化学发光物质吖啶酯dmae·nhs的合成方法

专利名称：化学发光物质吖啶酯dmae·nhs的合成方法
技术领域：
本发明涉及一种化学发光物质吖啶酯DMAE NHS的合成方法。
背景技术：
.化学发光分析法由于其高检测灵敏度、仪器设备相对简单、易自动化等优点，己 广泛应用于分析化学、生物、医学及环境等领域。目前，己有多种商品化的化学发光 物质及化学发光体系，相对其它类的化学发光物质，吖啶酯的发光效率高，发光体系 简单，不需要催化剂和增强剂，自然本底低，标记简单，分析灵敏度高。Weeks于 1983 年首次合成了用于化学发光分析的吖啶酯 AE'NHS [4-(2-Succinimidyloxycarbonyiethyl)phenyl-10methylac:ridinium-9-carboxylat e fluorosulfonate] ， 4-(2-琥珀酰亚胺氧羰基乙基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯氟 磺酸盐。AE'NHS做为一种典型的化学发光物质，具有良好的发光性能，已广泛应用于 化学发光分析，但其缺点是热稳定性不是很好，在水溶液中比较容易水解。 一种新 的卩丫啶酉旨衍生物DMAE NHS [2，,6，-Dimethyl-4，- (N-Succinimidyloxycarbonyl) Phenyl-10-Methyl-Acridinium-9-Carboxylate Methosulfate]， 2' ，6' — 二甲基-4， — (N— 琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲磺酸盐。相对于AE'NHS，该化合 物的分子结构特点是在酚环上引入两个甲基，其能起到增大空间位阻，增加该化合物 在水溶液中的水解稳定性的作用，DMAE NHS的光量子产率与AE'NHS相当，但其热稳 定性较AE'NHS显著提高，信噪比也比AE'NHS高。但根据文献中提供的方法，我们无法完成该化合物的制备。

发明内容
本发明的目的在于提供一种化学发光物质吖啶酯DMAE NHS的合成方法。 为达到上述目的，本发明方法采用了的反应机理为<formula>formula see original document page 4</formula><formula>formula see original document page 5</formula>
CH3.CH3OSO:根据上述反应机理，本发明采用如下技术方案一种化学发光物质吖啶酯DMAE NHS的合成方法，其特征在于该方法具有如下歩a) 3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾的合成将3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸溶于甲醇 中，搅拌下，滴加KOH溶液以调节溶液pH为7，在室温下搅拌反应3士0.5 小时，减压蒸馏除去溶剂，加入丙酮研磨，过滤并用丙酮洗涤，真空干燥后 得白色固体即为3, 5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾；b) 3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯的合成将步骤a制备的3，5-二甲基-4-羟基苯 甲酸钾、二苯并-18-冠醚-6溶于DMF和乙腈按1: 2体积比的混合溶剂中，搅 拌下回流反应30士5分钟，再加入苄氯，继续反应3.5士0.5小时，冷却至室温， 过滤，减压蒸馏除去溶剂，用少量氯仿溶解提取，将提取液上硅胶柱进行柱 层析纯化，首先用体积比为3: 1的氯仿与己垸的混合液淋洗，然后用氯仿淋 洗，分部接收，分别点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: 1 的甲苯与乙酸乙酯的混合液，收集对应Rf-0.6的部分，蒸发、干燥后得白色 固体，即为3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯；其中3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸 盐、二苯并-18-冠醚-6与苄氯的摩尔比为8.00 9.00: 1: 12.00 13.00;c) 9-吖啶酰氯的合成将9-吖啶羧酸溶于亚硫酰氯中，加热到100土5'C，搅拌 反应2土0.5小时，冷却至室温，减压蒸馏除去过剩的亚硫酰氯，真空干燥后 得黄色固体，即为9-吖啶酰氯；d) 2' ,6' -二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成将上述制备的 3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯和4-二甲基氨基吡啶溶于吡啶中，100土5'C温 度下，加热搅拌反应30±5分钟，冷却至室温，加入9-吖啶酰氯，100±5°C
