专利名称：处理细胞、胚胎或者卵母细胞的装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种处理细胞和其他细胞组织，特别是胚胎和卵母细胞的装置及方法。
背景技术：
已经知道用移液管等操作单个细胞以及将单个细胞隔离在阵列形式的井中。井可以比细胞大很多，或者尺寸相当。已经知道在象筛或象过滤器的基板中的细胞固持阵列，其细胞固持位置为规则阵列或随机图案。典型地用吸力定位细胞，给出通过基板的液体流动，但是现有技术中也使用过其他力，例如电泳或者双向电泳或者在重力下沉积。使用现有的基于阵列的装置，难以精确控制细胞周围的液体条件，同时使需要的液体的量最小化。当液体较为宝贵或者如果需要液体逐渐改变或液体的改变图案，象例如在卵母细胞或胚胎的成熟中遇到的那样，这是一个缺点。
US6193647公开了，一种处理胚胎的微型流体通道的网络被流动输送和在液体中移动通过‘胚胎传送通道’，并使用通道中的‘构造’特别是缩窄处而固持在要求的位置。这使得能从给定通道中容易插入和取回单个胚胎，但如果一个以上胚胎出现在通道中，就没那么便利了。
已经知道在特定应用中成群地培育卵母细胞和胚胎是较有利的。可以将多个胚胎容纳在同一通道中但难以接近特定一个。在US6193647中没有公开从给定群中选择单个胚胎的手段。在US6193647中示出的实施例中，需要较大数量的溶液来浸洗和交换给定卵母细胞上的溶液。在US6193647中公开的装置具有许多缺点。例如，对胚胎装置的大量生产即在硅中的微型制造，它要求相当复杂的装配。该装置也不适于容易完成机器人对胚胎的插入和取回。
发明内容
因此，本发明提供一种改进的用于处理细胞组织例如细胞、卵母细胞和胚胎的装置，其允许容易地接近一个群中的单独的细胞组织，同时能容易地将该群暴露在公共液体条件下，例如规划它们的成长或者代谢或者在它们上面进行试验步骤。本发明目的是将微型流动方法的优点，其中在能将液体的流动保持在细胞组织的附近的同时可以将细胞组织固持在器件中给定的位置，与阵列形式产生的操作的简易性，其中细胞组织固持在与微型流体通道连通的预成型的井中相结合。
可以被本发明处理的细胞组织包括卵母细胞、胚胎或者其他细胞复合体、单独的细胞本身以及单一或混合类型细胞的群。典型的细胞小于卵母细胞或胚胎，但同样的原理适用于更小的尺寸等级。在下面的说明中使用的术语卵母细胞、胚胎、细胞和细胞组织是可互换的。
根据本发明提供一种如权利要求书中所明确说明的装置。
本发明提供一种使用常规流体机器人并行处理一个或更多卵母细胞或细胞组织的装置和方法。该装置能够选择和处理单独的卵母细胞而对其他有最小的干扰，同时使复合卵母细胞暴露在公共流体条件下允许在单独或成群的卵母细胞上的培养基迅速交换在特定实施例中，实现卵母细胞的良好的可见度以允许目视评估和就地选择将给定容纳成分与用于运输或存储的装置相隔离同时保持在卵母细胞环境中的受控状态。
允许装置的一次性零件可廉价地大量制造。
该装置和方法可用在，例如在例如克隆或者体外受精的过程中对胚胎和卵母细胞的培育和成熟当中，在干细胞或其他研究中对单个细胞或细胞群的培育和成熟当中。
下面参考附图，来描述仅作为示例的本发明的实施例，在附图中图1a和1b示出根据本发明第一装置的横截面和平面图；图1c示出另一实施例的横截面；图2示出优选井的形状的横截面；图3示出在装置中怎样用气压移动液体；
图4a-o以横截面和平面图示出根据本发明的可选择的实施例；图5和6以横截面示出本发明的更多的实施例；图7示出机器人移液管的斜视图，以及根据本发明的装置；图8以横截面示出具有装配在一起的第一和第二基板的可选择的实施例；图9示出图8的实施例，其中第一和第二基板分开；图10示出装置在装配后的平面图；图11示出图10中的装置沿X-X截面的剖面图，及图12示出图10中的装置沿Y-Y截面的剖面图。
具体实施例方式
示例1图1示出根据本发明的装置，其中第一基板(10)设置有朝所述基板的主面开放的第一井(12)的阵列。每个井12适于保持卵母细胞或者其他细胞组织(14)。在本实施例中，井逐渐变细以将细胞组织定位在每个井的特定位置处。该装置还包括一个或更多朝每个井开放的流体通道(32)。
在图1所示的实施例中，流体通道形成在另一基板(20)的主面上，该面适于并设置为面对带有井的阵列的第一基板。在本实施例中该另一基板形成盖，其在密封面(22)处密封在基板上，该盖包括入口通道端24、入口通道26、出口通道28和出口端30；还包括一通道构造其在密封在基板上时形成通道32，流体可通过该通道从入口端流到出口端，与一个或更多井12连通。可以理解图1a所示的液体连接的安排为图解的，与通道的连接可以用本领域所知道的任何方式来实现。
基板优选为透明的，井12优选为适于从下方给出良好的用倒置显微镜的可见度。或者，盖20为透明的，在盖中的通道构造32的上表面有良好的光学特性使得可以从上方观察细胞组织。基板和井设计为允许使用移液管从上方接近。如图7所示，井可任选为规则间置在1D或2D阵列中，例如在依照SBS微板标准的位置上以使与机器人移液管的接合容易。
井12优选为逐渐变细，以允许从上方容易进入井中，同时将细胞组织定位在井基部的小范围内。井的尺寸可以使得它们在尺寸上与细胞组织14的直径接近，如图2a所示在这种情况中需要小直径移液管来处理所述组织-在处理中，于是它们不会被带入到吸入进移液管中的液体内，而是象常规吸持移液管的使用那样吸持在移液管的末端。井的尺寸优选为允许使用具有足够的内径的移液管以将所述组织和周围的培养基一起输送到移液管内。如图2b所示，井然后优选为逐渐变细到吸持位置而细胞组织接近其直径。细胞组织容纳在井的基部，其尺寸为使得细胞组织不会被通过通道32的流动所影响。通道32也可将尺寸制作为防止细胞组织通过它。
在图1a的实施例中，通道32示出为形成在盖的表面。在一可选择实施例中，通道32可以形成在基板10的表面上，那么盖具有在井的位置的平坦轮廓。
