一种小麦dna快速提取方法
【专利摘要】本申请公开了一种小麦DNA快速提取方法，包括以下步骤：提取液的配置；称取小麦叶片组织，用液氮磨碎至粉末状，转至离心管中待用；加入提取液至离心管中，混匀，然后再加入饱和酚，继续混匀，继续加入氯仿，继续混匀后高速离心；吸取上清液至新的离心管中继续加入氯仿，继续混匀后高速离心；吸取上清液至新的离心管中加入异丙醇溶液混匀后高速离心，弃上清液，将沉淀物用乙醇冲洗一次，晾干，加入超纯水溶解。本申请操作步骤简单，比现有技术缩短一半的时间；不易于降解，有利于后续实验的进行。
【专利说明】
一种小麦DNA快速提取方法
技术领域
[0001]本申请属于生物遗传领域，具体地说，涉及一种小麦DNA快速提取方法。
【背景技术】
[0002]植物DNA提取是分子标记选择中最重要、最基本的操作.为了分离出高质量、高纯度的植物基因组
[0003]DNA，许多学者用SDs (十二烷基硫酸钠)、cTAB(十六烷基三乙基溴化铵)等方法以小麦、水稻、大豆等作物的嫩叶为材料提取DNA，尽管分离的DNA质量、纯度都较高，符合PcR检测的要求，但此法要用液氮冷冻，操作步骤复杂，影响了分子标记技术的普及和推广.不用液氮也可以直接从大豆、玉米、小麦种子中提取DNA_1].不用液氮从小麦、棉花叶片中提取DNA也有报道;在分子标记辅助选择技术普及后，人们需要更简单、易行的提取DNA的方法.本研究在传统植物基因组DNA提取方法的基础上综合了几种DNA提取方法的优点，探索了以小麦幼叶为材料快速提取DNA的方法，旨在为PCR扩增和重要农艺性状基因的分子标记辅助选择育种提供可行的方法。
[0004]目前现有的小麦基因组DNA提取方法时间长，操作步骤多，易降解，纯度不高等缺点，本发明陈述了解决以上问题的操作方法，旨在建立一套易操作，时间短、提取质量高的小麦DNA提取方法。
【发明内容】
[0005]有鉴于此，本申请针对现有技术中存在的提取时间长，降解严重的问题，提供了一种小麦DNA快速提取方法。
[0006]为了解决上述技术问题，本申请公开了一种小麦DNA快速提取方法，包括以下步骤:
[0007]I)提取液的配置；
[0008]2)称取0.5-lg小麦叶片组织，用液氮磨碎至粉末状，转至2-5ml离心管中待用；
[0009]3)加入0.5-lml提取液至离心管中，混匀，然后再加入0.5-1.5ml饱和酚，继续混勾，继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混勾后高速离心；
[0010]4)吸取上清液至新的离心管中继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混勾后高速离心；
[0011 ] 5)吸取上清液至新的离心管中加入0.4-1.5ml的异丙醇溶液混匀后高速离心，弃上清液，将沉淀物用100-300ml乙醇冲洗一次，晾干，加入30-60uL超纯水溶解。
[0012]进一步地，步骤I)中的提取液的配置具体如下:将1-1Oml l_5MLiCl溶液、1-10%SDS 10-50ml、0.1-3M Tris.Cl l_60ml、0.1-2EDTA l_15ml，用50_70°C定容至 100_300ml，再加入100-400ml RNA降解酶。
[0013]进一步地，步骤3)中的离心时间为5_15min。
[0014]进一步地，步骤4)中的离心时间为5_15min。
[0015]进一步地，步骤5)中的离心时间为5_15min。
[0016]进一步地，步骤5)中的乙醇的质量浓度为70-75%。
[0017]与现有技术相比，本申请可以获得包括以下技术效果:
[0018]I)操作步骤简单，比现有技术缩短一半的时间。
[0019]2)不易于降解，有利于后续实验的进行。
[0020]3)本发明提取的小麦DNA电泳条带完整，不降解，杂质少、纯度高(实验杂质少，RNA污染低)。
[0021]当然，实施本申请的任一产品必不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
【附图说明】
[0022]图1为采用本发明提取的小麦DNA的电泳图，其中，1-6代表利用本发明提取的小麦DNA ；
