一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌CGMCC No.12227及其应用，属于微生物学领域。所述植物乳杆菌具有如下特性：(1)具有一定耐酸能力，在酸性环境(pH 4.0～6.0)下生长良好；(2)具有一定耐盐能力，在2％?6％盐浓度下生长良好；(3)细胞自溶度较高；(4)菌株产酸能力不强；(5)菌株产双乙酰能力较高；(6)细胞内双乙酰分解能力较弱。本发明的植物乳杆菌CGMCC No.12227可用于发酵食品，能够有效提高产品中双乙酰的含量，且对产品感官品质特性具有一定的改善作用，因此应用前景非常广泛。CGMCC No.1222720160321
【专利说明】
一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于食品微生物技术领域，具体涉及一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆 菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 双乙酰能够赋予发酵食品奶香风味，对发酵制品整体风味的平衡起促进作用。拥 有奶香风味的发酵食品深受消费者的喜爱，因此通过提高发酵食品中的双乙酰含量而加强 其奶香风味具有良好的应用前景。
[0003] 研究发现，发酵乳制品、豆制品和果蔬制品中双乙酰主要是通过微生物的柠檬酸 代谢途径合成。柠檬酸在柠檬酸裂解酶的作用下生成草酰乙酸，草酰乙酸在草酰乙酸脱羧 酶的作用下生成丙酮酸，部分丙酮酸在乙酰乳酸合成酶作用下在合成乙酰乳酸，然后 α_乙酰乳酸在α_乙酰乳酸脱羧酶作用下转化为乙偶姻，α_乙酰乳酸通过无酶氧化脱羧反应 生成双乙酰，双乙酰由双乙酰还原酶作用转化为乙偶姻，乙偶姻在乙偶姻还原酶作用转化 为2,3_ 丁二醇。在柠檬酸代谢途径中α_乙酰乳酸通过无酶氧化脱羧反应生成双乙酰，但是 α_乙酰乳酸不稳定，易在α_乙酰乳酸脱羧酶的作用下生成乙偶姻，并且这步反应不可逆。双 乙酰在双乙酰还原酶作用下易被还原为乙偶姻。综上可知，柠檬酸代谢生成双乙酰的途径 涉及的关键酶是:乙酰乳酸脱羧酶、双乙酰还原酶、乙偶姻还原酶。
[0004] 微生物合成双乙酰的能力存在差异（邵亚东.传统发酵乳制品中乳酸菌产双乙酰 特性的研究[D].内蒙古农业大学，2007)，郑应福(郑应福，阚振荣，赵春海.高产双乙酰乳球 菌的研究进展[J].中国生物工程杂志，中国生物工程杂志，2005,25(S1):186-189(S1): 186-189)等人和Crow(Crow V L.Properties of 2,3-Butanediol Dehydrogenases from Lactococcus lactis subsp.lactis in Relation to Citrate Fermentation.[J] ? Applied&Environmental Microbiology，1990,56(6): 1656-65)等人研究表明拥有双乙酰 合成能力的菌株具有较低乙酰乳酸脱羧酶、双乙酰还原酶和乙偶姻酶活力。然而，现有技 术中未见涉及具有较高的双乙酰合成能力的植物乳杆菌，以及将其应用于改善产品感官特 性的实例；因此，目前还需要一种双乙酰的合成能力较高、从而增强产品奶香风味的乳酸菌 及相关食品。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术存在的上述问题，本发明人在总结现有技术的基础上，通过大量实 验研究，筛选得到一株具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌，并且将其应用于发酵剂、发酵 乳、发酵果蔬制品和发酵豆制品等发酵食品中，提高发酵食品中的双乙酰含量，以增强其奶 香风味。
[0006] 本发明的第一个目的是提供一种具有双乙酰合成能力的植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)CCFM 601，该菌株是从我国新疆的发酵食品中筛选出的。该菌 于2016年3月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 12227,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0007] 所述的植物乳杆菌CGMCC No. 12227具有下述性质：
[0008] (1)具有耐酸能力，在酸性(pH为4.0~6.0)环境下生长良好；
[0009] (2)具有耐盐能力，在2%-6%盐浓度下生长良好；
[0010] (3)细胞自溶度较高，24h时达到20·18±0·14%;
[0011] (4)菌株产酸能力不强，24h后pH变化为0 · 97 ±0 · 01;