在盖和基板之间的密封面需要在两者之间限定一密封通道。该密封可以使用柔顺面22例如安装在基板或盖上的垫圈来实现；或者盖可以部分或全部由柔顺材料例如PDMS形成。密封可以用密封区域的疏水性形成，从而在通道32内的溶液不会蔓延而弄湿密封面22。疏水面可以对基板或盖或两者使用疏水材料、在一个或两者的表面上使用疏水垫圈或涂层来实现。
盖优选为使用钳夹装置(未示出)夹到基板上，该钳夹装置将盖和基板彼此相对定位并实现密封以及保持盖相对基板为固定的。
在另一实施例中(未示出)溶液可以弄湿表面22，在它们之间润湿的程度在设计中为可接受的，因为在液体膜在密封区域和通过通道的液体流动之间的成分交换可接受为忽略不计。
使用图1的装置的方法如下所述。
拿下盖后，基板放置在自动移液管管理器中，分发细胞组织，一井一个，以及体积上为基本充满它们的培养基。移液管的尺寸制作为将细胞组织保持在其内。细胞组织然后沉积到在井的基部的固持位置上。然后盖被安装并用钳夹机构(未示出)保持在适当位置上而液体流经通道32，接触井中的新月面。
井的容纳物不会主动流出井外；化合物在通道和井之间通过扩散交换。井和通道的大小使得这种交换会适当快速地发生。通常在用于卵母细胞或胚胎成熟的装置中，并不要求(通常要避免)化学环境的快速交换，因此要求的扩散时间及因此通道和井的尺寸不是太小。
对完全平衡典型的扩散时间和距离的关系为Dt/l2～1。对典型的小蛋白，其为成熟培养基中的最大分子，D～10-6cm2s-1，对100μm深的井给出的平衡时间为100s，对200μm的井为400s。一个蛋白质对另一个的(几乎)彻底的交换会花更长时间，对应大约5的Dt/l2。这些时间较长，但对卵母细胞成熟中的应用来说不是太长。
通道32优选为在从基板上拿去盖之前是空的。在本实施例中，这是通过迫使气体通过通道因此使液体转移通过出口而实现的。井没有出口，因此井中的液体水平如图3a和3b所示其受到的影响可忽略不计。然后盖没有溶液并可以拿下来，使井中的细胞组织环境不受影响。
处理系统优选包括用于跟踪每个井中的细胞组织的状态和对它们的化合物的应用的情况。然后它可以和自动显微镜载物台及数据登记系统接合以使载每个细胞组织上作的观察与它们的位置相互关联，因而使得实验的数据处理和追踪容易。
每个井通常要收到一个单个细胞组织，虽然某些场合可能更偏爱在每个中不止一个。井的尺寸制作为使得细胞组织可以从移液管被分发到井中，并会在重力下沉积或者在液体中被带着移向井中的固持位置。在US6193647的意思中细胞组织并非被通道中的液体流动而以旋转运动输送，而是其被类似于与本领域内已知那些而分发到井中，但具有改进地特征使得它适于将细胞组织保持在它内部的选定位置以及使围绕细胞组织的液体容易交换。
在卵母细胞培育中需要保持培养基的内容在特定限度内。通常理想培养基为与空气中5％CO2平衡；卵母细胞的代谢意味着需要将气体供应到卵母细胞附近的培养基上。在常规培育中这种情况的发生是通过从孵育器空气经过培养基的扩散。在本发明的装置中，气体从在前侧通道中的培养基扩散到井内和井外。特别是如果培养基静止一段时间，在某些应用中有利于保证对井有不变的气体供应。这一点在图1c所示的实施例中实现，其中盖20与图1a中的相同；但基板10另外包括一气体供应通道34其延伸靠近井的基部(或侧面)，被可透气材料从井内部隔开。实践中这一点可简单地通过从可透气聚合物例如PDMS制造井基部或者整个基板10来实现。井基部可由层压入基板结构中的可透气材料层形成。同样的，多孔的疏水材料例如多孔碳氟化合物膜可以用在层压结构中以形成井基部。
在另一实施例中，井装有一通道其从它的基部通向第二井，如图4所示，或者通向一通道，该通道作用是要保持能从第一井流入到其中或者能从上方被分发到其中的液体。至少第一井被设计为还让其容纳物被吸入到移液管中。第二井作用是要在抽吸期间提供从第二到第一井的液体的流动，该流动作用是将细胞组织从井传送到移液管中。
对细胞组织的观察可以从下方或者从上方进行。细胞组织在井中的保持位置优选为在井的基部，并且基板的材料是透明的，因而允许使用倒置显微镜从下方对细胞组织有现成的可见度。或者，细胞组织的保持位置可以在基部上方一高度上，一收缩部作用是定位细胞组织。可设置盖以降低蒸发，及可选择的，以限定井的体积-井的液体容纳物可以在使用中位于盖的水平面的下方，或者可以接触盖。后一安排在从上方观察的情况中是有利的使得提供清楚的光学界面。
井可以是分开的或者可以和一个或更多公共流体通道连接，因而使得对井有液体的公共供应。液体到及从井的流动可以完全依靠从上方移液，或者其与通过通道与井连通的流动的结合。在一些实施例中，气压可用于在第一和第二井之间、在其一个或两者与公共通道之间传输液体。以这种方式，液体可以被分发到基板上的一个或更多井中，然后被外部气压在基板上移动。气压可以是正的或者负的。特别是，可以使用负气压，施加在第二井上，以使液体从第一井流到第二井，或者以将细胞组织定位在保持位置或者以使在该位置时液体的流动经过该细胞组织。
井优选设置在基板上使得便于机器人处理液体和细胞组织。例如井可以位于在SBS标准1536井板上的井的位置。这样会在板上提供比从井的所需尺寸可行的更低密度的细胞组织，但确有容易的对外部机器人的接合。如果使用更精确的液体处理设备，井的密度可以更高。
对基板的流体连接可以是仅通过移液管，即没有流体能流经到基板的物理连接，或者可以有到基板上的一个或更多位置这样的连接。流体连接可以制作为到基板的下侧，或者到基板的上侧的除了及跳过移液管接近区域的区域，由基板内的通道形成的连接，或者其两者。或者，基板可具有由可动部件形成的连接，当需要连接时该可动部件接触基板，当不是这样例如在需要接近上表面以用于移液时该可动部件被移开。到井的流动通道可以形成在连接部件中，于是其在某些实施例中可以作用为安排在基板上的流体连接以便在操作周期的一个点上连接特定井和通道而在另外的点上连接其他的。这种连接部件包括柔顺零件以实现与基板接触的流体密封。
