(4-二甲 氨基化晚),自然升溫到室溫,揽拌过夜;次日,点板,反应完毕,进行柱层析分离,得到2?黄 色固体,即为化合物b2-4。该化合物的分析数据如下:1H NMR( CDC13) δ8.89 (S,1H),6.97 (S, lH),6.71(d,J=12.4Hz,lH),3.97(s,3H),1.53(s,9H);MS:Calcd for Cl抽isF化05(Μ-Η)-: 286.1,Found:285.0。
[0099] 4)化合物b2-5的合成:取13.5g的化合物b2-4,加入到200ml的DMAC(N,N-二甲基乙 酷胺)中,揽拌下全溶;再加入2eq的Ν,Ν,Ν'-Ξ甲基乙二胺和3eq的DIEA(N,N-二异丙基乙 胺),升溫到ll〇°C揽拌过夜;次日,反应完毕,得到2?油状物粗品化合物b2-5。该化合物的 分析数据如下:1η NMR(CDCl3)S8.54(s,lH),6.85(s,lH),6.60(s,lH),3.90(s,3H),3.22(t, J = 6.8Hz,2H), 2.81 (s,3H) ,2.55( t,J = 7.2Hz,2H), 2.26(s,細),1.49( s,9H);MS:Calcd for Cl讯28N405 (Μ+ΗΓ: 368.21,Found: 369.3。
[0100] 5)化合物b2-6的合成:取2?粗品化合物b2-5,加入到400ml的乙酸乙醋中,揽拌下 全溶,再加入4.07g的Pd/C(钮碳),20°C下氨化反应过夜;次日,原料反应完毕,直接滤除Pd/ C,浓缩,得到化合物b2-6粗品17g,为黑色油状物。该化合物的分析数据如下:iH NMR(CDCl3) 57.517(s,lH),6.941(s,lH),6.61(s,lH),4.10(m,2H),3.76(s,3H),2.92(m,2H),2.62(s, 3H),2.40(m,2H),2.27(s,6H),1.49(s,9H);MS:Calcd for Ci7出οΝ4〇3(Μ+ΗΓ:338.23, Found:339.4ο
[0101] 6)化合物b2-7的合成:取17.:3g化合物b2-6粗品,加入500ml的二氯甲焼和1.2eq的 DIEA(N,N-二异丙基乙胺),冰盐浴冷却到-5°C,氣气保护下滴加 l.leq的丙締酷氯,滴毕,自 然升溫到室溫,3小时后,反应完毕,直接低溫下旋蒸浓缩除去溶剂,得到2:3g粗品化合物b2- 7。
[017)中间体B-2的合成:取23g粗品化合物b2-7,加入到50ml的THF中,冰盐浴冷却到- 5°C,加入浓盐酸100ml,溫度T<10°C,揽拌2小时后,点板反应完毕,进行柱层析分离,得到 5.2g产品,即为中间体B2。该化合物的分析数据如下:iH NMR(CDC13) δ 10.10 (S,1H),7.97 (S, lH),6.68(s,lH),6.41-6.21(m,2H),5.65(m,lH),3.81(s,3H),3.76(s,2H),2.82(m,2H), 2.65(s,3H),2.20(s,6H);MS: Calcd for C化出4N4O2(M+H) +: 292.19,Found: 293.3。
[0103] 方法B2设及的反应式如下:
[0104]
[01化]方法B3包括下列步骤:
[0106] 1)化合物b3-2的合成:取50g原料化合物b3-l,加入到500ml的DMF中,再加入1.5eq 的二氣漠乙酸乙醋和2eq的碳酸钟,先室溫揽拌lOmin,加入3eq的水,氣气保护下油浴升溫 到50°C,4小时后原料反应完毕,降溫到0°C,加水泽灭,用二氯甲烧和石油酸等比例混合的 有机相萃取,有机相干燥,浓缩,进行柱层析分离,得到化合物b3-2产品77g。该化合物的分 析数据如下:1η NMR(CDCl3)S8.03(dd,J = 9.2,5.6Hz,lH),7.149-7.081(m,2H),6.645(t,J = 72.4Hz,lH)。
