一种用于全血dna中的jak2基因突变检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，包括具有内腔的盒体、盒盖、设置在盒体内将内腔分隔成彼此独立的多个容纳腔的隔板组件、装有JAK2突变检测反应液的第一保存管、装有反应酶的第二保存管、装有阳性对照的第三保存管及装有去离子水的第四保存管，第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管分别置于不同的容纳腔内，设有第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的容纳腔内分别设有用于固定保存管的衬垫。该试剂盒的设有隔板组件及衬垫，将装有试剂的保存管置于衬垫中，有利于试剂避光，避免了试剂间的交叉污染，同时减少了震动对试剂造成的影响，增加了试剂在运输过程中的稳定性。
【专利说明】
一种用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒
技术领域
[0001] 本实用新型属于生物技术领域，具体涉及一种用于全血DNA中的JAK2基因突变检 测试剂盒。
【背景技术】
[0002] JAK2即Janus Kinase 2,是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，受到JAK基因家族的编 码调控。JAK2酪氨酸激酶信号通路是细胞分化中一种主要的细胞因子信号传导通路。细胞 因子与JAK2结合使其活化，从而激活下游STAT蛋白，由STAT蛋白将信号导入细胞核内，从而 起到调控基因表达的作用，参与造血系统、免疫系统等多条信号通路。然而，JAK2激酶的持 续激活，会导致下游STAT蛋白的持续激活，继而便诱发骨髓增殖性肿瘤(MPN)等多种肿瘤。 骨髓增殖性肿瘤（My el oproliferat ive neoplasms，MPN)主要包括真性红细胞增多症 (Polycythemia vera，PV)、原发性血小板增生多症（Essential thrombocythemia，ET)、原 发骨髓纤维化（Primary myelofibrosis，PMF )、慢性粒细胞性白血病（Chron i c myelogenous leukemia，CML)。研究表明，骨髓增殖性肿瘤(MPN)通常伴有JAK2基因1849位 (G/T)突变，导致该蛋白第617位的缬氨酸(V)改变为苯丙氨酸(F)，从而引起一系列病变。在 PV患者中JAK2-V617F大约有90%-95%的突变率，而在ET和PMF中突变率约为50-60%。2008 年，世界卫生组织（WHO)明确将JAK2-V617F的突变作为MPN主要诊断指标之一。（A Tefferiland Jff Vardiman,Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008fforId Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms) 因此，检测JAK2-V617F突变对MPN患者的途断具有重要的临床意 义。
[0003] JAK2-V617F亦是骨髓增殖性肿瘤(MPN)的重要的靶点之一。目前的临床药物，如鲁 索替尼(Ruxolitinib)等其他在研药物，均是针对JAK2酪氨酸激酶开发的抗肿瘤抑制剂，通 过抑制隔断细胞JAK2酪氨酸激酶信号通路来抑制肿瘤的生长增殖。因此，未来通过检测 JAK2-V617F突变，不但可以帮助医生对患者进行MPN临床诊断，并且能够为JAK2抑制剂类药 物的临床使用提供参考依据。
[0004] JAK2-V617F基因突变主要的检测方法包括DNA Sanger测序法或PCR-凝胶电泳法 等。然而，这些方法往往具有操作繁琐，效率低，特异性和灵敏度欠佳等缺点。
【发明内容】
[0005] 本实用新型所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于全血DNA 中的JAK2基因突变检测试剂盒，可以方便快速且保证高特异性高灵敏度地检测全血DNA中 的JAK2基因突变。
[0006] 为解决以上技术问题，本实用新型采用如下技术方案：
[0007] -种用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，包括具有内腔的盒体及一端与 所述盒体的一侧壁相连用于打开或关闭所述内腔的盒盖，所述试剂盒还包括设置在所述盒 体内能够将所述盒体的内腔分隔成彼此独立的多个容纳腔的隔板组件、装有JAK2突变检测 反应液的第一保存管、装有反应酶的第二保存管、装有阳性对照的第三保存管及装有去离 子水的第四保存管，所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管分别置于不同 的所述容纳腔内，设有所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的容纳腔内 分别设有用于固定所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的衬垫。