基板优选用作处理系统的一部分，该系统安排液体对每个井移液增加的顺序以达到对细胞组织环境的改变的期望顺序。系统优选耦合到自动显微镜载物台上因而使得容易记录对细胞组织的观察。在某些实施例中，观察是从上方进行，盖部件可以需要在适当的位置以给出规定的液体界面用于有良好的可见度。系统然后储存细胞组织处理的结果用于在移走盖后的后面的步骤。在规则阵列中的井的布置有助于这一点-使用这样的系统允许在一个单个基板上处理大量的细胞组织同时使操作需要的努力最小化。
示例2图4a-4h示出根据图1的基板的井结构形成部分的局部视图。图4a中的实施例包括基板10，其包括一个或更多适于接收细胞组织的第一井50，每个通过具有第二井54的通道52连通。通道的尺寸制作为使得要限制在第一井中的细胞组织不能经过它。盖60在密封面62处密封到基板上，并包括一个或更多流动通道(64，66)其与第一和第二井连通。在井中的流动图案由盖中的通道的排列来决定是该实施例的特征。图4a示出一种排列，其中盖通道示出为垂直延伸到纸面并可以和不止一个第一和第二井连通。这种排列在图4b中的平面图中示出，其中，多个第一井50和第二井54分别与入口通道64和出口通道66并行连接。在该实施例中的基板10在图4c中示出，而盖在图4d中示出。
在另一实施例中，通道64和66中的一个或两者形成在基板10的表面，分别连接第一和第二井。于是盖60在井的位置上具有平坦的轮廓。在这个实施例中到和在井之间的流体连接被基板而不是盖的设计固定。该实施例允许盖的设计更简单，并在盖和基板连结时减轻在盖和基板之间对齐上的限制。
通道在盖中的另一排列在图4e中示出为平面图并在图4f中示出为剖面图。通道76将第一对井的第二井54和第二对的第一井50相连接，这样将井从入口端68串联连接到出口端74。该实施例要求提供从系统中除去气穴的装置，气穴在盖20被安装在基板上时形成，其在每个井中具有液体条，每个有一个在其上方的空气间隔。实现这一点依靠在盖中的通道中的可透气区域78，优选在井上方。当系统最初被增压时，空气被通过这些区域压出，使得液体形成经过系统的连续通路。
在使用中，细胞组织被移液到基板中的第一井中，盖被安装，然后培养基从入口井68通过入口通道64流到第一井。
第二井54的尺寸可以小于第一井，或者可以尺寸相同或者在它们允许移液管分发或抽吸时有较大的尺寸，或者作为简单的溢流井而不连接到出口通道上。在一些实施例中，它们可以通过盖排出以允许在它们充满时空气溢出。
在图4g中示出本发明的一对井概念的用处。第一井50有利于适于将细胞组织14保持在井中一受限制的位置，以便让显微镜观察容易定位。理想地该位置以x、y和z尺度定位，使得自动台将细胞组织带入在高放大倍数的视场并近似在焦点上。这一点可以实现，如果井50的基部具有直径小于上部82的区域84，其更大则会有利于允许移液管80接近。如果没有通过它的流动，该颈缩84不会容易有液体冲刷这一点使用通道52和第二井54实现。
第一井50可以构建为各种方式，具有共同特征即细胞组织保持在规定的位置上并控制为与从第一井到第二井的流动相逆。在图4h中示出另一实施例，其中颈缩86设置在井内而非其基部-这样具有细胞组织被流动集中到该颈缩上的优点，因而井可以明显大于细胞组织而仍然实现精确的定位。这使得本发明装置能被容易地应用到比卵母细胞小的细胞上，例如哺乳动物细胞。
可以用本领域中知道的任何手段，象模制、压印、激光钻孔、常规钻孔，来制造井50和颈缩86。可选择的，该颈缩可以形成在例如硅芯片这样的部件中，其中通孔可用本领域知道的手段形成，其安装在限定该井的基板中。颈缩的性质限定观察卵母细胞或井的方式-如果它是不透明的那么将从上方观察，在这种情况中本发明装置，包括盖和基板是特别有利的包括微型流体供应通道的盖可被移走，在观察期间安装光学上透明的盖在它的位置上。
在图4a-4h的实施例中的通道52可以用本领域知道的任何合适的手段形成，例如模制、压印、激光钻孔或消融、或者合适层的层叠以定义该结构。通道可以在井之间为相同的横截面，或者优选具有一部分其邻近井有更小的最小尺寸以留住细胞组织，而别处尺寸较大一些，以便使流动阻力最小。形成通道的优选方法是在两个无孔层之间层叠多孔材料层-第一(包含卵母细胞)井本身可以是在多孔材料层中的部分切下区域，材料的另一边与通向第二井的一较大通道连通。
在另一优选实施例中，在不需要从下方的可见度的应用中是有用的，第一井的基部由多孔材料形成，从而培养基可流经该材料而种在其中散开，这样到达细胞组织的下面。
示例2a图4i示出一实施例，其中细胞组织保持位置可以比在前面实施例中包装得更紧密-这使得围绕它们的溶液的总的体积更小。这里卵母细胞保持在基板150的微井152中，微井与前侧流动通道154和后侧流动通道156连通。前侧流动通道限定在基板150和可移除盖158之间，其在被移走后允许移液管接近井以加入或者移出卵母细胞，并且当在密封在基板上的位置时形成不透液体的如图1a的实施例中的从入口，通过通道154到出口的通路。后通道156可以类似地形成在基板和可移除后部件160之间；或者后部件160可以永久粘结在基板上，或者通道156可以形成在基板本身内。后通道可以如所示在入口和出口之间流动，或者可以仅通向流体可通过其在任一方向上流动的单个连接。
在使用中，图4i中的实施例如前所述那样操作移走盖158后用移液管加入或者移出卵母细胞；用通道156内的压力控制在井的基部中的经过通道162的悬浮溶液的流动。当盖158被放回原处时，溶液可以流动通过通道154。为了从通道中排出空气，通道中的前新月面需要接触井中的液体。这可以准备，或者通过对井的适当设计，从而新月面位于井的顶部，或者通过在后侧通道中使用轻微的背压以定位新月面从而液前会接触它。微井可用微型制造领域中知道的合适手段形成在基板中，例如微模制、微压印、激光钻孔、由湿或干化学蚀刻跟随的光刻构图。微井可形成在制作基板的材料中，例如在聚合物部件中的部分通过激光钻出孔的图案。或者，微井可以形成在单独的部件中，其然后安装在基板部件150上。在这种情况中，有优势的制造方法为例如在硅基板中蚀刻井，在例如光敏环氧树脂SU8的可光构图材料中构图并形成井的阵列，或者类似的已知手段。