[0023]图2为采用目前常用的方法提取的小麦DNA的电泳图，其中，其中，1-5代表用目前常用的方法提取的小麦DNA。
【具体实施方式】
[0024]以下将配合附图及实施例来详细说明本申请的实施方式，藉此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
[0025]实施例1小麦DNA快速提取方法
[0026]I)提取液的配置:将1-1Oml l_5MLiCl溶液、1-10%SDS 10_50ml、0.1-3M Tris.Cll-60ml、0.1-2EDTA l_15ml，用50_70°C定容至 100_300ml，再加入 100_400ml RNA降解酶；
[0027]2)称取0.5-lg小麦叶片组织，用液氮磨碎至粉末状，转至2_5ml离心管中待用；
[0028]3)加入0.5-lml提取液至离心管中，混匀，然后再加入0.5-1.5ml饱和酚，继续混勾，继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混勾后高速离心5_15min;
[0029]4)吸取上清液至新的离心管中继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混匀后高速离心5-15min；
[0030]5)吸取上清液至新的离心管中加入0.4-1.5mI的异丙醇溶液混匀后高速离心5-15min，弃上清液，将沉淀物用100-300ml 70-75%乙醇冲洗一次，晾干，加入30_60uL超纯水溶解即可。
[0031]由图1和图2可知，用本发明提取的小麦DNA电泳条带完整，没有降解，且不存在杂带污染，常规方法提取的小麦DNA电泳有大量弥散，存在降解，且杂带较多，不利于后续试验的进行。因此，本发明提取的小麦DNA电泳条带完整，不降解，杂质少、纯度高，且提取时间比常规方法减少一半，具有高效、高质量的特点，可用于普通PCR检测、Southern bo 11、基因组测序等试验。
[0032]上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。
【主权项】
1.一种小麦DNA快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)提取液的配置； 2)称取0.5-lg小麦叶片组织，用液氮磨碎至粉末状，转至2-5ml离心管中待用； 3)加入0.5-lml提取液至离心管中，混匀，然后再加入0.5-1.5ml饱和酚，继续混匀，继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混勾后高速离心； 4)吸取上清液至新的离心管中继续加入0.4-1.6ml氯仿，继续混匀后高速离心； 5)吸取上清液至新的离心管中加入0.4-1.5ml的异丙醇溶液混匀后高速离心，弃上清液，将沉淀物用100-300ml乙醇冲洗一次，晾干，加入30-60uL超纯水溶解。2.根据权利要求1所述的小麦DNA快速提取方法，其特征在于，所述步骤I)中的提取液的配置具体如下:将1-1Oml l-5MLiCl溶液、l-10%SDS10-50ml、0.1-3M Tris.Cl 卜60ml、0.1-2EDTA l-15ml，用50-70°C定容至 100-300ml，再加入 100-400ml RNA降解酶。3.根据权利要求1所述的小麦DNA快速提取方法，其特征在于，所述步骤3)中的离心时间为 5_15min。4.根据权利要求1所述的小麦DNA快速提取方法，其特征在于，所述步骤4)中的离心时间为 5_15min。5.根据权利要求1所述的小麦DNA快速提取方法，其特征在于，所述步骤5)中的离心时间为 5_15min。6.根据权利要求1所述的小麦DNA快速提取方法，其特征在于，所述步骤5)中的乙醇的质量浓度为70-75 %。
【文档编号】C12N15/10GK106086005SQ201610703947
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月22日
【发明人】朱永兴, 关雅静, 郭生虎, 石磊, 白海波, 张岩
【申请人】宁夏农林科学院