下搅拌反应3±0.5小时，然后在室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂， 粗产品用少量氯仿提取后上硅胶柱进行柱层析纯化，先用氯仿，后用乙酸乙 酯淋洗，分部接收，点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: 1 的甲苯与乙酸乙酯的混合液，收集Rf-0.6部分，蒸发，真空干燥，再用乙酸 乙酯和已垸进行重结晶，真空干燥后得针状黄色固体，即为2' ，6' -二甲基 -4' _苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中反应物3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸 苄酯、4-二甲基氨基吡啶与9-吖淀酰氯的摩尔比为6.00 7.00: 1: 8.00 9.00;e) 2' ,6' -二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成将上述制备的2',6'-二甲基_4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯、冰醋酸、体积百分比浓度为40%氢 溴酸，加热至100±5°C，搅拌反应3土0.5小时，冷却至室温，加入水，用体 积比为l: 4的甲醇与氯仿的混合液进行萃取，收集有机相，蒸干，用已烷洗 涤，加入氯仿得黄色悬浊液，缓慢滴加三乙胺中和至溶液的PH为7，水洗， 无水硫酸钠干燥，蒸发，真空干燥后得粗产品，将粗产品在硅胶板上进行薄 板层析，展开剂为体积比l: 9的甲醇和氯仿的混合液，收集RiK).42的部分， 即得到2' ,6' -二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中2'，6'-二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯、冰醋酸和氢溴酸的摩尔比为l:242.0 243.0: 11.00 12. 00;f) 2' ,6' -二甲基-4， -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成将上 述制备的2',6'-二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯溶于二甲基甲酰胺中，冰浴 下加入浓度为60g/L的二环已基碳二亚胺的DMF溶液和浓度为33.8 g/L的N-羟基琥珀酰亚胺的DMF溶液，室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂，用 二氯甲垸萃取，过滤，滤液浓縮，加入乙酸乙酯研磨，过滤，乙酸乙酯洗涤， 真空干燥得粗产品，粗产品用体积比为4: 1的氯仿和乙酸乙酯的混合液溶解， 经硅胶柱层析纯化，淋洗液为体积比为4: 1的氯仿和乙酸乙酯的混合液，分部收集，点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: l的乙醚和乙酸乙酯的混合液，收集Rf=0.88部分，蒸发，真空干燥，得白色固体；在该白色固体中加入体积比为2: 1的己垸和丙酮混合液研磨，过滤，再用体积比为2: 1的己烷和丙酮混合液洗涤，真空干燥后得白色固体，即为2， ，6' -二甲基-4， -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中2，,6，-二甲基-4，-甲酸苯基- 吖啶-9-羧酸酯、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1: 1.000 2. 000 : 1細 2. 000;g) 2， ，6' -二甲基-4' _(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲 石繊^"成将2',6，二甲基-4，-(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯溶 于二氯甲垸中，再加入硫酸二甲酯，加热回流反应四天四夜，冷却至室温， 滴加无水乙醚，析出黄色沉淀，至沉淀完全析出，过滤，真空干燥，用二氯 甲垸和乙醚重结晶，真空干燥得黄色固体，即为2' ，6' -二甲基_4' -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-io-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲fiMSk。本发明方法分七步合成所需要的产品，每步合成的产物都经IR、 'HNMR、 MS和元 素分析表征。如在合成3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾时，文献方法用氢氧化钠与3, 5-二甲基-4-羟基苯甲酸反应制备3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸钠，再用3，5-二甲基-4_ 羟基苯甲酸钠与苄氯作用制备3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸节酯，但是根据文献的记 载，我们无法得到所需的产物。