示例2b图4j、4k和4l示出另一实施例，其具有与图4i中相似的特征，除了这里通道162从井的基部侧向引出，使得从下方对卵母细胞有更清楚的可见度。图4k示出平面图，其中零件的标号同图4i一样。图4j示出在图4k中在AA处的横截面，穿过卵母细胞井，图4l示出在BB处的横截面，示出通道162怎样与后侧流动通道156交叉。
示例2c图4m示出另一实施例，其中形成在基板150中的卵母细胞井152包括在它们内部的颈缩其作用是留住卵母细胞。井作用就象储存毛细管，当充满培养基时依靠表面张力保持培养基。基板150可以由疏水材料(例如丙烯酸树脂)形成，井的典型直径小于1mm，这样毛细管的保持较有效。可以通过简单地用盖166、168盖住基板的上下表面将卵母细胞保留在它们的井中。这形成非常简单并易于操作的运送卵母细胞的方法。如果卵母细胞要被灌注培养基，那么用图4n所示的流动盖158、160代替这些盖。液体流动通过入口通道158然后接触在井中的新月面并使培养基流动通过井。可以通过从后侧施加压力来移动新月面到井152的顶部来来帮助接触新月面以及将空气从入口通道158排出。
在使用中，卵母细胞被从上方移液到井中并且与移液液体一起移动或者因重力停留在定位位置上。在图4m和4n示出井是完全充满的，但是移液体积可以选择为使新月面接近但不是刚好在井的末端。如果可见度合适，可以从上方，平行于井的轴来观察卵母细胞。或者可以从侧面观察井。该装置可以被在它的侧面操作以能使用标准的倒置显微镜，然后移回到竖向以允许使用移液管。如果需要侧向可见度，井应排列为1D阵列；如果从上方的可见度足够那么它们可以排列为2D。在任一情况中，井的尺寸小以及它们排列紧密都意味着可以在较小的装置中培育大量卵母细胞。使用该装置的系统设想为包括一计算机，其记录哪个卵母细胞需要在检查之后介入。然后一旦基板回到移液方向，可以自动对每一个进行正确的动作。
图4o示出另一实施例，其中当流动通道盖在适当位置时，卵母细胞被确实保持在单独的位置上。在该实施例中，盖158包括前侧流动通道154，其与一个或更多通道174连通，隔开而与井152排成行。通道的直径小于卵母细胞的，因而防止在反向流动的情况下或者如果盖158和基板150的结合体倾斜或转动倒置时在重力下卵母细胞进入通道154。在该实施例中后侧通道156形成为基板150的一部分而不是接触一可分离部件。该实施例适合于允许灌注具有培养基的卵母细胞的卵母细胞运送设备。
很清楚，如果不要求对卵母细胞单独识别的话，本发明的任何实施例可以在给定井中容纳一个以上的卵母细胞或者其他细胞组织。图4m、4n和4o中的实施例尤其适合这一点。井152可以制作为与卵母细胞有类似直径从而这些被顺次保持。井可以是统一直径，或者如图4a中一样在口部直径较大而基部较窄，或者直径与卵母细胞相近。在井的口部与卵母细胞尺寸相近的情况中，移液管不会被容纳在井内，因而可被设置为在移液过程中围绕口部密封基板150的表面。
示例3图5a-5b示出本发明的另一实施例。在图5a中第一井50具有直径选为容纳细胞组织的基部部分90和作用是容纳液体移液进入井中的较宽口部部分92。通道52与第二井54连通，同样有基部部分94和口部部分96。在图5b中示出基板安装有包括第一和第二通道64和66的盖12。这些通道以图1a中的方式从入口井流到出口井。在每个井中，在较宽的口部部分和较窄的基部部分之间结合部存在一毛细管止点。基板的材料安排为亲水的，这样在较窄的通道中的新月面上有比在较宽通道中的更大的压力因此低压足以移动在较宽部分中的新月面，但在较窄中的则不行。
在使用中，卵母细胞与测定数量的培养基一起被移液到第一井中。液体因毛细管作用流动经过通道52到第二井54。第二井比第一井窄，因而会因毛细管作用而填充到新月面100上，在较窄基部接合较宽口部的那一点上。在第一井中的新月面98会在第一井中的毛细管止点位置处或其上。从下方观察卵母细胞。当需要更换卵母细胞周围的液体时，盖12被安装而液体流过通道66。当它接触新月面100时，在井54中毛细管止点破裂。于是通道66中的压力下降而液体会从第一井流到第二井直到第一井中的新月面到达较窄的基部部分的起点处，其缩窄作为毛细管止点，假如通道66中的压力小于在毛细管止点位置处在新月面上的压力的话。通过通道64加入到第一井中的液体会接触新月面而毛细管止点会破裂于是液体可流过第一井通过第二井到出口通道66，直到新月面再次到达毛细管止点位置。
此实施例的毛细管止点特征也可象为本领域所知晓那样，用液体对井壁的接触角度的改变来实现，其与直径上的改变结合或代替它使用。井的较低部分制为亲水的而较高部分不那么亲水，或是疏水的于是井趋向于在来自通道52的负压(以及如果第一井50的较高部分是疏水的，在这一部分中的新月面上的正压)下变空，直到新月面到达亲水部分的起点，于是接触角减小，在新月面上的压力增大，假设通道52和第二井54设计正确的话，流动会停止。
图5a和5b中的实施例可通过，例如，标准塑料模制工艺制造。第一井的基部90较小优选为500μm或更小。此基部部分可以被模制，或者可以被钻孔，例如用激光钻孔工艺。第二井54在实践中可以是对其内部的液体施加毛细管力的任何结构，例如毛细管通道、在基板内的浅室、或者放置在具有较大最小尺寸的井或小室内的吸收材料。基板可由一种材料或者不止一种材料形成，特别是如果在第一井的较高部分要求不同的接触角，其可以由不同的塑料形成，并粘结到较低部分上；或者可以用表面涂层或处理来控制在两个部分中的接触角。井的较低部分可形成在基板的子部件中，通过微型制造，例如光刻SU8光敏环氧树脂；该子部件然后安装在包括井的较高部分的塑料模中。