[0008] 进一步地，所述隔板组件包括第一隔板和多个第二隔板，所述第一隔板将所述盒 体的内腔分隔成彼此独立的第一腔室和第二腔室，多个所述第二隔板将所述第一腔室分隔 成多个彼此独立的所述容纳腔。
[0009] 更进一步地，多个所述第二隔板将所述第一腔室平均分隔成彼此独立的多个所述 容纳腔。
[0010] 优选地，所述第二隔板具有3个，3个所述第二隔板将所述第一腔室平均分隔成彼 此独立的4个所述容纳腔。
[0011] 更进一步地，所述第一隔板的长度比所述第二隔板的长度长。
[0012] 更进一步地，所述第一隔板、多个所述第二隔板分别竖直设置在所述盒体内。
[0013] 更进一步地，所述试剂盒还包括八连管，所述八连管置于所述第二腔室内。
[0014] 进一步地，所述盒盖的一端部与所述盒体的所述一侧壁的上端部枢转连接，所述 盒盖的另一端部向下弯折延伸形成延伸部，当所述盒盖关闭所述盒体的内腔时，所述延伸 部塞入所述盒体内。
[0015] 进一步地，所述衬垫为海绵衬垫，所述海绵衬垫上开设有插孔，所述第一保存管、 第二保存管、第三保存管和第四保存管分别插设在所述插孔内。
[0016] 更进一步地，所述插孔为圆形插孔。
[0017] 于上述技术方案的实施，本实用新型与现有技术相比具有如下优点：
[0018] 本实用新型的试剂盒，结构设计简单合理，便于携带与保存;盒体内设有隔板组件 及衬垫，将装有试剂的保存管置于衬垫中，有利于试剂避光，并使得不同试剂得以存放于独 立的空间，避免了试剂间的交叉污染，同时减少了震动对试剂造成的影响，增加了试剂在运 输过程中的稳定性。
【附图说明】
[0019] 图1为本实用新型试剂盒的结构示意图；
[0020] 图中：1、盒体;2、盒盖;3、第一隔板;4、第二隔板;5、第一保存管;6、第二保存管;7、 第三保存管;8、第四保存管;9、衬垫;10、第二腔室；11、延伸部。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体实施例对本实用新型做进一步详细的说明，但本实用新型并不限于 以下实施例。
[0022]如图1所示，一种用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，包括具有内腔的盒 体1及一端与盒体1的一侧壁相连用于打开或关闭该内腔的盒盖2,该试剂盒还包括设置在 盒体1内能够将盒体1的内腔分隔成彼此独立的多个容纳腔的隔板组件、装有JAK2突变检测 反应液的第一保存管5、装有反应酶的第二保存管6、装有阳性对照的第三保存管7及装有去 离子水的第四保存管8,第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8分别置于 不同的容纳腔内，设有第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8的容纳腔内 分别设有用于固定第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8的衬垫9。
[0023] 本例中，隔板组件包括竖直设置在盒体1内的第一隔板3和多个竖直设置在盒体1 内的第二隔板4,第一隔板3将盒体1的内腔分隔成彼此独立的第一腔室和第二腔室10,多个 第二隔板4将第一腔室分隔成多个彼此独立的容纳腔。
[0024] 第一隔板3的长度比第二隔板4的长度长。具体地，第一隔板3可将盒体1的内腔平 均分隔成第一腔室和第二腔室10,多个第二隔板4也可将第一腔室平均分隔成多个容纳腔。 具体地，第二隔板4具有3个，3个第二隔板4将第一腔室平均分隔成4个容纳腔，4个容纳腔内 均设有衬垫9，衬垫9采用海绵衬垫，每个海绵衬垫上开设有圆形插孔，第一保存管5、第二保 存管6、第三保存管7和第四保存管8分别插设在圆形插孔内。
[0025] 本例中，试剂盒的盒盖2的一端部与盒体1的一侧壁的上端部枢转连接，盒盖2的另 一端部向下弯折延伸形成延伸部11，当盒盖2关闭盒体1的内腔时，延伸部11塞入盒体1内。
[0026] 本实用新型试剂盒还包括八连管，八连管置于第二腔室10内，便于操作者使用。
[0027] 本实用新型试剂盒的JAK2突变检测反应液包括引物探针，其序列如下：
[0030]其中，所述JAK2突变检测反应液包括如下成分：
[0032]本实用新型试剂盒的具体使用步骤如下：
[0033] (1)使用常规方法提取全血样本基因组DNA，并稀释至lOng/μΙ。
[0034] (2)进行荧光定量PCR扩增；
[0035]其中，荧光定量PCR扩增的反应体系如下：
[0037]其中，荧光定量PCR扩增的反应程序如下：
