一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法
【专利摘要】本申请公开了一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法，具体包括如下步骤：（1）、将经过干燥、粉碎的银杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取银杏果皮粗蛋白；（2）、将银杏果皮粗蛋白配制为质量浓度为1?10%，pH值为9?10的水溶液；然后加入蛋白酶，调节水溶液的温度为50?60℃，进行水解反应2?5小时后，再将水溶液在95?100℃下保持沸腾10?15min，进行灭酶，获得水解液；（3）、将上述水解液离心沉淀，取上清液真空冷冻干燥后制得抗氧化肽。因此本发明所制备的抗氧化肽可以作为抗氧化剂来使用，其对DPPH自由基的清除率较高，当抗氧化肽在溶液中的浓度达到0.4 g/L以上时，对DPPH自由基的清除率稳定在80%以上，对人体具有较高的保健作用。
【专利说明】
[0001] 一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法
技术领域
[0002] 本发明涉及一种酶法制备抗氧化肽的方法，尤其是一种利用银杏果皮制备抗氧化 肽的方法，属于生物技术加工领域。
[0003]
【背景技术】
[0004] 目前，我国每年的白果总产量超过1.2万吨，银杏叶片产量达到1.5万吨。而银杏果 皮产量较大，达到1.5-2.0万吨。银杏果皮含有蛋白质、脂肪、糖类、鞣质、微量元素、氨基酸， 以及黄酮类和酚酸类物质，如银杏酚、白果酚、白果酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、白果 醇，其酸性物质为莽草酸、D-糖质酸、橙如酸。
[0005] 目前国内外对银杏的研究主要集中在银杏叶，而银杏果外皮主要还是以废弃物的 形式被扔掉，没有得到有效的利用，既浪费大量资源，又污染了环境。因此银杏果皮的综合 利用，变废为宝就显得极为重要。目前国内外对银杏果皮的综合利用还处于空白阶段，并且 没有实际的应用。
[0006] 银杏果皮中含有较高的蛋白质，自然排放后，不仅浪费了资源，同时也造成环境污 染。植物活性肽概念的提出及分离检测技术的提高，使人们开始逐渐重视对富含蛋白质的 农副产品的深加工并从中获得多种活性肽，如酪蛋白磷酸肽、降血压肽和易消化吸收肽等， 植物来源活性肽的研究和开发对提高我国农产品深加工的附加值具有重要作用。
[0007] 抗氧化剂近些年来在国内外发展很快，用途也越来越广。抗氧化剂不仅用于含脂 肪食品的抗氧化，而且作为功能因子用于保健食品及化妆品等的开发。抗氧化剂的种类很 多，然而化学合成的抗氧化剂如BHA、BHT等，由于其本身具有毒副作用，各国政府纷纷对其 强制规定其添加量。人们把目光逐步转向从各种植物和动物组织中提取天然抗氧化剂。抗 氧化活性多肽由于低毒、高效等特点，作为食品和机体的抗氧化剂，被认为是人工合成抗氧 化剂的理想替代者。
[0008] 因此，本发明以银杏果皮为原料利用酶法制备具有抗氧化活性的多肽，为抗氧化 功能食品的开发提供理论依据与技术支持。
[0009]
【发明内容】
[0010] 本申请的目的在于提供一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法，具体包括如下步 骤： (1) 、将经过干燥、粉碎的银杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取银杏果皮粗蛋白； (2) 、将银杏果皮粗蛋白配制为质量浓度为1-10%，pH值为9-10的水溶液;然后加入蛋 白酶，调节水溶液的温度为50-60°C，进行水解反应2-5小时后，再将水溶液在95-100°C下保 持沸腾l〇_15min，进行灭酶，获得水解液;在该步骤中，银杏果皮粗蛋白配制成的水溶液优 选采用NaOH调节pH值;调节后的pH值最佳为9; (3)、将上述水解液离心沉淀，取上清液真空冷冻干燥后制得抗氧化肽。
[0011] 进一步，步骤（1)中将银杏果皮投入到NaOH水溶液中后，在55-65 °C下振荡1-5小 时，然后离心沉淀、取上清液;将上清液用盐酸调节PH值至2-3,再次离心沉淀，将沉淀用水 洗涤后，经干燥后得到银杏果皮粗蛋白；所述NaOH水溶液的浓度为0.05-0. lmol/L;银杏果 皮与NaOH水溶液的质量比为1:10-1:100。在将银杏果皮投入到NaOH水溶液中后，振荡时的 最佳温度为60°C。上述步骤（1)中，将银杏果皮投入到NaOH水溶液中后，振荡时的温度优选 为60 °C ;并且上清液用盐酸调节后，其pH值最佳为2.6。