示例4在前面的实施例中，装置包括盖来提供到基板中的井的流动通路。图6a和6b示出实施例，其中对井的液体供应是通过顺次移液，而依靠如前面实施例中的通道来实现液体流经井。在这些实施例中可移除盖不再是必须的-第一井可留置为开放并在过程的所有阶段上可进行移液。基板10包括与井通道52连通的一个或更多出口通道66。向通道66中的液体施加微弱的负压，此压力小于使液体通过入口井中的毛细管止点所需的力量。对每个移液到井中的等分剂量，液体会从第一井流到通道66中直到新月面到达毛细管止点，随之流动停止。用移液动作控制经过井的流动。以这种方式，如果移液的体积大于基部部分90的，卵母细胞会浸洗在最后移液的那种溶液里。如果移液量更小，那么混合溶液会在基部部分中共存并会通过扩散缓慢混合。为了在该系统中实现浓度随时间的梯度，需要依靠在井内的扩散性混合(其会将卵母细胞暴露在从上到下的浓度梯度中，因而可能是不想要的)或者要很远之前混合一系列浓度逐渐改变的等分剂量并将它们顺次移液到井中。在图6a和6b的实施例中，卵母细胞被保持在井的基部的一位置上。同样的原理应用到图6c中的实施例，其中卵母细胞保持在井的基部的颈缩106上。
示例5图8和9示出图4o所示的类型的另一实施例，其中当流动通道盖在适当位置时，一个或更多细胞组织例如卵母细胞、胚胎或其他细胞被确实保持在基板上的单独位置上。为简单起见，图8的装置示出一个单个留持定位，但应理解本发明包括具有多个这样的留持定位的装置。该装置包括基板(在此示例中称为基部部件)150和盖部件158，每个包括一流动系统，并这样安排以便安装在一起以完成一个通过卵母细胞位置的流动通路，并是可分离的以便将卵母细胞装入到装置中或者从其中移出它们。基部部件具有基部密封面153而盖具有盖密封面159，其在达到接近时产生的效果为在基部和盖之间完成一个或更多流体路径。图8示出装配到基部上的盖。图9示出在拆开装置时，盖被从基部向上移开而显示出这两个部件。在图4o和图8和9中共同的标记标示共同的零件。
基部部件150包括一个或更多第一流动系统，每个包括开向基部密封面153的井152，该井适于容纳一个或更多卵母细胞，通道156从井延伸，该通道适于防止卵母细胞离开井，该通道与端口157为流体上连通，可任选为通过一个或更多进一步的通道连通。流体连接218可任选提供为基部部件的一部分以便于在端口157和一外部流动系统之间的流体连通。或者，流体连接可以与在基部部件定位在其中的或者基部部件定位在其上的一个设备相关联。井152可以在其全部深度上是同一横截面尺寸。井可任选包括较宽的开口200和较窄的内部区域202，开口的尺寸为使得允许移液管进入以分发进入及或从井中抽吸一个或者更多卵母细胞，较窄区域202的尺寸为将卵母细胞定位在规定的位置上。通道156可具有颈缩164其定位及尺寸制作为防止卵母细胞离开井。
可任选的，如图8和9所示，在基部部件中包括了一个或更多第二流动系统，每个包括一延伸到在基部密封面153上的端口215上的通道214，该通道214与更远的端口217为流体上连通，可任选为通过一个或更多进一步的通道216连通。流体连接220可任选提供为基部部件的一部分以便于在端口217和一外部流动系统之间的流体连通。或者，流体连接可以与在基部部件定位在其中的或者基部部件定位在其上的一个设备相关联。
盖部件158包括一个或更多流动系统，每个包括通道204，与在图4o的实施例中的通道174类似，其在盖安装到基部上时与井152在流体上连通，通道204与限定在盖中的出口端口213在流体上连通。该流动系统可任选包括一个或更多从通道204延伸的，形成延伸到端口213的流体路径的进一步通道154。通道204和通道154中的一个或两者适于防止卵母细胞离开通道204。流体连接(未在图8和9中示出)可任选提供为盖部件的一部分以便于在端口213和一外部流动系统之间的流体连通。或者，流体连接可以与在基部部件定位在其中的或者基部部件定位在其上的一个设备相关联。
图8和9中的实施例具有优选的排列由此端口213定位在盖密封面159上，到盖中的流动系统的流体连接通过一如上所述的包含在基部部件150中的第二流动系统形成，这个在基部部件中第二流动系统具有限定在基部密封面153中的第一端口215，并限定一从端口215延伸到第二端口217的流体路径。在盖和基部中的流动系统排列为使得在盖被装配到基部上时，基部密封面153和盖密封面159被带到接近而通道212被带到与基部中的第二流动系统通过端口213和215在流体上连通。第二流动系统提供在盖中端口217和端口213之间的流体连通，并此后到井152。
通道204可以是任何统一的横截面尺寸。在图8和9中所示的优选实施例中，通道204逐渐变细并具有圆形横截面，具有与井152近似相同的开口直径。
通道204和通道154中的一个或两者可以大小为防止卵母细胞通行经过流体路径从井152到外部连接。可任选的，如图8和9所示，在通道154中设置颈缩210，其作用是防止卵母细胞沿通道154通行。
图8和9中的实施例示出作为Luer型的流体连接218和220，其管状部分抵靠端口157和217。这些连接可采用任何适当的形式以在装置的流动系统和任何外部流动系统或者所用的设备之间连通，以提供流到或流自装置的流体流动。例如任何或所有端口可以以在本领域中所知道的任何方式，达到与和一外部设备相关联的端口之间的流体连通。该装置可以设计为以这样的方式与设备交互安装以便将端口与定位在设备上的端口对齐，因而允许流体在它们之间移动。
基部150和盖158可具有这样的特征，其在它们被装配时使它们被保持在一起。这样的特征可以是形成为基部、盖或两者的一部分的夹状配合特征，或者可提供单独的夹或安装器件以将基部和盖保持在一起。多个基部和盖部件可以容纳在一个公共安装器件内，例如以允许它们被作为一组来操作。允许多个更小的器件排列为与标准机器人流体处理设备兼容，此实施例可能是特别有利的。
密封面153和159可以是平面或者可以具有这样的特征其在将它们带到接近时帮助通过它们的流体通道关闭。这样的特征可以包括凹痕或者栓特征其作用是将这些面保持在一起或者保持为在与这些面平行的面内对齐。优选至少一个面由柔顺材料形成，或者位于整个面上或者仅在端口附近。优选提供象围绕在一个或这两个面内的端口的凸起部分这样的特征，以对给定的用来将这些面保持在一起的力量，在这些区域用较高压力密封。