[0039] (3)结果分析，方法如下：
[0040] 根据每个样本反应的荧光信号达到阈值所需的循环数Ct值来判断，有扩增曲线且 Ct值小于或等于30(前15个循环不采集荧光，实际循环数为40)为阳性结果，说明样本中有 突变序列;无扩增曲线或Ct值大于30为阴性结果，说明样本中无突变序列或突变序列拷贝 数低于最低检测限。
[0041] 本实用新型试剂盒，结构设计简单合理，便于携带与保存;盒体内设计有隔板组件 及有圆形插孔的海绵衬垫，将试剂通过圆形插孔置于海绵衬垫中，有利于试剂避光，并使得 不同试剂得以存放于独立的空间，避免了试剂间的交叉污染，同时减少了震动对试剂造成 的影响，增加了试剂在运输过程中的稳定性;本实用新型试剂盒还提供了检测用八连管及 其放置区域，便于操作者使用;检测反应液为预混液，使用时加入反应酶即可，无需再进行 繁琐的配制过程，进一步减少实验污染；同时，本试剂盒检测速度快、灵敏度高、特异性强。 能检测到10个拷贝的突变基因。
[0042] 以上对本实用新型做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了 解本实用新型的内容并加以实施，并不能以此限制本实用新型的保护范围，凡根据本实用 新型的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本实用新型的保护范围内。
【主权项】
1. 一种用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，包括具有内腔的盒体及一端与所 述盒体的一侧壁相连用于打开或关闭所述内腔的盒盖，其特征在于:所述试剂盒还包括设 置在所述盒体内能够将所述盒体的内腔分隔成彼此独立的多个容纳腔的隔板组件、装有 JAK2突变检测反应液的第一保存管、装有反应酶的第二保存管、装有阳性对照的第三保存 管及装有去离子水的第四保存管，所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管 分别置于不同的所述容纳腔内，设有所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存 管的容纳腔内分别设有用于固定所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管 的衬垫。2. 根据权利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述隔板组件包括第一隔板和多个第二隔板，所述第一隔板将所述盒体的内腔分隔成彼此独 立的第一腔室和第二腔室，多个所述第二隔板将所述第一腔室分隔成多个彼此独立的所述 容纳腔。3. 根据权利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：多 个所述第二隔板将所述第一腔室平均分隔成彼此独立的多个所述容纳腔。4. 根据权利要求3所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述第二隔板具有3个，3个所述第二隔板将所述第一腔室平均分隔成彼此独立的4个所述容 纳腔。5. 根据权利要求2或3所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于： 所述第一隔板的长度比所述第二隔板的长度长。6. 根据权利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述第一隔板、多个所述第二隔板分别竖直设置在所述盒体内。7. 根据权利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述试剂盒还包括八连管，所述八连管置于所述第二腔室内。8. 根据权利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述盒盖的一端部与所述盒体的所述一侧壁的上端部枢转连接，所述盒盖的另一端部向下弯 折延伸形成延伸部，当所述盒盖关闭所述盒体的内腔时，所述延伸部塞入所述盒体内。9. 根据权利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于：所 述衬垫为海绵衬垫，所述海绵衬垫上开设有插孔，所述第一保存管、第二保存管、第三保存 管和第四保存管分别插设在所述插孔内。10. 根据权利要求9所述的用于全血DNA中的JAK2基因突变检测试剂盒，其特征在于:所 述插孔为圆形插孔。
【文档编号】C12Q1/68GK205590700SQ201620434307
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月13日
【发明人】程雪涛, 林敏 , 张亚飞
【申请人】凯杰（苏州）转化医学研究有限公司