[0107] 2)化合物b3-3的合成:取77g化合物b3-2,加入700ml无水乙醇全溶解,加入Pd/C (钮碳)13g,2(TC下氨化反应过夜;点板监控,原料反应完毕,直接滤除Pd/C,旋干得到化合 物b3-3粗品55g。该化合物的分析数据如下:1H NMR(CDC13)S6.84-6.70(m,3H),6.468(t,J =73.6Hz,IH),3.16(broad,2H);MS: Calcd f or C7也的NO(M+H) +: 178.04,Found: 178.00。
[0108] 3)化合物b3-4的合成:取化合物b3-3粗品55g,加入到600ml的浓硫酸中(冰盐 浴),,T<10°C揽拌全溶,保持在该溫度下加入lep硝酸钟,室溫下揽拌过夜;次日,倒入冰水 中,用氨水调节PH〉7,乙酸乙醋萃取,干燥,进行柱层析分离,得到6:3g黄褐色产品,即为化合 物b3-4。该化合物的分析数据如下:iH CDC13) δ7.46(d,J = 7.2Hz,1H),7.01 (d,J = 11.2Hz,lH),6.597(t,J = 72.4Hz,lH),4.047(broad,2H)。
[0109] 4)化合物b3-5的合成:取11. Ig化合物b3-4,加入到200ml的二氯甲烧中,冰盐浴冷 却到-5°C,滴加 l.leq的二碳酸二叔下醋的二氯甲烧溶液,滴毕,加入0.2eq的DMAP(4-二甲 氨基化晚),自然升溫到室溫,揽拌过夜,次日,点板,反应完毕,进行柱层析分离,得到9.7g 黄色产品,即为化合物b3-5。该化合物的分析数据如下:1H匪R(CDCI3)δ9.00(d,J =細Z, lH),7.07(d,J=10.8Hz,lH),6.864(s,lH),6.661(t,J = 71.2Hz,lH),1.541(s,9H);MS: 化led for Cl抽 13的化0日(]\1-扣-:323.08,化11]1(1:321.1。
[0110] 5)化合物b3-6的合成:取0.8?的化合物b3-5,用10ml的DMAC(N,N-二甲基乙酷胺) 溶解,加入2eq的R抽和3eq的DIEA(N,N-二异丙基乙胺),氣气保护下,80°C反应过夜;次日检 巧。,原料消失;80°C下,旋蒸除去DMA,加入50ml饱和碳酸钢水溶液和50ml二氯甲烧,二氯甲 烧再萃取2次,合并有机相,干燥,浓缩,得到化合物b3-6粗品1.3g。该化合物的分析数据如 下:MS:Calcd for Ci6出化化06(Μ+ΗΓ:389.14,化und:390.2。
[0111] 6)化合物b3-7的合成:取1.2g化合物b3-6,用lOOmL乙酸乙醋溶解,加入0.4eq的 Pd/C(钮碳),20°C氨化反应过夜;次日检测,原料消失,滤除Pd/C,浓缩,进行柱层析分离,得 到化合物b3-7产品0.7g。该化合物的分析数据如下:1H NMR(CDCl3)S9.32(br,1H),9.23(s, lH),6.96(s,lH),6.73(s,lH),6.47(t,J=74.8Hz,lH),5.85(m,lH),5.24(m,lH),3.86(m, 4H),2.83(m,4H),1.53(s,9H);MS:Calcd for Ci6出3F2N304(M+H) +:359.17,Found:360.2。
[0112] 7)化合物b3-8的合成:取原料丙締酸(或者取代的丙締酸)0.1 g,用20ml的DCM(二 氯甲烧)溶解,加入〇.7eq的草酷氯和一滴DMF,氣气保护下,-5°C反应4小时生成酷氯,得酷 氯溶液待用;同时,在另一个反应瓶中,取出0.2g(0.5eq)的化合物b3-7,用20ml干燥的二氯 甲烧溶解,加入0.15g的DIEA,-5°C下,把制好的酷氯溶液打入反应液中,反应过夜;次日直 接旋干,得化合物b3-8。该化合物的分析数据如下:MS:Calcd for Cl油24F3化化(Μ+ΗΓ: 431.17,Found:432.2。