可以用本领域所知道的各种方法来制造该装置。图8和9中示出的实施例具有这样的设计其允许使用广阔范围内的材料和制造方法。一个特别有利的特征是，如果使用透明材料，卵母细胞在位于或者井152或者通道204中时容易被观察，尤其是如果卵母细胞位于井的内部区域202时，在这种情况下可以通过井的实心基部来观察卵母细胞。在图8和9的设计中此基部可具有能够在制造过程中选择或者容易控制的光学特性。该设计允许使用可匹配实心井基部材料的光学特性的透镜物镜观察，并且其完成并不通过具有可变及不确定特性的一深度的液体培养基，通过过滤介质或者靠在过滤介质上，有不确定的对比。
图8和9中的实施例中的基部部件示出为包括主体部分230，其中限定了流动系统的部件，包括壁、通道、颈缩、端口及便于外部流体连接的特征。开向主体部分的主表面的部件为开放通道或者其他特征的形式。主体部分被密封到一平坦的部件232，其作用是封闭形成在主体部分的下表面上的流动部件。类似地，盖部件示出为包括主体部分234，由平坦的部件236封闭。优选的制造方法是用模制的PDMS形成主体部件而用玻璃形成平坦部件232和236，然后使用一个或这两个连接面的等离子活化来实现粘结。在本领域中熟知这样的装配方法。也知道其他可选择的制造方法，例如使用塑料平面封闭部件，或者用改进的等离子粘结工艺，或者使用力量将主体部分和平面部分保持在一起，例如通过夹紧或者夹配合。塑料形成方法例如注射模塑或压印可用于形成一个或这两个部件。当图8中的实施例示出通道及形成在主体部件230、234中的其他流动部件时，在可选择的实施例中一个或更多流动部件可全部或部分形成在平坦部件232、236中。
装置的流体特征的典型尺寸选择为对要处理的细胞组织的类型及预期的应用是适当的。在一些应用中，单个细胞组织或一小组细胞组织要求被保持在单独的井中，以对每个实现单独的化学环境，或者将它们放置在容易定位的X-Y位置。这样的应用的例子出现在胚胎学中，例如对卵母细胞和胚胎的处理，其中希望对化学环境能单独控制，而能够使用X-Y台的快速移动观察在装置原处的许多卵母细胞或胚胎是有用的。在这样的应用中，井的内部区域尺寸为保持仅仅单个或者较低数量的细胞组织。因此，井的内部区域的横截面尺寸优选为在该组织的最大横截面尺寸的从1到约10倍，最好在该最大尺寸的1和5倍之间。例如对于最大尺寸100μm的卵母细胞和胚胎，井的内部区域优选具有从100μm到1mm范围内的尺寸，最好100μm到500μm。对单个哺乳细胞或者小组细胞的培育或处理，井的尺寸优选在10μm到100μm的范围内，最好10μm到50μm。在其他实施例中，井的内部区域的部分具有的横截面尺寸为小于该细胞组织的最大尺寸。
流动系统的井及其他特征可具有适于应用和制造方法的任何截面轮廓。特别是，为了制造的容易，井可具有圆形横截面。通道可具有近似矩形的横截面，如果通过模制或者由机加工的模压印形成的话，或者可以具有圆形轮廓，如果从固体基板使用例如在标准微制造过程中使用的微工程方法象本领域所知道的光刻/薄膜沉积/蚀刻工艺来蚀刻的话。
从井引出的通道的最小尺寸，或者如果有的话在通道中的颈缩，选择为足以保持细胞组织不产生随通过井和通道的液体的流动而移动，并对细胞组织在压力下变形的任何可能性设定公差。颈缩的优选最小尺寸为该组织的最小尺寸的大约一半。
为了用于卵母细胞和胚胎，图8和9中的实施例的示例尺寸如下(所有尺寸为近似的)。井152为圆形截面，在基部密封面153处限定的开口200直径为3mm，直径逐渐变细到在内部区域202处的500μm。井约3mm深。通道204也是圆形截面的锥形井的形状，在盖密封面159处限定的开口206直径为3mm，在靠近与通道154连接处的通道的内部区域处直径为1mm。颈缩164和210高50μm。
下面给出流体连接及装置操作的例子。其他形式的连接及操作是可能的并且在本发明的范围内。
装置首先被拆开以能够接近井152。然后使用流体连接218经156通过端口157部分填充培养基到井152中。将一个或更多卵母细胞移液到井中，将盖158装配到基部150上。然后可通过端口157填充穿过装置的流体通道，而卵母细胞或胚胎保持在颈缩164与210之间的流体通路的区域中即在由井152和通道204限定的空间中。于是培养基可以在任一方向中流经井。象在前面的实施例中一样，将盖移走，可以通过从井152移液将卵母细胞从井中取回。可以使经过通道156的流动帮助抽吸的过程。在操作中实现用液体完全填充装置而没有陷获气泡，以及如果引入气泡的话有效地从系统中清除气泡，是有利的。图8和9中的排列，其中在装置装配后流体通路包括连接锥形通道204的锥形井152，在这一方面是特别推荐的，因为已经在实验中发现此排列比其他排列例如在装配后的装置中具有正方形基部或通道的井其具有直径上的突出或突然改变，有更好的整洁及随后对气泡的清除。由于这个原因，优选地，在井152中的开口200及通道204中的206处的设计是相同的截面形状。尤其优选地，是本实施例，其中井152和通道204的开口为圆形截面及相同直径。
图10、11和12示出另一实施例，其中提供了多个井，每个如图8和9的实施例所描述那样与一流动系统相关联，且设置另外的通道和端口以并行提供到多个井的流体连接。与井相关联的流动系统的排列与图8和9中所示的相似，相同的特征由相同标记标示。图10示出当装置装配好时的平面图，图11为在X-X处的截面而图12为在Y-Y处的截面。