[0012] (5)菌株产双乙酰能力高，达到l〇.69±〇.〇 7mg/L;
[0013] (6)细胞内双乙酰分解能力弱，α-乙酰乳酸脱羧酶为0·23±0·00μπι〇1乙偶姻· min-1 · g-S双乙酰还原酶活为0.10±0.01ymol NADH.min-1 · g-S乙偶姻还原酶活为0.02 ±0·01μηιο1 NADH · min-1 · g-、
[0014] 本发明的第二个目的是提供一种含有所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227的发酵剂 及其应用。
[0015] 所述发酵剂，在本发明的一种实施方式中，为直投式发酵剂。
[0016] 所述直投式发酵剂，在本发明的一种实施方式中，是将植物乳杆菌CGMCC No. 12227活化、培养至活菌数达到108cfu/mL以上，然后通过离心、缓冲液清洗、添加冻干保 护剂，调整细胞浓度至10 9cfu/mL以上，进行真空冷冻干燥，冻干后即得直投式发酵剂。
[0017] 所述直投式发酵剂，在本发明的另一种实施方式中，是将含有植物乳杆菌CGMCC No. 12227的菌液通过真空冷冻干燥处理制备的粉剂，它含有109cfu/g以上的活性植物乳杆 菌CGMCC No.12227。
[0018] 本发明的第三个目的是提供所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中 的应用。
[0019] 所述发酵食品，在本发明的一种实施方式中，包括:乳制品、果蔬制品、豆制品。
[0020] 所述乳制品，在本发明的一种实施方式中，包括酸奶、酸奶油、活性乳酸菌乳饮料、 发酵乳等。
[0021] 所述果蔬制品，在本发明的一种实施方式中，包括果蔬饮料、酵素以及发酵的胡萝 卜、黄瓜、甜菜、芹菜等制品。
[0022] 所述豆制品，在本发明的一种实施方式中，包括酸豆奶、豆腐乳、豆豉、豆酱等。 [0023]所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种实施 方式中，是在生产发酵乳制品、果蔬制品和豆制品的常规生产过程中，将植物乳杆菌CGMCC N 〇 . 12 2 2 7按照常规使用量接种到待处理的原料中，在能够使所述植物乳杆菌C G M C C No. 12227繁殖的温度、压力下进行发酵或存活。植物乳杆菌CGMCC No. 12227的加入，其代谢 产物使发酵制品具有一定的酸度、香味等优异特性，同时延长了产品保藏时间，改善了产品 营养价值和消化性。
[0024]所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选 的实施方式中，是用于制备活性乳酸菌乳饮料;具体是：原料乳经过巴氏杀菌处理后冷却， 分别将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No. 12227的菌液按照3%-5% (v/ v)的添加量添加到原料乳中，然后在42°C下发酵4-6h，冷却搅拌并加入稳定剂、抗氧化剂等 配料，均质后包装，即得活性乳酸菌乳饮料。
[0025]所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选 的实施方式中，是用于制备果蔬饮料;具体是:将新鲜水果蔬菜洗净后榨汁，经过高温瞬间 灭菌后降温至30-42°C，再接入植物乳杆菌CGMCC No. 12227,发酵培养一段时间，使其浓度 达到109cfu/mL以上，冷藏，即得果蔬饮料。
[0026]所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选 的实施方式中，是用于制备酸豆奶;具体是:浸泡大豆、去除大豆皮、沥去浸泡水，然后磨浆 并保温一段时间，筛网过滤后通过离心分离得到粗豆奶，再将粗豆奶加热到140-150°C后迅 速抽真空，再降温至30-42°C，然后添加植物乳杆菌CGMCC No. 12227,发酵培养一段时间，使 其浓度达到109cfu/ml以上，冷藏，即得酸豆奶。
[0027]所述植物乳杆菌CGMCC No. 12227在制备发酵食品中的应用，在本发明的一种优选 的实施方式中，是用于制备发酵乳;具体是：向原料乳中加入8%-12%(w/w)的蔗糖并搅拌 溶解，然后将乳化稳定剂溶解后按乳体积0.3%加入乳中，在18-22MPa下进行均质，再按照 乳体积计3 % -5 %向乳中分别接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌CGMCC No. 12227,在30-42Γ下进行发酵，发酵6-8h至凝乳，将凝乳后的酸乳放置成熟，即得发酵 乳。
[0028]上述原料乳的来源是新鲜牛奶。