经仔细研究，认为合成3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯 中使用的18-冠醚-6在反应中起的作用是相转移催化剂，而18-冠醚-6的孔径与K+离 子直径相匹配，而与Na+不相匹配，它能很好地摄取K+离子而不能很好地摄取Na+，因 此，我们在合成中使用氢氧化钾作反应物则获得成功。在合成2',6'-二甲基-4，-(N-琥 珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯时，文献方法对粗产品进行两次柱层析纯化，第 一次柱层析用氯仿/乙酸乙酯(4:l， V:V)作溶剂和淋洗剂，第一次柱层析后的产品作薄 板层析，用乙醚/乙酸乙酯(4:l， V:V)作展开剂，理论值Rf=0.28，第二次柱层析用己 垸/丙酮(2:1, V:V)溶解第一次柱层析后的产品，然后用它作淋洗剂提取产品。我们在 实验中发现，经过第一次柱层析后的产品在己垸/丙酮(2:l， V'AO中的溶解度很小，用 较多量的己烷/丙酮(2:l,V:V)只能溶解一小部分产品，大部分不溶，将溶于己垸/丙酮 (2:1, V:V)的这小部分产品经过第二次柱层析，对得到的产品进行元素分析和核磁谱图 鉴定，结果发现实验值与理论值相差甚远，而不溶于己烷/丙酮(2:l， V:V)的部分经过 鉴定实验值与理论值恰好吻合。本发明方法是将粗产品经过第一次柱层析后，加入 己烷/丙酮(2:l,V:V)进行研磨，过滤，分离出沉淀，用己烷/丙酮(2:1,V:V)洗涤，除去 溶于己烷/丙酮(2:l，V:V)的杂质，干燥后得所需要的产品。
具体实施方式
3, 5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾的合成4.7克3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸溶于4ml甲醇中，搅拌下，缓慢滴加2.5mol/L KOH溶液，用pH试纸检测溶液pH值，当溶液pH值等于7时，停止加入KOH，将 反应混和物在室温下搅拌反应3小时，减压蒸馏除去溶剂，加入丙酮研磨，过滤并用 丙酮洗涤，真空干燥后得白色固体4.76克，产率82.4%。 'HNMR谱(溶剂D20,内标 TMS, ppm): 2.02S(s,6H,-CH3),7.325(s，2H, aromatic), 4.67S(s，-OH, D20)。 IR光i普 (KBr压片，cm"): v(—OH)3433, v(C=0)1664， v(C=C，aromatic)1608、 1498、 1447， v(—CH3,)2957， 5(—CH3，—CH2)1421、 1385， v(C-H， aromatic), 3010。元素分析结果 实验值C 51.56%, H 5.50%,理论值C 52.9%, H 4.44%。 3, 5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯的合成在一装配有冷凝管、干燥管和搅拌磁子的250ml 二颈圆底烧瓶中加入2.16克3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾、0.462克二苯并-18-冠醚-6， 51mlDMF/乙腈(l:2， V:V),油 浴加热至80°C，并在8(TC下搅拌回流反应30min,通过恒压滴液漏斗加入2ml苄氯， 继续反应3.5h,冷却至室温，过滤，减压蒸馏除去溶剂，用少量氯仿溶解提取，将提 取液上硅胶柱进行柱层析纯化，首先用氯仿/已垸(3:l， V:V)淋洗，然后用氯仿淋洗， 分部接收，分别点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为甲苯/乙酸乙酯(4:l,V:V),收 集对应Rf-0.6的部分，蒸发、干燥后得白色固体1.81g，产率66.8%,熔点106~108 °C 。 'HNMR谱(溶剂CDCI3,内标TMS, ppm): 2.27S(s, 6H， -CH3), 5.15(s, 1H,墨OH), 5.326S(s, 2H, -CHr), 7.368~7.436S(t, 5H, aromatic H2，， H3，， H4，， H5，， H6，)， 7.7375(S, 2H, aromatic H2, H6), 7.2615(s, CDCI3)。
IR光谱(KBr压片，cm-1): v(—OH)3410， v(C=0)1687, v(C=C)1601 、 1492 、 1447 , v(_CH3, -CH2)2%3~2874， 5(-CH3, —CH2)1447、 1370， v(C—H， aromatic)3003、 3067。
MALDI—TOF质谱(M/Z): [MH]+ 256.3， [MNa]+279.2。元素分析结果实验值C 74.58%， H 6.50%,理论值C 74.98%, H6.29%。9-吖啶酰氯的合成在一装配有冷凝管、干燥管和搅拌磁子的100ml圆底烧瓶中加入4.7克9-吖啶羧 酸、60ml经干燥、重蒸后的亚硫酰氯，加热搅拌反应2h，冷却至室温，减压蒸馏除 去过剩的亚硫酰氯，真空干燥后得黄色固体4.7g，粗产率为86.6%。 'HNMR谱(溶剂 CDCI3,内标TMS, ppm): 7.979~8.0295(t, 2H, H4, H5), 8.220~8.2875(t, 4H, H2, H3， H6, H7)， 9.260~9.2895(d, 2H,仏，H8), 7.269S (s, CDCI3)。 IR谱(KBr压片，cnT1):: v(C=0)1778、 1801, v(C=C,C=N)1636、 1589、 1492,1471、 1429, v(C—H)3047。 2' ,6' -二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成
