专利名称：一种油脂降解菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种油脂降解菌。
背景技术：
油脂是重要的化工原料，主要用于甘油制取和高级脂肪酸的制备，油脂类化合物会对生态环境造成严重污染并且食用废油弃油会对人体健康造成威胁。因此，研究油脂类化合物的生物降解对于保护环境及提高人类健康具有重要意义。低温含油脂的废水属于工业中难处理的废水之一。国内对低温油脂高效降解微生物的研究很少见，针对于此，筛选低温条件下的油脂高效降解菌并了解其降解特性，可为低温油脂类废水的工业化处理提供微生物菌剂资源，从而对解决低温油脂类废水生物处理系统的问题奠定基础。
发明内容
本发明提供了一种油脂降解菌。油脂降解菌，它为油脂降解B5，属于Paucimonas-lemoignei属新种，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2011523，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年5月30日；它为革兰氏阴性好氧菌，菌体大小为0.8μπιΧ3.0μπι;它在 PDA固体培养基上形成圆形菌落，淡粉色、半透明，表面光滑，边缘呈波浪状，不易挑起；够利用葡萄糖，不能氧化乙醇或醛糖。本发明油脂降解菌B5，接触酶反应阳性、产吲哚试验阳性、甲基红试验反应阴性、 淀粉水解阴性、油脂水解阳性、硝酸盐还原反应阴性、明胶液化阴性、柠檬酸利用阴性、糖发酵试验既不产酸也不产气。本发明油脂降解菌B5，经16SrDNA测序及同源性比较，得到与其最相近的种属是 Paucimonas-lemoignei,同源性达98% ；结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果， 确定油脂降解菌B5为Paucimonas-lemoignei属的一个新菌种。油脂降解菌B5，属于Paucimonas-lemoignei属新种，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2011523，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年 5月30日。本发明油脂降解菌B5，具有低温条件下油脂类废水的生物强化处理功能，菌株的油脂降解率可达95%，不造成环境二次污染；对于解决低温条件下油脂类废水生物处理系统的问题很有帮助，具有较高的应用价值。
图1为具体实施方式
一中油脂降解菌B5的原子力学显微镜观察图，图2为具体实施方式
一中油脂降解菌B5的原子力学显微镜观察图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式油脂降解菌B5，属于Paucimonas-lemoignei属新种，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2011523，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年5月30日；它为革兰氏阴性好氧菌，菌体大小为 0. 8 μ mX 3. 0 μ m ；它在PDA固体培养基上形成圆形菌落，淡粉色、半透明，表面光滑，边缘呈波浪状，不易挑起；够利用葡萄糖，不能氧化乙醇或醛糖。本实施方式中油脂降解菌B5，其形态如图1和2所示；其生长温度为5 15°C，生长PH值为5. 5 9. 5 ；最适生长温度为5°C，最适生长pH值为7. 0。依据《伯杰氏细菌学鉴定手册》对油脂降解菌B5进行常规生理生化鉴定，实验结果为接触酶反应阳性、产吲哚试验阳性、甲基红试验反应阴性、淀粉水解阴性、油脂水解阳性、硝酸盐还原反应阴性、明胶液化阴性、柠檬酸利用阴性、糖发酵试验既不产酸也不产气。本实施方式油脂降解菌B5，是从小区居民生活区中的生活污水水样中经过驯化， 再经过活化初筛，然后再进行活化和复筛得到，过程如下驯化过程为挑取一菌环菌种接种于斜面培养基中，在15°C 5°C渐变的温度下置于光照培养箱中培养，每培养一个生长周期后重新挑取该斜面培养基中的菌株接种于其他的斜面培养基上，再次培养，在渐变的温度下逐渐停留在5°C。在5°C反复接种培养2个月， 完成整个驯化过程，得到8株能够在5°C条件下稳定生长繁殖的兼性嗜冷菌。1°C左右保藏菌种。初筛是将得到的8株菌分别接种于油脂中性红培养基中，进行5°C的低温培养活化，经2 3次活化后确定菌种回复了活力后再次接种于油脂中性红培养基中，培养4天后观察。通过观察培养基中菌落生长时产生的代谢产物使中性红颜色变化情况的差异来判断该种菌能否降解油脂或是降解油脂的初步情况。将驯化得到的8株菌株在相同条件下培养相同时间，若其中一株菌的单菌落生长的比较大且颜色鲜红则证明该菌能在低温下良好的生长且具有降解油脂的功效，从而初步测定出菌株对油脂的降解情况。对这8株菌随机编号1-8号，并做好记录，以便复筛的时候方便记录结果。复筛是将初筛使用的8株菌，分别接种于以花生油为唯一碳源的无碳源培养基中，驯化数周后，再次接种于油脂液体培养基中培养，经过4天后通过观察选取长势良好的 3株菌，继续以花生油为唯一碳源进行培养，活化2周后利用752型紫外分光光度计在波长为580nm处测其光密度值筛选出生长较好的菌株，通过具体的实验数据确定了 1株菌为优势菌，该菌种的编号为5号。其中每升斜面培养基由5gNaCl、10g蛋白胨和5g牛肉膏组成，pH值为7. 0 7. 2 ； 每升油脂中性红培养基由5gNaCl、10g蛋白胨、IOg花生油、5g牛肉膏、20g琼脂和ImL中性红(1. 6%中性红水溶液)组成，pH值为7. 2 ；TSB培养基由30gTSB商品化培养基粉末和20g 琼脂组成；每升复筛培养基由 5g(NH4)2S04、2gK2HP04、0. 5gMgS04 WH2OJgNaCUgNH4H2PO4 和 20g花生油组成。筛选出的菌依据《伯杰氏细菌学鉴定手册》对其进行常规生理生化鉴定，采用CTAB 法进行细菌总DNA的提取。将所得细菌基因组DNA用细菌16SrDNA通用引物进行PCR扩增， 电泳后割胶回收PCR产物，通过airlock脂肪酸鉴定系统对5号菌株进行检测鉴定进行同源性比较，发现本实施方式筛选得到的菌最相近的种属是Paucimonas-lemoignei，同源性达98%，结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，发现与本属其它菌种有区别，确定为Paucimonas-lemoignei属的一个新菌种，命名为油脂降解菌B5。
本实施方式中，在1500mg/L油脂浓度以下，培养Mh时，苯胺降解率达到40% ；培养84h时，苯胺降解率可达73. 5%以上，培养时，苯胺降解率达到95% ；实验证明油脂高效降解菌B5具有低温处理含油脂废水的功能，而且无需添加其它化学制剂，具有广阔的应用前景。
权利要求
1. 一种油脂降解菌，其特征在于油脂降解菌B5，属于Paucimonas-lemoignei属新种， 已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2011523，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年5月30日。
全文摘要
一种油脂降解菌，它涉及一种油脂降解菌。油脂降解菌B5，属于Paucimonas-lemoignei属新种，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NoM2011523，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年5月30日。本发明油脂降解菌B5，具有低温条件下油脂类废水的生物强化处理功能，菌株的油脂降解率可达95％，不造成环境二次污染；对于解决低温条件下油脂类废水生物处理系统的问题很有帮助，具有较高的应用价值。
文档编号C02F3/34GK102559535SQ20111016898
公开日2012年7月11日 申请日期2011年6月22日 优先权日2011年6月22日
发明者关健飞, 刘翔, 宋北, 牛佳, 王继华 申请人:哈尔滨师范大学