[0012]采用该方法提取银杏果皮粗蛋白，可以将银杏果皮中的蛋白最大限度地提取出 来，并得到纯度较高的银杏果皮粗蛋白。
[0013] NaOH的主要作用是将银杏果皮中的蛋白质溶解出来，以利于提取，当NaOH的浓度 达到一定浓度后，对于蛋白质的溶解速度已增加有限，将NaOH的浓度控制在0.05-0.1mol/ L，在保证蛋白质被溶解出来的前提下，降低NaOH的消耗。适当的固液比可以使银杏果皮中 蛋白质能够被提取出来，进入到NaOH水溶液中，为避免NaOH水溶液中蛋白质的浓度过高，而 影响银杏果皮中蛋白质的提取率，NaOH水溶液相对于银杏果皮的量不能太少，当然在超过 一定的比例后，过多的NaOH水溶液也不能提取到更多的蛋白质，将银杏果皮与NaOH溶液的 质量比控制在1:10-1:100之间，即可保证银杏果皮中的蛋白质能够被尽可能地提取出来。
[0014] 进一步，所述蛋白酶为碱性蛋白酶。经过筛选，碱性蛋白酶是最佳的用于分解蛋白 质的蛋白酶。
[0015] 进一步，蛋白酶的添加量为银杏果皮粗蛋白质量的1-5%，进一步优选为2-3%。该范 围内的蛋白酶的用量已能较好地完成蛋白质的分解，无需过多地添加。
[0016] 本发明所制备的抗氧化肽可以作为抗氧化剂来使用，其对DPPH自由基的清除率较 高，当抗氧化肽在溶液中的浓度达到〇.4 g/L以上时，对DPPH自由基的清除率稳定在80%以 上，对人体具有较高的保健作用。
[0017]
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 将银杏果皮除杂，40°C烘干12小时，用粉碎机研磨成粉，取IOkg投入到100kg NaOH水溶 液中，在60°C下振荡2小时后，离心沉淀取上清液，然后将上清液用盐酸调节pH值至2.6,然 后离心沉淀，将沉淀物清洗并干燥后制得银杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的浓度为0.08 mol/L〇
[0019] 将制得的银杏果皮粗蛋白制成质量浓度为1%、ρΗ值为9的水溶液，然后加入相对 于银杏果皮粗蛋白的质量的1%的碱性蛋白酶，在50°C进行水解反应2小时后，将水溶液在 IOOtC下保持沸腾10 min，进行灭酶，获得水解液。其中银杏果皮粗蛋白制成的水溶液用 NaOH调节pH值。
[0020] 将水解液离心沉淀，取上清液经真空冷冻干燥后制得抗氧化肽A。
[0021] 实施例2 将银杏果皮除杂，50°C烘干8小时，用粉碎机研磨成粉，取Ikg投入到100kg NaOH水溶液 中，在50°C下振荡5小时后，离心沉淀取上清液，然后将上清液用盐酸调节pH值至2,然后离 心沉淀，将沉淀物清洗并干燥后制得银杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的浓度为0.1 mol/ L0
[0022] 将制得的银杏果皮粗蛋白制成质量浓度为10%、pH值为10的水溶液，然后加入相对 于银杏果皮粗蛋白质量的2%的碱性蛋白酶，在60°C进行水解反应5小时后，将水溶液在95°C 下保持12 min，进行灭酶，获得水解液。
[0023] 将水解液离心沉淀，取上清液经真空冷冻干燥后制得抗氧化肽B。
[0024] 实施例3 将银杏果皮除杂，50°C烘干8小时，用粉碎机研磨成粉，取2kg投入到100kg NaOH水溶液 中，在55°C下振荡3小时后，离心沉淀取上清液，然后将上清液用盐酸调节pH值至3,然后离 心沉淀，将沉淀物清洗并干燥后制得银杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的浓度为0.05 mol/L〇
[0025] 将制得的银杏果皮粗蛋白制成质量浓度为5%、pH值为9.5的水溶液，然后加入相对 于银杏果皮粗蛋白质量的4%的碱性蛋白酶，在50°C进行水解反应2小时后，将水溶液在98°C 下保持11 min，进行灭酶，获得水解液。
[0026] 将水解液离心沉淀，取上清液经真空冷冻干燥后制得抗氧化肽C。
[0027] 实施例4 将银杏果皮除杂，40°C烘干12小时，用粉碎机研磨成粉，取Ikg投入到90kg NaOH水溶液 中，在60°C下振荡4小时后，离心沉淀取上清液，然后将上清液用盐酸调节pH值至2.6,然后 离心沉淀，将沉淀物清洗并干燥后制得银杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的浓度为0.09 mol/L〇
[0028] 将制得的银杏果皮粗蛋白制成质量浓度为8%、pH值为9的水溶液，然后加入相对于 银杏果皮粗蛋白质量的5%的碱性蛋白酶，在50 °C进行水解反应3小时后，将水溶液在97 °C下 保持15 min，进行灭酶，获得水解液。