装置包括基部部件150和盖部件158，其可装配到一起以形成穿过装置从入口端到出口端的封闭流体通路，并可以拆卸以能接近井152。基部部件具有基部密封面153而盖具有盖密封面159，其在带到接近时作用是在基部和盖之间完成多个单独的流体通路。基部部件包括多个流动系统，每个包括开向基部密封面153的井152和至少一个从井延伸的通道156，在通道中可任选具有颈缩164，其防止卵母细胞离开井。通道156与延伸到一个或更多端口253、254的第一总管通道250流体连通，该端口每个与一流体连接218流体连通，该端口或这些端口作用是允许流体流向或流自在装置外部的流动系统。在图10中，流体连接示出为抵靠端口253、254的管218，但本领域中所知道的任何合适的流体连接都可以使用，例如在图8和9的实施例中所示的Luer流体连接。
图10中的实施例具有和图8和9中的相似的优选排列，由此流体连接被做成是通过基部部件150。因此基部部件也包括第二流动系统，其包括多个通道214，每个延伸到限定在基部部件密封面153处的端口215上，通道214与第二总管通道252流体连通。第二总管通道252延伸到一个或更多端口255、256，每个与一流体连接218流体连通，这些端口作用是允许流体流向或流自在装置外部的流动系统。
盖部件158包括多个流动系统，每个包括开向盖密封面159的通道204，通道可任选为图11和12所示的锥形井的形状，通道204与限定在盖中的端口213流体连通。流动系统可任选为包括洗过形成延伸到端口213的流体通路的一个或更多进一步通道154。或者通道204或者通道154适于防止卵母细胞离开通道204，例如通过在通道中在与井的连接处设置颈缩210。
在图10、11和12所示的优选实施例中，通过在基部中的第二流动系统作成到盖中的流动系统的流体连接，进一步的通道212设置在盖中的流动系统中，其与通道204连通并开向限定在盖密封面159中的端口213。在盖和基部中的流动系统排列为使得当盖被装配到基部上时，基部密封面153和盖密封面159被带到接近而通道212被带到为与基部中的第二流动系统中的通道214通过端口213和215流体连通。此第二流动系统在第二总管通道252和通道204之间，及因此到井152的上开口，提供流体连通。
当装置被装配时，对每个井152的开口被带到与对每个通道204的开口流体连通，而对每个流动系统，盖中的通道212被带到与基部中的通道214流体连通。这样建立了一个封闭的经过每个井的流体路径，从第一总管通道250，通过通道156、颈缩164(如果有)、井152、盖中的通道204、盖中的颈缩210(如果有)、通道154和212、通道214和第二总管通道252。
实施例包括在本发明中，其中通过一个或更多与盖部件相关的流体连接来实现与每个流动系统的通道204的流体连接。在这种情况下，上面讨论的基部中的第二流动系统可以省略。这可能通过位于盖中的端口213，独立涉及到盖中的每个流动系统的流体连接。实施例包括在本发明中，其中第二总管通道252形成在盖部件内。在这种情况中，可以将一个或更多流体连接作成为通过与盖相关联的流体连接器而到第二总管通道。或者，连接通道可设置在盖和基部内，与盖中的第二总管通道的端部的每一个流体连通，所述盖在装置装配时对齐并以上面描述的方式建立对单独流动系统的流体连接。
第一和第二总管通道可以在沿它们的长度上是同一截面尺寸，或者其可以在沿它们的长度上改变。包括井152和连通通道的流动系统可以是彼此在本质上相类似的或者可以被设计为不相同。每个流动系统看来与其他相平行，在第一和第二总管通道之间连通。在填充液体后，通过每个流动系统的流动与通过每个的液体流阻成正比。装置设计为经过每个流动系统的液体流阻相近是有利的，该流阻在总管通道的末端的端口之间测得。如果装置设计为使得在总管通道中的流阻与通过每个流动系统的流阻相比为可忽略不计，那么通过将每个流动系统设计为类似的，通过其每个的流动会是类似的。然而如果在总管通道中有明显的流阻，那么或者总管通道的尺寸被设计为沿其长度改变，或者流动系统的尺寸被设计为彼此之间不同，以便使总的流阻及因此通过每个井的液体流动相近。在特定情况中，将通过井的流动设定为不相等的，在这种情况中总管通道及/或流动系统的尺寸可被相应设置，是有利的。
图10、11和12的实施例可以由用在图8和9的实施例中的或者用在任何前面的实施例中的同样的装置来制造。在通道的位置和其他流动特征中的类似的变化在本发明的范围内。在图10、11和12的实施例中的特征的尺寸与图8和9的实施例中详述的那些相类似。
下面给出装置的流体连接和操作的一个示例。其他形式的连接和操作是可能的并在本发明的范围。
如图10所示，如果向第一总管通道提供两个或更多连接，那么一个连接(260)会起流体入口的作用而第二个(262)起通风孔的作用。如果要求将不同的液体培养基引入到装置中，可以提供另外的连接以作为另外的入口。在一些实施例中，对第一总管通道仅安排一个流体连接，在这种情况中它起流体入口的作用，而通风则通过包括井和连通通道的流动系统来实现。优选至少在第二总管通道的末端处设置流体连接(264，266)。在正常使用中这些作为流体出口。设置阀272以打开和关闭通风孔262，而对出口264、266设置阀274和276。设置泵270以驱动流体流动进入入口260。
在使用中，首先拆开装置以接近井152。借助泵270，打开通风孔阀272，用培养基冲刷第一总管通道250。然后关闭阀272，使用泵通过第一总管通道用培养基部分填充井152。然后将卵母细胞移液到井中并安装盖部件。阀274和276打开而阀272关闭，开动泵来填充流动系统的剩余部分。在第二总管通道252的两个末端设置出口端口允许空气在两个方向上被液体替换，并避免仅有一个出口时会出现的，空气被位于第二总管通道中在空气和出口之间的液体块所挡住的那种情况。第二总管通道向两个出口填充液体，然后一个阀，比如274，被关闭，而液体会通过其他出口端口和出口阀276流过系统。如果需要达到最佳通风，可以在沿第二总管通道的长度上设置两个以上的出口。