[0113] 8)中间体B-3的合成:取O.lg的化合物b3-8,加入3ml的浓盐酸,加入时有气泡放 出,揽拌3分钟即可;反应液滴加到lOml的饱和碳酸钢溶液中,滴毕,溶液PH〉10;用二氯甲烧 30ml萃取2次,干燥,浓缩得到0.08g产品,即为中间体B3。该化合物的分析数据如下:MS: Calcd for Cl姐 16的N6〇6(M+Hr:331.11Jound:332.1。
[0114] 方法B3设及的反应式如下:
[0115]
[0116] 实施例1
[0117] 本实施例的喀晚类化合物,其结构式如式1-1所示:
[011 引
[0119] 本实施例的喀晚类化合物的制备方法如下:将50mg(ο . 15mmo 1)的中间体B、150mg (Ο . 5mmo 1)的中间体A与35mg(0.18mmo 1)的一水对甲苯横酸溶解在5ml的2-戊醇中,然后升 溫至50°C,氮气保护下揽拌过夜,TLC显示原料基本消失,旋干容积,然后加入20ml二氯甲烧 和20ml饱和碳酸钢水溶液,分层,再用20ml二氯甲烧洗涂水相两次,合并有机相,干燥旋干, TLC分离得到20mg产品,即为化合物I-1。该化合物的分析数据如下:1H-應R(400M化, CDCl3):S:10.18(br,lH);9.19(br,lH);8.38(s,lH);7.52(dt,J=2.39,11.32,lH),7.16- 7.24(m,2H);7.03-7.06(m,2H);6.86(br,lH);6.71(t J = 7.11,lH);6.30-6.38(m,2H); 5.67(dd J = 2.62,9.58, IH); 2.84( t,J = 5.27,2H); 2.70(s,3H); 2.37( tj = 4.91,2H); 2.30(s,6H);MS m/z化SI):585[M+扣+。
[0120] 上述制备方法设及的反应式如下:
[0121]
[0122]其中,中间体A1-1是义用上述的方法A1制成的;中间体B1-1是义用上述的方法B1 制成的。
[0123] 实施例2-29的喀晚类化合物及其制备方法所用的中间体A、中间体B如表1所示,其 余同实施例1。
[0124] 表1实施例2-29的喀晚类化合物及其制备方法所用的中间体A、中间体B
[0125]








[0134] 实施例30
[0135] 本实施例的喀晚类化合物,为实施例6所示的喀晚类化合物(1-6)的甲横酸盐,其 结构式如式1-30所示:
[0136]
[0137] 本实施例的喀晚类化合物(甲横酸盐)的制备方法为:将0.37g的化合物1-6加入 50ml的单口瓶中,加入10ml的丙酬和1ml的水,加完后揽拌下慢慢加入64mg的甲横酸,加完 后在50°C条件下反应化,将反应液蒸干后加入6ml的乙腊升溫至70°C揽拌30min,慢慢冷却 使固体析出,将固体滤出,用乙腊洗涂,干燥后得到白色的固体140mg,即为化合物1-30。采 用HPLC检测其纯度为98.5 %。所得化合物1-30的分析数据为:HNMR(400M,ds-DMSO): 9.35(s lH),9.14(s,lH),8.76(s,lH),8.70(s,lH),8.36(s,lH),7.95(s,2H),7.85(d,J=8.10Hz, lH),7.41(m,2H),6.97(s,lH),6.60(m,lH),6.24(d,J=16.7Hz,lH),5.78(d,J = 11.4Hz, 1扣,3.82(3,3扣,3.26(3,他),2.79(3,細),2.59(3,3扣,2.31(3,3扣。
[0138] 该制备方法设及的反应式如下:
[0140] 实验例
