一种循环肿瘤dna中的egfr基因检测的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒。
【背景技术】
[0002]现有技术中，检测使用的一种EGFR基因突变的竞争抑制QPCR检测试剂盒，一般结构包括盒体、盒体上部设有盒盖，盒体的腔体内设有固定座和试剂瓶槽，在固定座上设有
1.5ml EP管容器孔和0.5ml EP管容器孔，所述1.5ml EP管容器孔内设有1.5ml EP管，所述0.5ml EP管容器孔内设有0.5ml EP管，所述试剂瓶槽内设有装PCR缓冲液混合物试剂瓶。
【实用新型内容】
[0003]本实用新型的目的:提供一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，结构简单，可以防止试剂盒内的容器底部发生碰撞破损，保证盒盖和盒体的密封性，方便移动和运输，可以在给EGFR基因突变检测时方便实验人员操作，提高工作效率。
[0004]为了实现上述目的，本实用新型的技术方案是:
[0005]一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，包括试剂盒本体、盒盖、固定座、保护垫体、多个底部撑高垫、多块底部防滑垫、便携提手、多支EP管、试剂瓶、密封环及分隔网；所述的盒盖的一端铰接在所述的试剂盒本体的顶部，所述的盒盖罩盖在所述的试剂盒本体上，所述的密封环设置在所述的盒盖的下端边缘处，所述的盒盖通过所述的密封环与所述的试剂盒本体密封连接；所述的多个底部撑高垫分别设置在所述的试剂盒本体的底部边缘处，使所述的试剂盒本体的底部设有镂空，所述的多块底部防滑垫对应设置在所述的多个底部撑高垫的底部，所述的便携提手的两端分别连接在所述的试剂盒本体的外壁两侦h所述的固定座设置在所述的试剂盒本体内，所述的保护垫体设置在所述的固定座内，所述的分隔网呈网状设置在所述的保护垫体的上端面上，所述的分隔网与所述的保护垫体为一体结构，所述的保护垫体上设有多个插槽，所述的插槽对应设置在所述的分隔网的网格内；所述的多支EP管及试剂瓶分别对应插入在所述的多个插槽内，所述的多支EP管的容量分别为1.5ml及0.5ml，所述的试剂瓶内装有酶混合物。
[0006]上述的循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其中，所述的试剂盒本体上设有隔温套，所述的隔温套活动套接在所述的试剂盒本体的外部。
[0007]上述的循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其中，所述的1.5ml的多支EP管中分别装有突变检测溶液:
[0008]外显子19缺失检测反应混合液；
[0009]L858R 混合液；
[0010]T790M 混合液；
[0011]G719A，G719C，G719S 混合液；
[0012]所述的突变检测溶液体积为210ul。
[0013]上述的循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其中，所述的0.5ml的多支EP管中分别装有参考混合液、热启动酶以及阳性对照质粒。
[0014]上述的循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其中，所述的试剂瓶中的酶混合物包括浓度为0.4mmol/L的dNTPs，5mmol/L的Mg2+，2x Buffer及引物。
[0015]本实用新型结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染，试剂盒在血浆EGFR基因突变检测时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点，容器孔的设计使得容器底部磕碰破损，保证试剂盒密封安全，方便运输。
【附图说明】
[0016]图1是本实用新型一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒的结构示意图。
【具体实施方式】
[0017]以下结合附图进一步说明本实用新型的实施例。
[0018]请参见附图1所示，一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，包括试剂盒本体1、盒盖2、固定座3、保护垫体4、多个底部撑高垫5、多块底部防滑垫6、便携提手7、多支EP管8、试剂瓶9、密封环10及分隔网11 ;所述的盒盖2的一端铰接在所述的试剂盒本体I的顶部，所述的盒盖2罩盖在所述的试剂盒本体I上，所述的密封环10设置在所述的盒盖2的下端边缘处，所述的盒盖2通过所述的密封环10与所述的试剂盒本体I密封连接；所述的多个底部撑高垫5分别设置在所述的试剂盒本体I的底部边缘处，使所述的试剂盒本体I的底部设有镂空，所述的多块底部防滑垫6对应设置在所述的多个底部撑高垫5的底部，所述的便携提手7的两端分别连接在所述的试剂盒本体I的外壁两侧；所述的固定座3设置在所述的试剂盒本体I内，所述的保护垫体4设置在所述的固定座3内，所述的分隔网11呈网状设置在所述的保护垫体4的上端面上，所述的分隔网11与所述的保护垫体4为一体结构，所述的保护垫体4上设有多个插槽12，所述的插槽12对应设置在所述的分隔网11的网格内；所述的多支EP管8及试剂瓶9分别对应插入在所述的多个插槽12内，所述的多支EP管8的容量分别为1.5ml及0.5ml，所述的试剂瓶9内装有酶混合物。
