微杆菌菌株及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及微生物【技术领域】，具体公开一种微杆菌菌株(Microbacterium sp.)、其生物学纯培养物，以及其在降解苯酚中的应用。所述微杆菌菌株为SY-PD-42，保藏编号为CCTCC NO：M2014101。本发明的微杆菌菌株可以高效降解废水中的酚类物质，并且能够耐受苯酚浓度高达2500mg/L的含酚溶液。
CCTCC NO：M 2014101
20140324
【专利说明】微杆菌菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物【技术领域】，具体涉及一种微杆菌菌株，其生物学纯培养物，以及 其在降解苯酚中的应用。
【背景技术】
[0002] 苯酚是一种常见的水溶性有机污染物，广泛存在于石油、化工、煤气、焦化、钢铁及 酚类生产厂排放的废水中。含酚废水来源广、数量多、危害大，排放进水水体中，会对水体造 成严重污染，是我国水污染控制中列为重点解决的有毒有害废水之一。
[0003] 目前国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、生物法等。其中生物法是 利用微生物代谢活动，去除废水中的有毒物，具有无二次污染，经济，安全等优点。
[0004] 目前已报道多种苯酚降解菌，包括：假单胞菌（Pseudonomonas sp.)、根瘤菌 (Rhizobia)、热带假丝酵母（Yeasttrichosporon)、醋酸 |丐不动杆菌（Acinctobacter calcoaceticus)、真养产碱菌（Alcaligeneseutrophus)、热葡糖苷酶芽孢杆菌 (Geobacillus thermoglucosidasius)、藻类（Ochromonas danica)、芽抱杆菌（Bacillus)、 产酸克雷伯菌（Klebsiellaoxytoca)、红球菌（Rhodococcus)、贪噬菌属（Variovorax)和罗 尔斯通氏菌属（Ralstonia)等。
[0005] 然而，现有通过筛选获得的降解苯酚菌株，普遍存在对高浓度含酚废水耐受力较 低的问题。一般地，苯酚降解菌株对酚的耐受浓度低于2000mg/L，在高浓度酚存在的情况 下，苯酚降解率通常低于90% ;在对含酚废水的生物处理过程中，若想实现高降解率的处理 效果，则需要较长的周期，在处理实际废水时经济性低。
[0006] 因此，获得具有高苯酚耐受力的降解菌，对于处理实际含酚废水具有重要意义。
【发明内容】
[0007] 本发明要解决的技术问题在于提供一种具有高苯酚耐受力的降解菌。
[0008] 本发明一方面提供一种微杆菌属（Microbacterium sp.)，其分类命名为SY-PD42， 2014年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC，中国，武汉，武汉大学），保藏号 为 CCTCC NO :M 2014101。
[0009] 一些实施例中，所述微杆菌菌株的16S rRNA基因序列为SEQ ID NO: 1。
[0010] 本发明另一方面提供该微杆菌菌株的生物学纯培养物。
[0011] 一些实施例中，本发明的生物学纯培养物为所述微杆菌菌株在以苯酚为碳源、 (NH4) 2S04为氮源的培养基中的生物学纯培养物。
[0012] 本发明再一方面提供一种降解含酚溶液中的苯酚的方法，使用本发明的所述微杆 菌菌株，或生物学纯培养物，进行所述降解。
[0013] 一些实施例中，在所述含酚溶液中，苯酚的浓度可以在2500mg/L以下。一些实施 例中，苯酚的浓度可以在2000mg/L以下。
[0014] 一些实施例中，可以在25至35°C的温度进行所述降解。
[0015] 一些实施例中，可以在6. 5至9. 5的pH进行所述降解。
[0016] 本发明通过筛选获得一种微杆菌菌株，其能够高效降解含酚溶液中的苯酚，可耐 受高达2500mg/L的苯酚浓度，尤其适用于含高酚废水的生物处理。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1不同苯酚浓度条件下微杆菌SY-PD-42对苯酚的降解率及菌株浓度。
[0018] 图2微杆菌SY-PD-42在苯酚浓度2000mg/L条件下对苯酚的降解曲线。
[0019] 保藏信息：微杆菌属（Microbacterium sp.) SY-PD42, 2014年3月24日保藏于中 国典型培养物保藏中心（CCTCC，中国，武汉，武汉大学），保藏号为：CCTCC NO :M 2014101。
【具体实施方式】