[0141] 一、本实验例对实施例1-29的喀晚类化合物对野生型EGFR和突变型EGFR激酶的活 性抑制作用进行检测。
[0142] 利用本方法测定待测物对双突变型EGFR激酶化GFR T790M/L858R激酶)、野生型 EGFR激酶化GFR WT)活性的抑制作用。本检测方法中所用的野生型EGFR和突变型EGFR (T790M/L858R)激酶均购自Carna Bioscience(卡纳生物科学)。
[0143] 实验设计:
[0144] 待测化合物的准备:
[0145] 1、将待测试的化合物配制成10mM(mmol/L)的DMS0溶液,对照样化合物AZD9291配 制成 lmM(mmol/L)的 DMS0 溶液。
[0146] 2、通过3-倍稀释,将待测化合物溶液连续稀释到12个浓度(或别的所需的测试浓 度)在TECAN EV0200的384孔板上。
[0147] 3、使用Echo550转移20nL测试溶液到384孔板上(Coring 3570)。使用DMS0作为空 白对照。
[014引进行酶测试:
[0149] 1、准备含有酶、基质、辅因子的1.3X酶溶液,如下表2所示。
[0150] 2、在室溫下,每个孔板的孔中加入15化的1.3X酶溶液培养30分钟。
[0151] 3、加入扣L的4X ATP溶液开始测试反应。最终每个孔中的溶液体积应为20化,含有 的成分如下表2所示。
[0152] 4、孔板在室溫下培养90分钟,然后加入40化的终止缓冲液(含有0.5M EDTA)终止 测试反应。
[0153] 5、使用EZ检测分析每个孔的实验数据。
[0154] 表2酶测试中酶溶液参数表
[0155]
[0157]数据分析:
[015引1、使用read转化率(CR),根据如下公式计算抑制比率:
[0159]
[0160] 2、按照如下公式,使用XLFit(equation 201)计算IC50和Ki值,
[0161]
[0162] 检测结果如下表3所示。
[0163] 表3野生型EGFR和突变型EGFR激酶的活性抑制检测结果
[0164]

[0166] 结合上述实验结果,本发明的喀晚类化合物与现有技术相比具有如下优点:
[0167] (1)本发明的式I所示的化合物对EGFR有非常好的抑制活性,尤其对EGFR突变(特 别是EGFR T790M/L858R突变)的抑制活性非常明显的高于现有技术化合物AZD9291的活性, 如实施例1、3、9、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、22等等。在达到相同的治疗效果的前提 下,可W大大减少给药量,从而大大减少药物所引起的其他副作用。
[016引(2)本发明的式I所示的化合物对野生型EGFR具有低的抑制活性,明显优于同代现 有技术化合物AZD9291,如实施例1、2、3、4、6、8等等,对酶的选择性抑制活性可^达到10~ 60倍,明显的优于现有技术化合物AZD9291的3倍,且比第二代EGFR抑制剂的选择性更高。在 药物应用方面,可W很好的减少由于对野生型EGFR强抑制而导致病人皮疹等严重的毒副作 用等问题。
[0169] (3)与其他已知的EGFR突变抑制剂相比,本发明化合物还显示出有利的物理性质 (如水溶性等),有利的代谢特征(如较好的药代动力学特征,如生物利用度)。
[0170] 二、化合物对细胞生长抑制活性测试:
[0171] 测试方法和步骤采用本领域技术人员熟知的方法进行,方法中所用试剂均可市购 得到。测试方法:
[0172] 1.实验步骤:
[0173] (1)使用Echo (非接触式纳升级声波移液系统)取40化待测化合物溶液到测试板。
[0174] (2)将细胞配制成25000cell/mL的溶液,然后取40化到指定的384孔巧聯板上。
[01巧](3)培养板在37Γ,5%的二氧化碳,95%的湿度下培养72小时。
[0176] (4)每孔中加入40化的C細Titer-Glo?试剂。
