慢病毒试剂盒的盒子的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及生物技术领域，特别是涉及一种慢病毒试剂盒的盒子。
【背景技术】
[0002]基因表达是细胞在生命过程中，把储存在DNA序列中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子的过程。通过基因工程可以实现外源基因在生物细胞甚至生物体内的表达，从而达到人为调控细胞或实物体性状的目的。
[0003]真核细胞，尤其是哺乳动物细胞的外源基因的导入，主要通过物理方法、化学方法或生物学方法完成。物理方法主要包括DNA显微注射法、电穿孔法和金属颗粒轰击法等方法;化学方法主要包括脂质体介导和受体介导等方法;生物学方法主要是通过各种病毒实现，如腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒等。物理方法和化学方法可以负载大量外源基因片段，并且有部分方法可以实现将外源基因插入到细胞或生物体的基因组中，但总体来说，通过这两类方法实现外源基因表达的效率不高，而且大多数时候无法很好地实现外源基因插入细胞或生物体基因组，进而无法实现外源基因的稳定永久表达。生物学方法中的腺相关病毒、慢病毒等方法则可以很好地实现这一目标，它们可以将外源基因整合到细胞或生物体的基因组中，从而实现外源基因的稳定永久表达。其中，慢病毒以其具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段更大等优点受到科学界的青睐。
[0004]目前，不管是在实验室还是在产业界，慢病毒的应用都非常广泛。随着应用领域的不断扩大，对慢病毒的要求也在不断提高。当前，在科研和实际运用中，通过慢病毒一次导入两个基因并实现其高效表达的需求也越来越大，例如2013年《Science》杂志评选出的十大科学突破之首一癌症免疫疗法，包括TCR-T等技术。由于TCR-T技术能够表达特异性受体靶向识别特异性的细胞如肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究，并从初期的基础免疫研究转变为现在的临床应用。由于TCR-T技术需要将T细胞受体(TCR)两个亚基对应的DNA序列同时导入到T细胞中，因此其对能实现双基因快速导入技术的需求非常迫切，而现有的慢病毒载体尚不能很好地满足这一需求。
[0005]当前的慢病毒技术主要通过两种方式实现双基因的导入:在慢病毒载体的基因表达区构建双启动子或一个启动子+—个内部核糖体进入位点序列(IRES)，通过两个启动元件在转录水平实现两个外源基因的表达。这两种方式均可以实现双基因的表达，但存在以下两个主要的缺点:1、位于载体上游和下游基因的表达水平不一致。由于不同启动元件效率的不同以及两者之间可能存在的相互作用，从而导致上下游基因的表达水平差异很大(如10倍的差异)，甚至出现其中一个基因不表达的情况;2、慢病毒对外源基因的负载容量一般在8000-10000bp左右，而启动元件的大小一般在500-700bp左右。可以看到，单个启动元件占慢病毒负载容量的比例接近10%，因此多引入一个启动元件就意味着通过慢病毒导入的外源基因序列，就意味着可用于导入外源基因容量的减少。因此使用这两种方式实现的慢病毒双基因表达均不是特别理想。现有技术中尚无可解决以上问题的慢病毒载体。
[0006]传统的试剂盒结构基本为上下开合的试剂盒外壳和海绵内置物组成，此种试剂盒成本低，易获取，被普遍使用，但是此种试剂盒的不足之处在于试剂盒只是起到一个存放各种试剂的作用，当试剂类型较多时，需要操作者精神高度集中才能避免加样过程中出现的多加、漏加或加错样等情况出现。而现有技术中并没有带加样提醒功能的试剂盒。
【实用新型内容】
[0007]基于此，有必要提供一种带加样提醒功能的慢病毒试剂盒的盒子。
[0008]一种慢病毒试剂盒的盒子，包括:
[0009]盒体；
[0010]与所述盒体转动连接的盒盖；
[0011]设置在所述盒体内的衬板，所述衬板上设有枪头收集孔、多个试剂孔以及与所述多个试剂孔对应设置的多个加样指示灯；
[0012]设置在所述试剂孔内的试剂管；以及
[0013]设置在所述盒体内的感应器，所述感应器与所述枪头收集孔的底部对应设置，并且所述感应器通过感应所述枪头收集孔的底部控制所述多个加样指示灯依次亮起和熄灭。
[0014]在一个实施例中，所述感应器与所述枪头收集孔的底部通过弹簧连接。
[0015]在一个实施例中，还包括设置在所述盒盖与所述盒体接触的位置的感应块，所述感应块用于感应所述盒盖与所述盒体是否接触。
[0016]在一个实施例中，所述感应块为感应磁铁。
[0017]在一个实施例中，所述盒体和所述盒盖通过铰链转动连接。
[0018]在一个实施例中，所述衬板上设有6个试剂孔，所述试剂管的数量为6个。
[0019]在一个实施例中，所述加样指示灯的数量为5个，5个所述试剂孔与5个所述加样指示灯一一对应设置，I个所述试剂孔不对应设置所述加样指示灯。
[0020]在一个实施例中，6个所述试剂管分别用于承装限制性内切酶缓冲液、BstBI限制性内切酶、Age I限制性内切酶、慢病毒转移载体、无菌水和慢病毒包装辅助载体。
[0021]在一个实施例中，所述慢病毒转移载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual_Casp9.WPRE载体。
[0022]在一个实施例中，所述慢病毒包装辅助载体包括pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体。
[0023]这种慢病毒试剂盒的盒子通过感应器感应枪头收集孔的底部，当加样操作完成后，感应器感应到废弃的枪头被打入感应枪头收集孔内，同时感应器控制加样指示灯按照顺序依次亮起和熄灭，可以达到指示加样的目的。
【附图说明】
[0024]图1为一实施方式的慢病毒试剂盒的盒子的结构示意图；
[0025]图2为如图1所示的慢病毒试剂盒的盒子的感应器和枪头收集孔的示意图。
【具体实施方式】
[0026]下面主要结合附图及具体实施例对慢病毒试剂盒的盒子及其制备方法作进一步详细的说明。[0027 ]如图1和图2所示的慢病毒试剂盒的盒子，包括盒体1、盒盖20、衬板30、试剂管(图中未显示)、感应器50、弹簧60以及感应块70。
[0028]本实施方式中，盒体10为长方体。盒盖20与盒体10通过铰链转动连接。
[0029]衬板30设置在盒体10内，衬板30上设有枪头收集孔32、多个试剂孔34以及与多个试剂孔34对应设置的多个加样指示灯36。衬板30与盒体10的开口留有一段距离从而使得衬板30与盒体10形成一有开口的容置空间，从而容纳试剂管。
[0030]优选的，加样指示灯36均为LED灯。
[0031]结合图2，感应器50设置在盒体10内，感应器50与枪头收集孔32的底部对应设置，并且感应器50通过感应枪头收集孔32的底部控制多个加样指示灯36依次亮起和熄灭。
[0032]本实施方式中，感应器50与枪头收集孔32的底部通过弹簧60连接。当加样操作完成后，废弃的枪头被打入感应枪头收集孔32内，感应器50通过感应枪头收集孔32的底部，控制多个加样指示灯36依次亮起和熄灭，从而达到指示加样的目