[0029]所述植物乳杆菌的培养，在本发明的一种实施方式中，是37°C下静置培养。
[0030] 所述植物乳杆菌的培养，在本发明的另一种实施方式中，是使用MRS培养基进行培 养。
[0031] 本发明的有益效果是：
[0032] 1、本发明方法安全健康:本发明中应用的植物乳杆菌CGMCC No. 12227是可用于食 品的安全菌株，制备方法中也没有添加其他化学物质，安全健康。
[0033] 2、本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC No. 12227能有效提高发酵制品中双乙酰物 质的含量，从而对产品感官品质特性具有一定的改善作用。
【附图说明】
[0034]图1:植物乳杆菌CGMCC No. 12227在不同pH条件和不同浓度的盐条件下的生长情 况；
[0035] 图2:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的自溶度；
[0036]图3:添加植物乳杆菌CGMCC No. 12227的活性乳酸菌乳饮料中双乙酰含量；
[0037]图4:添加植物乳杆菌CGMCC No. 12227的活性乳酸菌乳饮料的感官评定结果。
【具体实施方式】
[0038]通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
[0039] 实施例1:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的菌种培养方法
[0040] MRS平板纯化分离:无菌操作接种环挑取植物乳杆菌CGMCC No. 12227,在灭菌的 MRS平板上划线，将平板置于37 °C培养箱中培养48h后，挑取单菌落进行镜检，实现菌株的纯 化分离。
[00411菌株活化:从_80°C冰箱中取出冻藏菌株，融化后取100微升菌液接种于灭菌的MRS 液体培养基中，在温度37°C下生长18h，划线，在固体MRS中37°C下培养48h，挑选单菌落接种 于灭菌的MRS液体培养基，活化三代后进行实验。
[0042] MRS液体培养基组成：20g葡萄糖、10g牛肉膏、10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g乙酸 钠、2g磷酸氢二钾、2g梓檬酸二胺、lg吐温80、0. lg硫酸镁、0.05g硫酸猛与1000mL蒸馏水，pH 6.2-6.4，该培养基在115°(：下灭菌2〇1^11。11?固体培养基需再添加15-2(^琼脂条。
[0043]培养条件:厌氧条件下静置培养。
[0044] 实施例2:植物乳杆菌CGMCC No. 12227对不同pH值的耐受性实验
[0045] 将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No . 12227接种于MRS液体培养基中，在37 °C下培养24h，传代培养2-3次，取菌液200yL接种于10.0 mL pH值分别为4.0、5.0、6.0的MRS 液体培养基后，在37°C下培养24h，测定不同酸性环境下植物乳杆菌CGMCC No. 12227的OD600 值，实验结果如图1所示。由图1可知，植物乳杆菌CGMCC No . 12227在pH4.0的酸性条件下能 维持生长，具有较好的耐酸能力。
[0046] 实施例3:植物乳杆菌CGMCC No. 12227对不同浓度盐溶液的耐受性实验
[0047]将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No . 12227接种于MRS液体培养基中，在37 °C下培养24h，传代培养2-3次，取菌液200yL接种于10.0mL盐浓度分别为2%、4%、6%的皿1? 液体培养基后，在37 °C下培养24h，测定不同盐浓度环境下植物乳杆菌CGMCC No. 12227的 〇D6q()值，实验结果如图1所示。由图1可知，植物乳杆菌CGMCC No. 12227在盐浓度为6%的条 件下仍能生长，具有较好的耐盐能力。
[0048]实施例4:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的细胞自溶度实验
[0049] 将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No . 12227接种于MRS液体培养基中，在37 °C下培养24h，传代培养2-3次，将菌液按照2 % (v/v)的接种量接入MRS液体培养基中增殖培 养12h，将菌体培养液冷冻离心（5000g，15min，4°C )，用0 · 05mo VL的pH 7 · 0的roS缓冲液清 洗菌体并进行重悬，调整初始〇D6Q()为1.0左右，用PBS缓冲液作为空白试剂调零。将悬浮液和 空白试剂放置在30 °C下24h，在600nm处分别测定初始、24h的吸光度，分别记作ODo，0D24。菌 体自溶度计算方法如下：自溶度（％ ) =0D『0D24/0Dq X 100 %。
