一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法
【专利摘要】本发明公开了一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，通过独创性地采用水飞蓟素双相萃取技术分离水飞蓟宾粗品I，采用膜分离技术分离水飞蓟宾粗品I得到水飞蓟宾粗品II，通过重结晶技术结晶水飞蓟宾粗品II得到水飞蓟宾精品I，最后采用等离子重结晶法结晶水飞蓟宾精品I得到高纯度水飞蓟宾，通过工艺的改良，最终实现项目研究的产业化生产工艺。本发明大幅度的降低了提取过程中有机溶剂的使用，避免了有机溶剂的大量使用对环境造成的污染，在减低生产成本的同时，减少有机溶剂的使用给人类健康带来的不可估量的毒副影响。
【专利说明】
一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法
技术领域
[0001]本发明属于中药制备领域，具体涉及一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法。
【背景技术】
[0002]水飞蓟素(Silymarin)是从水飞蓟的种子中提取出来的一种黄酮木质素类混合物，它包括水飞蓟宾(Si I ibinin，或Sy Iibin)、异水飞蓟宾(isosylibinin)、水飞蓟亭(silicristin)、水飞蓟宁(siIidianin)等成分。水飞蓟宾(FigureI)本身也是由等比例水飞蓟宾A和水飞蓟宾B构成的两个非对映体混合物。体外和动物实验研究结果表明水飞蓟宾有很好的保护肝细胞免受毒素损伤的作用。水飞蓟宾有四个手性中心，水飞蓟宾A(2R，3R，10尺，1110和水飞蓟宾8(21?，31?，103，113)，约占水飞蓟素总量的60%-70%，是主要活性成分。目前，水飞蓟宾作为保肝药物被广泛应用于治疗肝炎、肝硬化及代谢中毒性肝损伤等疾病，其机制是抗氧化、抗脂质过氧化、抗纤维化、细胞膜稳定和免疫调节作用，并能增强肝再生能力等，被称为“天然的保肝药”；同时，大量的研究表明水飞蓟宾还具有降血脂、保护心肌及抗糖尿病的作用。在动物研究实验中表明其没有明显的慢性毒副作用。近些年来的研究发现，水飞蓟宾还具有较强的抗肿瘤活性，使其越来越受到国内外研究者的关注。
[0003]目前，水飞蓟宾有多种提取分离方法，但主要方法包括:(I)先将水飞蓟种子去油，再以乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂加热回流，经过多次萃取、洗脱，提取分离得到水飞蓟宾产品，该方法利用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等对人体有害溶剂提取的产品存在着有害溶剂残留，残留量超标等问题，而且该方法操作时间长，能耗大，污染环境；(2)使用超临界二氧化碳萃取法提取分离水飞蓟宾，该方法虽然改善了有机溶剂残留问题，但是操作时间较长，对操作温度、压力有一定要求；(3)国外也有研究用高温高压热水代替有机溶剂提取水飞蓟宾，但是高温高压生产难度大，危险性高，不利于工业生产。目前在生产中采用的较多的提取和纯化方法，依然为有机溶剂提取法，采用这种方法不仅会对人体产生毒害作用，而且还会造成很大开销。因此，在保证水飞蓟宾纯度的前提下，研究如何降低水飞蓟宾提取过程中有机溶剂的使用，对于环境保护和提高生产效率方面都非常有意义，同时也是本项目的研究目的和意义。
[0004]随着水飞蓟的广泛应用，对其有效成分水飞蓟宾的提取和纯化方法的研究也越来越多，但是大多数都局限于传统方法，本申请独创性地采用水飞蓟素双向萃取技术分离水飞蓟宾粗品I，采用膜分离技术分离水飞蓟宾粗品I得到水飞蓟宾粗品II，通过重结晶技术结晶水飞蓟宾粗品II得到水飞蓟宾精品I，最后采用等离子重结晶法结晶水飞蓟宾精品I得到高纯度水飞蓟宾，通过工艺的改良，最终实现项目研究的产业化生产工艺。
【发明内容】
[0005]发明目的:为解决上述技术问题，本发明提出一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法。
[0006]技术方案:为实现上述技术目的，本发明提出一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，包括如下步骤:
[0007](I)双相萃取水飞蓟素:首先用甲醇加热溶解水飞蓟素，滤去不溶物，抽滤，将得到的固体用石油醚洗三次，将烘干得到的固体以25%PEG2000,12% (NH4)2SO4和3%NaCl双水相体系剂型萃取，得到水飞蓟宾粗品I，经HPLC检测，含量指标在80%以上；