在一装配有冷凝管、干燥管和搅拌磁子的100ml 二颈圆底烧瓶中加入1.337克 3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酉旨、100mg4-二甲基氨基吡啶、15ml经干燥、重蒸的吡啶， 加热搅拌反应一定时间后，冷却至室温，加入1.595克9-吖啶酰氯，IOO'C下搅拌反 应3h,然后在室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂，粗产品用少量氯仿提取后上 硅胶柱进行柱层析纯化，先用氯仿，后用乙酸乙酯淋洗，分部接收，点样于硅胶板上 进行薄板层析，展开剂为甲苯/乙酸乙酯(4:l， V:V),收集RfK).6部分，蒸发，真空干 燥，进一步纯化在乙酸乙酯/已烷中进行重结晶，真空干燥后得0.998克针状黄色固 体，产率41.4%，熔点148~149°C. 'HNMR谱(溶剂CDCI3,内标TMS, ppm): 2.475( s， 6H, -CH3), 5.395(s, 2H， -CH2-),7.345~7.483S(m, 5H， benzoic alcohol), 7,719~8.4555(m, 8H, acridinic)， 7.719~7.770S(t, 2H， acridinic H4, H5,)， 7.922~7.970S(t, 4H, acridinic H2, H3, H6， H7), 8.426~8.455S(d, 2H, a acridinic Hl5 H8), 8.549S(s, 2H, phenylformic acid)， 7.2535(s, CDCI3)。 IR光谱(KBr压片，cm'1): v(C-H, aromatic, 3067), v(-CH3, -CH2)2968, S(-CH3, -CH2)1453、 1376, v(C=0)1723、 1730, v(C=C， C=N)1607、 1549、 1520、 1478、 1453。 MALDI-TOF质谱(M/Z): [MH]+ 461.9。元素分析结果 实验值C 77.03%, H 5.03%, N 2.66%, O 13.12%，理论值C 78.07%, H 5.02%， N3.04%, 0 13.87%。2' ,6' -二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成在一装配有冷凝管、干燥管和搅拌磁子的100ml 二颈圆底烧瓶中加入540mg 2',6'-二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯、17ml冰醋酸、2.8ml 40%氢溴酸，加 热至IOO'C,搅拌反应3h,冷却至室温，加入60ml水，用30ml甲醇/氯仿(1:4, V:V) 分三次萃取，收集有机相，蒸干，已垸洗漆，加入氯仿得黄色悬浊液，缓慢滴加三乙 胺中和至溶液呈中性，水洗，无水硫酸钠干燥，蒸发，真空干燥后得粗产品349mg， 粗产率为80.3%,产品在硅胶板上进行薄板层析，展开剂为甲醇/氯仿(l:9， V:V), Rf=0,42。IR光谱(KBr压片，cm"): v(-OH)3440, v(C=0) 1743、 1702, v(C=C， C=N)1626、 1607、 1520、 1462、 1442, v(C—H， aromatic)3060、 3020, v(—CH3,-CH2)2960、 2857, S(—CH3,-CH2)1462、 1352。2' ，6' -二甲基-4' -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成在一装配有冷凝管、干燥管和搅拌磁子的100ml圆底烧瓶中加入410mg2',6'-二 甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯、54ml经干燥、重蒸后的二甲基甲酰胺，冰浴10min, 加入366mg 二环已基碳二亚胺(预先溶于6.1ml DMF中)，冰浴30min,加入206mgN-