[0050] 将本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227与其他菌株(从传统发酵食品中分离得到 ^Lactobacillus plantarum CCFM 309、Lactococcus lactis cremoris CCFM 223、 Lactobacillus sp.CCFM 608)进行自溶度比较，实验结果如图2所示。由图2可知，植物乳杆 菌CGMCC No. 12227在30°C条件下培养24h后细胞自溶度为20.18%，故该株菌具有高的自溶 度，自溶度较高的菌株可快速释放出胞内蛋白酶，加快产物的代谢。
[0051 ] 实施例5:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的产酸能力实验
[0052] 将冷冻保存的本发明植物乳杆菌CGMCC No . 12227接种于MRS液体培养基中，在37 °C下培养24h，传代培养2-3次，将菌液按照2% (V/V)的接种量接入脱脂乳中进行增殖培养 18h，测定脱脂乳培养基的ρΗ(ρΗ〇和脱脂乳培养基的初始pH(pHo)，以Δ pHipHo-pHi计算得 到菌株的产酸能力，结果见表1。实验结果(表1)表明，培养18h后，pH变化了0.97±0.01，故 该株菌产酸能力不强。
[0053]表1乳酸菌产酸能力
[0054]
[0055] 实施例6:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的产双乙酰能力实验
[0056] (1)建立双乙酰标准曲线
[0057] 配置双乙酰标准溶液：用微量进样器吸取15yL双乙酰标准品，溶于蒸馏水中，并定 容至500mL。取12支编号的试管分成2排放置，并分别加0.0 mL、2. OmL、4. OmL、6. OmL、8. OmL、 10.0 mL的标准溶液各2支，分别用蒸馏水补足lOmL，取5. OmL上述双乙酰标准溶液加入8 %的 三氯乙酸溶液，这样双乙酰标准溶液的浓度分别为0 · 〇yg/mL、3 · Oyg/mL、6 · Oyg/mL、9 · Oyg/ mL、12. Oyg/mL、15. Oyg/mL。第一排试管中添加0.5mL 1 %的邻苯二胺溶液，第二排作为空白 对照不添加邻苯二胺溶液;摇匀后置于黑暗处中30min，加入4.0mol/L盐酸以终止反应，第 一排试管加2 .OmL，第二排试管加2.5mL，混勾后以第二排试管作为空白参照，测定335nm波 长下的吸光度值。以双乙酰的浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。
[0058] (2)测定样品中双乙酰浓度：
[0059] 菌株在MRS中活化培养三代，将菌体培养液以2% (v/v)的接种量接入10% (w/v)的 脱脂培养基，37°C培养24h。将发酵乳液用等体积8%的三氯乙酸的混合后，4500rpm，10min， 4°C离心，取上清液再用滤纸过滤一遍，分别取10mL澄清液加入两支试管，第一支添加0.5ml 1%的邻苯二胺，第二支试管不加作为空白对照，混匀后，于黑暗处反应30min后，第一支试 管加2ml的4mol/L的盐酸终止反应，第二支加2.5ml的4mol/L的盐酸，混勾后，测定335nm波 长下的吸光度值。结果见表2，CCFM 309作为对照菌株。实验结果表明，植物乳杆菌CGMCC No. 12227产双乙酰能力较强，有利于提高发酵食品中的双乙酰含量。
[0060] 表2菌株产双乙酰能力
[0061]
[0062]实施例7:植物乳杆菌CGMCC No. 12227的细胞内双乙酰分解能力实验 [0063] (1)无细胞提取物的制备(CFE)
[0064] 将菌株在MRS培养基中活化培养三代，取菌体培养液在5000g，4 °C下离心15min，所 得的菌体用ros(磷酸盐缓冲液)清洗两次后，重悬于0.05mol/L的pH 7.0磷酸钠缓冲液中， 调整初始〇D 600nm为0.5左右。再利用超声波细胞破碎仪进行细胞破碎。超声波细胞破碎条 件：超声工作5s，停止5s，破碎时间为20min，超声工作功率为40 %。将破碎后的细胞于 10000g，4°C下冷冻离心10min，收集上清液，即得菌体无细胞提取液(CFE)，放置于-80 °C下 备用。每次使用CFE时都需要采用考马斯亮蓝G-250方法测定蛋白质浓度及蛋白标准曲线。 [0065] (2) α-乙酰乳酸脱羧酶活力的测定