[0008](2)将得到的水飞蓟宾粗品I通过膜分离得到水飞蓟宾粗品II，经HPLC检测，含量指标在90%以上；
[0009](3)将得到的水飞蓟宾粗品II解析重结晶得到水飞蓟宾精品I，经HPLC检测，含量指标在96%以上；
[0010](4)将得到的水飞蓟宾精品I中加入等摩尔量的水进行重结晶，水中的H离子与水飞蓟宾中的阴离子结合，有效地促进了水飞蓟宾的重结晶，形成得到高纯度水飞蓟宾经HPLC检测，含量指标在99 %以上。
[0011]具体地，步骤(2)中，膜分离首先以膜孔径0.30?0.5μπι的滤膜进行一级膜分离，然后再用应用0.15?0.3μπι的滤膜进行二级膜分离，最后进行喷雾干燥成水飞蓟宾粗品11。
[0012]步骤(3)中，用无水乙醇溶解水飞蓟宾粗品II，溶解后微孔过滤，将滤液浓缩至水飞蓟宾粗品II与加入的无水乙醇的总体积的20%?30%，析晶、过滤、干燥得到水飞蓟宾精品I O
[0013]有益效果:本项目通过采用双相萃取技术、膜分离技术以及重结晶技术相结合的方式提纯水飞蓟宾，大幅度的降低了提取过程中有机溶剂的使用，避免了有机溶剂的大量使用对环境造成的污染，在减低生产成本的同时，减少有机溶剂的使用给人类健康带来的不可估量的毒副影响。
【具体实施方式】
[0014]提出一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，包括如下步骤:
[0015](I)双相萃取水飞蓟素:首先用甲醇加热溶解水飞蓟素，滤去不溶物，抽滤，将得到的固体用石油醚洗三次，将烘干得到的固体以25%PEG2000,12% (NH4)2SO4和3%NaCl双水相体系剂型萃取，得到水飞蓟宾粗品I，经HPLC检测，含量指标在80%以上；
[0016](2)将得到的水飞蓟宾粗品I通过膜分离得到水飞蓟宾粗品I1:首先以膜孔径0.30的滤膜进行一级膜分离，然后再用应用0.15的滤膜进行二级膜分离，最后进行喷雾干燥成水飞蓟宾粗品11，经HPLC检测，含量指标在90 %以上；
[0017](3)将得到的水飞蓟宾粗品II解析重结晶得到水飞蓟宾精品I，具体地用无水乙醇溶解水飞蓟宾粗品II，溶解后微孔过滤，将滤液浓缩至水飞蓟宾粗品II与加入的无水乙醇的总体积的20%?30%，析晶、过滤、干燥得到水飞蓟宾精品I，经HPLC检测，含量指标在96%以上；
[0018](4)将得到的水飞蓟宾精品I加入等摩尔量的水进行重结晶，水中的H离子与水飞蓟宾中的阴离子结合，有效地促进了水飞蓟宾的重结晶，形成得到高纯度水飞蓟宾经HPLC检测，含量指标在99 %以上。
[0019]本发明的方法通过独创性地采用水飞蓟素双向萃取技术分离水飞蓟宾粗品I，采用膜分离技术分离水飞蓟宾粗品I得到水飞蓟宾粗品II，通过重结晶技术结晶水飞蓟宾粗品II得到水飞蓟宾精品I，最后采用等离子浓度的水进行重结晶法结晶水飞蓟宾精品I得到高纯度水飞蓟宾，通过工艺的改良，最终实现项目研究的产业化生产工艺。本项目的实施大幅度的降低了提取过程中有机溶剂的使用，避免了有机溶剂的大量使用对环境造成的污染，在减低生产成本的同时，减少有机溶剂的使用给人类健康带来的不可估量的毒副影响。
【主权项】
1.一种高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)双相萃取水飞蓟素:首先用甲醇加热溶解水飞蓟素，滤去不溶物，抽滤，将得到的固体用石油醚洗三次，将烘干得到的固体以25%PEG2000,12% (NH4)2SO4和3%NaCl双水相体系剂型萃取，得到水飞蓟宾粗品I; (2)将得到的水飞蓟宾粗品I通过膜分离得到水飞蓟宾粗品II; (3)将得到的水飞蓟宾粗品II解析重结晶得到水飞蓟宾精品I; (4)将得到的水飞蓟宾精品I中加入等摩尔量的水进行重结晶，得到高纯度水飞蓟宾。2.根据权利要求1所述的高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，膜分离首先以膜孔径0.30?0.5μπι的滤膜进行一级膜分离，然后再用应用0.15?0.3μπι的滤膜进行二级膜分离，最后进行喷雾干燥成水飞蓟宾粗品11。3.根据权利要求1所述的高纯度水飞蓟宾分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，用无水乙醇溶解水飞蓟宾粗品II，溶解后微孔过滤，将滤液浓缩至水飞蓟宾粗品II与加入的无水乙醇的总体积的20%?30%，析晶、过滤、干燥得到水飞蓟宾精品I。
【文档编号】C07D407/04GK106083834SQ201610453396
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月21日
【发明人】武俊明, 吴春芳, 付廷明
【申请人】江苏中兴药业有限公司