[0020] 下面参照具体的实施例进一步描述本发明，但是本领域技术人员应理解，本发明 并不限于这些具体实施例。
[0021] 实施例1 :
[0022] 微杆菌SY-PD-42菌株的分离和鉴定
[0023] ( -）采用富集培养法从辽宁某石化厂生化好氧池活性污泥中分离得到，具体步 骤如下。
[0024] (1)配制培养基：在250mL三角瓶中装入IOOmL苯酚无机盐培养基混合体系，其中 包括培养基溶液、无机盐微量元素溶液和苯酚。每IL培养基加入ImL微量元素溶液；苯酚 先于45°C水浴中溶解，待无机盐培养基高压灭菌后加入体系。
[0025] 培养基溶液为（g/L) :0· 9ΚΗ2Ρ04、6· 5Na2HP04 ·12Η20、0· 4(NH4)2S04、0. 2MgS04 ·7Η20 ; 微量元素溶液为（g/L) : Ig FeSO4 · 7H20、Ig MnSO4 · Η20、0· 25g Na2MoO4 · 2Η20、0· Ig Η3Β04、 0· 25g CuCl2 · 2Η20、0· 25g ZnCl2、0. IgNH4 · V03、0. 25g Co(NO3)2 · 6Η20、0· Ig NiSO4 · 6H20， 溶于900mL蒸馈水，加入5mL浓H2SO4，补蒸馈水至1000mL。
[0026] (2)驯化培养：向培养基中接入5mL从辽宁省某石化厂采集的生化好氧池活性污 泥，于30°C在转速150r/min的摇床中振荡培养2天，取5mL菌液接种到IOOmL新培养基中， 重复转接7次。新培养基中苯酚的浓度依次递增。起始浓度为500mg/L，以后每次转接苯酚 浓度增加500mg/L，直到第7次转接的4000mg/L。
[0027] (3)分离纯化：驯化培养好的菌液按10_3、10_4、10_ 5、10_6和10_7稀释，取0· ImLKT5 稀释液涂在含有2000mg/L苯酚的无机盐培养基平板上，30°C倒置培养2至3天，挑取单菌 落，进行3次划线分离纯化，得到纯化的菌株SY-PD-42。
[0028] (二）采用16S rRNA基因测序法对微杆菌SY-PD-42菌株进行分类鉴定，具体步骤 如下。
[0029] (1)细菌总DNA的制备：用天根公司基因组提取试剂盒提取SY-PD-42菌株的基因 组DNA，作为PCR反应的模板。
[0030] (2) 16S rRNA 基因的 PCR 扩增：
[0031] 使用如下扩增引物
[0032] 27F :5, -AgAgTTTgATCMTggCTCAg-3, [M = C，A]
[0033] 1492R :5, -CggYTACCTTgTTACgACTT-3, [Y = T，C]
[0034] 中间引物：533F :5, -gTgCCAgCMgCCgCggTAA-3，
[0035] PCR反应体系如下表所示：
[0036]
【权利要求】
1. 一种微杆菌菌株（Microbacterium sp.)，其特征在于，所述微杆菌菌株为 SY-PD-42,保藏号为 CCTCC NO :M2014101。
2. 如权利要求1所述的微杆菌菌株，其特征在于，所述微杆菌菌株的16S rRNA基因序 列为 SEQ ID N0:1。
3. 权利要求1或2所述的微杆菌菌株的生物学纯培养物。
4. 权利要求3所述的生物学纯培养物，其特征在于，为微杆菌菌株在以苯酚为碳源、 (NH4) 2S04为氮源的培养基中的生物学纯培养物。
5. -种降解含酚溶液中的苯酚的方法，其特征在于，使用权利要求1或2所述的微杆菌 菌株，或权利要求3或4所述的生物学纯培养物进行所述降解。
6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述含酚溶液中，苯酚的浓度在2500mg/L 以下。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述含酚溶液中，苯酚的浓度在2000mg/L 以下。
8. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，在25至35°C的温度进行所述降解。
9. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，在6. 5至9. 5的pH进行所述降解。
【文档编号】C02F3/34GK104371948SQ201410312201
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年7月2日 优先权日:2014年7月2日
【发明者】朱希坤, 李小明, 戴速航, 杨德玉, 周悦, 李旭 申请人:中国中化股份有限公司, 沈阳化工研究院有限公司