[0029] 将水解液离心沉淀，取上清液经真空冷冻干燥后制得抗氧化肽D。
[0030] 对实施例中得到的抗氧化肽进行活性检测，采用对DPPH自由基的清除作用来表 示，具体操作如下： 将抗氧化肽分别制成不同浓度的样品，然后分别取0.4 mL样品与等体积的40g/L DPPH 无水乙醇溶液充分混合，室温下避光静置30 min，于波长517 nm下测定吸光值。用去离子水 和还原型谷胱甘肽代替样品分别作空白对照和阳性对照。样品的DPPH自由基清除活力按下 列公式(1)计算： :自由:纖辱
式中，Ai为加入样品的DPPH无水乙醇溶液的吸光值;Aj为加入样品的无水乙醇溶液的 吸光值;Ao为用去离子水替代样品的DPPH无水乙醇溶液的吸光值。
[0031] 检测结果见表1。
[0032]表1抗氧化肽对DPPH自由基的清除效果
本申请公开了一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法，具体包括如下步骤：（1)、将经 过干燥、粉碎的银杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取银杏果皮粗蛋白；（2)、将银杏果皮粗蛋 白配制为质量浓度为1-1〇%，ρΗ值为9-10的水溶液;然后加入蛋白酶，调节水溶液的温度为 50-60°C，进行水解反应2-5小时后，再将水溶液在95-100°C下保持沸腾10_15min，进行灭 酶，获得水解液；（3)、将上述水解液离心沉淀，取上清液真空冷冻干燥后制得抗氧化肽。因 此本发明所制备的抗氧化肽可以作为抗氧化剂来使用，其对DPPH自由基的清除率较高，当 抗氧化肽在溶液中的浓度达到〇 . 4 g/L以上时，对DPPH自由基的清除率稳定在80%以上，对 人体具有较高的保健作用。
【主权项】
1. 一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1 )、将经过干燥、粉碎的银杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取银杏果皮粗蛋白； (2)、将银杏果皮粗蛋白配制为质量浓度为1-10%，ρΗ值为9-10的水溶液;然后加入蛋白 酶，调节水溶液的温度为50-60°C，进行水解反应2-5小时后，再将水溶液在95-100°C下保持 沸腾10-15min，进行灭酶，获得水解液； (3 )、将上述水解液离心沉淀，取上清液真空冷冻干燥后制得抗氧化肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于， 步骤（1)中将银杏果皮投入到NaOH水溶液中后，在55-65 °C下振荡1-5小时，然后离心沉 淀、取上清液;将上清液用盐酸调节pH值至2-3,再次离心沉淀，将沉淀用水洗涤后，经干燥 后得到银杏果皮粗蛋白； 所述NaOH水溶液的浓度为0.05-0. lmol/L;银杏果皮与NaOH水溶液的质量比为1:10-1: 100〇3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，将银杏果皮投入到NaOH水溶液 中后，振荡时的温度为60°C。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1)中，上清液用盐酸调节后，pH值为 2.6〇5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为碱性蛋白酶。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，蛋白酶的添加量为银杏果皮粗蛋白质量的 1-5%〇7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，银杏果皮粗蛋白配制成的水 溶液用NaOH调节pH值。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，银杏果皮粗蛋白配制成的水 溶液的pH值为9。
【文档编号】C12P21/06GK106086132SQ201610420906
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月16日 公开号201610420906.8, CN 106086132 A, CN 106086132A, CN 201610420906, CN-A-106086132, CN106086132 A, CN106086132A, CN201610420906, CN201610420906.8
【发明人】王航
【申请人】如皋福大工程技术研究院有限公司