图10、11和12的实施例示出在第一和第二总管通道之间平行连接的多个流动系统。应该明白其他形式的流体连接也包括在本发明的范围内。例如设想装置的所有或一些流动系统的串联连接。还有，可以提供进一步的第一和第二总管通道，每一对与进一步的流动系统组相连通。可设置分发通道作为装置的一部分，其与进一步的第一和第二总管通道连通以提供流向和流自它们的流体流动。这些进一步的通道可整个形成在基部部件内，全部在盖部件内，或者可以在它们装配后形成和关闭在它们之间。它们可以以上面所描述的方式借助于形成为流体连通的端口而在基部和盖部件之间通过。
流体储池可以合并在根据上面的任何实施例中的装置内，作用是供应流体至或接受流体自任何或所有包括在装置中的井及流动系统。这些储池可位于基部部件或盖部件中，或者位于一适于与基部或盖部件互配合以与它们有流体连接的进一步部件中。泵和阀也可设置在装置中，作为或基部、盖或进一步部件的一部分。一个包括流体储池、阀和泵的部件可设计为可从装置上拆下来，或反之亦然，不将盖从基部上拆下。
本发明装置可设计为与提供和控制流向和流自装置的流体流动的设备一起操作。该设备可容纳一个或更多这样的装置。该设备可提供液体至，或接受液体自该装置，或者可以作用在该装置上以产生到或从装置上的储池的流体流动，例如，通过施加气压到装置上的液体储池，或者施加物理力量到装置的一可变形部分上以引起在它内部的流体流动。装置可包括另外的部件，例如电动力的或电控的部件象泵、阀、测量仪器和温度控制器，并可设置有电连接以与该设备上的相应的连接相接触。该装置可朝向该设备定位或定位在该设备上以便装置在这样定位时，使流体端口流通及/或电连接相接触。该装置可设置有电源，其可储存电力以在装置从设备上拆下来时以运行这些部件。装置设计为可用另外的、便携的电源和外部控制手段操作以允许其在独立于该设备的期间操作，并能被用于在一个设备和位于和第一个很远处的另一个设备之间在其内部运送细胞组织，是有利的。
当盖中的通道204为大到足以容纳移液管的井的形状时，从井中卸除细胞组织的另一方法是适用的。可以通过流动在井152和通道204之间移动卵母细胞，或者如果装置在还在装配时是倒置的，卵母细胞会从井沉积到通道中。然后基部150被从盖上移走，留下通道204为打开以允许移液管通过开口206进入。然后卵母细胞被从通道204的内部区域208抽吸到移液管中。图8和9中所示的实施例，当被修改使得通道204为井的形状，在其内部区域208具有比井152的内部区域的直径更大的直径时，也适于这种另外的卸除方法。这使得从盖中的通道204中移液比从井152移液中更容易，同时仍然在井152的内部区域中产生封闭的环境用于控制对培养基的暴露或者控制卵母细胞的精确位置以使光学观察较为容易。在一些实施例中，第二井204可具有大到足以让移液管到达井的底部的内部区域。在其他实施例中，为了控制移液管尖端对一个或这些卵母细胞的接近，第二井尺寸可作成是将移液管定位在底部上的一距离处。然后通道或井204可被用于处理活动的卵母细胞，如果设置了多个这样的井，可以用与前面实施例中描述的对井50、152的同样的方式，改装用于与机器人移液管设备的使用。
在一方面中本发明提供了具有通道的装置，所述通道沿它们的长度由与另一个相接触的一个基板的表面封闭。在另一方面中本发明提供一装置，其中通道形成在两个基板的任一或两者之中，并被带到相接合使得对齐的端口、开口或者井提供流体通路，并设置密封面以围绕端口、开口或井密封。在任一情况中，盖基板和基部基板连结而形成一个完整的流体通路。
权利要求
1.一种装置，包括第一基板，其具有开向该第一基板的一第一主表面的第一井的阵列，所述第一井适于保持细胞组织，该装置还包括一个或更多开向该井或每个井的流体通道。
2.如权利要求1所述的装置，其中井逐渐变细以将细胞组织定位在每个井中的给定位置处。
3.如权利要求1或2所述的装置，其中所述一个或更多流体通道中的至少一个形成在一另一基板的主表面和所述第一基板的一主表面之间，该另一基板可拆卸地固定到所述第一基板上。
4.如权利要求1或2所述的装置，其中所述一个或更多流体通道中的至少一个形成在一另一基板的主表面和所述第一基板的所述第一主表面上，该另一基板可拆卸地固定到所述第一基板上。
5.如前面权利要求中任一所述的装置，其中所述一个或更多流体通道中的至少一个形成在所述第一或另一基板的主体内，该通道具有与该另一个基板中的端口或井相对齐的开口，该基板设置有密封面其适于围绕开口提供密封。
6.如前面权利要求中任一所述的装置，其中所述一个或更多流体通道中的至少一个也开向所述第一基板的所述第一主表面中的一个或更多第二井。
7.如权利要求1或2所述的装置，其中井延伸通过基板到达其另一主表面，该一个或更多流体通道形成在一另一基板的主表面上适应及排列为面向所述第一基板的所述另一主表面，该另一基板可拆卸地固定到所述第一基板上。
8.如前面权利要求中任一所述的装置，其中该流体通道被从第一井中横向移位，使得可以与所述主表面垂直地通过所述第一或另一基板不观看所述流体通道而观看细胞组织。
9.如前面权利要求中任一所述的装置，其中在一个基板中的开口和在另一个基板中的端口或井随着离主表面的距离逐渐变细而变得更小，用于避免在填充流体通道时气泡陷获在流体培养基中。
10.如前面权利要求中任一所述的装置，其中一个或更多流体通道设置有可透气区域以允许在用液体填充时从所述流体通道中除去气泡或泡。
11.如前面权利要求中任一所述的装置，包括钳夹装置，其用于保持该第一和另一夹板对齐并使它们相互接合。
12.一种用于处理细胞组织的系统，包括如前面权利要求中任一所述的装置以及其他细胞组织处理装置。
全文摘要
用于处理细胞组织的装置，包括第一基板，其具有开向该第一基板的一第一主表面的第一井的阵列，所述第一井适于保持细胞组织，该装置还包括开向每个井的流体通道。该井逐渐变细以将细胞组织定位在每个井中的给定位置处。该流体通道形成在另一基板的主表面上，适应及排列为面向所述第一基板的一主表面，该另一基板可拆卸地固定到所述第一基板上。
文档编号B01L3/00GK1909847SQ200480033049
公开日2007年2月7日 申请日期2004年9月10日 优先权日2003年9月10日
发明者约翰·R·道奇森 申请人:奥瓦图尔研究股份有限公司