[0066] 反应体系总体积lmL，包括200mM pH 6.0的磷酸钠缓冲液，2-5mg CFE，反应通过添 加300mMa-乙酰乳酸开始，分别在反应时间〇、15min时测定生成的乙偶姻浓度，一个单位酶 活性表征为Ιμπιο?乙偶姻/min，得到a-乙酰乳酸脱羧酶活为每分钟每克蛋白0.23±0.00微 摩尔乙偶姻。
[0067] (3)双乙酰还原酶活力的测定
[0068] 反应体系总体积300yL，包括3.9mM的双乙酰，0.039mM的NADH，CFElOOyL，27mM的pH 6.0的磷酸钠缓冲液，37 °C下反应30min，在340nm波长下测吸光度，得到双乙酰还原酶为每 分钟每克蛋白〇. 10 ±0.01微摩尔NADH。
[0069] (4)乙偶姻还原酶活力的测定
[0070]反应体系总体积（300μυ，包括3.9mM的乙偶姻，0.039mM的NADH，CFE 100yL，27mM 的pH 6.0的磷酸钠缓冲液，37°C下反应30min，在340nm波长下测吸光度，得到乙偶姻还原酶 活为每分钟每克蛋白〇. 02 ± 0.00微摩尔NADH。
[0071]实验结果(表3)表明，植物乳杆菌CGMCC No. 12227具有较低的α-乙酰乳酸脱羧酶、 双乙酰还原酶和乙偶姻酶活力，有利于减慢双乙酰的代谢，提高发酵食品中的双乙酰含量， 以增强其奶香味。
[0072]表3菌株酶活能力
[0073]
[0074] 以上数据表明，本发明的植物乳杆菌具有独特的优良性质：（1)具有耐酸性，在低 pH下生长良好；（2)具有耐盐能力，在高盐浓度下生长良好；（3)细胞自溶度较高；（4)产酸能 力不强；（5)细胞内产双乙酰能力高；（6)细胞内双乙酰分解能力弱。以上特性有利于菌株在 发酵食品中保持一定浓度，并合成较高含量的双乙酰，增强发酵食品的奶香味。
[0075]应用实施例1:利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227制备直投式发酵剂
[0076] 植物乳杆菌CGMCC No . 12227按照2% (v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，在 37 °C下培养20-24h，使得植物乳杆菌CGMCC No . 12227活菌数达到108cfu/mL以上，离心 (4000rpm，10min，4°C)，用pH 7.0的roS缓冲液冲洗沉淀2次后，加入脱脂乳和甘油作为冻干 保护剂，调整细胞浓度至109cfu/mL，混合均匀后进行真空冷冻干燥，冻干后即得所述的植 物乳杆菌CGMCC No. 12227直投式发酵剂。
[0077]应用实施例2:利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227制备活性乳酸菌乳饮料
[0078] 原料乳经过巴氏杀菌处理后冷却至42°C，按照3%-5%(v/v)的添加量向乳中分别 接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No. 12227(三种菌株菌液的体积比 为1:1:1)，然后在42°C下发酵4-6h，冷却搅拌并加入稳定剂、抗氧化剂，均质后包装，即得含 本发明植物乳杆菌CGMCC No. 12227活菌的活性乳酸菌乳饮料。其中，所述稳定剂为高酯果 胶、单硬脂酸甘油酯，抗氧化剂为抗坏血酸。
[0079] 选择实验室保存的从传统发酵食品中分离得到的Lactobacillus plantarum CCFM 309作为对照菌株，按照上述步骤接入CCFM 309,对添加植物乳杆菌CGMCC No. 12227 和CCFM 309的两种活性乳酸菌乳饮料进行双乙酰含量的测定以及感官评定，结果分别见图 3和图4。图3表明：添加植物乳杆菌CGMCC No. 12227的活性乳酸菌乳饮料中双乙酰含量上 升，图4表明：添加有植物乳杆菌CGMCC No . 12227的活性乳酸菌乳饮料的奶香味、喜好度等 增强，风味明显得到改善。
[0080] 应用实施例3:利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227制备果蔬饮料
[0081] 将新鲜水果蔬菜洗净后榨汁，在温度140°C下高温热杀菌2秒后立即降温到37°C左 右，再接入植物乳杆菌CGMCC No. 12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/mL以上， 在温度4°C下冷藏，即得含本发明植物乳杆菌CGMCC No. 12227活菌的果蔬饮料。