羟基琥珀酰亚胺(预先溶于6.1ml DMF中)，室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂， 加入20ml 二氯甲烷萃取，过滤，滤液浓縮，加入10ml乙酸乙酯研磨，过滤，乙酸 乙酯洗涤，真空干燥得粗产品336mg,用少量氯仿/乙酸乙酯(4:l，V:V)溶解，经硅胶柱 层析纯化，淋洗液为氯仿/乙酸乙酯(4:l,V:V)，分部收集，点样于硅胶板上进行薄板 层析，展开剂为乙醚/乙酸乙酯(4:l，V:V),收集Rfi.88部分，蒸发，真空干燥，得白 色固体，加入70ml己烷/丙酮(2:1, V:V)研磨，过滤，已垸/丙酮(2:l， V:V)洗涤，真空 干燥后得194.2mg白色固体，产率37.5%，熔点274 276。C。 'HNMR谱(溶剂CDCI3, 内标TMS， ppm): 2.487S(s, 6H, —CH3), 2.918S(s, 4H, —CH2—), 7.587~7.7235(t， 2H, H4， H5, acridinic), 7.850-7.卯15(t， 2H, H!, H8, acridinic)， 8.015(s, 2H， aromatic), 8.360 8.419S(t, 4H, H2， H3, H6, H7， acridinic), 7.241S(s, CDCI3)。IR光谱(KBr压片，cm-1): v(C=0)1768、 1742, v(C=C，C=N) 1627、 1606、 1553、 1516、 1479、 1458、 1433,v(C-H, aromatic) 3064， v(-CH3， -CH2)2986、 2930、 2852，《-CH3, -CH2)1479、 1353 。 MALDI-TOF质谱(M/Z): [MH]+468.45。元素分析结果实验值C 68.6%, H 4.41%, N 6.16°/。，理论值C69.2。/0， H4.30%， N5.98%。2， ，6' -二甲基-4' -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲5難'敏的 合成在一装配有冷凝管、干燥管的25ml鸡心瓶中，加入35.5mg 2',6'-二甲基-4，-(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯，经干燥、重蒸后的2ml二氯甲垸，0.8ml经 重蒸的硫酸二甲酯，加热回流反应四天四夜，冷却至室温，滴加经干燥、重蒸的的无 水乙醚，析出黄色沉淀，至沉淀完全析出为止，过滤，真空干燥，在二氯甲烷/乙醚 中重结晶，真空干燥得黄色固体4.8mg,产率10.65%,熔点226 230'C。元素分析结 果实验值C 55.35%, H4.41%,N 3.97%,理论值C 58.58%, H4.41%, N4.71%。 'HNMR谱(溶剂DMSO,内标TMS, ppm), 1.6035(s, 6H, —CH3), 2.84%(s, 4H, —CH2—)， 3.4545(s, 6H, _CH3, dimethyl sulfatic), 7.037~7.7515(m， 10H, acridinic and aromatic), 2.498, 2.943(s， DMSO)。 EI质谱(溶剂甘油，M/Z): [MH]+483(被打掉一个 -S04CH3的DMAE'NHS的碎片峰)。IR光谱(KBr压片，cm-1): v(C=0)1738、 1742, v(C=C, C=N) 1632、 1554、 1462、 1426, v(C-H, aromatic) 3023, v(-CH3,-CH2)2925、 2906, 5(—CH3, —CH2)1462、 1369。
权利要求
1. 一种化学发光物质吖啶酯DMAE NHS的合成方法，其特征在于该方法具有如下步 骤a. 3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾的合成将3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸溶于甲醇 中，搅拌下，滴加KOH溶液以调节溶液pH为7，在室温下搅拌反应3土0.5 小时，减压蒸馏除去溶剂，加入丙酮研磨，过滤并用丙酮洗涤，真空干燥后 得白色固体即为3， 5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾；b. 3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯的合成将步骤a制备的3,5-二甲基-4-羟基苯 甲酸钾、二苯并-18-冠醚-6溶于DMF和乙腈按l: 2体积比的混合溶剂中，搅 拌下回流反应30土5分钟，再加入苄氯，继续反应3.5土0.5小时，冷却至室温， 过滤，减压蒸馏除去溶剂，用少量氯仿溶解提取，将提取液上硅胶柱进行柱 层析纯化，首先用体积比为3: 1的氯仿与已烷的混合液淋洗，然后用氯仿淋 洗，分部接收，分别点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: 1 的甲苯与乙酸乙酯的混合液，收集对应Rf=0.6的部分，蒸发、干燥后得白色 固体，即为3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯；其中3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸 盐、二苯并-18-冠醚'6与节氯的摩尔比为8.00 9.00: 1: 12.00 13.00;c. 9-吖啶酰氯的合成将9-吖啶羧酸溶于亚硫酰氯中，加热到100土5'C，搅拌 反应2士0.5小时，冷却至室温，减压蒸馏除去过剩的亚硫酰氯，真空干燥后 得黄色固体，即为9-吖啶酰氯；d. 2， ，6， -二甲基-4，-节氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成将上述制备的 