[0019]所述的试剂盒本体I上设有隔温套13，所述的隔温套13活动套接在所述的试剂盒本体I的外部，可用于为试剂盒本体I隔绝外部温度的影响。
[0020]所述的1.5ml的多支EP管8中分别装有突变检测溶液:
[0021]外显子19缺失检测反应混合液；
[0022]L858R 混合液；
[0023]T790M 混合液；
[0024]G719A，G719C，G719S 混合液；
[0025]所述的突变检测溶液体积为210ul。
[0026]所述的0.5ml的多支EP管8中分别装有参考混合液、热启动酶以及阳性对照质粒。
[0027]所述的试剂瓶9中的酶混合物包括浓度为0.4mmol/L的dNTPs，5mmol/L的Mg2+，2x Buffer及引物。
[0028]底部撑高垫5可将试剂盒本体I的底部抬高，减少桌面的温度和湿度对内部引物及探针等的影响；底部防滑垫6可确保本实用新型平稳的放置在桌面上，便携提手7便于携带；分隔网11可增强保护垫体4的强度，同时有利于区分不同的EP管8和试剂瓶9。
[0029]本实用新型的操作方法:
[0030]I)取模板 DNA
[0031]取病人全血5mL，常规提取DNA，取1ng DNA作为模板。
[0032]2)反应体系
[0033]将各反应物质按照如下中反应体系进行配比；
[0034]反应体系为25ul，包括qPCR混合液20ul，参照引物或者ARMS引物各0.5ul (终浓度 0.5 uM/L)，模板 Iul (1ng),
[0035]模板Iul
[0036]参照引物或者ARMS引物终浓度0.5 uM/L
[0037]PCR缓冲液终浓度IX
[0038]dNTPs终浓度为 0.2mM
[0039]通用下游引物终浓度为0.5uM
[0040]TagMan探针终浓度为0.1uM
[0041]Goldstar Best Tag 酶终浓度为 0.05U/ul
[0042]MgCl2终浓度为 2mM
[0043]3)体系反应
[0044]竞争抑制QPCR在ABI 7900上检测每个样本进行3管反应，每管加入相同的qPCRmix,通用下游引物，TaqMan探针，各管所不同的是参照引物或者ARMS引物。qPCR反应条件为:95C预变性10min，95C 15s，60C lmin，扩增反应为46个循环。
[0045]综上所述，本实用新型结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染，试剂盒在血浆EGFR基因突变检测时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点，容器孔的设计使得容器底部磕碰破损，保证试剂盒密封安全，方便运输。
[0046]以上所述仅为本实用新型的优选实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是利用本实用新型说明书内容所作的等效结构变换，或直接或间接运用附属在其他相关产品的技术领域，均同理包括在本实用新型的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其特征在于:包括试剂盒本体、盒盖、固定座、保护垫体、多个底部撑高垫、多块底部防滑垫、便携提手、多支EP管、试剂瓶、密封环及分隔网；所述的盒盖的一端铰接在所述的试剂盒本体的顶部，所述的盒盖罩盖在所述的试剂盒本体上，所述的密封环设置在所述的盒盖的下端边缘处，所述的盒盖通过所述的密封环与所述的试剂盒本体密封连接；所述的多个底部撑高垫分别设置在所述的试剂盒本体的底部边缘处，使所述的试剂盒本体的底部设有镂空，所述的多块底部防滑垫对应设置在所述的多个底部撑高垫的底部，所述的便携提手的两端分别连接在所述的试剂盒本体的外壁两侧；所述的固定座设置在所述的试剂盒本体内，所述的保护垫体设置在所述的固定座内，所述的分隔网呈网状设置在所述的保护垫体的上端面上，所述的分隔网与所述的保护垫体为一体结构，所述的保护垫体上设有多个插槽，所述的插槽对应设置在所述的分隔网的网格内；所述的多支EP管及试剂瓶分别对应插入在所述的多个插槽内，所述的多支EP管的容量分别为1.5ml及0.5ml，所述的试剂瓶内装有酶混合物。2.根据权利要求1所述的循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒本体上设有隔温套，所述的隔温套活动套接在所述的试剂盒本体的外部。
【专利摘要】本实用新型公开了一种循环肿瘤DNA中的EGFR基因检测的试剂盒，包括试剂盒本体、盒盖、固定座、保护垫体、多个底部撑高垫、多块底部防滑垫、便携提手、多支EP管、试剂瓶、密封环及分隔网；盒盖通过密封环与试剂盒本体连接；多个撑高垫设在试剂盒本体底部，底部防滑垫设在底部撑高垫底部，便携提手连在试剂盒本体两侧；固定座设在试剂盒本体内，保护垫体设在固定座内，分隔网设在保护垫体上，保护垫体上设有插槽，EP管及试剂瓶插在插槽内。本实用新型在血浆EGFR基因突变检测时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点，容器孔的设计使得容器底部磕碰破损，保证试剂盒密封安全，方便运输。
【IPC分类】C12M1/00, C12Q1/68
【公开号】CN204644340
【申请号】CN201520300884
【发明人】张道允, 巩子英
【申请人】上海允英医疗科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月12日