[0082]应用实施例4:利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227制备酸豆奶 [0083]用软水在温度80°C下浸泡大豆2h，再去除大豆皮，然后沥去浸泡水后加沸水磨浆， 并在高于80°C下保温12min。将得到的浆料用150目筛网过滤，然后进行离心处理，得到的离 心液即为粗豆奶，再将其加热到140-150°C并迅速导入真空冷却室进行抽真空，然后将温度 降至约37°C，再接入本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227,发酵培养一段时间，使其浓度达 到109cfu/ml以上，在温度4°C下冷藏保存，得到含本发明植物乳杆菌CGMCC No. 12227活菌 的酸豆奶。应用实施例5:利用本发明的植物乳杆菌CGMCC No. 12227制备发酵乳
[0084]原料乳购自于无锡天资乳业的合格的标准化原料乳。向原料乳中加入10% (w/w) 的蔗糖并搅拌溶解，然后将乳化稳定剂溶解后按乳体积0.3%加入乳中，在20MPa下进行均 质，再按照乳体积计3%-5%向乳中分别接入保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌 CGMCC No. 12227(三种菌株菌液的体积比为1:1:1)，在37°C下进行发酵，发酵8h至凝乳，将 凝乳后的酸乳放置4 °C成熟24h后，即得所述的发酵乳。
[0085]虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技 术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范 围应该以权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1. 一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，该菌株已于2016年3月21日保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 12227,保藏地址为 北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。2. 含有权利要求1所述的植物乳杆菌CGMCC No. 12227的发酵剂。3. 根据权利要求2所述的发酵剂，其特征在于，所述发酵剂为直投式发酵剂，具体制备 方法如下:将植物乳杆菌CGMCC No. 12227活化培养至活菌浓度达到108cfu/mL以上，然后通 过离心、缓冲液清洗、添加冻干保护剂，调整活菌浓度至10 9cfu/mL以上，进行真空冷冻干 燥，冻干后即得直投式发酵剂。4. 根据权利要求2或3所述的发酵剂的应用。5. 根据权利要求1所述的植物乳杆菌CGMCC No. 12227的应用。6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用具体是在制备发酵食品中的应 用，所述发酵食品是乳制品、果蔬制品、豆制品。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述乳制品包括酸奶，酸奶油，活性乳酸菌 乳饮料或发酵乳;所述果蔬制品包括果蔬饮料，酵素，发酵胡萝卜、黄瓜、甜菜或芹菜制品;所 述豆制品包括酸豆奶、豆腐乳、豆豉或豆酱。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述活性乳酸菌乳饮料的制备方法是：原 料乳经过巴氏杀菌处理后冷却，按照以原料乳的体积计3%-5%的添加量分别添加保加利 亚乳杆菌、嗜热链球菌和植物乳杆菌CGMCC No. 12227到原料乳中，在42°C下发酵4h-6h，冷 却搅拌并加入其它配料，均质、包装，即得活性乳酸菌乳饮料。9. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述果蔬饮料的制备方法是：将新鲜水果 蔬菜洗净之后榨汁，经过高温瞬间灭菌后降温至30°C_42°C，再接入植物乳杆菌CGMCC No. 12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/mL以上，冷藏，即得果蔬饮料。10. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述酸豆奶的制备方法是:浸泡大豆、去 除大豆皮、沥去浸泡水，然后磨浆并保温一段时间，筛网过滤后通过离心分离得到粗豆奶， 再将粗豆奶加热到140°C-15(TC后迅速抽真空，再降温至30°C-42°C，然后添加植物乳杆菌 CGMCC No. 12227，发酵培养一段时间，使其浓度达到109cfu/ml以上，冷藏，即得酸豆奶。
【文档编号】A23L33/135GK106085901SQ201610402801
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月8日
【发明人】陈卫, 刘小鸣, 赵建新, 殷俊玲, 田丰伟, 张秋香, 王刚, 翟齐啸, 张灏
【申请人】江南大学