[0177] (5)将测试板在室溫下,解育30分钟,W稳定发光信号。
[017引(6)密封测试板,W1000转/分钟的离屯、速度来去除气泡。
[0179] (7)将测试板在摇床上摇动1分钟。
[0180] (8)读取测试板数据。
[0181] 2.数据处理
[0182] (1)使用下面的公式计算残留率:
[0183]
[0184] S:测试样品读数;
[01化]V:空白样读数;
[0186] Μ: AZD9291测试样(ΙμΜ用于测试PC-9和H1975,30μΜ用于A431测试)读数;
[0187] 使用 XLF 口 (V5.3.1.3)软件计算 IC50。
[0188] 检测结果如表4所示。
[0189] 表4化合物对细胞抑制活性检测结果
[0190]
[0191] 从表4可W看出,本发明的示例化合物对EGFR突变型细胞化1975、PC-9)表现出较 强的抑制活性;与对照样化合物AZD9291相比,本发明的化合物对EGFR突变型细胞生长的抑 制活性比对照化合物AZD9291提高了 4~7倍。
[0192] 其中,对照化合物AZD9291 (商品名:迈瑞替尼)结构如下:
[0193]
【主权项】
1. 一种喀晚类化合物,其特征在于:包括式I所示的化合物,或其药学上可接受的盐、立 体异构体、溶剂化物或前药:其中,Ar选自苯基或取代的苯基; 化选自氨、面素、Ξ氣甲基或氯基; 化选自甲氧基、二氣甲氧基、二氣気代甲氧基或Ξ氣甲氧基; 化选自如下任意一种结构:, Xi、拉、&各自独立的选自氨或面素。2. 根据权利要求1所述的喀晚类化合物,其特征在于:当Ar为取代的苯基时,所述取代 的苯基为一取代、二取代或Ξ取代的苯基,取代基各自独立的选自面素、氯基、硝基、醋基、 Cl-4烷基或环烷基、Cl-4烷氧基或环烷氧基、Cl-4面代烷基、Cl-4酷基、Cl-6烧氨基或环烧氨基。3. 根据权利要求2所述的喀晚类化合物,其特征在于:式I所示的化合物选自:4. 根据权利要求1所述的喀晚类化合物,其特征在于:所述药学上可接受的盐为无机酸 盐或有机酸盐,所述无机酸盐选自盐酸盐、氨漠酸盐、氨舰酸盐、硫酸盐、硫酸氨盐、硝酸盐、 憐酸盐、酸式憐酸盐;所述有机酸盐选自甲酸盐、乙酸盐、Ξ氣乙酸盐、丙酸盐、丙酬酸盐、径 乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、巧樣酸盐、酒石酸盐、 甲横酸盐、乙横酸盐、苯横酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、精 脑酸盐、精脑横酸盐。5. -种EGFR抑制剂,其特征在于:包含权利要求1-4中任一项所述的喀晚类化合物。6. 根据权利要求5所述的EGFR抑制剂,其特征在于:还包含药学上可接受的载体。7. -种如权利要求5所述的EGFR抑制剂在制备用于调控EGFR络氨酸激酶活性或治疗 EGFR相关疾病的药物方面的应用。8. 根据权利要求7所述的应用,其特征在于:所述调控EGFR络氨酸激酶活性或治疗EGFR 相关疾病是指癌症、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病或屯、血管疾病。9. 一种如权利要求5所述的EGH?抑制剂在制备治疗非小细胞肺癌的药物方面的应用。
【文档编号】A61P37/00GK106083736SQ201610462600
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月21日
【发明人】吴豫生, 牛成山, 耿阳, 梁阿鹏, 郭中伟, 刘建涛, 杨俊亮, 霍云峰, 韩兴旺, 孟庆国, 李敬亚, 郭瑞云, 邹大鹏
【申请人】郑州泰基鸿诺医药股份有限公司
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