3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸苄酯和4-二甲基氨基吡啶溶于吡啶中，100土5'C温 度下，加热搅拌反应30±5分钟，冷却至室温，加入9-吖啶酰氯，100±5°C 下搅拌反应3±0.5小时，然后在室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂， 粗产品用少量氯仿提取后上硅胶柱进行柱层析纯化，先用氯仿，后用乙酸乙 酯淋洗，分部接收，点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: 1 的甲苯与乙酸乙酯的混合液，收集Rf二0.6部分，蒸发，真空干燥，再用乙酸 乙酯和己烷进行重结晶，真空干燥后得针状黄色固体，即为2' ，6' -二甲基 - 4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中反应物3,5-二甲基-4-羟基苯甲酸 节酯、4-二甲基氨基吡啶与9-吖啶酰氯的摩尔比为6.00 7.00: 1: 8.00 9. 00; e. 2， ，6' -二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶_9-羧酸酯的合成将上述制备的2，，6'-二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯、冰醋酸、体积百分比浓度为40%氢 溴酸，加热至100±5°C,搅拌反应3±0.5小时，冷却至室温，加入水，用体 积比为1: 4的甲醇与氯仿的混合液进行萃取，收集有机相，蒸干，用已烷洗 涤，加入氯仿得黄色悬浊液，缓慢滴加三乙胺中和至溶液的PH为7，水洗， 无水硫酸钠干燥，蒸发，真空干燥后得粗产品，将粗产品在硅胶板上进行薄 板层析，展开剂为体积比l: 9的甲醇和氯仿的混合液，收集Rfi.42的部分， 即得到2， ，6' -二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中2，,6，-二甲基-4'-苄氧羰基苯基-吖啶-9-羧酸酯、冰醋酸和氢溴酸的摩尔比为1: 242.0 243. 0: 11.00 12. 00;f. 2' ,6' -二甲基-4， -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯的合成将上 述制备的2'，6'-二甲基-4'-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯溶于二甲基甲酰胺中，冰浴 下加入浓度为60g/L的二环已基碳二亚胺的DMF溶液和浓度为33.8 g/L的N-羟基琥珀酰亚胺的DMF溶液，室温下搅拌反应过夜，减压蒸馏除去溶剂，用 二氯甲烷萃取，过滤，滤液浓縮，加入乙酸乙酯研磨，过滤，乙酸乙酯洗涤， 真空干燥得粗产品，粗产品用体积比为4: 1的氯仿和乙酸乙酯的混合液溶解， 经硅胶柱层析纯化，淋洗液为体积比为4: 1的氯仿和乙酸乙酯的混合液，分部收集，点样于硅胶板上进行薄板层析，展开剂为体积比为4: 1的乙醚和乙酸乙酯的混合液，收集Rf=0.88部分，蒸发，真空干燥，得白色固体；在该白色固体中加入体积比为2: 1的已垸和丙酮混合液研磨，过滤，再用体积比为2: 1的已垸和丙酮混合液洗涤，真空干燥后得白色固体，即为2' ,6' -二甲基-4' -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-吖啶-9-羧酸酯；其中2，,6，-二甲基-4，-甲酸苯基-吖啶-9-羧酸酯、二环已基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1: 1.000 2. 000 : 1細 2. 000;g. 2， ，6' -二甲基-4' -(N-琥珀酰亚胺氧羰基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲S^"成将2'，6，二甲基-4'-(N-琥珀酰亚胺氧羰基傳基-吖啶-9-羧酸酯溶 于二氯甲烷中，再加入硫酸二甲酯，加热回流反应四天四夜，冷却至室温， 滴加无水乙醚，析出黄色沉淀，至沉淀完全析出，过滤，真空干燥，用二氯 甲烷和乙醚重结晶，真空干燥得黄色固体，即为2' ,6' -二甲基-4， -(N-琥 珀酰亚胺氧羰基)苯基-10-甲基-吖啶-9-羧酸酯甲 &。
全文摘要
本发明涉及一种化学发光物质吖啶酯DMAE·NHS的合成方法。本发明方法分七步合成所需要的产品，每步合成的产物都经IR、¹HNMR、MS和元素分析表征。使用氢氧化钾作反应物成功合成3，5-二甲基-4-羟基苯甲酸钾，本发明方法是将粗产品经过第一次柱层析后，加入己烷/丙酮(2∶1，V∶V)进行研磨，过滤，分离出沉淀，用己烷/丙酮(2∶1，V∶V)洗涤，除去溶于己烷/丙酮(2∶1，V∶V)的杂质，干燥后得所需要的产品。
文档编号C09K11/06GK101121710SQ20071004592
公开日2008年2月13日 申请日期2007年9月13日 优先权日2007年9月13日
发明者刘一兵, 吴明红, 尹东光, 沈德存, 正 焦, 罗志福, 贺佑丰, 韩世泉 申请人:上海大学